INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA DE LOS RR.

NN

CRECIMIENTO DE Chlorella vulgaris EN BIORREACTORES CON

DIFERENTES MORFOLOGÍAS
OBJETIVO GENERAL
Contrastar la producción de biomasa de Chlorella en biorreactores de diferente morfología.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS

 Identificar las condiciones necesarias para el crecimiento de Chlorella.

 Determinar la morfología óptima para el crecimiento de Chlorella.

INTRODUCCIÓN

Las microalgas se encuentran en el fondo de la cadena alimentaria y pueden considerarse una

fuente interesante de nutrientes y compuestos bioactivos. La producción de productos
alimenticios enriquecidos con microalgas tiene cada vez más atención, a medida que las personas
se vuelven más conscientes de la relación entre la dieta y la salud (Graça, Fradinho, Sousa, &
Raymundo, 2017).

Chlorella vulgaris es una microalga de color verde de forma esférica. El color verde lo obtiene
de los cloroplastos, estructuras encargadas de hacer la fotosíntesis, no presentan flagelos y se
encuentran, la mayoría, en agua dulce. Estas microalgas se reproducen de manera rápida y de
forma asexual y para esto es necesario el uso de carbono obtenido de la fotosíntesis, agua, luz y
algunos minerales.

Esta microalga así como otras son algunas de las más interesantes con posibles propiedades
bioactivas, que revelan una composición química bien equilibrada, así como una fuente de
moléculas de gran valor, como ácidos grasos poliinsaturados, pigmentos como carotenoides,
clorofilas, esteroles, vitaminas, hidrocoloides y otros compuestos biológicamente activosOtras
investigaciones realizadas, han dado como revelado un potencial antimicrobiano contra
microorganismos patógenos y de descomposición de alimentos nombrando al pan (Graça,
Fradinho, Sousa, & Raymundo, 2017).

Lo que le da su gran interés como alimento básico con gran importancia en la nutrición humana
es su fuente de carbohidratos, proteínas, fibra dietética, vitaminas, micronutrientes y
antioxidantes, siendo apreciado por su sabor, versatilidad, comodidad, textura y apariencia
(Graça, Fradinho, Sousa, & Raymundo, 2017).
Chlorella vulgaris ha llamado la atención en el campo de la Biotecnología debido a que es una
interesante fuente de biomasa para el sector de producción de biodiesel; las microalgas producen
de 10 a 100 veces más energía que otros cultivos de biodiesel de segunda generación. Se estimó
que pueden producir 5000 a 20,000 galones de petróleo por acre por año (AHMAD, KHAN, &
YASAR, 2013).

En la actualidad ha sido objeto de investigación muy fuerte para el campo de biorremediación del
petróleo crudo. Chlorella ha sido una microalga muy investigada y se ha descubierto que posee
no sólo una resistencia considerable contra los contaminantes del petróleo crudo, sino también
una gran capacidad en la remediación de los compuestos de petróleo crudo (Kalhora, Movafeghia,
Mohammadi-Nassabb, Abedic, & Bahrami, 2017).

METODOLOGÍA

Para este experimento se buscó identificar si la morfología de los biorreactores influye en

la multiplicación de Chlorella para lo cual se utilizó 2 biorreactores de diferentes
morfologías, entre ellas se encontraron los prismas y los cilindros, con tres repeticiones
cada uno. Cada grupo realizó los cálculos respectivos para la obtención de biomasa en su
propio biorreactor. Estos cálculos se realizaron mediante:

𝐶1 𝑥 𝑉1 = 𝐶2 𝑥 𝑉2

Se procedió a colocar dentro del prisma el volumen de Chlorella previamente calculado,

3ml de fertilizante foliar “Nitrofoska” y con el uso de parafilm se selló el biorreactor al
que se le colocó una bomba de oxígeno con su respectiva manguera para brindar
oxigenación, se dejó transcurrir los días tomando muestras en tubos de ensayo en
diferentes días con 3 gotas de lugol en cada muestra y posteriormente se observó bajo el
microscopio con la ayuda de la cámara de Neubauer para cuantificar la concentración y
realizó una curva de crecimiento

RESULTADOS
Concentración inicial de Chlorella

𝐶1 𝑥 𝑉1 = 𝐶2 𝑥 𝑉2

𝐶2 𝑥 𝑉2
𝑉1 =
𝐶1

1000000𝑐𝑒𝑙𝑙/𝑚𝑙 𝑥 1000𝑚𝑙
𝑉1 =
1.10 𝑥 108 𝑐𝑒𝑙𝑙/𝑚𝑙

𝑉1 = 0.909𝑚𝑙 𝑑𝑒 𝐶ℎ𝑙𝑜𝑟𝑒𝑙𝑙𝑎

Aforo de biorreactor en forma de prisma

𝑽𝑻𝒐𝒕𝒂𝒍 𝒅𝒆 𝒂𝒈𝒖𝒂 = 1000𝑚𝑙 − 0.909𝑚𝑙 𝑑𝑒 𝐶ℎ𝑙𝑜𝑟𝑒𝑙𝑙𝑎 − 3𝑚𝑙 𝑑𝑒 𝑁𝑖𝑡𝑟𝑜𝑓𝑜𝑠𝑘𝑎

𝑽𝑻𝒐𝒕𝒂𝒍 𝒅𝒆 𝒂𝒈𝒖𝒂 = 996. 09 𝑚𝑙

Cuantificación de crecimiento de Chlorella vulgaris en biorreactores en morfología de prisma.

Tabla N°1. Crecimiento de Chlorella en biorreactor con forma de prisma (1).

TIEMPO Log
FECHA # MUESTRA Células/ml
(Días) Concentración
17/10/2017 0 0 50000 4,698970004
19/10/2017 1 2 350000 5,544068044
20/10/2017 2 3 950000 5,977723605
25/10/2017 3 8 5300000 6,72427587
07/11/2017 4 21 1250000 6,096910013
08/11/2017 5 22 2150000 6,33243846
10/11/2017 6 24 2700000 6,431363764
13/10/2017 7 27 3100000 6,491361694
Fuente: Autoras, 2017

Tabla N°2. Crecimiento de Chlorella en biorreactor con forma de prisma (2).

TIEMPO Log
FECHA # MUESTRA Células/ml
(Días) Concentración
17/10/2017 0 0 650000 5,812913357
18/10/2017 1 2 1300000 6,113943352
24/10/2017 2 6 1150000 6,06069784
25/10/2017 3 8 350000 5,544068044
07/11/2017 4 21 6100000 6,785329835
08/11/2017 5 22 4600000 6,662757832
10/11/2017 6 24 5900000 6,770852012
13/10/2017 7 27 6700000 6,826074803
Fuente: Autoras, 2017

Tabla N°3. Crecimiento de Chlorella en biorreactor con forma de prisma (3).

 TIEMPO Log
FECHA # MUESTRA Células/ml
(Días) Concentración
17/10/2017 0 0 200000 5,301029996
19/10/2017 1 2 850000 5,929418926
20/10/2017 2 3 2350000 6,371067862
25/10/2017 3 8 4000000 6,602059991
07/11/2017 4 21 5450000 6,736396502
08/11/2017 5 22 9000000 6,954242509
10/11/2017 6 24 8800000 6,944482672
13/10/2017 7 27 4800000 6,681241237
Fuente: Autoras, 2017

Cuantificación de crecimiento de Chlorella vulgaris en biorreactores de morfología cilíndrica.

Tabla N°4. Crecimiento de Chlorella en biorreactor con forma de cilindro (1).

TIEMPO Log
FECHA # MUESTRA Células/ml
(Días) Concentración
17/10/2017 0 0 1600000 6,204119983
19/10/2017 1 2 1950000 6,290034611
20/10/2017 2 3 5050000 6,703291378
25/10/2017 3 8 29150000 7,464638559
07/11/2017 4 21 43150000 7,6349808
08/11/2017 5 22 30700000 7,487138375
10/11/2017 6 24 26400000 7,421603927
13/10/2017 7 27 24350000 7,386498966
Fuente: Autoras, 2017

Tabla N°5. Crecimiento de Chlorella en biorreactor con forma de cilindro (2).

TIEMPO Log
FECHA # MUESTRA Células/ml
(Días) Concentración
17/10/2017 0 0 2450000 6,389166084
19/10/2017 1 2 1950000 6,290034611
20/10/2017 2 3 1850000 6,267171728
25/10/2017 3 8 4450000 6,648360011
07/11/2017 4 21 54800000 7,738780558
08/11/2017 5 22 43100000 7,63447727
10/11/2017 6 24 49100000 7,691081492
13/10/2017 7 27 35600000 7,551449998
Fuente: Autoras, 2017

Tabla N°6. Crecimiento de Chlorella en biorreactor con forma de cilindro (3).

TIEMPO Log
FECHA # MUESTRA Células/ml
(Días) Concentración
17/10/2017 0 0 1750000 6,243038049
19/10/2017 1 2 3550000 6,550228353
 20/10/2017 2 3 3150000 6,498310554
25/10/2017 3 8 3650000 6,562292864
07/11/2017 4 21 20100000 7,303196057
08/11/2017 5 22 28300000 7,451786436
10/11/2017 6 24 34150000 7,533390708
13/10/2017 7 27 80950000 7,908216853
Fuente: Autoras, 2017

Análisis estadístico

Figura 1. Análisis de varianza cilindro/prisma.

Fuente: Autoras, 2017

Según se observa en la Figura 1, se puede observar que el p-valor para morfología es mayor a un
α=0.05, por lo que no existe diferencia significativa estadística. La prueba Pos-Hoc arrojó que la
morfología si presenta diferencia significativa siendo el cilindro la mejor morfología para
desarrollar biomasa de Chlorella, mientras que el prisma obtuvo menos media de crecimiento.

Análisis estadístico repeticiones

 Figura 2. Análisis de varianza de morfologías
Fuente: Autoras, 2017
Debido a que los prismas y cilindros usados durante el experimento no se podían considerar
repeticiones dado que no presentaban las mismas dimensiones y características, se realizó análisis
de varianza para corroborar cual morfología fue más eficaz para el crecimiento de Chlorella, por
lo que el análisis estadístico arrojó que el p-valor de las morfologías es de 0.0030 siendo menor a
un α=0.05 por tanto existe diferencia significativa. La prueba Pos-Hoc mostró que existe similitud
entre C1, C2, C3, P3 y P2 pese a que los dos últimos también presentaron similitud con P1;
morfología que presentó menor crecimiento de Chlorella.

DISCUSIÓN

Chlorella es un género de microalgas clorofíceas que se caracteriza por presentar un rápido

crecimiento en cultivo celular y por su capacidad de utilizar como sustrato nutricional compuestos
orgánicos e inorgánicos (Wehr & Sheath, 2003). Es por ello que se utilizó cepa de Chlorella para
obtener resultados en un periodo de tiempo corto.

Las concentraciones muy altas de oxígeno pueden provocar una inhibición por O2. Estas
situaciones de inhibición, hacen del nivel de burbujeo una variable pertinente para la
incorporación o despojo de aquellos compuestos en su medio; de acuerdo a esto se puede decir
que uno de los factores que pudo contribuir a la baja producción de biomasa en el biorreactor en
forma de prisma es el burbujeo producido por la bomba modelo Air Pump U-3600 (Fernandez,
2013).

La agitación, además de facilitar la eficiencia en el transporte, impedir la sedimentación de las

algas y su adherencia a las paredes del reactor y homogeneizar el pH, asegura la distribución de
los gases y de la luz, sin embargo, no todas las especies toleran una agitación fuerte que provea
al reactor de un buen mezclado, ya que son sensibles al estrés hidrodinámico pero en este caso las
microalgas utilizadas si soportaron tales agitaciones por burbujeo.

El material del que está hecho el biorreactor en forma de prisma es de vidrio, entonces, se debe
tener en cuenta que la densidad del material afecta la resistencia de éste de manera inversamente
proporcional; de esta forma, si la densidad aumenta, la resistencia del material se reduce. A su
vez, la resistencia también depende del espesor, es este el que determina el contenido energético
que puede retener el material en sus paredes, también conocida como energía retenida de pared.
Dicha energía se relaciona simultáneamente con la conductividad térmica del material. Así, entre
más delgado sea éste, mayor resistencia, menor la energía retenida y la conductividad térmica, lo
cual permite controlar la acumulación de calor por conducción del material hacia el cultivo,
previniendo un aumento indirecto de la temperatura siendo la ideal de 12, 5 a 30 °C (Herrera,
2014). El vidrio posee una mayor densidad comparado con el acrílico y polietileno
respectivamente; por tanto, su resistencia al impacto es menor, haciéndolo un material susceptible
a la ruptura, a pesar de que posee una energía retenida baja con espesores pequeños (Herrera,
2014). Por otro lado, el espesor influye en la transmisión de luz en el material y entre menor sea
este mayor es dicha transmisión; con esto se asegura que se suplan las necesidades lumínicas de
las microalgas para sobrevivir. Así, una reducción de ésta última, afecta directamente al
crecimiento microalgas y por ende a la producción de biomasa es menor. En este caso la cantidad
de luz para el crecimiento del cultivo, fue adecuada, ya que los biorreactores fueron colocados en
un lugar con cantidad de luz necesaria (Herrera, 2014).

Las paredes del biorreactor en forma de prisma cuentan con vértices y aristas, en las cuales se
produce acumulación de biomasa, por lo tanto, esto es una desventaja a la hora de tomar muestra
ya que no hay homogeneidad (Acuña, 2011).

Para el crecimiento de la cepa se eligieron 2 modelos de biorreactores, cilindro y prisma; en los

cuales se tomaron en cuenta los mismos parámetros para cada uno de ellos (factores externos,
cantidad de cepa y nutrimentos). Mostrando que el mejor modelo de biorreactor para el
crecimiento de biomasa de Chlorella fue el de cilindro debido a su geometría, por lo que la
remoción del calor exotérmico de la fermentación se lleva a cabo de manera eficiente. De igual
manera requiere de poca cantidad de medio de cultivo. (Ruíz-Leza, 2005)

CONCLUSIÓN

 El biorreactor con morfología de prisma no fue adecuado para una significativa

producción de biomasa de Chlorella, siendo así el de cilindro el de mejor rendimiento.

 El factor más notable que afectó en la producción de biomasa de Chlorella en el

biorreactor con morfología de prisma, fue la presencia de vértices y aristas, es decir su
geometría no fue la adecuada.

 Los tres biorreactores con morfología en forma de prisma no coincidieron en los

resultados, debido a factores como el material, su densidad, transparencia y capacidad de
mantener la temperatura.

BIBLIOGRAFÍA

Acuña, R. (21 de Mayo de 2011). Diseño de Foto-Bioreactores para el Cultivo Micro Algas
Oleaginosas Parte 2. Bioproceso y Especifidades. Obtenido de
https://bioreactorcrc.wordpress.com/2011/05/21/diseo-de-foto-bioreactores-para-el-
cultivo-micro-algas-oleaginosas-parte-2-bioproceso-y-especifidades/
AHMAD, F., KHAN, A. U., & YASAR, A. (2013). THE POTENTIAL OF CHLORELLA
VULGARIS FOR WASTEWATER TREATMENT AND BIODIESEL PRODUCTION
. Pakistan Journal of Botany, 461-465.
Fernandez, M. (Octubre de 2013). Diseno, montaje y caracterización de fotobiorreactores airlift
para el cultivo de Chlorella sorokiniana. Obtenido de
https://repository.eafit.edu.co/bitstream/handle/10784/8219/Miguel_FernandezAngel_2
013.pdf?sequence=2
Graça, C., Fradinho, P., Sousa, I., & Raymundo, A. (2017). Impact of Chlorella vulgaris on the
rheology of wheat flour dough and bread texture. ELSEVIER, 1-28.
Herrera, J. (28 de Marzo de 2014). Diseño de un Fotobiorreactor airlift a escala banco. Obtenido
de file:///D:/User/Downloads/Dialnet-DisenoDeUnFotobiorreactorAirliftAEscalaBanco-
5085375.pdf
Kalhora, A. X., Movafeghia, A., Mohammadi-Nassabb, A. D., Abedic, E., & Bahrami, A. (2017).
Potential of the green alga Chlorella vulgaris for biodegradation of crude oil
hydrocarbons. Marine Pollution Bulletin , 286-290.
Ruíz-Leza, H. A. (10 de Octubre de 2005). DISEÑO DE BIORREACTORES PARA
FERMENTACION. Coahuila, Mexico.
Wehr, J., & Sheath, R. (2003). Freshwater Algae of North America: Ecology and Classification.
Massachusetts: Academic Press.

ANEXOS

Curva de crecimiento - Prisma

8
7
Log Concentración

6
5
PRISMA 1 4
PRISMA 2 3
2
PRISMA 3
1
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29
Tiempo (Días)

Anexo 1. Curva de crecimiento de prismas

Fuente: Autoras, 2017
 Curva de crecimiento - Cilindro
9
8

Log Concentración
7
6
5
CILINDRO 1
4
CILINDRO 2 3
CILINDRO 3 2
1
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1011121314151617181920212223242526272829
Tiempo (Días)

Anexo 2. Curva de crecimiento de cilindros

Fuente: Autoras, 2017

Curva de crecimiento
9
8
Log Concentración

7
6
5
4
3
2
1
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29
Tiempo (Días)

PRISMA 1 PRISMA 2 PRISMA 3

CILINDRO 1 CILINDRO 2 CILINDRO 3

Anexo 3. Curva de crecimiento de prismas y cilindros

Fuente: Autoras, 2017