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CODIGO: 2008157245
POR MEDIO DE LA PRESENTE ES GRATO DIRIGIRME A UD. PARA SALUDARLO Y A LA VEZ HACERLE
CONSTAR, SOBRE LAS ACTIVIDADES REALIZADAS EN EL INTERNADO.
• Afianzar conocimientos
sobre separación de
hemocomponentes.
• Determinar las
temperaturas, tiempo,
volumen, en el que se
conservan los
hemocomponentes
• Determinar los grupos
sanguíneos del sistema ABO
por fase globular y serica
• Demostrar la presencia del
antígeno D.
• Preparación de células
control coombs
Flebotomía
Es la extracción de la sangre de la vena medial de buen calibre que se le extrae al
Separación de Hemocomponentes
Son procesos que se llevan a cabo para obtener esencialmente 3
hemocomponentes:
agitación)
- 2200rpm
- T° 20C°
- Tiempo : 10 minutos
o automatizada.
200g.
- Se programa el equipo para separar el plasma
mencionados)
(confiriéndole el preservante
PG es de 250 ml aporx.)
- 3100rpm
- T° : 20 C°
- 10 min
INTRODUCCIÓN
Las secciones de Inmunohematología y Banco de Sangre tienen bajo su
responsabilidad el preparar los hemocomponentes y seleccionar el más indicado
para el paciente, a quien el médico se lo prescribe.
Para cumplir con esta labor se debe interaccionar con los donantes de sangre,
realizar pruebas inmunohematológicas como la determinación de grupos
sanguíneos, fenotipos y pruebas de compatibilidad dentro de otras.
La determinación de los grupos sanguíneos se realiza mediante una reacción
antígeno-anticuerpo.
El sistema de grupos sanguíneos ABO es único en cuanto a que una persona que
carezca de los antígenos A y/o B en los eritrocitos, regularmente tiene anticuerpos
en el suero dirigidos al antígeno o antígenos faltantes.
Para realizar el grupo sanguíneo de una persona se prueban directamente los
eritrocitos con reactivo Anti-A, y Anti-B (prueba con eritrocitos o prueba directa).
La confirmación de los resultados se hace utilizando eritrocitos de grupo A y B
(prueba sérica o prueba inversa). Algunas pruebas adicionales facilitan la
identificación de subgrupos
Prueba Globular (Directa): Es un método sencillo que consiste en hacer reaccionar
los glóbulos rojos del paciente con los antisueros A y B buscando aglutinación
visible, lo cual indica que las células poseen el antígeno contra el que está dirigido el
anticuerpo.
Prueba Sérica (Inversa): En este método se utiliza el suero del paciente el cual se
hace reaccionar con células A1, células A2 y células B. La aglutinación indica la
presencia de Anti-A y/o Anti-B en el suero.Para que el grupo sea determinado, las
pruebas directa e inversa deben ser correspondientes
EQUIPOS Y MATERIALES
Materiales
Materiales para la preparación de Grupo Sanguineo ABO en prueba sérica
▪ Marcador de vidrio.
▪ Tubos sin anticoagulante 13 x 100 mm del sistema de extracción al
vacío.
▪ Tubos de ensayo
▪ Gradilla para tubos.
▪ Guantes descartables.
▪ Reactivo Anti A - Anti B - Anti D
▪ Solucion Salina Fisiologica
Equipo
Los Equipos para la preparación de del pool y
▪ Micropipeta automática regulable.
▪ Centrífuga
PROCEDIMIENTOS
1. Preparar un pool del grupo sanguíneo “o” con 6 muestras distintas del grupo
“o”
2. De cada muestra traspasar 250 ul al tubo rotulado para el pool
3. Homogenizar suavemente
4. Lavar los glóbulos rojos del pool del grupo sanguíneo “O”, de la muestra de
sangre “A”, “B”, y “AB”
5. Rotular cuatro tubos de ensayo uno para cada grupo(A, B. AB, O)
6. A cada tubo de ensayo pipetear 500ul de sangre de cada grupo sanguíneo
según corresponda
7. Completar a cada uno de los tubos con suero fisiológico, faltando un dedo
para llenar el tubo de ensayo
8. Homogenizar suavemente
9. Centrifugar a 2500 rpm durante 3 minutos
10. Retirar de la centrifuga suavemente y con la pipeta Pasteur retirar el
sobrenadante con mucho cuidado(utilizar una pipeta Pasteur diferente para
cada muestra)
11. Realizar el procedimiento por cuatro veces
12. Rotular cuatro tubos de ensayo uno para cada grupo sanguíneo (A,B,AB,O)
13. Preparar la suspensión de glóbulos rojos lavados al 5% con la siguiente
formula
Prueba globular
Realizar dilución al 5% para lo cual pipetear 25 ul de paquete globular del paciente
y 500ul de suero fisiológico
Agregar una gota del reactivo a cada tubo de ensayo rotulado de acuerdo que
corresponda para el tubo Anti-A reactivo Anti- A, para el tubo Anti- B reactivo Anti-
B y para el tubo Anti-D reactivo Anti D
Prueba sérica
1. Rotular cuatro tubos de ensayo para cada grupo sanguíneo (A, B, AB Y O)
2. Pipetear 50ul de la suspensión al 5% de glóbulos rojos lavados de cada tipo
de grupo sanguíneo según corresponda a cada tubo de ensayo rotulado (del
grupo A al tubo de ensayo rotulado A y así sucesivamente)
3. Luego pipetear 100ul de suero de la muestra del paciente y agregar a cada
tubo de ensayo rotulado
4. Homogenizar y centrifugar a 2500 rpm durante 15 segundos
5. Retirar de la centrifuga suavemente evitando movimientos exagerados y
proceder a la lectura uno por uno cada tubo de ensayo, homogeneizar
suavemente hasta desprender el botón formado y anotar cada resultado.
CUADRO
CONCLUSIONES
DETERMINACIÓN DE Rh Debil
INTRODUCCIÓN
El grupo Rh (D) se determina por la presencia o ausencia del antígeno D sobre los
glóbulos rojos, el cual puede ser detectado por una prueba de aglutinación directa
con un suero clasificador anti-D. Una persona
que posee en sus glóbulos rojos el antígeno D, se conoce como “Rh positivo”,
mientras que la ausencia del antígeno D denota a una persona “Rh negativo”. El
antígeno D es altamente inmunogénico, lo cual le confiere la característica de ser el
de mayor importancia clínica después de los antígenos del sistema ABO. Se estima
que entre 30-85 % de las personas Rh D negativo que reciben una transfusión Rh D
positivo producen anticuerpos anti-D causantes de enfermedad hemolítica
fetoneonatal (en el caso de embarazadas), anemias hemolíticas autoinmunes y
reacciones transfusionales. La diversidad y complejidad antigénica del sistema Rh
se genera por la disposición y proximidad de los genes RHD y RHCE en el brazo corto
del cromosoma 1, lo que facilita la aparición de múltiples eventos de intercambio
genético que originan las variantes débiles y parciales del antígeno D. Desde el punto
de vista clínico, la variante parcial DVI se postula como la de mayor importancia en
la población blanca. Existen múltiples variables que pudieran influir en la
determinación serológica del antígeno D, como la gran diversidad de metodologías,
reactivos anti-D, polimorfismos del sistema Rh, variantes del antígeno D, entre otras,
por lo que este documento busca estandarizar y entregar recomendaciones para una
adecuada clasificación sanguínea RhD.
MARCO TEORICO
SISTEMA RHESUS
Procedimientos realizados
1. Colocar una gota de Anti – D (Rh) sobre una placa de vidrio limpia y
rotulada.
2. Agregar 1 gota de sangre total con anticoagulante al lado del anti D
3. Mezclar el antisuero con los glóbulos rojos en un área aproximada de 2
cm de diámetro y balancear constantemente la placa durante
2 minutos.
4. Observar macroscópicamente la presencia o ausencia de aglutinación
TECNICA EN PLACA
Resultados de la práctica
1) Colocar una gota de Anti-D (Rho) sobre una placa
Anti-A Anti-B Anti-D
de vidrio limpia y rotulada.
Anti-A Anti-B Anti-D
2) Agregar al lado una gota de la suspensión de glóbulos rojos a probar. Debe
mantenerse la relación antisuero:células en todos los ensayos.
3) Mezclar el antisuero y los glóbulos rojos con un palillo descartable en un
área de 2 cm de diámetro y balancear constantemente la placa durante 2
minutos.
Observar macroscópicamente la presencia o ausenciade aglutinación. La
observación puede facilitarse si se emplea unaGrupo:
fuente“O” RhD:
de luz positivo
difusa.
Si el período de observación es mayor a 2 minutos,efectos de la evaporación
del reactivo pueden conducira resultados equivocados (débilmente
Observación
positivos).
Algunas muestras D débiles o D parcial pueden no aglutinar cuando se utiliza
la técnica en placa. Ante resultados indeterminados o negativos deben
confirmarse utilizando la técnica en tubo. Las técnicas en placa no están
aconsejadas para la detección de muestras D débil o D parcial.
SUSPENSION CELULAR AL 5 % PARA LA DETERMINACIÓN DEL Rh EN
TUBO
PRINCIPIO
La utilización de suspensiones de glóbulos rojos a diferentes porcentajes es
muy útil en muchos procedimientos serológicos y el objetivo es lograr un
número adecuado de glóbulos rojos para leer y graduar las reacciones.
MATERIALES
• Muestra de sangre
• Tubos
• Pipetas automáticas
• Solución salina
• Centrifuga (3000 rpm o equivalente)
• Suspensión eritrocitaria al 5%
1° RA FORMA DE PREPARACIÓN
PROCEDIMIENTO:
Lavado de Glóbulos Rojos
1.Colocar 1ml de sangre total con anticoagulante
2. Agregar SSF
5.Lavar 3 veces
6.Retirar todo el sobrenadante y dejar los glóbulos rojos lavados
Suspension al 5%
950 ul ClNa (0.9%) + 50 ul GR lavados˂˃ 1 ml de GR al 5%
CONCLUSION
• El lavado y suspensión de glóbulos rojos tienen como propósito
graduar la concentración de glóbulos rojos en un porcentaje ya
conocido para poder estudiar mejor las reacciones e interacciones en
las pruebas de compatibilidad sanguíneas.
• Se lavan los glóbulos para descartar partículas que podrían inferir con
el estudio como (fragmentos eritrocitarios, restos de Hb , componentes
extracelulares).
TECNICA EN TUBO
PROCEDIMIENTO - TIPIFICACION DEL D débil DEL SISTEMA
RH
OBJETIVO:
• La expresión del antígeno D en el grupo de los D débiles esta
disminuido en número de copias de antígeno D, por lo que su presencia
tiene que ser demostrado mediante la técnica de la antiglobulina.
• El objetivo de esta técnica es demostrar la presencia del antígeno D.
ALCANCE: Centros de Hemoterapia y Bancos de Sangre.
MATERIALES Y EQUIPOS:
EQUIPOS:
• Centrifuga De Inmunohematologia,
• Aglutinoscopio
• Tubos 12x 75
• Pipetas automáticas
PROCEDIMIENTO
1. Suspensión al 5% de glóbulos rojos en estudio en solución salina al
0.9%.
2. Colocar una gota de Anti D en un tubo limpio y rotulado D.
3. Colocar una gota de suero control RH o Alb 22% en un tubo limpio y
rotulado. “Control”
4. Agregar una gota de la suspensión al 5% de glóbulos rojos en estudio,
a cada tubo.
5. Mezcla con suavidad y centrifugar de acuerdo con las instrucciones
casi siempre por 15 seg a 2500 rpm (leer) o por 3 min. a 2500 rpm.
(lavar)
6. Resuspender con suavidad las células y examine macroscópicamente
en busca de aglutinación con la ayuda del aglutinoscopio.
7. Leer, interpretar y registra los resultados. Si reacción es negativa
continuar procedimientos.
8. Incubar en baño maría durante 30 min, luego repetir el paso 5 y 6 si
es negativo continuar.
9. Lavar los tubos con Sol.salina por 4 veces decantando totalmente el
ultimo lavado.
10. Agregar 2 gotas de Suero Coombs repetir paso 5 y 6.
11. comprobar con células control de Coombs.
IMÁGENES ADJUNTAS DEL PROCEDIMIENTO
1 2
CONTROL
Tubo D
CÉLULAS DE
ESTUDIO AL 5 %
3
4
Tubo D Control
-1 gota GR 5 % -1 gota GR 5%
-Anti-D -Alb 22%
5 6 6
NO HAY
AGLUTINACIÓN SE PROCEDIO A INCUBAR LAS 2
MUESTRAS EN EL BAÑO MARIA
POR 15 MIN (tiempo min) A 37 °
RESULTADO:
NO HUBO AGLUTINACION
SE AGREGA 2 GOTAS DE AGH
EN LOS 2 TUBOS PREVIAMENTE
7 LAVADOS.
SE CENTRIFUGA A 2500 X 15
SEG, SE RESUSPENDEN LAS CELL. FINALMENTE, PARA CORROBORAR LA
Y SE INTERPRETAN NEGATIVIDAD DE LA PRUEBA SE
RESULTADOS AGREGAN CELULAS CONTROL
COOMBS EN LOS 2 TUBOS DONDE LA
RESULTADO:
AGLUTINACION SERA DE 1+/2+.
NO HUBO AGLUTINACION
DANDONOS EL
SIGUIENTE RESULTADO
D Ctl RH Interpretación
Lectura inmediata 0 0 Continuar
Lectura de incubación 0 0 Continuar
Lectura de suero de 0 0 Continuar
CoomBs
D Ctl RH Interpretación
Lectura inmediata 0 0 Continuar
Lectura de incubación 0 0 Continuar
Lectura de suero de 0 0 Continuar
CoomBs
D Ctl RH Interpretación
Lectura inmediata 0 0 Continuar
Lectura de incubación 0 0 Continuar
Lectura de suero de 1+ 0 Positivo
Coombs
TABLA RH NO DETERMINADO
D Ctl RH Interpretación
Lectura inmediata 0 0 Negativo
Lectura de incubación 0 0 Negativo
Lectura de suero de 1+ 1+ INVALIDO
Coombs
Control de Coombs
OBSERVACIONES:
DEFINICIONES Y ABREVIACIONES
• D débil: corresponde al fenotipo cuyos eritrocitos poseen una cantidad
reducida del antígeno D y requieren, por tanto, de la prueba de
antiglobulina indirecta para su detección.
• D parcial: corresponde al fenotipo cuyos eritrocitos son catalogados
como D positivos, pero carecen de una porción del antígeno D, pudiendo
estos pacientes aloinmunizarse cuando reciben transfusiones de
glóbulos rojos D positivos.
• Del: corresponde al fenotipo cuyos eritrocitos expresan niveles muy
bajos del antígeno D, por lo que no pueden ser detectados con métodos
serológicos de rutina.
Suero control D: control que permite evaluar la especificidad del suero
anti-D empleado, ya que al agregarlo a los glóbulos rojos en estudio no
se observa aglutinación.
• Variantes del antígeno D: designación de las variaciones en la expresión
del antígeno D, lo cual incluye los fenotipos D débil, D parcial y Del.
1.Dilucion de Hematíes al 1%
3.Centrifugar
1 2
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS:
CONLUSIONES
• La técnica en micro tarjeta, es una técnica
sencilla y rápida, tanto en el procedimiento
como en la interpretación de resultados.
• Reduce el riesgo de contaminación biológica.
• Ofrece una buena reproducibilidad y
repetibilidad.
• Reduce el tiempo de la prueba significativamente
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
• Roback JD, editor. AABB Technical Manual, 17th ed., Bethesda, Maryland,
2011.
• American Association of Blood Banks. AABB Standards for Blood Bank and
Transfusion Services, 25th ed., Bethesda, Maryland, 2008.