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CURVA DE CRECIMIENTO DE LEVADURA

I. INTRODUCCION.
Los métodos directos de cuantificación de microorganismos permiten

establecer la población total de microorganismos existentes, tienen la ventaja de

ser rápidos aunque no es posible diferenciar a las células vivas de las muertas.

Entre estos métodos tenemos la turbidimetría.

II. OBJETIVO.
- Determinar curva de crecimiento a levadura en estudio y de la levadura
Saccharomyces mediante método de tubidimetría con inóculo de 10%.
- Observar la acción fermentativa de la saccharomyces en masa de pan.

III. REVISION BIBLIOGRAFICA


3.1. Levaduras.
Se considera que las levaduras son hongos unicelulares, en contra

posición a los mohos que son multicelulares. Las levaduras pueden ser

diferenciadas de las bacterias por el mayor tamaño de sus células y por la forma

ovalada, alargada, elíptica o esférica de las mismas (JAY, 1994).

3.2. Crecimiento de levadura


El crecimiento de levaduras se realiza por el método de

TURBIMETRIA que consiste en medir la densidad óptica a 660 nm.(SCRIBAN,

1985). La turbidimetría mide la luz dispersada como un decrecimiento de la luz

transmitida a través de la solución. (HERNANDEZ, 1997).

En una suspensión microbiana la cantidad de microorganismos está

directamente relacionada con la turbiedad o densidad óptica. La metodología es

útil con suspensiones de densidad microbiana baja y con cultivos en donde los
microorganismos son unicelulares y con un tamaño de unos cuantos micrómetros,

características que les permiten mantenerse suspendidos y homogéneamente

distribuidos; en tanto que con microorganismos de mayor tamaño y con aquellos

productores de polisacáridos esta metodología no es adecuada.

IV. MATERIALES Y METODOS


4.1. Microorganismo.
Levadura en estudio
Levadura Saccharomyces cerevisiae.
1 cucharada (tamaño café) de fermento biológico seco instantáneo
(levadura) Saccharomyces cerevisiae

4.2. Reactivos
- Medio BYPO liquido
- Medio caldo nutritivo
- Alcohol 96º
4.3. Materiales y equipos.
- Asa de siembra. - Espátula.
- Matraces de 250 mL. - Cocina.
- Tubo de ensayo de 10 mL. - Mecheros.
- Pipetas de 1 mL. - Autoclave
- Algodón. - Incubadora.
- Piola. - Bandeja agitadora.
- Espectrofotómetro.
- Un recipiente de diámetro y alto 7 x 14 cm
- 1 regla.
- 4 cucharadas (tamaño te) de harina de trigo
- 2 cucharadas (tamaño café) de azúcar
- 6 cucharadas (tamaño té) de agua.
4.4. Metodología.
4.4.1. Para determinar el crecimiento de la levadura en estudio se realiza
los siguientes pasos:
Primero: Acondicionamiento de la levadura al medio de cultivo.
La levadura aislada en placa se siembra con asa de siembra en 50 mL
de medio BYPO liquido en un matraz y se pone a agitación a 150 rpm
durante 24 horas a temperatura 28 ºC; con la finalidad de habituar al
microorganismo al medio.
Segundo: Crecimiento microbiano.
a. La levadura, una vez acondicionada al medio, se inocula 10% en 50
mL de medio BYPO líquido empleando un matraz de 250 mL, seguidamente
se procede con la medición de densidad óptica a 660 nm cada dos horas.
Para ello se realizaron diluciones de 0.5 mL. de caldo en 2.5 mL. de
agua estéril. Al aumentar las lecturas de absorbancia a más de 0.600 (D.O),
se realizaron diluciones de 0.1 mL. de caldo en 2.9 mL. de agua estéril,
procediéndose a leer la absorbancia.
b. Inocular con 1ml del cultivo del matraz los tubos con caldo nutritivo
e incubar a 28 °C. Cada dos horas se sacará un tubo y se le medirá su
turbidez a 600nm, se harán diluciones de aquellas muestras en que la
densidad óptica sea mayor a 1

4.4.2. Para observar la acción fermentativa de la Saccharomyces en la


masa del pan se realizará lo siguiente:
 Disolver la levadura en agua.

 Preparar en la bolsa de plástico una gacha espesa de harina de

trigo, azúcar, agua y levaduras.

 Medir la altura inicial de la masa.

 Repetir las mediciones cada 5 minutos hasta el colapso de la masa.

 Control: repetir el experimento, sin agregar levaduras, en el punto 1.


V. RESULTADOS Y DISCUSIONES
5.1.-RESULTADOS
LECTURAS DE ABSORBANCIA PARA CURVA DE CRECIMIENTO

LEVADURA: levadura en estudio

CONDICIONES: 28°C -150 rpm

CELULAS INICIO: 0 millones de células/ mL matraz

Fecha Hora Tiempo Absorvancia Vol. Tomado Dilución

(h) 660 nm ( mL ) matraz mL cub / mL matraz

14:30 0.00 - 0.047 0.500 6

30/05/2018 16:30 2.00 0.500 6

18:30 4.00 0.500 6

Nº Células (ec) incrementos Nº Células


millones cell / mL matraz millones cell / mL matraz
-24 0
1 26 26
1 26 26

CURVA DE CRECIMIENTO DE LA LEVADURA

LEVADURA
millones cell / mL Horas
-24 0.00 5
0
1 3.25
-50.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00
mill cell / mL.

1 4.35 -10
-15
-20
-25
-30

Horas
L11

5
0
0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00
-5
mill cell / mL.

-10
-15
-20
-25
-30

Horas

ACCION FERMENTATIVA DE SACCHAROMYCES

Curva de accion fermentativa con


saccharomyses
100
85 90
80 75 80 75
60 65
54
40 43 ALTURA mm
24 30
20
0
0 10 20 30 40 50

Curva de accion fermentativa sin


saccharomyses
25

20

15

10 ALTURA mm

0
0 10 20 30 40 50
5.2.-DISCUSIONES
 Los datos obtenidos en la práctica no fueron tan verídicos ya que el
lugar en el que se realizó no tiene las características necesarias como
por ejemplo estar libre de microorganismo.
 La presencia de microorganismos hizo de la práctica algo inexacta ya
que el lugar no estaba asépticamente preparado. La falta de equipos y
reactivos no permiten la eficacia de resultados.

VI. CONCLUSION
Es un tema muy importante ya que nosotros como futuros ingenieros
agroindustriales debemos estar al tanto de las tecnologías que existen para
lograr mejores procesos de forma que las tareas designadas no sean
complejas y tengamos soluciones de calidad.
Fue una práctica en la que se aprendió de manera generalizada el uso del
espectrofotómetro con respecto al crecimiento microbiano.
VII. BIBLIOGRAFIA
CRUEGER, 1993. Biotecnología. Manual de Microbiología Industrial. Trad.
por Paloma Liras Padín. 3 ed. Zaragoza – España, Acribia S.A. 413 p.
HERNÁNDEZ, 1997. Microbiología. Editorial Paraninfo. Madrid.
TORTORA, J. 1993. Introducción a la Microbiología. 3 ed. Zaragoza –
España. Editorial Acribia. 289 p.