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Propósito de Uso

El Agar Papa Dextrosa es utilizado para el cultivo de hongos.

Resumen y explicación del producto

El Agar Papa Dextrosa (Potato Dextrose Agar, PDA, por sus siglas en inglés) es un medio de propósito general para
levaduras y mohos que puede ser suplementado con ácidos o antibióticos para inhibir el crecimiento bacteriano. Es
recomendado para uso con métodos de conteo en placa para alimentos, productos lácteos y pruebas realizadas en
cosméticos. El Agar Papa Dextrosa (PDA) puede ser usado para el cultivo de levaduras y mohos clínicamente
significativos. La base (infusión de papa) nutricionalmente rica, estimula la esporulación de los mohos y la producción
de pigmentos en algunos dermatofitos

Principios y procedimientos

El Agar Papa Dextrosa está compuesto por Infusión de Papa deshidratada y Dextrosa que fomentan el crecimiento
exuberante de los hongos. El agar es adicionado como agente solidificante. Muchos procedimientos estándares usan
una cantidad específica de ácido tartárico estéril (10%) para reducir el pH de este medio a 3,5  0.1, y así inhibir el
crecimiento bacteriano. No recalentar el medio acidificado, el calentamiento en estado ácido hidrolizará el agar

Formula de uso

Procedimiento

1. Suspenda 39 g del medio de cultivo en un litro de agua purificada

2. Caliente agitando frecuentemente y permita que hierva por un minuto para disolver completamente el medio.

3. Autoclave a 121°C durante 15 minutos

Procedimiento de la Prueba

Métodos de Vertido en Placa

1. Adicione 1 mL de la muestra de la muestra en una placa de petri estéril.


2. Adicione la cantidad especificada (10 o 20 mL) del agar estéril derretido (enfriado a 45–50°C) y revuélvalo gentilmente
para mezclarlo completamente. Permita que se solidifique.
3. Incube a 22–25°C o 30–32°C (dependiendo del método seguido) durante 2–7 días o por más tiempo.
Resultados
Las levaduras crecerán como colonias desde un color crema a un color blanco. Los mohos crecerán como colonias
filamentosas de variados colores. Cuente el número de colonias y considere el factor de dilución (si la muestra fue
diluida) al determinar el conteo de levaduras y/o mohos por cada gramo o mililitro de material.
Almacenamiento
Almacene el envase conteniendo el medio de cultivo deshidratado sellado firmemente y a una temperatura entre 2–
30°C. Una vez abierto y cerrado nuevamente, coloque el envase en un ambiente con baja humedad a la misma
temperatura de almacenamiento. Proteja el producto de los efectos de la humedad y de la luz manteniendo el envase
firmemente cerrado.
Cerebro Corazón (BHI), Agar

Se emplea para el cultivo de bacterias exigentes como Estreptococos, Neumococos, Meningococos y otros. Por la adición
de Estreptomicina, Gentamicina o Cloranfenicol resulta un medio selectivo para hongos.

Fundamento

Por la presencia de peptona, infusión de cerebro de ternera e infusión de corazón de res, se tienen los componentes
necesarios para nutrir microorganismos exigentes. La glucosa se emplea para la fermentación y el fosfato como tampón.
Por la adición de antibiótico es un medio adecuado para el estudio de hongos patógenos. Debido a su contenido de
glucosa es menos indicado para la caracterización de hemólisis, pero puede utilizarse suplementado con sangre.

Preparación

Suspender 52 g en 1 L de agua destilada; calentar y agitar hasta ebullición y hervir durante 1 minuto. Distribuir y
esterilizar a 121ºC durante 15 minutos. Agitar el medio antes de usar. Para preparar un medio selectivo para hongos, el
medio esterilizado y fundido se debe enfriar hasta 50ºC y añadir asépticamente 20.000 UI de penicilina y 40 mg de
estreptomicina por litro de medio. Se obtiene un medio más estable añadiendo 0,05 mg de cicloheximida y 0,5 mg de
cloranfenicol por litro, antes de esterilizar.

Modo de empleo

Incubar a 35±2ºC de 24 a 72 horas.

Glucosa Sabouraud, Agar (Ph. Eur.)

Se utiliza para el cultivo de hongos y levaduras y para la numeración de estos microorganismos en alimentos y otros
materiales. Los medios líquidos o caldos están indicados para pruebas de esterilidad; los agares Sabouraud con glucosa
están especialmente indicados para dermatofitos, mientras que los que contienen maltosa favorecen el crecimiento de
los hongos filamentosos. Se aconseja utilizar un medio suplementado con antibióticos cuando las muestras están
altamente contaminadas.

Fundamento

En este medio la mezcla de peptonas es la fuente nitrogenada para el crecimiento de los hongos y levaduras, el
carbohidrato (glucosa) es la fuente energética. El Agar Glucosa Sabouraud corresponde a las recomendaciones de USP y
Ph. Eur. para recuento de hongos y levaduras, ya que se trata de un medio que suministra todos los requerimientos
nutritivos necesarios. Sin embargo, se recomienda la utilización de antibióticos de amplio espectro en muestras muy
contaminadas. El Cloranfenicol inhibe la mayor parte de contaminación bacteriana y la Cicloheximida inhibe el desarrollo
de hongos saprofitos. Los medios de Sabouraud pueden ser adicionados con otros productos para mejorar su
selectividad: • Potasio Telurito al 0,015% concentración final, inhibe el crecimiento bacteriano. • 2,3,5-Trifenil-2H-
Tetrazolio Cloruro al 100 mg/l, permite diferenciar Candida albicans de las otras Cándidas. • Penicilina a razón de 20.000
UI/l, inhibe la mayor parte de bacterias.
Pueden utilizarse otros antimicrobianos, así como indicadores que pueden hacer que el medio sea selectivo y/o
diferencial.

Preparación

Suspender 65 g en 1l de agua destilada; calentar y agitar hasta ebullición y hervir durante 1 minuto. Distribuir y
esterilizar a 118-121ºC durante 15 minutos. Evitar la exposición excesiva al calor, que favorece la hidrólisis de los
componentes ablandando el medio.

Modo de empleo

Sembrar la muestra según fines previstos e incubar entre 20-25ºC de 3 a 7 días. La Farmacopea Europea recomienda
este medio para el recuento total de mohos y levaduras a 20-25ºC durante ≤ 5 días. Para la promoción de crecimiento
de Candida albicans ATCC 10231 y Aspergillus niger ATCC 16404, inóculo ≤ 100 ufc, se incuban a 20-25ºC durante ≤ 5
días.

Maltosa Sabouraud, Agar

Se utiliza para el cultivo de hongos y levaduras y para la numeración de estos microorganismos en alimentos y otros
materiales. Los agares Sabouraud con maltosa están especialmente indicados para favorecer el crecimiento de los
hongos filamentosos. Se aconseja utilizar un medio suplementado con antibióticos cuando las muestras están altamente
contaminadas.

Fundamento

En estos medios la peptona es la fuente nitrogenada para el crecimiento de los hongos y levaduras, el carbohidrato
(maltosa) es la fuente energética. La maltosa, cumple con los requisitos nutritivos, de forma general, de hongos y
levaduras patógenos y no patógenos. El medio Agar Maltosa Sabouraud también permite la diferenciación de
Pseudomonas en poblaciones mixtas, ya que potencia la producción de piocianina. El crecimiento selectivo que se da en
los medios Sabouraud que no contienen antibióticos, depende por completo del pH ácido de estos medios. Sin embargo,
se recomienda la utilización de antibióticos de amplio espectro en muestras muy contaminadas. El Cloranfenicol inhibe
la mayor parte de contaminación bacteriana y la Cicloheximida inhibe el desarrollo de hongos saprofitos. Los medios de
Sabouraud pueden ser adicionados con otros productos para mejorar su selectividad: • Potasio Telurito al 0,015%
concentración final, inhibe el crecimiento bacteriano. • 2,3,5-Trifenil-2H-Tetrazolio Cloruro al 100 mg/l, permite
diferenciar Candida albicans de las otras Cándidas. • Penicilina a razón de 20.000 UI/l, inhibe la mayor parte de
bacterias. Pueden utilizarse otros antimicrobianos, así como indicadores que pueden hacer que el medio sea selectivo
y/o diferencial

Preparación

Suspender 65 g en 1l de agua destilada; calentar y agitar hasta ebullición y hervir durante 1 minuto. Distribuir y
esterilizar a 118-121ºC durante 15 minutos. Evitar la exposición excesiva al calor, que favorece la hidrólisis de los
componentes ablandando el medio.
Modo de empleo

Sembrar la muestra según fines previstos e incubar entre 20ºC y 30ºC de 3 a 7 días

Glucosa Sabouraud, Caldo (Ph. Eur.

Se utilizan para el cultivo de hongos y levaduras y para la numeración de estos microorganismos en alimentos y otros
materiales. Los medios líquidos o caldos están indicados para pruebas de esterilidad. Se aconseja utilizar un medio
suplementado con antibiótico cuando las muestras están altamente contaminadas.

Fundamento

En estos medios la peptona es la fuente nitrogenada para el crecimiento de hongos y levaduras, el carbohidrato (glucosa
o maltosa) es la fuente energética. El medio líquido de Sabouraud se prepara según los procedimientos oficiales para
realizar pruebas de esterilidad. El crecimiento selectivo que se da en los medios Sabouraud que no contienen
antibiótico, depende por completo del pH ácido de estos medios. Sin embargo, se recomienda la utilización de
antibióticos de amplio espectro en muestras muy contaminadas. El Cloranfenicol inhibe la mayor parte de
contaminantes bacterianos y la Cicloheximida inhibe el desarrollo de hongos saprofitos. Los medios de Sabouraud
pueden ser adicionados con otros productos, para mejorar su selectividad: - Potasio telurito al 0,015% concentración
final, inhibe el crecimiento bacteriano. - 2,3,5-Trifenil-2H-Tetrazolio Cloruro a 100 mg/l, permite diferenciar Candida
albicans de las otras Candidas. - Penicilina a razón de 20.000 UI/l, inhibe la mayor parte de bacterias. Pueden utilizarse
otros antimicrobianos, así como indicadores que puedan hacer que el medio sea selectivo y/o diferencial.

Preparacion

Disolver 30 g en 1 l de agua destilada. Distribuir y esterilizar a 118-121ºC durante 15 minutos. No sobrecalentar para no
“caramelizar” los carbohidratos.

Modo de empleo

La Farmacopea lo recomienda para el control de Candida albicans. Inocular 100 ml de caldo Glucosa Sabouraud con 10
ml de una solución madre 1:10 que contenga no menos de 1 g o 1 ml de la muestra de producto a controlar. Incubar a
30-35ºC durante 3-5 días. Subcultivar sobre Glucosa Sabouraud Agar (413802) e incubar a 30-35ºC durante 24-48 horas.
Para el control de Candida albicans la incubación es a 20- 25ºC durante 2-3 días. Siempre confirmar las colonias
sospechosas.

Citrato de Simmons, Agar

Se emplea para la diferenciación e identificación de Enterobacteriáceas y ciertos Hongos, basándose en la utilización del
Citrato

Fundamento

Este medio se fundamenta en el distinto comportamiento de los Coliformes fecales y los Aerógenos en un ambiente que
contiene sales inorgánicas de amonio como única fuente de nitrógeno y citrato como única fuente de carbono. En tal
situación los primeros muestran su incapacidad de desarrollo, mientras que los segundos lo hacen sin dificultad. La
presencia de azul de bromotimol hace que el medio, inicialmente verde, pueda cambiar de color por la producción de
álcali, a un azul oscuro. Para caracterizar Klebsiella es preciso añadir Inosita a razón de 10 g/l antes de esterilizar.
Preparación

Suspender 24,3 g en 1 l de agua destilada; calentar y agitar hasta ebullición y hervir durante 1 minuto. Distribuir y
esterilizar a 121ºC durante 15 minutos. Si se distribuye en tubos de ensayo dejar enfriar en posición inclinada, dejando
un fondo de 2-3 cm y una superficie inclinada de 4-5 cm.

Modo de empleo

El medio preparado es de color verde, cuando se siembra en los tubos se hace en la columna vertical y por estría en la
superficie inclinada. Incubar entre 35±2ºC de 24 a 96 horas.

Glucosa Sabouraud + Cloranfenicol, Agar (Ph. Eur.)

Se utiliza para el cultivo de hongos y levaduras y para la numeración de estos microorganismos en alimentos y otros
materiales. Los agares Sabouraud con glucosa están especialmente indicados para dermatofitos. Se aconseja utilizar un
medio suplementado con antibióticos cuando las muestras están altamente contaminadas.

Fundamento

En este medio la mezcla de peptonas es la fuente nitrogenada para el crecimiento de los hongos y levaduras, el
carbohidrato (glucosa) es la fuente energética. La utilización de antibióticos de amplio espectro en muestras muy
contaminadas (Cloranfenicol) inhibe la mayor parte de contaminación bacteriana. Los medios de Sabouraud pueden ser
adicionados con otros productos para mejorar su selectividad: • Potasio Telurito al 0,015% concentración final, inhibe el
crecimiento bacteriano. • 2,3,5-Trifenil-2H-Tetrazolio Cloruro al 100 mg/l, permite diferenciar Candida albicans de las
otras Cándidas. • Penicilina a razón de 20.000 UI/l, inhibe la mayor parte de bacterias. Pueden utilizarse otros
antimicrobianos, así como indicadores que pueden hacer que el medio sea selectivo y/o diferencial.

Preparación

Suspender 65 g en 1l de agua destilada; calentar y agitar hasta ebullición y hervir durante 1 minuto. Distribuir y
esterilizar a 118-121ºC durante 15 minutos. Evitar la exposición excesiva al calor, que favorece la hidrólisis de los
componentes ablandando el medio.

Modo de empleo

Sembrar la muestra según fines previstos e incubar entre 20-25ºC de 3 a 7 días.