UNIVERSIDAD DEL CAUCA

​ acultad De Ciencias Naturales, Exactas Y De La Educación

F
Departamento de Biología
Laboratorio de Microbiología.

MÉTODOS DE ASEPSIA Y UBICUIDAD MICROBIANA

Bolaños Angulo Darlin Paola (código); Astudillo Linda Jineth (103015011037); Alvarado Rengifo
Marbelle (1030150110 ); Jorge Isaac Sanmiguel ( 103012011299).

Realización:​ 15 de mayo de 2018; ​Entrega:​ 29 de mayo de 2018

Docente:​ Sandra Rivas.
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Resumen: En la práctica realizada se llevaron a cabo técnicas de asepsia, como flamear el asa hasta que el
alambre tome un tono rojo, trabajar siempre junto al mechero, flamear la boca del tubo y cajas de petri. Se
realizaron diferentes pruebas para aislar microorganismos, se tomaron muestras de mucosas, (nariz, boca,
párpado inferior), superficie, aire y manos, las distintas muestras se sembraron en medios de cultivo los cuales
fueron incubados durante un determinado tiempo, esto permitió el crecimiento de colonias las cuales fueron
indispensables para la observación de diferentes formas de colonias ( irregular, circular), borde ( liso,
encorvado, ondulado ) y color ( blanco, beige, anaranjado, verde, amarillo) que existen, comprobando así la
diversidad de bacterias que se encuentran en múltiples espacios y las semejanzas que algunas de estas colonias
presentan.

Palabras claves: ​Asepsia, Ubicuidad, Contaminación microbiana, Colonias, Incubadora.

OBJETIVOS: Microorganismos del aire: ​Se destapó una

caja de petri con agar nutritivo en los
Comprender la importancia de la asepsia en el siguientes lugares: Sobre la incubadora, en
control de la contaminación microbiana en el pasillo, baño, dentro de la cámara de flujo
laboratorio laminar apagada, dentro de la cámara de flujo
laminar encendida, al lado del mechero
Demostrar la ubicuidad de los encendido, teniendo en cuenta las técnicas de
microorganismos en diversos ambientes, asepsia finalmente se rotuló e incubó a 35 ± 2
superficies corporales y objetos inanimados ªC durante 24 a 48 horas, colocando las cajas
utilizando técnicas de cultivo en medio sólido. invertidas.

I.​ ​METODOLOGÍA: Microorganismos de las superficies: ​en este

Se realizaron diferentes experimentos para
verificar la importancia de tener una correcta
asepsia y la presencia de microorganismos en
los diferentes ambientes muestreados.
caso se trabajó seis ambientes distintos.
Inicialmente se utilizó un copo de algodón
humedecido en solución salina y se frotó sobre
la superficie del suelo del laboratorio sin
desinfectar. Posteriormente con copos de
algodón (diferentes en cada muestreo) se frotó
sobre superficies de: suelo del laboratorio
 desinfectado con etanol 70%, suelo
desinfectado con hipoclorito de sodio en tres
concentraciones distintas (5.25%, 2.5%, 0.5%)
y por último sobre la pared de la incubadora.

Microorganismos en mucosas: ​con la ayuda

de una torunda de algodón previamente
humedecida en solución salina, percatandonos
que estuviera estéril; las siguientes pruebas en Suelo Circular
mucosas se realizó por persona: Fosas nasales, desinfectado Irregular Lobu. Blanco 2
la boca con enjuague bucal y otra no, párpado con etanol.
inferior, terminado el procedimiento se incubó
a 35 ± 2 ªC durante 24 a 48 horas, colocando
las cajas invertidas.

Microorganismos en manos: ​Los ambientes

muestreados para este caso fueron los
siguientes: manos sin lavar, manos lavadas con
antibacterial y manos lavadas con agua de
grifo. Se utilizaron torundas para hacer la
Suelo
siembra sobre el agar nutritivo. Finalmente se
desinfectado Circular Liso Anaranj 21
incubó a 35 ± 2 ªC durante 24 a 48 horas.
con NaClO Irregular Ondu. ado
2,5%.
II. RESULTADOS.

Tabla 1. ​Resultados Microorganismos en

Superficies.

Ambiente Forma de Borde Color # de

colonia colonia

Pared interna Irregular

de la Filamentos Liso Beige +20
incubadora. a Suelo
desinfectado Irregular Lobu. Blanco 1
con NaClO
0,5%.

Suelo sin Irregular Liso Blanco 25

desinfectar. Circular
 Tabla 3. ​Resultados de microorganismos en
Suelo
mucosas.
desinfectado x x x x
con NaClO
5,25%. ​Forma ​# de
​Ambiente de Borde ​Color coloni
colonia a

Muestra de
la boca sin irregul Encorv Translúcid 34
listerine ar ado o- blanco

Nota: ​Hipoclorito (NaClO), lobulado (Lobu),

ondulado (Ondu).

Tabla 2. ​Resultados de microorganismos del aire.

Forma Muestra de
Ambiente de ​Borde Color Elevac la boca con Irregul Ondul Amarillo- 69
colonia ión listerine ar ado blanco

Cámara de
flujo circular entero lisa, plana
laminar brillante,
encendida superficial

Cámara de
flujo circular entero lisa, plana
laminar brillante,
apagada superficial
Párpado circular liso blanco- 60
Sobre la circular ondula rugosa, plana amarillo
incubadora do superficial
, mate

Sobre el
mesón al irregul lobula lisa, plana
lado del ar do brillante,
mechero superficial

circular entero lisa, plana

Baño brillante,
Mucosa irregul encorv blanco- 3
superficial
nasal ar ado traslúcido
lisa,
Pasillo circular entero superficial elevad
, mate o
 Circular Encorva Blanco, 2
Manos sin do opaco.
lavar translúcid
a

Irregular Ondula Blanco, 3

do opaco.
​
Nota: Observaciones las 24 y 48 horas después de
incubar a una temperatura de 36°C.
Tabla 4. ​Resultados de microorganismos en
manos. III. DISCUSIÓN DE RESULTADOS.

​Ambiente ​Forma de ​Borde ​Color #​ de Los microorganismos se encuentran

colonia colon distribuidos por todas partes cumpliendo
ia funciones ya sean benéficas o perjudiciales,
esto quiere decir que son diversos en el
Redondea Liso Blanco, 1
ambiente y en materiales, y la diversidad de
do opaca,
estos microorganismos puede ser corroborada
lisa
por medio de pruebas microbiológicas como la
Manos sin Blanco, 2 siembra de muestras tomadas de superficie,
lavar Irregular Encorva translúcid aire, manos y mucosas. Es importante
do a, lisa mencionar que las muestras tomadas fueron
llevadas a la incubadora a una temperatura de
Blanco, 3
37° C ya que es la temperatura óptima a la que
Irregular Ondula opaca,
do lisa
la mayoría de gérmenes o bacterias crecen,
mientras que las temperaturas bajas retrasan el
Liso Blanco, 1 crecimiento de los gérmenes y a temperaturas
Redondea lisa de congelación se impide la multiplicación de
do brillante estos, de igual manera las altas temperaturas
Manos producen la muerte y destrucción de los
lavadas Irregular Blanco, 2
Ondula lisa
microorganismos, así a 65º C mueren gran
con agua
do brillante parte de los gérmenes patógenos y a 100º C se
de grifo.
destruyen prácticamente todo tipo de bacterias.
Irregular Lobulad Blanco, 3 (Montez, 2012).
o lisa
brillante En la tabla 1 se observan las pruebas
Manos Irregular Encorva Lisa 1
realizadas para superficies donde se tomaron
lavadas do brillante, muestras de diferentes sitios desinfectados y
con opaca sin desinfectar, permitiendo asi apreciar el
antibacteri crecimiento de distintas colonias. En el caso de
al Redondea Liso Blanco, 2 la muestra tomada del suelo de laboratorio sin
do opaca, desinfectar se encontraron 25 colonias con
rugosa
forma irregular, borde liso y color blanco,
Circular Liso Ocre-verd 1 mientras que desinfectado con etanol se
oso, lisa, obtuvo un crecimiento de 2 colonias de forma
opaca irregular, borde lobulado y color blanco. En
cuanto a las muestras de suelo desinfectado
con NaClO al 2.5% se obtuvo un crecimiento
de 21 colonias de forma irregular borde liso
ondulado y color anaranjado, con NaClO al
0.5% creció 1 colonia de forma irregular,
borde lobulado y color blanco y desinfectando
con el mismo NaClO pero en este caso al
5.25% no hubo crecimiento de ninguna. Con
estos resultados se puede deducir que el
NaClO al 0.5%, al 5.25% y el etanol son muy
buenos desinfectantes, mientras que al 2.5%
no sería viable utilizar como desinfectante ya
que el crecimiento de colonia fue casi igual al
crecimiento de colonia de la muestra del suelo
sin desinfectar.
En la tabla 2 se observan los resultados de los
microorganismos del aire donde se tomaron
muestras sobre la cámara de flujo laminar
encendida y apagada, sobre la incubadora,el
mesón al lado del mechero, baño y pasillo,
obteniendo de esta manera colonias de forma
circular, a excepción de la muestra tomada al
lado del mechero, pues ésta presenta una
forma irregular, en cuanto al color todas
presentaron una coloración lisa brillante, a
excepción de la muestra tomada sobre la
incubadora, ya que está presenta una
coloración mate, en cuanto a la elevación la
única que difiere es la muestra tomada en el
pasillo ya que ésta es elevada, mientras que el
resto de las colonias es plana, por último en
cuanto al borde la mayoría lo presenta entero,
mientras que la muestra sobre la incubadora lo
presenta ondulado y el de la muestra al lado
del mechero encendido es lobulado. Lo
anterior indica que las muestras tomadas sobre
el baño y la cámara de flujo encendida y
apagada se tratan de un mismo tipo de colonia
bacteriana tal vez porque ambos espacios a
pesar de estar en contacto con diferentes tipos
de muestras presentan un similar control de
desinfección, pues el baño está regularmente
aseado y desinfectado con cloro y la cámara de
flujo laminar está destinada a eliminar o evitar
cualquier tipo de bacteria, por lo tanto se
puede inferir que ambos lugares permiten el
crecimiento de este tipo de colonia.
En la tabla 3 se observan las muestras tomadas
sobre las mucosas como parte inferior del
párpado , mucosa nasal y muestra de la boca
con y sin listerine obteniendo para cada una de
estas muestras un número diferente de
colonias, En el caso de las muestras tomadas
de la boca sin enjuague con listerine se
obtuvieron 34 colonias con un forma irregular,
borde encorvado y un color
Blanco-translúcido, mientras que en la muestra
tomada de la boca después del enjuague sin
listerine las colonias crecieron
significativamente a un número 69, en este
caso la forma obtenida fue irregular, el borde
Ondulado y con una coloración de
amarillo-blanco, por lo que se puede decir que
el enjuague bucal al mismo tiempo que
elimina algún tipo de bacteria favorece el
crecimiento de otra, aunque también el
elevado crecimiento de las colonias en la
muestra de la boca con listerine pudo ser
debido a que fue sembrado en un medio de
cultivo con un pH de 7.0 ( neutro)
favoreciendo así su crecimiento, además cabe
mencionar que se estima que en la boca hay
cerca de 100 millones de bacterias por cada
milímetro de saliva, es decir cerca de 615
especies (Rodriguez, 2017) y al mismo tiempo
que algunos productos eliminan algunas
especies están favoreciendo a muchas otras.
En cuanto a la muestra tomada del párpado
inferior se obtuvieron 60 colonias con borde
liso, forma circular y color amarillo - blanco,
esto pudo ser debido a que la piel está
expuesta al aire libre y por ende al contacto
con múltiples bacterias ya que la piel humana
es el hogar de una amplia gama de bacterias,
hongos y virus. Las bacterias suelen preferir
sitios donde la piel está más grasa ( espalda y
orejas), ya que encuentran estas áreas como
zonas más estables para su supervivencia. No
obstante, incluso en otras zonas donde la piel
se encuentra más expuesta al medio físico y
tiende a resecarse con facilidad, es bastante
común detectar una presencia microbiana. La
mayoría de los microorganismos que habitan
en la piel son inofensivos o incluso
beneficiosos de alguna manera para nosotros.
Sin embargo, algunos de ellos son
responsables de múltiples trastornos, como es
el caso del acné, la psoriasis o el eczema
(Román, 2016).
Para el caso de la muestra tomada de la
Mucosa nasal aquí solo se encontraron 3
colonias que por su forma irregular, borde
encorvado y color Blanco-traslúcido hace
suponer que es el mismo tipo de colonia
encontrado en la muestra de la boca sin
listerine. El bajo número de colonias es debido
a los vellos de la nariz ya que estos actúan
como barrera defensiva física contra patógenos
ambiental como hongos, esporas y todo tipo de
bacterias,pues cuando una persona inhala aire
a través de su nariz inhala también todas las
partículas suspendidas en el aire donde las
partículas más grandes son atrapadas por el
pelo de la nariz quedándose pegadas en la capa
de moco que lo recubre.
Finalmente en la tabla 4 se observan
microorganismos encontrados en las manos sin
lavar, lavadas con agua de grifo y con gel
antibacterial encontrando en cada muestra 3
colonias con forma, borde y color diferente,
por lo que se puede decir que el gel
desinfectante no es de buena calidad ya que
aunque eliminó bacterias encontradas en las
manos sin lavar y permitió el crecimiento de
otras, corriendo el riesgo de que haya
eliminado bacterias benéficas para la salud
humana y por el contrario promueva el
crecimiento de otras que podrían causar
múltiples daños.
IV. CONCLUSIONES.
Gracias a la práctica realizada se pudo
observar que existen múltiples tipos de
bacterias en diferentes espacios como
superficies, mucosas, aire, manos y piel, donde
algunas colonias son las mismas a pesar de ser
extraídas de espacios diferentes a excepción de
algunas como es el caso de las bacterias
encontradas en las manos donde cada tipo de
colonia fue distinta. Por otro lado la muestra
que mayor número de colonias presentó fue la
tomada de la boca con enjuague de listerine el
cual favoreció el crecimiento de 69 colonias.
En cuanto a las muestras tomadas del suelo se
pudo comprobar que tanto el etanol como el
NaClO al 0.5% son muy buenos desinfectantes
ya que sólo permitieron el crecimiento de 2 y 1
colonia respectivamente, pero preferiblemente
se debe utilizar NaClO al 5.25% ya que no
permite el crecimiento de ninguna colonia.
Ahora bien, los productos usados como
listerine y gel antibacterial no son muy
recomendables ya que ambos permitieron un
mayor crecimiento de colonias. Finalmente se
pudo comprobar que las técnicas de asepsia
son fundamentales para llevar a cabo cualquier
procedimiento en cuanto a siembra de
microorganismos en diferentes tipos de
cultivos o cualquier otro procedimiento
microbiológico , pues las bacterias se pueden
encontrar en cualquier lugar y si no se llevan a
cabo las muestras se contaminaran.
V. PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS​.
1. ​Según los resultados de la práctica de
laboratorio, existen diferencias en la
abundancia y diversidad de los
microorganismos dependiendo del ambiente
muestreado? ¿Por qué?.
R: Según los resultados obtenidos si existen
diferencias significativas, puesto que la
contaminación puede ser provocada por
diferentes agentes presentes en los ambientes
de donde se tomó la muestra, además influye
la manera en que se manipularon los
instrumentos o equipos utilizados en cada
prueba.
2. ​Son similares o diferentes lo
microorganismos que se encuentran en cada
uno de los ambientes muestreados? ¿Por qué?.
R: Son diferentes, debido a que se pueden
encontrar microorganismos patógenos y no
patógenos, también tienen diferentes formas,
estructuras y texturas, todo esto gracias a las
condiciones del medio que les favorece a cada
grupo. Las diferencias también se ven
reflejadas en la coloración de las colonias que
van desde blanco, translúcidas hasta verdes; de
acuerdo a los resultados obtenidos.
3. ​Consultar y hacer una lista con nombres
científicos de 10 microorganismos comunes en
los ambientes de donde se obtuvieron las
muestras.
- ​Sthaphylococcus aureus
-​ ​Escherichia coli
- ​Pseudomonas
- ​Streptomyces
- ​Porphyromonas gingivalis
- ​Tannerella forsythia
- ​Haemophilus parainfluenza
- ​Flavobacterium
- ​Penicillium
- ​Mycetozoa
(Anónimo, 1996)
4. ​Con base en la lista que usted realizó,
seleccione 3 microorganismos y consulte sobre
su clasificación taxonómica, su metabolismo y
su importancia ecológica.
1. ​Sthaphylococcus aureus
Taxonomía
Dominio: Bacteria
Filo: Firmicutes
Clase: Bacilli
Orden: Bacillales
Familia: Staphylococcaceae
Género: ​Staphylococcus aureus.
En cuanto a los requerimientos de cultivo, son
no exigentes desde el punto de vista
nutricional, creciendo en medios pobres y
simples. En su relación con el oxígeno son
aerobios-anaerobios facultativos (Archer,
2000).
Su capacidad para producir en pocas horas
enterotoxinas resistentes al calor, la convierte
en una bacteria causante de un gran número de
intoxicaciones alimentarias. Estas toxinas
pueden producir náuseas, diarreas, vómitos de
manera intensa, pero de corta duración, de
varias horas a un día. La toxina actúa
rápidamente, manifestándose los síntomas a
las pocas horas de haber consumido el
alimento contaminado (Archer, 2000).
2. ​Streptomyces
Taxonomía
Dominio: Bacteria
Filo: Actinobacteria
Orden: Actinomycetales
Suborden: Streptomycineae
Familia: Streptomycetaceae
Género: Streptomyces
Es el género más extenso de actinobacterias,
un grupo de bacterias gram-positivas de
contenido GC generalmente alto.​ Se
encuentran predominantemente en suelos y en
la vegetación descompuesta y la mayoría
produce esporas (también denominadas
conidios) en los extremos de las hifas aéreas.
Se caracterizan por poseer un metabolismo
secundario (rutas metabólicas no requeridas
para la supervivencia) complejo. Dentro de su
importancia se producen numerosos
antibióticos de uso clínico como
estreptomicina, ácido clavulánico, neomicina,
cloranfenicol, etc. Las Streptomyces raramente
son patógenas, aunque pueden producir
infecciones en humanos y en las plantas,
ocasionando costras ( Scott, 2009).
 https://gestionintegra.com/factores-que-favore
3​. ​Penicillium cen-el-crecimiento-bacteriano/ Fecha de visita
: Mayo 28 de 2018.
Taxonomía.
Reino: Fungi Rodríguez, I. (2017). ​En nuestro cuerpo viven
Filo: Ascomycota unos 48 millones de bacterias. Tomado de :
Clase: Eurotiomycetes https://www.nacion.com/ciencia/aplicaciones-
Orden: Eurotiales cientificas/en-nuestro-cuerpo-viven-unos-48-bi
Familia: Trichocomaceae llones-de-bacterias-60-billones-de-virus-y-vari
Genero: ​Penicillium os-miles-de-millones-de-hongos/ZBPGABKR
E5AZLJUVGTHZ2GMP4Q/story/ Fecha de
Los miembros del género ​Penicillium son visita : Mayo 28 de 2018.
hongos filamentosos. Las especies de
Penicillium están ampliamente distribuidas en Román, L. (2016). ​Las bacterias de la piel
la naturaleza y se hallan en el suelo, la siempre nos acompañan​. Tomado de:
vegetación caída, el aire y el suelo. Además de https://omicrono.elespanol.com/2016/05/bacter
su potencial patogenicidad, Penicillium ias-de-la-piel/​. Fecha de visita : Mayo 28 de
produce mycotoxinas, son considerados 2018.
contaminantes habituales en el laboratorio,
pero pueden causar infecciones, especialmente
en huéspedes immunocomprometidos
(​Benenson, 1997).

VI. BIBLIOGRAFÍA.

Anónimo (1996). Programa de control

microbiológico ambiental en zonas de
producción. Ed. Asociación Española de
Farmacéuticos de la Industria (AEFI), Madrid.

Archer, GL. (2000). ​Staphylococcus

epidermidis and Other Coagulase-Negative
Staphylococci​. Mandel, Douglas, Bennet
Principales and Practice of Infectious diseases.

Benenson, A. S. (1997). ​Manual para el

control de las enfermedades transmisibles​.
16.a edic. Ed. Organización Panamericana de
la Salud, Washington.

Bartha, R. (2002). ​Ecología microbiana y

Microbiología ambiental​. Ed. Pearson
Educación, Madrid.

Montez, M. (2012). ​Factores que favorecen el

crecimiento bacteriano. Tomado de: