UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN

MARCOS
(Universidad del Perú, Decana de América)

FACULTAD DE QUÍMICA E INGENIERÍA QUÍMICA

E.P. INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL
LAB. ANÁLISIS QUÍMICO INSTRUMENTAL

Tema: Determinación de la cafeína en bebidas gasificadas

Profesora: Mg.Sc. María Rosario Calixto Cotos

Estudiante: Mosquera Calongos, Walter.

Lima – Perú
24/05/2018
 ÍNDICE

1.- INTRODUCCIÓN 2
2.- MARCO TEÓRICO 2
3.- ESQUEMA DE PROCEDIMIENTO 4
4.- RESULTADO Y PRESENTACIÓN DE GRÁFICOS 6
5.- INTERPRETACIÓN Y DISCUSIÓN DE RESULTADOS 8
6.- CONCLUSIONES 8
7.-CUESTIONARIO 8
8.- ANEXOS 11
9.-BIBLIOGRAFÍA 11
1.- INTRODUCCIÓN
La presente práctica se realizó en el laboratorio de Química Analítica e Instrumental
de la facultad de Química e Ingeniería Química de la Universidad Nacional Mayor de
San Marcos en donde se midió por espectrofotometría y empleando un
Espectrofotómetro Ultravioleta visible UV - 1700, Shimadzu la concentración del
contenido de cafeína en muestras de bebidas comerciales, en este caso: Inca Kola y
guaraná. La cafeína es posiblemente la sustancia estimulante más consumida en el
mundo, ya sea mediante infusión, o ya para el ámbito más deportivo, a través de
cápsulas. Clasificada como alcaloide( trimetilxantina), presente en el café (0.8 a
2%), en el té (1,1 a 5,6%) y nuez de cola o guaraná (2 a 3%) aumenta la presión
sanguínea, la actividad cerebral y la secreción renal y que ingerida en cantidades
elevadas o desmedidas causa conductas perjudiciales para la salud (Sánchez, R.C
2005).

2.- MARCO TEÓRICO

2.1 ¿Qué es la espectrofotometría UV-visible ?

La espectrofotometría UV-visible es una técnica analítica que permite determinar la

concentración de un compuesto en solución. Se basa en que las moléculas
absorben las radiaciones electromagnéticas y a su vez que la cantidad de luz
absorbida depende de forma lineal de la concentración. Para hacer este tipo de
medidas se emplea un espectrofotómetro, en el que se puede seleccionar la
longitud de onda de la luz que pasa por una solución y medir la cantidad de luz
absorbida por la misma (Nieves et al, 2010)

La región UV se define como el rango de longitudes de onda de 195 a 400 nm. Es

una región de energía muy alta. Provoca daño al ojo humano así como quemadura
común. Los compuestos con dobles enlaces aislados, triples enlaces, enlaces
peptídicos, sistemas aromáticos, grupos carbonilos y otros heteroátomos tienen su
máxima absorbancia en la región UV, por lo que ésta es muy importante para la
determinación cualitativa y cuantitativa de compuestos orgánicos. Diversos factores
-como pH, concentración de sal y el disolvente- que alteran la carga de las
moléculas, provocan desplazamientos de los espectros UV. La fuente de radiación
ultravioleta es una lámpara de deuterio
.
En la región visible apreciamos el color visible de una solución y que corresponde
a las longitudes de onda de luz que transmite, no que absorbe. El color que absorbe
es el complementario del color que transmite. Por tanto, para realizar mediciones de
absorción es necesario utilizar la longitud de onda en la que absorbe luz la solución
coloreada. La fuente de radiación visible suele ser una lámpara de tungsteno y no
proporciona suficiente energía por debajo de 320 nm.
2.2 Transmitancia y Absorbancia
Cuando un rayo de luz de una determinada longitud de onda
de intensidad Io incide perpendicularmente sobre una
disolución de un compuesto químico que absorbe luz o
cromóforo, el compuesto absorberá una parte de la radiación
incidente (Ia) y dejará pasar el resto (It), de forma que se
cumple: Io = Ia + It

La transmitancia (T) de una sustancia en solución es la

relación entre la cantidad de luz transmitida que llega al detector una vez que ha
atravesado la muestra, It, y la cantidad de luz que incide sobre ella, Io, y se
representa normalmente en tanto por ciento: % T = It/Io x 100 La transmitancia nos
da una medida física de la relación de intensidad incidente y transmitida al pasar por
la muestra. La relación entre %T y la concentración no es lineal, pero asume una
relación logarítmica inversa.

La absorbancia (A) es un concepto más relacionado con la muestra puesto que

nos indica la cantidad de luz absorbida por la misma, y se define como el logaritmo
de 1/T, en consecuencia: A = log 1/T = -log T = -log It/ Io. Cuando la intensidad
incidente y transmitida son iguales (Io = It), la transmitancia es del 100% e indica
que la muestra no absorbe a una determinada longitud de onda, y entonces A vale
log 1 = 0.

Ley de Lambert-Beer Esta ley expresa la relación entre absorbancia de luz

monocromática (de longitud de onda fija) y concentración de un cromóforo en
solución: A = log I/Io = ε·c·l
La absorbancia de una solución es directamente proporcional a su concentración –a
mayor número de moléculas mayor interacción de la luz con ellas-; también
depende de la distancia que recorre la luz por la solución –a igual concentración,
cuanto mayor distancia recorre la luz por la muestra más moléculas se encontrará-;
y por último, depende de ε, una constante de proporcionalidad -denominada
coeficiente de extinción- que es específica de cada cromóforo. Como A es
adimensional, las dimensiones de ε dependen de las de c y l. La segunda magnitud
(l) se expresa siempre en cm mientras que la primera (c) se hace, siempre que sea
posible, en M, con lo que las dimensiones de ε resultan ser M-1·cm-1. Este
coeficiente así expresado, en términos de unidades de concentración molar (o un
submúltiplo apropiado), se denomina coeficiente de extinción molar (εM). La ley de
Lambert-Beer se cumple para soluciones diluidas; para valores de c altos, ε varía
con la concentración, debido a fenómenos de dispersión de la luz, agregación de
moléculas, cambios del medio.(Skoog, D. A. 2008)

2.3 Curva de Calibración

La curva de calibración es un método muy utilizado en química analítica para
determinar la concentración de una sustancia (analito) en una muestra desconocida,
sobre todo en disoluciones. El método se basa en la relación proporcional entre la
concentración y una determinada señal analítica (propiedad). Conociendo esta
relación, será posible conocer la concentración en una muestra dada mediante la
medida de esa señal. La relación concentración – señal se suele representar en una
gráfica a la que se le conoce como curva de calibración o curva de calibrado.
(EURACHEM, 2002)

2.3 ¿Qué es la cafeína?

La cafeína, también conocida como 1,3,7-trimetilxantina,

es un alcaloide perteneciente a la familia de las xantinas,
que posee propiedades estimulantes sobre el sistema
nervioso central, y que puede obtenerse a partir de
varias fuentes, como los granos de café u hojas de té, o
bien de manera sintética.

Se la considera una droga psicoactiva, aunque con efectos secundarios leves si

se consume debidamente, pero como tal, se puede volver adictiva. No aporta valor
nutricional, y puede ser utilizada para favorecer ciertos ámbitos, como el deportivo y
el desempeño de tareas cognitivas.

Una vez ingerida, bien a partir de suplementos de cafeína, o bien como infusión, y
ser introducida en el riego sanguíneo va a alterar la forma de actuar del organismo
(en aprox 45 min). Observando su estructura molecular, es similar a la adenosina,
una sustancia química que se encuentra en las células humanas, y que actúa en el
cerebro como un depresor del sistema nervioso. (Sánchez, R.C 2005).
3.- ESQUEMA DE PROCEDIMIENTO

3.1 Materiales y Reactivos:

- 02 celdas de cuarzo
- 03 vasos precipitados de 50 ml
- 01 vaso precipitado de 150 ml
-01 pipeta volumétrica de 1,2,5,10,15 y 20 ml

-01 pipeta graduada de 10 ml

-01 Fiola de 200 ml
-02 Fiola de 100 ml
-08 Fiola con tapa de 50 ml
- Pro pipetas

3.2 Equipo
- Espectrofotómetro SHIMADZU UV-1700
- Balanza Analítica

3.3 Reactivos
- Agua destilada
- Cafeína
- HCl (reactivo controlado)
3.4 Preparación de las soluciones:
● Preparación de HCl a 0,01M a partir de HCl 0,2M
- Se toma 25 ml de HCl 0,2M y se lo lleva a una fiola de 500 mL
- Se enrasa con agua destilada

● Preparación de la muestra Problema(Tratamiento)

- Se debe volver incolora, para ello primero se desgasifica: 60 ml en un vaso
precipitado, agitar por 3 min a temperatura ambiente.
- Luego pesamos M1= 1,0179 g y M2= 2,006 g de inka kola, se lleva a una fiola de 50
ml cada muestra y se completa o enrasa con HCl 0,01 M.

● Preparación de la solución stock de cafeína de 100 ppm o estándar primario

- La cafeína debe ser secada en una estufa a 50 - 70 °C por 24h.
- Se pesa 10 mg de cafeína.
- Se lleva a una fiola de 100 ml y se completa con HCl 0,01M.

● Preparación de soluciones stock de trabajo o estándares intermedios

- Para determinar los volúmenes a diferentes concentraciones, se emplea la siguiente
fórmula:
𝑵 𝑯𝑪𝒍 × 𝑽𝑯𝑪𝒍 = 𝑵𝒅𝒆𝒔𝒆𝒂𝒅𝒂 × 𝑽𝒅𝒆𝒔𝒆𝒂𝒅𝒐
- En 8 fiolas diferentes de 50 ml se prepara las soluciones a concentraciones de 1, 2,
3, 4, 5, 6, 7,8 ppm.
- Ejemplo para 1 ppm: ř100 𝑝𝑝𝑚 × 𝑉𝐻𝐶𝑙 = 1 𝑝𝑝𝑚 × 50 𝑚𝐿
- Nos resulta 0,5 ml de solución stock de cafeína, esta se enrasa con 49,5 ml de HCl
en una fiola, resultando 50 ml de volumen final(todo con pipeta volumétrica)
- Se realiza el mismo procedimiento para las demás concentraciones resultando los
siguientes volúmenes:

CONCENTRACIÓN Vol de sol. stock de cafeína

1 ppm 0,5 ml

2 ppm 1 ml

3 ppm 1,5 ml

4 ppm 2 ml

5 ppm 2,5 ml

6 ppm 3 ml

7 ppm 3,5 ml

8 ppm 4 ml
3.4 Procedimiento para encendido del Espectrofotómetro UV-1700 SHIMADZU

Encendido de supresor de
picos y el estabilizador

Retirar la bolsa de sílice del

compartimiento

Encender el espectrofotómetro
y esperar la verificación del
instrumento

Encender la computadora

Presionar F4 En el
espectrofotómetro y cerrar

Ingresar al software UV PROBE

Ingresar al modo spectrum,

hacer corrección de línea base
(rango: 190 - 1100)

Colocar en el compartimiento
de muestra las celdas (Muestra
y referencia) con el blanco y
presionar AUTOZERO

● Se utiliza como blanco HCl 0,01M

● Con el método SPECTRUM se obtiene el espectro de absorción de una solución
estándar de cafeína (Cafeína-272 nm)
● Se obtiene el espectro de absorción de la solución diluida de muestra problema y la
absorbancia.
● Con la longitud de onda de máxima absorción encontrada de solución estándar, se
realiza la cuantificación por el método PHOTOMETRIC
4.- RESULTADO E INTERPRETACIÓN DE GRÁFICOS

4.1 DATOS TEÓRICOS

● Cantidad máxima de cafeína al día permitida

PERSONA mg de cafeína max /día

ADULTO 400 mg*

MUJERES EMBARAZADAS 300 mg

ADOLESCENTES NIÑOS** 115 mg

(Fuente: Esther Myer, 2017)
*400mg de cafeína equivalen a 4 tazas de café aproximadamente,
**2,5 mg de cafeína/ Kg de peso corporal, es decir un niño de 45 Kg puede tomar
115 mg de cafeína al día.

● Cafeína en bebidas gaseosas

BEBIDA GASEOSA mg de cafeína/ 100 ml de gaseosa

Coca Cola 9,6

Inka Kola 10,57

Pepsi Cola 10,73

(Fuente: caffeine informer)

4.2 DATOS EXPERIMENTALES

4.2.1 Determinación de longitud de onda máxima (Método Spectrum)

No Pv Longitud de Abs Descrip

onda (nm) ción

1 ⏫ 272 0.273 272

4.2.2 Curva de Calibración

CONCENTRACIÓN ABSORBANCIA
(ppm)

2 0,108

3 0,168
 4 0,238

5 0,271

6 0,342

7 0,377

4.2 Determinación de las concentraciones de cafeína en las muestras

- Muestra desconocida 1 (M1) = 1,0179 g de inka kola
- Muestra desconocida 2 (M2) = 2,006 g de inka kola

Muestra Concentración Absorbancia

(ppm)

M1 2,328 0,129

M2 4,682 0,260
 ● Existe 2,328 mg de cafeína por Litro de solución

𝑚𝑔 0,05 𝐿
2,328 × = 0,1164 𝑚𝑔/50 𝑚𝑙
𝐿 50 𝑚𝑙
● Es decir: 0,1164 mg de cafeína en 50 ml de muestra problema
● “Suponiendo” que la densidad de la inka kola sea 1 g/ml se puede hacer el
siguiente cálculo para 100 ml de gaseosa inka kola pura.

1 ml de gaseosa inka kola → 0,1164 mg de cafeína

100 ml de gaseosa inka kola → X
X= 11,64 mg/100 ml

5.- INTERPRETACIÓN Y DISCUSIÓN DE RESULTADOS

❖ Una vez realizada la curva de calibración nos salió un R cuadrado de 0,9906,
quizás no sea una linealidad precisa, pero a partir de estos datos se pudo
determinar la concentración exacta en ppm de cafeína o mg de la misma por
L de solución.
❖ También se puede determinar la cantidad de cafeína en mg por 50 ml de
Muestra problema, recordando que 50 ml de dicha muestra (M1) hay 1,0179
g de inka kola, resultando 0,1164 mg/50 ml.
❖ De la misma forma, y realizando la suposición que la densidad de inka kola
es 1 g/ml, la cantidad de cafeína es 11,64 mg/ 100 ml comparando con
nuestros datos teóricos de 10,57 mg/ 100 ml guardan una relación similar. Si
se sabría la densidad exacta de inka kola se podría saber con mayor
exactitud la cantidad de cafeína en mg por cada 100 ml de la bebida
gaseosa.
❖ Las concentraciones de M1 Y M2 guardan similar relación, indicándonos que
dichas concentraciones fueron determinadas correctamente.

6.- CONCLUSIONES
➢ Mediante el método de la espectrofotometría uv - visible se puede determinar
la longitud de onda óptima, además la concentración exacta la cual nos
permite trabajar con un menor porcentaje de error y tener una mayor
precisión en la lectura.
➢ El color de la gaseosa no influye o no es indicador de la mayor o menor
concentración de la cafeína.
➢ Para distintos tipos de muestras de gaseosas sus absorbancias son distintas
ya que tienen diferente concentración de la especie absorbente.
 ➢ Las mediciones deben ser instantáneos ya que con el paso del tiempo las
concentraciones de las soluciones varían y el equipo espectrofotómetro UV-
Vis no realiza la lectura correcta.

7.- CUESTIONARIO
7.1 Sustancias análogas que se pueden cuantificar en la región uv análogo al
método empleado (mencionar longitud de onda máximo)

● Manganeso → 545 nm
● Etanol → 340 nm

8.- BIBLIOGRAFÍA
● Nieves. Abril Díaz, Espectrofotometría:Espectros de Absorción y
cuantificación colorimétrica de biomoléculas. Departamento de Bioquímica y
Biología Molecular. Córdoba, España. (2010).
● Myer. Esther, Estudios de máxima ingesta de cafeína por día, (2017)
● Sánchez, Reyes Christian ( Cultivo, Producción y Comercialización del CAFÉ. Lima,
Perú. (2005).
● Skoog. Douglas A., F. James Holler y Stanley R. Crouch , Principios de
Análisis Instrumental. 6ª Ed. Cengage Learning Editores, (2008).
● EURACHEM Cooperation on International Traceability in Analytical
Chemistry. (2002). Guide to Quality in Analytical
● https://www.caffeineinformer.com
● https://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-
mol/pdfs/08_ESPECTROFOTOMETRIA.pdf
● https://es.slideshare.net/juliogonzalez33046736/espectrofotometra-uv