INSTITUTO POLITÉÉ CNICO NACIONAL

ÉSCUÉLA NACIONAL DÉ CIÉNCIAS BIOLOÉ GICAS

INGÉNIÉRIÉA ÉN SISTÉMAS AMBIÉNTALÉS

PRAÉ CTICA 9

“PROCESOS MICROBIANOS DEL CICLO DEL

NITROGENO”
LABORATORIO DÉ MICROBIOLOGIÉA AMBIÉNTAL

EQUIPO NO. 3 Grupo: 5AM1

 Aparicio Almazán Brenda Guadalupe

 Vázquez Jiménez Mabel Jirivet

EQUIPO 7:

 Garduño Machorro Jazmín

 Valdez Vázquez Antonio

PROFESOR(ES):
 M. en C. Gisela Boll Argüello
 M. en C. Claudia Paulina Dotor Vázquez
 Dra. Jane Castillo Vera

FECHA DE REALIZACIÓN: 20 de Marzo al 03 de Abril del 2018

FECHA DE ENTREGA: 10 de Abril del 2018

OBJETIVOS.

1. Determinar experimentalmente los principales procesos metabólicos involucrados en el

ciclo del nitrógeno.
2. Enumerar formas fisiológicas de bacterias involucradas en estos procesos, en diferentes
muestras de suelo.

RESULTADOS.

En esta práctica se tomaron muestras de suelo procedentes de las cascadas de Atlihuetzia

en Tlaxcala. El equipo 3 se ubicó en la estación 3 y el equipo 7 en la estación 2.

a) Nitrificación

Para esta prueba se realizó una serie de diluciones con 10g de suelo previamente pesados
hasta la dilución 10-6, se sembraron alícuotas de 1ml en series de 3 tubos de medio para
nitrificantes fase 1 (nitritación), posteriormente se adicionaron 3 gotas de reactivo de Griess A
y 3 gotas de reactivo Griess, el color rosa o rojo intenso indico presencia de nitritos, a los
tubos negativos (sin presencia de color) se agrego granalla de Zinc, y se observó coloración
rojo intenso indica presencia de nitratos.
Tabla 1. Nitritación (NMP) de suelo en base húmeda y seca.
Log
Numero NMP en NMP/g
Estación Equipo NMP/g BS NMP/g
característico tabla BH
BS
3
1 3-3-3 >1100 >1100 ¿ 1.50 x 10 >3.1760
1 1
6 2-0-0 9.1 9.1 1.71 x 10 1.2329
2
2 3-2-3 290.0 290.0 6.04 x 10 2.7810
2
7 3-0-0 23.0 23.0 7.41 x 101 1.8698
1
3 3-0-1 39.0 39.0 5.41 x 10 1.7331
3
8 2-0-0 9.1 9.1 2.21 x 101 1.3443
0
4 0-0-0 <3.0 <3.0 ¿ 6.52 x 10 <0.8142
4
9 2-0-1 14.0 14.0 2.22 x 101 1.3463
0
5 1-0-0 3.6 3.6 5.62 x 10 0.7497
5
10 2-0-0 9.1 9.1 1.51 x 101 1.1789

Équipo 3 y 7 Procesos microbianos del ciclo del nitroó geno Paó gina 1
 Microorganismos Nitrificantes
3.5
3.18
3 2.78

2.5
Log NMP/g BS

2 1.87
1.73
1.5 1.34 1.35
1.23 1.18
1 0.81 0.75
0.5

0
Eq.1Es .1 Eq.6Es .1 Eq.2Es .2 Eq.7Es .2 Eq.3Es .3 Eq.8Es .3 Eq.4Es .4 Eq.9Es .4 Eq.5Es .5 Eq.10Es .5
Equi pos

Microorga ni s mos Ni tri fica ntes

Fig. 1. grafica de las UFC/g en base seca de los microorganismos que participan en el ciclo del nitrógeno (Nitritación).

Équipo 3 y 7 Procesos microbianos del ciclo del nitroó geno Paó gina 2
b) Proteólisis

Para esta prueba se tomaron alícuotas de 0.1ml de las diluciones 10 -3, 10-4 y 10-5 y se
colocaron en cajas de agar leche, se inocularon a 28°C durante 48hrs y se contaron las que
tenían halo transparente, se calcularon las UFC/g en base húmeda y seca.

Equip Numero de Log UFC/g

Estación Dilución UFC/g BH UFC/g BS
o colonias BS
5 5
1 5.5 10
−4
5.5 x 10 7.53 x 10 5.8767
1 7 7
6 10 10
−5
1 x 10 1.886 x 10 7.2755
5 6 6
2 > 10 10
−5
¿ 10 ¿ 10 >6
2 5 5
7 13 10
−3
1.3 x 10 4.20 x 10 5.6232
5 5
3 2 10
−4
2 x 10 2.77 x 10 5.4424
3 6 6
8 14 10
−4
1.4 x 10 3.41 x 10 6.5327
6 6
4 27 10
−4
2.7 x 10 5.86 x 10 6.7678
4 4 4
9 2 10
−3
2 x 10 3.17 x 10 4.5010
4 4
5 3 10
−3
3 x 10 4.68 x 10 4.6702
5 6 6
10 24 10−4
2.4 x 10 4 x 10 6.6020
Tabla 2. UFC/g de Proteolíticos, de suelo en base húmeda y seca.

Microorganismos Proteoliticos
8
7.28
7 6.77 6.6
6.53
5.88 6
6 5.62 5.44
5 4.5 4.67
Log UFC/g BS

0
Eq.1Es .1 Eq.6Es .1 Eq.2Es .2 Eq.7Es .2 Eq.3Es .3 Eq.8Es .3 Eq.4Es .4 Eq.9Es .4 Eq.5Es .5 Eq.10Es .5
Equi pos

Mi croorganis mos Proteol i ticos

Fig. 2. grafica de las UFC/g en base seca de los microorganismos proteolíticos que participan en el ciclo del nitrógeno.

Équipo 3 y 7 Procesos microbianos del ciclo del nitroó geno Paó gina 3
 c) Producción de amoniaco (Amonificación)

en este método se inocularon con 1ml series de 3 tubos con diluciones 10 -2, 10-3 y 10-4 que
contenían medio de Stuart y se incubaron a 28°C durante 7 días, se evaluó el proceso de
amonificación con el desarrollo de color anaranjado a rojo intenso que indico presencia de
amoniaco, se calculo NMP para obtener el numero de organismos presentes en el suelo

Fig. 3, 4 y 5. Series de tubos con medio Stuart inoculados con diluciones 10-2, 10-3 y 10-4, se observa la formación de amoniaco (color
rosa intenso a rojo intenso) a partir de materia orgánica presente en el suelo.

Tabla 3: Amonificación (NMP) de suelo en base húmeda y seca.

Log
Numero NMP en NMP/g
Estación Equipo NMP/g BS NMP/g
característico tabla BH
BS
4 4
1 3-3-3 >1100 ¿ 1.1 x 10 ¿ 1.50 x 10 >4.1760
1 4 4
6 3-3-3 >1100 ¿ 1.1 x 10 ¿ 2.07 x 10 >4.3159
2 2
2 0-2-3 16.0 1.60 x 10 3.33 x 10 2.5224
2 3 3
7 3-2-3 290.0 2.9 x 10 9.35 x 10 3.9708
3 3
3 3-3-1 460.0 4.6 x 10 6.38 x 10 3.8048
3 2 3
8 2-3-2 44.0 4.4 x 10 1.07 x 10 3.0293
4 4
4 3-3-3 >1100 ¿ 1.1 x 10 ¿ 2.39 x 10 >4.3783
4 1 1
9 0-0-0 <3.0 ¿ 3.0 x 10 ¿ 4.76 x 10 <1.6776
1 2
5 2-0-0 9.1 9.1 x 10 1.42 x 10 2.1522
5 2 2
10 0-1-3 12.0 1.2 x 10 2 x 10 2.3010

Équipo 3 y 7 Procesos microbianos del ciclo del nitroó geno Paó gina 4
Fig. 6. grafica de las UFC/g en base seca de los microorganismos que participan en el ciclo del nitrógeno (Amonificación).

Microorganismos de Amonificadores
5
4.5 4.32 4.38
4.18
3.97
4 3.8
3.5
3.03
3
Log NMP/g BS

2.52
2.5 2.3
2.15
2 1.68
1.5
Équipo 3 1y 7 Procesos microbianos del ciclo del nitroó geno Paó gina 5
0.5
0
d) Desnitrificación

para este método se inoculo1 ml en serie de 3 tubos con medio de desnitrificantes de las
diluciones 10-4, 10-5 y 10-6 durante 7 días a 28°C, se registraron como positivos aquellos que
contenian gas dentro de la campana de Durham.

Fig. 7,8 y 9. Series de tubos con medio de desnitrificantes inoculados con diluciones 10 -4, 10-5 y 10-6, se observa gas de nitrógeno
solo en uno de los tubos lo que indica presencia de microorganismos con respiración anaerobia.

Tabla 4: Desnitrificación (NMP) de suelo en base húmeda y seca.

Log
Numero NMP en NMP/g
Estación Equipo NMP/g BS NMP/g
característico tabla BH
BS
5 5
1 3-3-1 460.0 4.60 x 10 6.30 x 10 5.7993
1 4 4
6 3-0-0 23.0 2.3 x 10 4.33 x 10 4.6364
6 6
2 2 3-3-3 >1100 ¿ 1.1 x 10 ¿ 2.29 x 10 >6.3598

Équipo 3 y 7 Procesos microbianos del ciclo del nitroó geno Paó gina 6
 5 5
7 3-2-1 150.0 1.50 x 10 4.83 x 10 5.6839
4 4
3 3-0-0 23.0 2.3 x 10 3.19 x 10 4.5037
3
8 3-0-0 23.0 2.3 x 104 5.60 x 104 4.7481
6 6
4 3-3-3 >1100 ¿ 1.1 x 10 ¿ 2.39 x 10 >6.3783
4 6 6
9 3-3-3 >1100 ¿ 1.1 x 10 ¿ 1.74 x 10 >6.2405
5 3-2-3 290.0 2.90 x 105 4.53 x 10 5 5.6560
5 5 5
10 3-3-1 460.0 4.6 x 10 7.66 x 10 5.8842

Microorganismos Desnitrificantes
7

5
Log NMP/g BS

0
Eq.1Es .1 Eq.6Es .1 Eq.2Es .2 Eq.7Es .2 Eq.3Es .3 Eq.8Es .3 Eq.4Es .4 Eq.9Es .4 Eq.5Es .5 Eq.10Es .5
Equi pos

Mi croorganis mos Des ni tri fica ntes

Fig. 10. grafica de las UFC/g en base seca de los microorganismos que participan en el ciclo del nitrógeno (Desnitrificación).

DISCUSIÓN.

6
En la Tabla 2, podemos observar que el equipo 2 tiene un valor mayor a 10 UFC/g en
base seca de proteolíticos, el crecimiento que tuvieron en sus cajas Petri fue excesivo ya que
no se notaba un gran contenido de agar leche, esto pude deberse a que hubo una gran
cantidad de degradación por parte de estos microorganismos. El equipo 6 fue el segundo en
posicionarse en mayor cantidad de proteolíticos obtenidos con un valor de 1.887x1 07
UFC/g en base seca, esto lo podemos observar de mejor manera en la Fig. 2. Mientras que

Équipo 3 y 7 Procesos microbianos del ciclo del nitroó geno Paó gina 7
el equipo con menor cantidad de UFC/g en base seca fue el 9 con una cantidad de 3.17x1
4
0 .

Para el caso del proceso de amonificación podemos observar la Tabla 3, que el equipo 9 es
el que tiene menor cantidad de NMP/g en base seca, mientras que los equipos 1, 4 y 6 son
los que obtienen mayor cantidad de microorganismos amonificadores contenían , el equipo
cuatro es el que obtiene la primera posición con un valor mayor de 2.39x1 04 . Sin tomar
en cuenta a los equipos que les dio un NMP en la tabla de >1100, observamos que el equipo
7 tiene el valor más alto entre los equipos restantes, esto lo podemos observar en la Fig.6.

En el proceso de nitritación observamos en la Tabla 1, que el equipo 1 obtiene los valores

más altos con un NMP en tabla >1100 mientras que el equipo 4 se posiciona en el último
lugar con el menor valor que fue de <3.0, si descartamos estos dos valores observamos que
los resultados más altos en NMP/g en base seca son para la estación 2 con los equipos 2 y
7, esto lo podemos observar con mejor claridad en la Fig.1.

Para la fase de desnitrificación notamos en la Tabla 4, que los equipos 2, 4 y 9 obtienen de

nuevo un NMP en tabla >1100, esto nos indica que tienen una gran cantidad de
microorganismos desnitrificantes, después de estos valores tan altos observamos que los
equipos 1, 5, 7 y 10 tienen valores muy cercanos, y los equipos 3, 6 y 8 tampoco difieren
entre sus resultados se observa mejor en Fig. 10.

Como sabemos la cantidad de microorganismos puede variar, dependiendo de algunos

factores como lo es la temperatura, la humedad, la luz solar, la cantidad de materia orgánica,
tipo de suelo entre otras, cabe mencionar que en algunos procesos coinciden los dos
equipos de una misma estación en tener los valores más altos como lo fue en el caso de la
amonificación, en donde la estación 1 obtuvo los valores más altos, mientras que para el
proceso de desnitrificación la estación 4 obtuvo los valores más altos.

Para el análisis de los procesos de nitrificación, amonificación y desnitrificación se realizó

una modificación en tiempo, ya que para la nitrificación la incubación era durante 14 días
bajo una temperatura de 28°C, mientras que para los dos restantes era de 7 días bajo 28°C.

Mientras que nosotros realizamos los tres procesos en un tiempo de incubación de 14 días
bajo una temperatura de 28°C, no podemos acertar al cien por ciento que esto fuese un

Équipo 3 y 7 Procesos microbianos del ciclo del nitroó geno Paó gina 8
factor para no obtener ninguna cantidad de microorganismos para la fase de nitratación, y
que por ende hubiese afectaciones a nuestros resultados en los otros procesos.

CONCLUSIÓNES.

 Se determinó experimentalmente los principales procesos metabólicos involucrados en

el ciclo del nitrógeno.
 Se enumeraron las formas fisiológicas de bacterias involucradas en estos procesos,
en diferentes muestras de suelo.
 Los factores bióticos y abióticos producen alteraciones en el número de
microorganismos involucrados en los procesos del ciclo del nitrógeno.

CUESTIONARIO

1. ¿Qué factores pueden alterar el número de microorganismos involucrados en el ciclo del

nitrógeno?
 Temperatura, humedad, vegetación, tipo de suelo, luz solar, cantidad de materia
orgánica, el oxígeno con el que puedan estar en contacto y la ausencia de amoniaco
o nitritos.
2. Como afecta la presencia o ausencia de oxígeno en los diferentes procesos del ciclo del
nitrógeno.
Tabla 5: diferencias con la presencia o ausencia de oxígeno en el ciclo del
nitrógeno.

Presencia
Como receptor de electrones
(oxidantes).
Inactiva la nitrogenasa
Desfavorece el proceso de fijación
Ausencia
Existen organismos que producen
desnitrificación.
La nitrogenasa puede trabajar
Favorece el proceso de fijación

3. La adición de fertilizantes nitrogenados puede tener consecuencias en los procesos

globales de contaminación. Indique cuales consideraría usted que son esas
consecuencias.
 Hablando en general de los fertilizantes, estos pueden afectar las aguas
subterráneas si se utilizan en abundancia y no es posible la absorción de la cantidad
usada. No solo afectaría las aguas, ya que en un gran exceso esto puede provocar la
eutrofización de las aguas donde se está llevando la acumulación, esto quiere decir

Équipo 3 y 7 Procesos microbianos del ciclo del nitroó geno Paó gina 9
 que tendremos un desarrollo masivo de algas las cuales van a suprimir la vegetación
marina así como a otras especies animales.
 En el caso de la agricultura es una fuente principal de contaminación en el aire, no
solamente hablando del ganado que afecta en un 40% de la producción global de
emisiones de amoniaco mientras que el uso de fertilizantes es del 16%, estas
emisiones provocan acidificación en los suelos.

Tabla 6: Composición promedio de algunos fertilizantes.

Fertilizante Formula N (%)

Nitrato de amonio NH 4 NO 3 33
Fosfato monoamónico NH 4 H 2 PO 4 11
Fosfato diamónico ( NH 4 )2 HPO4 21
Sulfato de amonio ( NH 4 )2 SO 4 21
Nitrato de calcio Ca ( NO 3 )2 16
Nitrato de sodio NaNO3 Na NO 3 16
Urea CO ( NH 2 )2 46
Nitrato de amonio cálcico ( NO3 ) NH 4 Ca 27
Nitrosulfato de amonio NH 4 NO 3 ( NH 2 )2 SO 4 30
Cloruro de amonio NH 4 Cl 26
Nitrato de potasio KNO3 14

4. Cuáles son las ecuaciones químicas que se llevan a cabo en cada uno de los procesos
biológicos analizados.
 Fijación
N2→ N H3
 Nitrificación
−¿
−¿ Fase II Nitratación N O¿3
→
N H 3 Fase 1 Nitritación N O¿2
→
 Proteólisis
Proteínas → Aminoácidos
 Amonificación
Proteínas → Aminoácidos → N H 3
 Desnitrificación
−¿ → N 2
−¿ → N O¿2
¿
N O3

Équipo 3 y 7 Procesos microbianos del ciclo del nitroó geno Paó gina 10
Bibliografía.

 «Agricultura mundial: hacia los años 2015/2030,» [En línea]. Available:

http://www.fao.org/docrep/004/y3557s/y3557s11.htm. [Último acceso: 07 Abril 2018].

 I. A. M. B. Ing. Agr. Carlos Perdomo, «fagro,» [En línea]. Available:

http://www.fagro.edu.uy/fertilidad/publica/Tomo%20N.pdf. [Último acceso: 07 Abril
2018].

 Microorganismos de alteración o deterioro. [En línea]. Available:

http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/4Alteracion_6541.pdf

 Profesora: Dra. Nora Iñón. Fijación Biológica Del Nitrógeno. [En línea]. Available:
http://www.iib.unsam.edu.ar/archivos/docencia/licenciatura/biotecnologia/2017/Quimica
Biol/1495120476.pdf

Équipo 3 y 7 Procesos microbianos del ciclo del nitroó geno Paó gina 11