GOTA GRUESA: TINCIÓN GIEMSA

I. INTRODUCCIÓN

La parasitosis sanguínea es estudiada en laboratorio a través de tinciones como Giemsa, que

permite la visualización del parasito y la célula parasitada. El paludismo ocasionado por
plasmodium es determinado con esta técnica

La tinción de Giemsa es un método habitual para el examen de frotis sanguíneos, cortes

histológicos y otro tipo de muestras biológicas. Es muy útil para la identificación de riketsias
(plasmodium), protozoos…

La técnica de Giemsa está formada por varios colorantes: los tintes neutros utilizados
combinan el azul de metileno como tinte básico y la eosina como tinte ácido, lo que da una
amplia gama de colores. El azul de metileno es un colorante metacromático, de ahí que
muchas estructuras se tiñan de púrpura y no de azul. El pH de la solución de coloración es
crítico, entre 6.4 y 6.9 por lo que se debe ajustar idealmente según diversos fijadores.

¿Cómo vemos las células con esta tinción?

1. Citoplasma: rosa

2. Núcleos: azul

3. Eritrocitos: rojo

4. Gránulos de las células cebadas: violeta

5. Bacterias: azul

6. Parásitos: azul

PRINCIPIOS GENERALES

♦ El parásito causante de la malaria o paludismo es el plasmodio que se encuentra en la

sangre.

♦ La gota gruesa es la extensión de una gota de sangre en forma cuadrangular de un

diámetro aproximado de 1 a 1,5 cm mediante la cual se puede concentrar la densidad del
parásito permitiendo un examen rápido. Con la gota gruesa se puede detectar la presencia
del plasmodio, su especie y la densidad parasitaria.

♦ El frotis sanguíneo es la extensión de una gota de sangre de tal manera que se pueden
observar al microscopio, tanto los eritrocitos como los parásitos en un sólo plano. Con el
frotis sanguíneo se logra diferenciar claramente la especie de plasmodio.

♦ La recolección de sangre se debe hacer en el momento en que se presenta la fiebre (en

esta etapa los parásitos son más numerosos) y antes que se administren medicamentos
antipalúdicos.

♦ Para el pronóstico y el tratamiento de la enfermedad es importante que se identifique

la especie en el laboratorio.
♦ Existen 4 especies diferentes de parásitos que causan malaria o paludismo en el
mundo:

– Plasmodium vivax.

– Plasmodium malariae.

– Plasmodium ovale.

– Plasmodium falciparum.

♦ En el Perú solo se presentan tres de ellas. Plasmodium ovale solo se encuentra presente
en el África.

♦ Un paciente puede tener más de una especie de parásitos del paludismo al mismo
tiempo.

II. CAPACIDAD:

Utiliza técnicas de hematología en estudio de parásitos en sangre

III. FUNDAMENTO:

Los tintes neutros utilizados combinan el azul de metileno, azure A y azure B como tientes
básicos, y la eosina como tiente acido. Lo que da una amplia gama de colores de acuerdo a
la afinidad cromática de la célula. Al teñir la gota la sangre se seca, la hemoglobina de los
eritrocitos se disuelve y es arrastrada por el agua de la solución que contiene el reactivo.
Solo queda en la gota gruesa parásitos y leucocitos

IV. MATERIALES Y EQUIPOS

Laminas portaobjetos, solución de etanol
Soporte de coloración. Goteros
Colorante giemsa
Composición: Colorante giemsa
Metanol
Glicerina
Coloque y disuelve los ingredientes en un frasco que contenga cuentecillas de vidrio
y sacudir.
Sacude el frasco 3 veces al día por cuatro días consecutivos, por ultimo filtrar
Amortiguador del colorante: Fosfato monobásico de potasio 6.63 gr.
Fosfato bibásico de sodio 2.56 ml.
Agua destilada 1000.00ml
Equipos: microscopio

V. PROCEDIMIENTO:

Preparación de la gota gruesa

 Realizar la asepsia en zona de punción, ejecutar la punción

 Limpiar la primera gota de sangre
 Tomar el portaobjetos con la mano derecha y con la mano izquierda oprimir y
extraer una gota de sangre, apenas más grande que una O mayúscula
  Colocar la gota de sangre en la lámina, en uno de los extremos y con la esquina
de la otra lamina extender la gota aproximadamente un centímetro formando
un cuadrado.
 Con la misma lamina realizar hacia un extremo el frotis
 Rotular la lámina y dejar secar al aire.
 Dejar secar la muestra y proceder a la tinción.

Tinción giemsa

 Cubrir la extensión con alcohol metílico químicamente puro por 5 min. Dejar secar
al ambiente.
 Cubrir la gota con dilución preparada de 1 ml de agua tamponada mas de 2 gotas
del colorante.
 Dejar actuar en reposo por 10 minutos.
 Lavar en un aplaca Petri con agua, introduciendo y retirando tres veces sin
sacudir
 Dejar secar a temperatura ambiente
 Observar en el microscopio con objetivo de 40x y luego con objetivo de inmersión
100x.

VI. LECTURA: identificar las células sanguíneas y buscar parásitos en sus diferentes
estadios. la presencia de plasmodiun se caracteriza por un anillo de citoplasma azul
claro con un pequeño punto periférico de cromatina roja. Esto se informa por especie
y cantidad de parásitos. Los resultados de la densidad parasitaria es por 100 campos
examinados.

Numero de parásitos:

Menos de 40 parásitos: se informa 1-39 parásitos (100 campos)

+/- 2 parásitos 20-60 parásitos (100 campos)
+ de parásitos 1 parasito x campo
++ de parásitos 2 – 20 parásitos x campo
+++ de parásitos 21-200 parásitos por campo
++++ de parásitos mas de 200 parásitos x campo

VII. INTERPRETACIÓN
Una muestra negativa (-): indica ausencia de parásitos
Una muestra positiva (+): indica presencia de parásitos
 VIII. RESULTADOS

Preparación de la gota gruesa

Obtención de la gota Se rompe los hematíes formado un cuadrado con la

punta de una lámina portaobjetos

Tinción giemsa

Se le agrega a la muestra el colorante giemsa

Laminas cubiertas con el colorante por 10 min.
previamente diluido en agua tamponada
Enjuagando la lámina portaobjeto Colocando aceite de cedro a la
lamina ya seca

OBSERVACION EN EL MICROSCOPIO

IX. DISCUSION

La tinción giemsa es una técnica de coloración en el laboratorio que se realiza para descartar
especies de plasmodiun mediante la observación en el microscopio de los hematíes,
trofozoitos, esquizontes, gametocitos propios de este parásito.

En esta práctica no se pudo observar las láminas coloreadas al microscopio por cuestiones
de tiempo por lo que no logramos identificar ningún estadio de las especies de plasmodiun
Pero la técnica de coloración fue aplicada y aprendida.

X. CONCLUSION: Se realizó la técnica de coloración giemsa

XI. BIBLIOGRAFIA : www.labcross-tecnicasdehematologia”%$6gotagruesa.sadfgt.manual3

XII. ANEXOS
 P. falciparum

P. ovale