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FERMENTACIÓN ALCOHÓLICA
PARTE A: FERMENTACIÓN ALCOHÓLICA DE JUGO DE POMELO
PARTE B: USO DEL SACARÍMETRO DE EIHÖRN
DOCENTES:
STELLA, LAURA INES
GARCIA, ROCIO
Introducción
Todos los organismos vivos se caracterizan por tener asociada consigo el proceso de metabolismo.
El mismo es el medio por el cual los organismos sintetizan energía para satisfacer las demandas
internas que tienen de la misma. El metabolismo en si consiste en dos etapas, el anabolismo y el
catabolismo. El catabolismo comprende los procesos asociados a la transformación de
macromoléculas complejas en otras moléculas más sencillas, con su consecuente almacenamiento
de energía proveniente de los enlaces que se rompen de estas moléculas complejas, en forma de
ATP. Las levaduras son microorganismos anaeróbicos facultativos (es decir, capaces de vivir en
ausencia de oxigeno). Esto implica que pueden obtener energía independientemente de si hay o
no oxígeno. Para las levaduras y en general, la respiración celular es el proceso catabólico
mediante el cual el rendimiento energético es mayor. No obstante, poseen la capacidad
adaptativa de poder obtener energía en ausencia de oxígeno. Este proceso alternativo de
obtención de energía se denomina fermentación alcohólica. La fermentación alcohólica se origina
al ponerse en contacto varias especies de levaduras que atacan el azúcar y otras sustancias
presentes en el jugo, formando etanol y otros compuestos. Para esta experiencia se empleara jugo
de fruta (pomelo), el cual será un sustrato óptimo para llevar a cabo la práctica.
Materiales
Vaso de precipitado
Pisetas
Probeta
Varas de vidrio
Exprimidor
Pomelo amarillo (dos unidades)
Sacarímetro de Eihörn
Varilla de vidrio
Instrumentos
Balanza granataria
pH metro
Cámara de Neubauer
Cubre cámara
Microscopio óptico
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Desarrollo
El desarrollo del práctico dio inicio con la preparación del jugo de pomelo, comenzando por
exprimirlo y tomar nota de las características apreciables en el mismo. Para extraer el jugo se utilizó
un exprimidor eléctrico. A razón de favorecer el proceso de fermentación se añadió azúcar al jugo
de pomelo, con el posterior agregado de levaduras de panadería, siendo estas las responsables de
llevar a cabo el proceso fermentativo.
Pasados unos 30 minutos aproximadamente, se extrajo una alícuota de 5ml para preparar en un
matraz de 50ml, una dilución 1/10 a fin de realizar un primer recuento de células de levadura en la
cámara de Neubauer bajo microscopio óptico. Las observaciones microscopio se realizaron con un
aumento total de 400x, siendo 10x correspondientes al lente ocular y 40x al lente objetivo.
El vaso de precipitado donde se dispuso la muestra de pomelo con azúcar y levadura se cubrió con
papel metálico de modo que se mantengan las condiciones de anaerobiosis y además, impedir que
cuerpos extraños puedan alojarse o disponerse dentro del vaso afectando a la experiencia.
La toma de una alícuota con su inmediata dilución o no, se realizó luego a diferentes tiempos
posteriores correspondiendo a: pasadas 12hs, 36hs y luego 120hs (5dias) de la preparación de la
muestra de juego de pomelo con azúcar y levaduras. Cada análisis de estas alícuotas consistió en
observar al microscopio para realizar el conteo correspondiente de células de levadura presentes
en la muestra para cada tiempo.
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Observaciones:
A continuación se presentan las características observadas en la muestra preparada del jugo de
pomelo, a distintos tiempos de análisis.
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Observadas en cámara de Neubauer con aumento ocular 10x y lente objetivo 40x (aumento total: 400x).
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Observadas en cámara de Neubauer con aumento ocular 10x y lente objetivo 40x (aumento total: 400x).
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Observadas en cámara de Neubauer con aumento ocular 16x y lente objetivo 40x (aumento total: 640x).
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Resultados y gráficos
nº Células/ml tiempo [h]
117.500.000 0,5
194.000.000 12
375.000.000 36
1.600.000 120
300,000,000
194,000,000
N [n° celulas/ml]
250,000,000
200,000,000
150,000,000
100,000,000 117,500,000
1,600,000
50,000,000
0
0 20 40 60 80 100 120 140
tiempo [h]
En el primer tramo, representado por la línea continua, puede apreciarse un crecimiento en número
de células en las muestras tomadas para distintos tiempos. Esta etapa corresponde a la
multiplicación donde la reproducción de las células es rápida, de manera tal que el medio es
ocupado en mayor medida por aquellos microrganismos capaces de reproducirse con mayor
velocidad respecto a otros, o que sean capaces de generar productos metabólicos o sustancias
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Observadas en cámara de Neubauer con aumento ocular 10x y lente objetivo 40x (aumento total: 400x).
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A partir del tercer punto se estima (debido a la falta de tiempo para obtener más datos) que se
alcanza la segunda etapa observable en el gráfico (en línea de puntos), la fase estacionaria. En esta
etapa las levaduras dejan de reproducirse con tanta velocidad debido a que la fuente de carbono
(azúcar agregada y presente en el jugo de fruta) ya no es suficiente para cubrir la demanda de la
población de células. El cuarto punto correspondiente para las 90hs de realizarse la extracción del
jugo, es solamente estimativo para determinar un rango en el que podría haberse mantenido la fase
estacionaria.
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Esquemas
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Desarrollo
Se procedió a pesar la glucosa necesaria para preparar 50ml de solución de glucosa al 10% (5g
aproximadamente) y la levadura seca a agregar, que fue de 0,015g aproximadamente. Para
favorecer la actividad de las levaduras se preparó la solución utilizando agua tibia. A esta solución
de glucosa se la preparo en un vaso de precipitado. Una vez lograda la solución se le añadió la
levadura pesada agitando con una varilla de vidrio para favorecer la disolución de esta en el agua. A
este preparado se lo dispuso luego en el sacarímetro de Eihörn, evitando que queden burbujas de
agua. Al mismo instante se comenzó a tomar el tiempo con cronometro para poder determinar, a
partir de las graduaciones en el sacarímetro, los volúmenes de gas generado a distintos tiempos.
tiempo [min] volumen de CO2 [ml] tiempo [min] volumen de CO2 [ml]
0 0 30 0,8
5 0,01 35 1,6
10 0,05 40 2,4
15 0,1 45 3,3
20 0,2 50 4,1
25 0,5 30 0,8
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Conclusión/es
Los objetivos propuestos para la experiencia fueron alcanzados de manera satisfactoria. Logro
realizarse el proceso de fermentación alcohólica espontanea en una muestra de jugo de pomelo en
laboratorio. A partir de los datos obtenidos se construyó y analizo la curva de crecimiento
correspondiente para las levaduras, siendo estas los microorganismos dispuestos en el jugo para
realizar la fermentación en el mismo. A partir de la curva de crecimiento, se distinguieron las
diferentes etapas que suceden durante el mecanismo asociado a la cinética del crecimiento
microbiano.
A su vez, fueron aplicados los conocimientos adquiridos en prácticos anteriores acerca del uso del
microscopio, preparación de cámara Neubauer y el conteo de microorganismos.
Bibliografía
Apuntes proporcionados por la catedra de Biotecnología, UTN FRRe.
http://www.fmed.uba.ar/depto/microbiologia/catedra2/sem101.pdf
Aquiahuatl Ramos, María de los Ángeles. Manual de prácticas de laboratorio de
microbiología general. Primera edición. Año 2004.