Sinapsis, sumación e integración

BIO-252M, 2013.
Rodrigo Varas
rvaras@bio.puc.cl
 El objetivo de la clase de hoy es…

Comprender los eventos claves de la señalización sináptica.

 Sinapsis, la historia:

A comienzos del sXX, Camillo Golgi y Ramón y Cajal establecieron las bases
histológicas del Sistema Nervioso.
• 1897: Charles S. Sherington utilizó el término “sinapsis” (griego: “abrochar”).
• 1906: Langley usó el término “neurotransmisor” para referirse a las
substancias que median las sinapsis.
• 1921: Otto Loewi demostró la existencia de transmisión química: liberación
de acetilcolina desde el nervio vago en el corazón.

El experimento de Otto Loewi

(Premio Nobel 1936):
 Sinapsis

• Unión funcional y estructural altamente especializada

entre una neurona y otra célula excitable.
• Permite formar circuitos neuronales interconectados.
• Puede ser de naturaleza química ó eléctrica.
La señalización sináptica está altamente conservada:
Filogenia de la evolución sináptica:
 Sinapsis

Sinapsis eléctrica: Sinapsis química:

• Espacio sináptico ~3.5 nm.
• Continuidad citoplasmática.
• Sin retardo ( <0.1ms).
• Bidireccional.
• Uniones en hendidura.
• Espacio sináptico ~20 -40 nm.
• Discontinuidad citoplasmática.
• Retardo 0.3 – 5 ms.
• Unidireccional.
• Vesículas presinápticas y densidad
postsináptica.
 Sinapsis eléctrica

Sinapsis eléctrica astrocítica Sinapsis eléctrica neuronal

200 nm 200 nm

• Transmisión instantánea de la señal (acoplamiento eléctrico).

• Comunicación intercelular directa (acoplamiento metabólico).
• Importantes en la sincronización y en la rapidez de las respuestas.
 Sinapsis eléctrica

¿Cómo es estructuralmente una

sinapsis eléctrica?
 Sinapsis eléctrica

• Los canales que forman la unión en hendidura cruzan las

membranas de ambas células, formando poros de ~1,5- 2 nm.
• Cada célula aporta con un hemicanal o conexón, formado por seis
subunidades proteicas denominadas conexinas.
• No es un simple poro, la permeabilidad del canal es altamente
regulada (Ca2+-CaM, pH, AMPc, etc.,).
 Sinapsis eléctrica

Patrón de expresión en la epidermis:

Conexinas descritas:

Cx23, Cx25, Cx26, Cx30, Cx31, Cx32, Cx36, Cx37,

Cx40, Cx43, Cx45, Cx46, Cx47, Cx50, Cx59, Cx62.
 Sinapsis eléctrica

Permeabilidad selectiva:

Señalización no convencional a
través de hemicanales
 Sinapsis química

Múltiples sinapsis químicas Sinapsis química “perforada”.

1 µm 200 nm

• Altamente estructurada y asimétrica (hendidura sináptica 20-40 nm).

• Zonas activas: región presináptica, alta densidad de vesículas.
• Densidad postsináptica: receptores, proteínas de andamio, de adhesión.
• Gran diversidad de neurotransmisores y receptores (co-transmisión, etc.,).
 Sinapsis química

• Llegada de un potencial de acción al terminal presináptico.

• Apertura de canales de Ca2+ dependientes de voltaje.
•Fusión de vesículas a la membrana presináptica (exocitosis).
• El neurotransmisor liberado activa un receptor específico.
• Generación del potencial postsináptico.
Sinapsis química
Sinapsis química
 Eficacia sináptica

• No es fija, depende de los patrones de actividad (presente e historia previa).

• Cambios en la eficacia de transmisión conlleva a facilitación y/o depresión.
 Sinapsis química
Ciclo de vida de las vesículas sinápticas:
 Sinapsis química
Ciclo de vida de las vesículas sinápticas:

desde el núcleo!!
~80-90%

~10-15%
~1%
 Sinapsis química
Anclaje vesicular en terminal sináptico:

(VAMP) ~ v-SNARE

~ t-SNARE

Proteina regulatoria
sensible a Ca2+
Sensibilidad
a Ca2+ ?

α-latrotoxina

Secreción rápida (neurotransmisores): ~1 a 5 milisegundos + reciclaje vesicular

Secreción lenta (insulina en células β–pancreáticas): ~1 a 5 segundos + sin reciclaje.
 Sinapsis química
Anclaje vesicular en terminal sináptico:
 Sinapsis química
A nivel molecular

Evento clave: liberación del contenido vesicular

 Sinapsis química
Liberación cuántica de neurotransmisores:

• Cada vesícula almacena una cantidad fija (cuanta) de neurotransmisor.

• Cada cuanta liberado evoca una respuesta idéntica en la postsináptica.
• El aumento de Ca2+ en el terminal sincroniza la liberación vesicular.
• La respuesta total es la suma de las respuestas a cada cuanta liberado.

¿podemos medir directamente la liberación de neurotransmisores?

 La técnica amperométrica
Mediciones en tiempo real de la liberación sináptica
 Modalidades de liberación sináptica:

Fusión completa de
vesícula

“Kiss and run”

“Flickering”
 Sinapsis química
Liberación de neurotransmisores:

• [ACh] = 200 mM
• [DA y ATP] = 500 mM (en la misma vesícula).
• ¿Ka de los receptores para estos neurotransmisores?

¿definición de neurotransmisor?
 Sinapsis química
Neurotransmisores:

“agente químico endógeno que participa en el relevo, amplificación y/o

modulación de una señal eléctrica entre una neurona y otra célula”

es el receptor el que dictará el efecto del neurotransmisor

Criterios para considerar una sustancia como neurotransmisor:

1) Sintetizada endógenamente (presencia de substrato y enzimas biosintéticas).
2) Almacenada en cantidad suficiente en la neurona.
3) Liberada desde el terminal presináptico ante un estímulo adecuado.
4) Actúa sobre el efector a través de receptores específicos (farmacología).
5) Aplicación exógena imita la acción del transmisor endógeno.
6) Mecanismo(s) especifíco(s) de recaptura y/o remoción del transmisor desde el espacio
sináptico.
 Sinapsis química
Liberación cuántica de neurotransmisores:

Moléculas simples y abundantes

Alta especificidad y afinidad por receptores

Monoaminas:
Amino ácidos: Péptidos:
Serotonina
Glutamato Endorfinas
Dopamina
GABA Somatostatina
Histamina
Aspartato Neurotensina
Adrenalina
Glicina Substancia P
Noradrenalina
Acetilcolina
Encefalinas
Oxitocina
VIP
Ácidos grasos: Otros: Neuroquininas
Endocanabinoides Zn Bradicinina
NO, CO AII
etc.,
control voluntario músculos
los más (SNP)
Sistemas
abundantes
motivacionales
 Sinapsis química
Ciclo de vida de los neurotransmisores:

Difusión simple
Procesamiento y
“maduración”

Captación Receptores Presinápticos:

precursores (regulación liberación y/o
síntesis)

Almacenamiento vesicular
Receptor Postsináptico
(protección, acumulación)
Enzima degradación
Inactivación metabólica

Transportadores de membrana Liberación del transmisor

(alta afinidad) “Jack in the Box”
 Sinapsis química
Curso temporal de la señalización:

Inhibidor de
la recaptura
control

• Dinámica de liberación.
• Concentración de neurotransmisor.
• Cinética de los receptores.
• Recaptura/remoción del neurotransmisor.
 Sinapsis química
Receptores ionotrópicos y metabotrópicos:

R. Ionotrópicos:
Canales activados por ligando
Multiméricos:
5 subunidades: nAChRs,
GABAARs, 5-HT3Rs, GlyRs
4 subunidades: iGluRs
R. Metabotrópicos:
Asociados a proteína G
1 subunidad 7 TM
Cascada de eventos (kinasas, etc)
mAChRs, mGluRs, GABABRs, etc.
 Sinapsis química
Señalización:

Potencial postsináptico Potencial postsináptico

excitatorio inhibitorio

Recordar que:
…respuestas subumbrales se suman.
Potenciales postsinápticos
Sumación:
Potenciales postsinápticos
 Integración sináptica

Sumación temporal: Sumación espacial:

Una región es estimulada repetida y Varias regiones son estimuladas
rápidamente simultáneamente
Integración sináptica
 Integración sináptica

La generación (o no) de un potencial de acción depende de la

suma de todos los potenciales postsinápticos.
 Acetilcolina

El primer neurotransmisor descrito (Otto Loewi, 1921) y el más

estudiado (unión neuromuscular).

En Sistema Nervioso Autónomo:

 Neuronas pre-ganglionares ACh: ester de colina y
 Neuronas parasimpáticas post-ganglionares. ácido acético

En Sistema Nervioso Central:

Distribución restringida (núcleos basales).

El precursor Acetil CoA deriva del piruvato proveniente del

metabolismo de la glucosa:

Colina-
acetiltransferasa
Acetil-CoA + Colina Acetilcolina + CoA SH
(ChAT)
Acetilcolinesterasa
Factor limitante en la
biosíntesis
Acetato + Colina
 Acetilcolina
Receptores Nicotínicos:
• El modelo más estudiado de receptores
ionotrópicos.
• Pentaméricos (subunidad α  poro)
~290kDa.
• Canal catiónico no selectivo (subunidad α
 PCa2+).
• nAChRs musculares y nAChRs neuronales:
Receptores Muscarínicos:
• GPCRs (7TM); sitio de unión ACh (TM3)
“enterrado”.
• 5 subtipos (m1-m5).
• Diversidad en el 3er loop intracelular:
i) m1 -m5: Gq/11  PLC/PKC
ii) m2, m4: Gi  (-) AMPc/PKA
Los más comunes en SNC: m1, m3, m4 (m2
corazón).
• Agonistas: ACh, muscarina, pilocarpina
(glaucoma)
• Antagonistas: atropina, pirenzepina (m1)
• Pre- y postsinápticos.

Amanita muscaria

• nAChRs muscular: 2αβγδ; 2αβЄδ (Hill = 2).

 antagonistas: curare, atracurio, succinilcolina
• nAChRs neuronal: 2α3β; homopentámero α (Hill =2/5).
 antagonistas: α-bungarotoxina (α7)
 Ciclo de vida de la acetilcolina

Derivado del piruvato,

etapa limitante en la Muy abundante y activa
síntesis de ACh.
Liberación Ca2+ dependiente

Alta afinidad (ΔNa+)

 Catecolaminas

• Dopamina, noradrenalina y adrenalina.

• Formadas en pasos enzimáticos sucesivos. Phe Tyr
Phe-hidroxilasa
• Derivadas de los aminoácidos fenilalanina y tirosina. FAOH
• Tirosina hidroxilasa (TH): marca catecolaminérgica.
• Catecolamina inhibe TH (competencia por cofactor).

Déficit en la FAOH (hígado) puede

resultar en fenilcetonuria (oligofrenia)
por acumulación de fenil-derivados

cinética muy rápida

(bajos niveles DOPA)

baja especificidad

requiere sustrato
especifico como
“metil-donor”
 Dopamina

• Catecolamina predominante en SNC.

• Los niveles de DA están regulados principalmente por:

AADC DβH
VMAT
L-DOPA NE
Dopamina
Receptores dopaminérgicos
•GPCRs (7TM), sitio de unión (TM3/TM5) “enterrado”.
• 2 subtipos (diversidad en el loop intracelular TM6-TM7):
i) Receptores D1 (D1, D5): (+) AMPc/PKA.
ii) Receptores D2 (D2, D3, D4): (-) AMPc/PKA.
• Modificaciones post-transduccionales (glicosilación; S-S)
• Agonistas: apomorfina (adicción, Parkinson’s).
• Antagonistas: domperidona, haloperidol (esquizofrenia).
• Pre- y postsinápticos.
 Sinapsis dopaminergicas

Sistema nigrostriado
 Movimiento
 E. Parkinson: bajos niveles de DA en Sust. Nigra
(tratamiento con L-DOPA exógeno)
Sistema meso(cortico)límbico
 Recompensa, refuerzo y anticipación
 psicosis y esquizofrenia
(antisicóticos: bloqueadores D2)
 Adicción
 Cocaína (y anfetaminas) inhiben recaptura de DA
 Noradrenalina/ adrenalina

Síntesis :
N- metil
DβH transferasa
VMAT NET
DA NE Adrenalina

Consideradas “hormonas de estrés”

En Sistema Nervioso Autónomo:

 Neuronas simpáticas post-ganglionares.
 “fight or flight”
 Receptores adrenérgicos

• Sólo receptores metabotrópicos: GPCRs (7TM)

• Adrenalina y noradrenalina como ligandos endógenos.
• Sitio de unión: residuos en TM3, TM5, TM6 y TM7.

Receptores α-adrenérgicos:
i) α1Rs (3 subtipos): Gq/11  PLC/PKC.
ii) α2Rs (3 subtipos): Gi  (-) AMPc/PKA.
Receptores β-adrenérgicos:
 (3 subtipos): Gs  (+) AMPc/PKA.

• Más abundantes en SNC: α2Rs (autorreceptores) y β1Rs .

• Fentolamina (vasodilatador): antagonista αRs.
• Propanolol (hipertensión): antagonista selectivo β2Rs.
• Salbutamol (asma): agonista selectivo β2Rs.
 ?
rvaras@bio.puc.cl