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Facultad de Salud y Nutrición

Curso: Microbiología

Clase N° 13. Retrovirus, Priones


Docente: Janet M. Quispe Quispe

Año Académico : 2018-I


INTRODUCCIÓN
• Familia de virus de hebra sencilla de ARN positiva con envoltura
• Asociados con cáncer, leucemia y SIDA
• Asociados con desórdenes inmunológicos y síndromes
degenerativos y neurológicos.
• En 1911 Peyton Rous
– Asociación con tumores sólidos en los pollos
– Virus de la Leucosis Aviar
– Virus del Sarcoma de Rous
• Se replican por una transcriptasa inversa
INTRODUCCIÓN
• Los retrovirus constituyen una amplia familia viral agrupada, bajo la
denominación Retroviridae.

• Todos los retrovirus comparten similares características en lo referente a


su organización genómica y estructura del virión.

• Se trata de virus cuyo material genético está compuesto por ARN y que
poseen una enzima, la transcriptasa inversa (TI), que permite la síntesis
de ADN complementario a partir del genoma vírico tras la infección de la
célula huésped.

• El genoma de los retrovirus puede integrarse específicamente en el


genoma del hospedador gracias al ADN intermediario.
CLASIFICACIÓN
 Los retrovirus se pueden clasificar dentro de tres géneros importantes:

HTLV-1, HTLV-2, HTLV-5


DELTARETROVIRUS TRANSFORMAN LA CELULA DIANA , PERO NO LA MATAN.
PRODUCE CANCER Y TRASTORNOS NEUROLÓGICOS.

VIH-1, VIH-2
LENTIVIRUS SON VIRUS LENTOS
PRODUCEN TRASTORNOS NEUROLÓGICOS E INMUNODEPRESORAS.

PRODUCEN UN EFECTO CITOPÁTICO VIRAL


SPUMAVIRUS NO CAUSAN NINGUNA ENFERMEDAD CLÍNICA
VIRUS ESPUMOSO HUMANOS
FAMILIA RETROVIRIDAE
FAMILIA SUBFAMILIA GENERO EJEMPLOS

Retroviridae Orthoretrovirinae Alpharetrovirus Virus del sarcoma y leucemia de aves (AVL)*

Betaretrovirus Virus de tumor mamario de ratón (MMTV)*

Gammaretrovirus Virus relacionado con leucemia de ratón (Mo-MLV)*

Deltaretrovirus Virus linfotrópico humano de células T (HTLV-1, HTLV-2)*


Virus linfotrópico bovino ( BLV)*

Lentivirus Virus de la inmunodeficiencia humana (HIV-1, HIV-2)*


Virus de la inmunodeficiencia Simia (SIV)*

Epsilonretrovirus Wally dermal sarcoma virus

Spumaretrovirinae Spumavirus Espumavirus Humano (HFV)*


ESTRUCTURA DE LOS RETROVIRUS
•Virus esférico envuelto
•Diametro: 90 – 130 nm
•Pequeñas proyecciones en su
superficie
•Nucleocapside esférica o en
cono truncado
•2% de ácido nucleico.(2 ARN
(+) y 1 ARNt (trp, pro,lys). Su
tamaño varía entre 8 a 11 kb.

Sigla Proteina Función


MA Matriz Proteina de la matriz (gen gag)

CA Capside Proteinas de la capside (gen gag); protege al core.

NC Nucleocapside Proteina de la capside (gen gag); protege al genoma, forma parte del core.

PR Proteasa Esencial para el clivaje de la proteina Gag durante la maduración

RT Transcriptasa Reversa Retrotranscripción del RNA genómico, también tiene actividad RNAsaH

IN Integrasa Codificada por el gen pol, es necesaria para la integración del provirus
Glicoproteínas de Proteínas externas de la envoltura; Antigeno viral muy importante. Interviene en la
SU
superficie union al receptor.
Proteina
TM Glicoproteinas internas de la envoltura madura
transmembrana
RETROVIRUS

 Retro significa hacia atrás, y el nombre hace referencia a que


estos virus tienen un modo inverso de replicar el ácido nucleico.

 Retrovirus: un genoma constituido por ARN, pero se replican por


medio de un ADN intermediario usando la enzima transcriptasa
inversa (o reversa).
 Retrovirus son interesantes por varias razones:

1. Fueron los primeros en que se demostró la capacidad para causar


cáncer habiéndose estudiado ampliamente por sus
características carcinogénicas.
2. Un grupo de retrovirus, el causante del SIDA, aunque se conoce
solo desde los primeros años de la década de 80, ha llegado a
representar uno de los mayores problemas de salud pública.

3. El genoma de los retrovirus puede integrarse específicamente en el


genoma del hospedador gracias al ADN intermediario, proceso que
está siendo estudiado.
LENTIVIRUS
•Infecciones persistentes, dando lugar a enfermedades con largos
periodos de incubación.

•Normalmente infectan células del sistema inmune (macrófagos,


células T)

•Una característica importante, carente en otros retrovirus, es su


habilidad para infectar a células quiescentes.

•Lentivirus: genoma de Acido Ribonucleico (ARN) más extenso, en


torno a las 10 Kilobases (Kb).

•Su propiedad más relevante estriba en la capacidad de codificar


genes esenciales que permiten la regulación de su propia expresión p10
en la célula infectada. p24 (PR)
(CA)
AR
•La replicación de los lentivirus es, en general, tóxica para la célula N+
p17
conduciendo a su disfunción y posterior muerte. (MA)

p7 (NC)
p66,p51
(RT)
p32 envolt
(IN) ura

gp120
gp 41 (SU)
(TM)
VIRUS DE INMUNODEFICIENCIA HUMANA
(VIH)
VIRUS DE INMUNODEFICIENCIA HUMANA
(VIH)

HISTORIA DEL VIH/SIDA

 1931: probable primer caso: primate a humano


 1981: descubrimiento de la enfermedad: SIDA
 1983: descubrimiento del virus de
inmunodeficiencia humana: VIH Luc Montagnier
& Robert Gallo.
 1985:test diagnóstico factores de
riesgo:sangre,sexo (HSV-2)
 1986: primer tratamiento disponible:AZT
Distribución mundial de niños y adultos viviendo con
VIH / 2017
Principales vías de transmisión por región.

Referencia de la Organización mundial de la salud-2017


PERSONAS CON VIH EN AMERICA LATINA -
2016
VIRUS DE INMUNODEFICIENCIA HUMANA
Familia Retroviridae

Subfamilia Orthoretrovirinae

Género Lentivirus

Tipos: VIH-1 y VIH-2

 Virus esférico envuelto (90–130 nm)

 Genoma: 2 hebras simples de ARN +

Proteínas de Superficie

gp120-gp41 // gp105-gp36

 Polimerasas unidas al ARN

p65/51; p31 // p68 – p34

 Proteinas del Core

p17 -p24 // p16 - p26


ESTRUCTURA BÁSICA DE
RETROVIRUS
1.- Core de ribonucleoproteína
a. Genoma - 2 cadenas RNA
b. Enzimas víricas
Transcriptasa inversa
Integrasa
Proteasa
c. Cápside
2.- Envoltura
a. Doble capa lipídica
b. Glicoproteínas de transmb.
ESTRUCTURA DEL GENOMA DE
RETROVIRUS
TRES genes que codifican dos o más proteínas

R U5 U3 R
5’ Poly A 3’
gag pol env

gag (group specific antigen) - codifica proteínes estructurales del core

pol (polimerasa) - codifica dos enzimas


transcriptasa inversa: necesaria para la transcripción inversa
es una DNA polimerasa - RNA dependiente
integrasa: permite la integración del provirus

env (envelope) - codifica proteínas de transmembrana de la envoltura


CICLO DE VIDA DEL VIH
Con la ayuda de la
transcriptasa reversa el VIH
forma ADN viral conocido como
ADN-VIH

Células blanco:
Linfocitos T CD4, Monocitos, Macrófagos, Cél de Langerhans, Cél dendríticas
CICLO DE VIDA DEL VIH
Usando una enzima en su
núcleo, la célula CD4 produce
Usando la integrasa el VIH ARN viral y mARN
inserta su ADN-VIH en el ADN
celular

Células blanco:
Linfocitos T CD4, Monocitos, Macrófagos, Cél de Langerhans, Cél dendríticas
CICLO DE VIDA DEL VIH
Las largas cadenas
de proteínas
Las enzimas del la célula
emigran hacia las
producen largas cadenas de
membranas de la
proteínas que contienen las
célula CD4
piezas del vih

Células blanco:
Linfocitos T CD4, Monocitos, Macrófagos, Cél de Langerhans, Cél dendríticas
CICLO DE VIDA DEL VIH

Células blanco:
Linfocitos T CD4, Monocitos, Macrófagos, Cél de Langerhans, Cél dendríticas
CICLO
REPLICATIVO
VIAS DE TRANSMISIÓN DEL VIH
HISTORIA NATURAL DE LA
INFECCIÓN POR EL VIH
HISTORIA NATURAL DE LA INFECCIÓN POR EL VIH
Síntomas de la retroviremia
aguda en VIH

• mialgia • Náusea, diarrea


• Linfadenopatía • Pérdida de peso
• Fiebre y fatiga • Sudoración nocturna
• Faringitis • Úlceras mucocutáneas
• Rash • cefalea
En sangre: linfopenia
Indicadores de SIDA
• Candidosis (esófago, • Neumonitis o esofagitis
tráquea, bronquios y por más de 1 mes
pulmones) • Sarcoma de Kaposi
• Criptotocosis • Linfoma cerebral
extrapulmonar • Neumonía linfoide
• Criptosporidiosis con intersticial/hiperplasia
diarrea persistente por linfoide pulmonar
más de 1 mes • Tuberculosis diseminada
• CMV y Herpes • Neumonía por
mucocutáneo Pneumocystis carinii
• Toxoplasmosis cerebral
Manifestaciones que
Definen el SIDA
• Infección • Sarcoma de Kaposi
micobacteriana • Linfoma no Hodgkin de
• Infecciones bacterianas células B
múltiples o recurrentes • Burkitt o no Burkitt
• Coccidioidomicosis • Sarcoma
diseminada inmunoblástico
• Encefalopatía por VIH
• Histoplasmosis
diseminada
• Isosporiasis
VIH-INFECCIÓN PRIMARIA TÍPICA
TECNICAS DE LABORATORIO PARA EL DIAGNOSTICO DE
LA INFECCION POR VIH
ESTUDIO DE RESPUESTA INMUNE
HUMORAL : IgM-IgG

Los test serológicos se basan en la interacción Antígeno-Anticuerpo.

 Test de Tamizaje
- ALTAMENTE SENSIBLES para poder detectar los Ac. De la muestra.
- Detectan anticuerpos para VIH-1 y VIH2 (sin lograr discriminar)
- Antígenos: Lisado total del virus, proteinas recombinantes, péptidos
sintéticos.

 Test Confirmatorios
- ALTAMENTE ESPECIFICOS para confrmar con certeza la presencia de Ac.
Específicos contra VIH.
- Pueden discriminar infección por VIH-1 y VIH-2.
PRUEBAS DE TAMIZAJE
ELISA
• Las técnicas inmunoenzimáticas metodología relativamente simple.
• Alta sensibilidad
• Nivel de automatización y diseño para realizar un gran número de tests de
forma simultánea.
PRUEBAS DE TAMIZAJE
ELISA
PRUEBAS DE TAMIZAJE
ELISA
PRUEBA RÁPIDA
• Principio: inmunocromatografía.
• Sensibilidad y especificidad: 97-100%.
• Cuando? Embarazada con trabajo de parto sin control previo para VIH, en
lugares que no cuentan con otra metodología.
• Por qué? Evaluar y decidir rápidamente la utilización de profilaxis
medicamentosa.
PRUEBA CONFIRMATORIA
WESTERN BLOT
PRUEBA CONFIRMATORIA
WESTERN BLOT
PRUEBA CONFIRMATORIA
WESTERN BLOT
PRUEBA CONFIRMATORIA
WESTERN BLOT
INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA
DETECCIÓN DE ACIDOS
NUCLEICOS
• Se realiza mediante la reacción de PCR.
• Altamente sensible y específico
• Dirigido específicamente a las secuencias nucleicas virales.
• Los análisis basados en ácidos nucleicos capturan porciones del ARN del
VIH o ADN pro viral y las amplifican para facilitar la detección del virus.
• Involucra tres etapas:
1.Extracción o captura del genoma viral
2.Amplificación
3.Detección

• Reduce el Período de Ventana desde la infección hasta la detección.


• El análisis NAT se usa más comúnmente para detectar el VIH en recién
nacidos y en bancos de sangre.
• Costoso.
OBJETIVOS DEL NAT
Terapia antirretroviral (TARV)
La finalidad del Tratamiento Antiretroviral (TARV) es reducir al máximo y durante el mayor tiempo la
replicación viral.El otro objetivo es preservar o restaurar el sistema inmune de la persona infectada.
Su aplicación, de acuerdo a las buenas prácticas clínicas ha disminuído la morbimortalidad y ha
logrado una sustancial mejoría en la calidad de vida y años de sobrevida de los pacientes.

Inhibidores de la
retrotranscripción

Inhibidores
de la Fusión

Inhibidores de
la Proteasa

Inhibidores de
la Integrasa
FARMACOS ANTIRETRIVIRALES
ALGORITMO PARA EL DIAGNOSTICO DE
INFECCION POR VIH
HTLV
TAXONOMIA

• Família Retroviridae
• Sub-família Oncovirinae
• 1980 – HTLV-1
• 1982 – HTLV-2
• 2005 – HTLV-3
• 2005 – HTLV-4
EPIDEMIOLOGÍA
•HTLV:Primer retrovirus descrito en humanos

•Mundo:15a20millones de personas infectados por HTLV-1

•Brasil:2,5millones de personas infectadas de HTLV-1

•En regiones endemicas la prevalencia aumenta en pacientes del sexo


femenino.
EPIDEMIOLOGÍA
HTLV-1

Esta distribuido en varias partes del mundo, las zonas con mas alta
prevalencia de HTLV-1 son el sur este de Japón, África, y las islas
del caribe. También es endémico en el sur de América.

HTLV-2

- Se encuentra en forma endemica en poblaciones indigenas como


indios de Guaymi de Panama.
- Se encuentra en paises como Italia donde es frecuente el uso de
drogas endovenosas.
- Ambos virus han ido encontrados en poblaciones de riesgo y
donantes de sangre.
LINFOMA DE CELULAS T DEL ADULTO

HTLV-1

PARAPARESIA ESPASTICA TROPICAL


HAM/TSP

15-20% POBLACION MUNDIAL SON SEROPOSITIVAS A HTLV-1

SEROPREVALENCIA:
- Región geográfica.
- Características Sociodemográficas.
- Composición de la población
- Comportamiento de riesgo de individuos.
VIAS DE TRANSMISIÓN

PERIODO DE
INCUBACIÓN 20-30 AÑOS
PATOGENICIDAD E INMUNIDAD

 El crecimiento celular descontrolado puede transformar


las células en células.

 Esta infeccion produce alteraciones genéticas en las


células a lo largo de un periodo extenso.

 Asociados a transtornos neurologicos neoplasicos.

 HTLV-causa leucemia linfocítica aguda de célulasT del


adulto (ATLL) o mielopatia asociado a HTLV-I(parapesia
espástica tropical), produciendo una enfermedad
neurologica oncogenica.
PATOGENICIDAD
Infectan principalmente linfocitos TCD colaboradores,
resultando en una proliferación maligna de dichas células.

Se ha observado que estas células una vez infectadas ya no


poseen la capacidad ayudadora.

También puede infectar Linfocitos TC8, y en menor grado


Linfocitos B, las neuronas expresan receptores para el virus.
CICLO DE REPLICACIÓN

• Los HTLV penetran el citoplasma de la célula huésped que esta en dicisión


1

• Una vez dentro de la célula, la enzima Transcriptasa reversa a partir del ARN viral
sintetiza el ADN viral.
2

• El ADN se traslada al núcleo de la célula huésped y se integra en el genoma celular


Provirus
3

• A partir del ADN se produce un ARN que es traducido a proteínas.


4

• Finalmente los viriones se ensamblan y se liberan de la célula por gemación en la


5 membrana celular del huésped produciiéndose una infección latente de por vida.
MIELOPATIA/ PARAPARESIA ESPÁSTICA TROPICAL
(HAM/TSP)
( De 2-3 % )
Leucemia / linfoma das células T do adulto (ATLL)
( De 1-2 % )

PRINCIPALES SINTOMAS Y SIGNOS


CLINICOS
- Fiebre
- Dolor abdominal
- Ictericia
- Perdida de peso
- Linfadenopatias
- Hepatoesplenomegalia
- Hipercalcemia
- Infecciones oportunistas
- Lesiones em piel.
DIAGNOSTICO LABORATORIAL

Realizado en dos etapas: Clasificación y confirmación

•Clasificacion: testes laboratoriais sorológicos(ELISA ou aglutinação –


Sorologia para HTLV).

•Presença de anticorpos contra o vírus

•Confirmação: utiliza-se geralmente um teste sorológico


(Westernblot) e em casos de indeterminação deste, o teste PCR
(HTLV-PCR)

•Os dois últimos testes, além de confirmarem a infecção, discriminam


se ela é causada pelo HTLV-1 ou HTLV-2.
DIAGNOSTICO LABORATORIAL
CURSO: MICROBIOLOGÍA

TEMA: PRIONES

DOCENTE:
Dra. Janet M. Quispe Quispe

Año Académico : 2018-1


HISTORIA
HISTORIA
PRIONES
Un prion es una Partículas proteínica infecciosa.

una proteína puede causar una enfermedad en particular y


puede ser trasmitida a otra persona si se expone a
materiales contaminados.
características de los PRIONES
Luego de haberla definido podemos citar las siguientes
características de un prion.
Puede producir una "infección" que puede llevar a la
muerte del "organismo infectado”
 Parece ser capaz de replicarse a sí mismo
No es una bacteria!
Es menor que un virus!
No es un virus!
No contiene la información genética
Composición química común a otros seres vivos.
características de los PRIONES
tipos de enfermedades producidas
por priones
forma de infección
estructura de los priones
Priones
• Para prevenir las enfermedades de etiología priónica y en
primer lugarla nueva variante de Cretzfeldt Jakob, es necesario
romper la cadena de transmisión, para eso el ejemplo ya
existe y lo anotamos antes al referirnos a la desaparición del
Kuru tras el abandono del canibalismo por parte de las etnias
afectadas en la Nueva Guinea.
CURSO: MICROBIOLOGÍA

TEMA: PCR

DOCENTE:
Dra. Janet M. Quispe Quispe

Año Académico : 2018-1


Semestre: IV
DEFINICIÓN DE PCR

La reacción en cadena de la polimerasa es una técnica


de biología molecular en donde hay reacción enzimática
in vitro que amplifica millones de veces una secuencia
específica de ADN durante varios ciclos repetidos en los
que la secuencia blanco es copiada fielmente.
APLICACIÓN DE PCR EN
MEDICINA
 Detección de cantidades mínimas(diagnóstico temprano en
pacientes asintomáticos)

 Monitoreo de terapia (por ej. Disminución de carga viral)

 Evaluación de terapia-pronostico de recaída

 Detección de cepas resistentes a antibióticos

 Detección temprana de Citomegalovirus y otros patógenos en


pacientes con trasplante de órganos (por inmunosupresión y
mayor riesgo a infecciones latentes)
EVALUACIÓN DE MUESTRAS
MUESTRAS QUE PUEDEN SER PATOGENOS QUE PUEDEN SER
EVALUADAS POR PCR DETECTADOS POR PCR

 SANGRE  BACTERIAS
 MUCOSA  HONGOS
 TEJIDO  PARÁSITOS
 ORINA  VIRUS
 HECES  MUTACIONES EN GENES
 LCR  AUSENCIA/DELECCIÓN DE
GENES
FUNDAMENTO DE LA PCR
 Es la amplificacion. enzimática de un fragmento de ADN flanqueado por
dos secuencias de oligonucleótidos que hibridan en la cadena
complementaria de la molécula molde que se va a amplificar
(cebadores o “primer”) y que son utilizados por una DNA polimerasa
termoresistentepara copiar la secuencia de la misma.

 Consta de 3 etapas: desnaturalización, hibridación y extensión.

ASPECTOS GENERALES
 Ampliamente sensible, detecta mínimas cantidades de un gen o
secuencia.
 Rápida. En pocas horas permite obtener resultados
 Múltiples aplicaciones
FUNDAMENTO DE LA PCR
PASOS DE LA PCR
REACCIÓN EN CADENA DE
POLIMERASA
CARGA VIRAL - VIH
PRE ANALITICO
• NO MAS DE 48 HORAS PARA SU PROCESO.
• SE REQUIERE PLASMA.
• VOLUMEN DE 1ml DEPENDIENDO DEL
EQUIPO.

CARGA VIRAL
- Es la cuantificación de VIH-1 que se
encuentra en el plasma o cuantificación del
RNA vírico que existe en una muestra.
- El método empleado consiste en técnicas de
biología molecular o de diagnóstico genético,
usando la reacción en cadena de la
polimerasa.
- La carga viral resulta un marcador de la
actividad del VIH-1 y junto con la
determinación de CD4 miden la competencia
del sistema inmune
ANALISIS DE CARGA VIRAL
Determinan el numero de partículas de VIH en
una muestra de sangre. Esto se lleva a cabo
comprobando los genes del VIH, llamado ARN por
mililitro

CARGA VIRAL INDETECTABLE


Determinan el numero de
partículas de VIH en una
muestra de sangre. Esto se
lleva a cabo comprobando
los genes del VIH, llamado
ARN por mililitro