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AVANZADAS EN VACUNOS
+
La velocidad de cambio genético
(mejoramiento) depende de:
• Si se usa sólo el padre como recurso de
mejoramiento genético
• Si se usa sólo la madre como recurso de
mejoramiento genético
• Si se usan ambos padres como recurso
de mejoramiento genético
Mejoramiento genético a través del
padre
• Es la práctica más usada debido a la gran eficiencia y
alta relación beneficio/costo de la inseminación artificial.
• Se usan sistemas de evaluación genética y selección de
padres a través de pruebas de progenie
• Se alcanza en la industria lechera internacional un
incremento genético promedio anual de 1.5 a 2% en los
principales caracteres de interés económico
• Un semental vacuno deja en promedio más de 10 mil
crías al año (alta diseminación de genes deseables
debido a la alta tasa reproductiva de los machos vía IA)
Pero …..
Para alcanzar la Maximización del
progreso genético por generación:
• Producción de animales
“Compuestos Geneticos” tanto
para reproducción como para
beneficio
Transformación genética total en
una sola generación
• Formación de hatos
especializados en
producción lechera o
carnicera vía TE
usando como
receptoras ganado
criollo no
especializado pero
adaptado a la región.
Foto INIA, PERU, ternero Brown Swiss
Puro nacido de vaca criolla.2006.
DIEZ AÑOS DE AHORRO DE CRUZA
ABSORVENTE
Estado de arte de las
principales tecnologías
reproductivas del ganado
bovino
La monta natural controlada y
dirigida
Monta natural
• Los sistemas de monta natural
extensiva usan en promedio 4%
de toros sobre la población de
hembras, por lo tanto cada toro
deja en promedio 20 crías
anualmente. Los sistemas de
empadre controlado y dirigido
permiten incrementar el número
de hembras servidas por macho,
en este sistema las hembras son
sujetas en un brete de montas y el
toro efectúa una sola monta por
hembra en celo y en el momento
oportuno con relación a la
ovulación, lográndose 100 montas
por estación reproductiva por toro,
resultando en 80 crías nacidas
por toro por año.
Estado de la IA y prospectivas para el
futuro
• Bien desarrollada y diseminada en muchos países.
• Un toro puede producir un promedio de 30 mil dosis de
inseminación anual con una tasa promedio de fertilidad de
53% a la primera inseminación con semen congelado dejando
un promedio de 8 mil hijas al año.
• El uso de semen sexado ya se dispone en forma comercial.
• Se observa una reducción en fertilidad del ganado lechero
(Holstein mayormente) a nivel mundial probablemente debido
a límites metabólicos y a elevado parentesco entre los toros
probados y las vacas servidas.
• Areas de interés son aún:
– La conservación seminal a medio ambiente
– La encapsulación del semen para flujo continuo de semen en el
tracto femenino
– Incrementar la fertilidad del semen congelado mejorando
sistemas de protección celular. Evidencia de fracturas de ADN
Conservación del semen de bovino a temperatura
ambiente en la selva alta del Perú (Tingo María)
utilizando el dilutor de agua de coco (CME)
Día desde la Motilidad pH % de
colección y progresiva % espermatozoides
dilución (1:20 vivos
con CME)
1 70.00 6.81 71.55
2 68.00 6.76 68.53
3 62.00 6.60 64.15
4 58.00 6.60 59.08
5 52.00 6.26 53.45
6 41.00 6.08 42.67
7 48.00 6.14 39.7
Promedios de 4 eyaculados por toro de 2 toros
William Vivanco y Antonio Espinoza, 1974.
Temperatura ambiental promedio 23.6°C, humedad relativa 84.3%, altitud 660 msnm.
Tecnologías para el incremento de la
tasa reproductiva de las hembras
Ovocitos
IVM
Proceso “in vitro” IVF
IVC
Frescos / Congelados
Embriones Sexados / No sexados
Esquema de la colección de ovocitos por
aspiración folicular transvaginal en el vacuno
Colección de ovocitos por
aspiración folicular transvaginal
Sistema de aspiración folicular: bomba de vacío
conectada a tubo de colección y este a la aguja de
aspiración
Colección de ovocitos por aspiración folicular vía
transvaginal (TVR) y con guía de ecosonografía,
Echuca, Victoria, Australia, 2002
OPU en GNS, Puerto Varas, Chile, 2005
OPU en Shenyang China. 2009
Unidad móvil para procesar ovocitos desde su
colección hasta maduración en tránsito. Echuca,
Vic. Australia. SPB
Unidad móvil de procesamiento de ovocitos,
Echuca Victoria Australia, SPB.
Ovocitos de diferente grado
Laboratorio central de
procesamiento de ovocitos y
producción de embriones in vitro
N° promedio/sesion/donante (%)
Foliculos aspirados 13.0 (100.00)
Barranquilla
Colombia,
W. Vivanco,
2005
Transferencia embrionaria
quirúrgica (laparotomía costal)
TECNOLOGÍAS
COMPLEMENTARIAS A LA
PRODUCCION DE
EMBRIONES
Tecnologías complementarias a la
producción de embriones
• Aumentan la presión de selección en la
población de madres debido a que se puede
incrementar aun más la producción de crías por
madre selecta:
– Sexado de embriones : ahorro de recipientes,
reducción en número de donantes (incremento presión
de selección).
– Clonación (multiplicación) de embriones sexados:
efecto multiplicador de animales selectos
– Uso de espermatozoides sexados: aumento en
numero de crías del sexo requerido; utilización
eficiente de ovocitos colectados, reducción de número
de donantes.
Sexado de embriones
• Obtencion de biopsia
• PCR para determinar presencia
de cromosoma “Y”
• Reacción enzimatica
• Fluorescencia
• 95% de muestras son sexadas
exitosamente
• No se afecta la viabilidad
Método Peter Bredbracka; FinnEnzymes, Finlandia
Multiplicación de embriones
sexados por bisección o clonado
verdadero
Bisección de embriones de bovino in vitro sexados
Células somáticas
Enucleación de ovocito (n) y
transferencia nuclear (2n)
Enucleación, sujeción del ovocito
Enucleación, aspiración del núcleo del
ovocito con ayuda de epifluorescencia
Enucleación, remoción del núcleo del ovocito
Transferencia nuclear, introduciendo el
núcleo de la célula donante al ovocito
enucleado
Transferencia Nuclear completada con
núcleo 2n posicionado
Pasos siguientes a la
transferencia nuclear
• Reprogramación nuclear : Poner la célula somática adulta
al estado similar al de una célula embrionaria pre diferenciada.
Depende de la habilidad del citoplasma del ovocito de poder
remodelar la estructura de la cromatina y apropiadamente
reprogramar los patrones de expresión genética de la célula
donante
• Fusión : Obtenida por 2 pulsaciones eléctricas de 2.25 kV/cm
por 15 µsec
• Activación: Obtenida químicamente por incubación en 5 µM
ionomycin seguida por cultivo en 2 mM dimethylaminopurine (6-
DMAP)
Eficiencia de la transferencia
nuclear de células somáticas para
clonación en bovinos
Clon Clon actual
actual meta IVP
% Blástulas 40 50 40
% Sobrevivencia 20 50 45
embrionaria
80
AI
60 IV P
40 NT
0 40 80 120 160
Gestación (días)
Aplicaciones de la clonación
en mamíferos de granja y otras
especies
Aplicaciones de la clonación de mamíferos de
granja y otras especies animales
• Rápida multiplicación de animales de alto valor genético
para la producción
– Incremento de la tasa de mejora genética clonando
individuos de alta producción y clonando embriones de alto
valor genético estimado
– Clonación de padrillos probados para incrementar su
difusión genética
– Establecimiento de hatos especiales
– Facilitación de pruebas de progenie y del uso de machos
selectos en sistemas de mejoramiento
– Cambio genético y establecimiento de hatos élite
rápidamente
– Uniformidad en la producción (F = G + E)
• Rescate/Preservación de razas y/o especies en peligro de
extinción.
• Producción y multiplicación de animales transgénicos
Primer vacuno clonado en el mundo: Clonación de Lady
con fines de rescate de raza ENDERBY en extinción en
Nueva Zelanda
40°S
New
Zealand
50°S
Enderby Is.
Antarctic
Circle
Antarctica
Lady, Elsie (LC1), Derby, Drs.
Wells y Vivanco, Ruakura NZ 1998
Copias adicionales de Lady: LC2,
LC3,LC4,LC5,LC6 (Wells, Ruakura
NZ 1999)
Análisis Microsatelital de los clones
de Lady
Lady
cells
Cloned calves Recipient
s
BMS2113
RM216
Clonación de animales de alta
producción para formar hatos
élite
Elizabeth, vaca campeona en producción lechera de NZ,
con el mayor número de copias nacidas (más de 40 al año
2000. Wells et al Ruakura NZ)
NZ: clonación de toro probado
- Clonación del toro Holstein de mayor
prueba genética de NZ
Toro de más alta prueba de 3 copias del toro probado
progenie en NZ
Clonación como instrumento en
la generación y multiplicación de
animales transgénicos
Promoter Gene
or driver + construct
Combinando
Somatic transgenesis y
cells clonación
Uso de clonación en
investigación
• Producción de animales
genéticamente idénticos para
estudios experimentales
• Trabajos científicos en
reprogramación nuclear
Sexado de
espermatozoides
Diferencia en contenido de ADN entre
el cromosoma X e Y en los
espermatozoides de diferentes
especies
Especies % Diferencia
Humano 2.8
Cerdo 3.6
Vacuno 3.8
Equino 4.1
Ovino 4.2
Chinchilla 7.5
Separación de espermatozoides “X” e “Y”
para la producción de crías de sexo
predeterminado
• Método comprobado: Citometría de flujo
• Precisión de sorteo: 85% (Y) y 90% (X)
• Eficiencia: 350 mil a 12 millones por hora
• Preñez: 10% menos que con semen sin sexar
• Mayor eficiencia en fertilización in vitro
• Disponibilidad comercial: limitada a sólo ciertos
toros y razas.
Separación de espermatozoides X
e Y por citometria de flujo
Clitómetro de Flujo para sexado de
espermatozoides. Laboratorio
Artech. Ruakura NZ
Primera
ternera
Nacida en el
mundo
producto de
semen
sexado. W.
Vivanco.
Ruakura
1995
Efecto genético de producción de
crías de sexo pre determinado
• 7% sobre la tasa de mejora genética anual
obtenida con la técnica reproductiva en
uso
• Producción de crías de sexo
predeterminado tiene más un efecto
comercial de gran impacto económico:
producción exclusiva de animales
requeridos por el mercado.
La obtención y uso de células
germinales y células eternas
(stem cells, totipotentes)
Usos
• En la producción a voluntad de células y tejidos
con fines médicos y productivos
• Como nuevo instrumento en reproducción
avanzada:
– 2008, CSIRO Australia; M.Herrid. Producción de los
primeros corderos cría de macho selecto donante de las
células en ovejas empadradas por carneros recipientes
de las células primordiales del donante.
– 2009, China: nacimiento de la primera camada de
ratones producto de diferenciación de células eternas o
células madre (stem cells) totipotentes, en embriones.
Procedimiento seguido
• Irradiación de testículos de los machos
recipientes
• Inoculación de células primordiales del macho
donante a los testículos de los recipientes
• Desarrollo de espermatogenesis a partir de las
células primordiales del donante en cada
recipiente
• Monta o inseminación a hembras usando los
machos recipientes.
El futuro
• Optimización de la producción de embriones in vitro y la
clonación
• Uso de marcadores genéticos a nivel embrionario,
reproducir solo los embriones que tienen el sexo y la
composición genética deseada
• Modificación de genes (transgenesis): producción de
proteínas humanas en animales, incremento de genes
para mayor producción, eliminación de genes no
deseables
• Producción de células Totipontes eternas ( Stem Cells) y
gobernar su especialización.
• Producción de órganos humanos en animales
( Xenotransplantación)
Gracias por su atención
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