La población mundial ha aumentado de manera extraordinaria y junto con ella la

contaminación a la cual estamos expuestos de manera masiva y permanente

debido al aumento progresivo de la contaminación ambiental con cromo
hexavalente a causa de emisiones industriales Una fuente importante del Cr(VI) lo
constituyen los dicromatos de potasio y de sodio, que son utilizados en la industria
de cromados, manufactura de pigmentos, colorantes, curtido de pieles, en la
preparación de antisépticos, en la limpieza de material de vidrio de laboratorio,
como agente valorante, entre otros.

El Cr (VI) existe en las formas aniónicas CrO4 2-, HCrO4 - o Cr2 O7 - ,

dependiendo del pH del medio y tiene la capacidad de ingresar a la célula
utilizando la vía general de los canales proteicos transportadores de aniones. Al
ingresar al espacio intracelular, el cromo (VI) interacciona con agentes reductantes
e inicia un proceso reductivo a los estados Cr(V), Cr (IV) y Cr(III), generando una
fuerza oxidativa capaz de producir lesiones en el DNA, aductos Cr-DNA, uniones
cruzadas DNA-DNA, DNA-proteínas, sitios apúrícos, entre otros Es por ello que
podemos clasificar a este reactivo como un agente genotoxico ya que afecta
negativamente la integridad del material genético de una célula es decir que
perjudica el DNA.

En la toxicología genética se acepta que una sola prueba no puede detectar con
exactitud o predecir confiablemente los efectos genotóxicos de una sustancia en el
ser humano; por esto es importante tener alternativas para evaluar genotóxicos.
La correlación entre mutagenicidad y carcinogenicidad es cada día más aceptada.
Se ha demostrado que 157 de los 175 carcinógenos conocidos también son
mutágenos, de ahí la conveniencia de saber con precisión el posible daño que un
compuesto puede tener sobre nuestro organismo o sobre otros seres vivos.
El monitoreo de los contaminantes por análisis directo requiere conocer el agente
químico a verificar; además, su evaluación está limitada por la sensibilidad y
especificidad del método utilizado. Ante esto, los bioensayos ofrecen
considerables ventajas, ya que un organismo puede metabolizar un compuesto
cualquiera en otros que pueden ser aún más tóxicos que el original.
Diversos químicos medioambientales e industriales provocan daños en animales
que se emplean en la experimentación, y es obvio ese potencial para causar
efectos similares en el hombre. Las pruebas para la detección de mutágenos, por
lo tanto, son importantes en cuanto que estos compuestos tienen la capacidad de
alterar el material genético en los organismos; además, pueden tener efectos
teratogénicos, causar mutaciones en las células germinales y en las células
somáticas, inducir enfermedades cardíacas, influir en los procesos de
envejecimiento y provocar mutaciones que pueden generar cáncer.

Se dispone actualmente de pruebas con las que se puede determinar un daño

genético o detectar compuestos genotóxicos. Estas pruebas pueden ser
bioquímicas, in vivo o in vitro, con micro o macroorganismos; pueden asimismo
determinar daños microscópicos o moleculares como cuando se estudian algunos
polimorfismos génicos (que, según se sabe, se asocian con el desarrollo de
algunos tipos de cáncer), o bien la formación de aductos, es decir, complejos que
se forman cuando un compuesto químico se une a una molécula biológica, como
el ADN o ciertas proteínas. Conocer estas alternativas es importante, pues cientos
de compuestos químicos que no están suficientemente estudiados aparecen en el
mercado cada semana, sobre todo en lo que respecta al daño que pueden
producir en el material genético de los seres vivos.

En esta práctica desarrollaremos una de las técnicas existentes para analizar este
fenómeno sometiendo alrededor de veinte peces a diferentes concentraciones de
dicromato de potasio del cual ya hemos hablado anteriormente, dicha práctica
posee el nombre de micronúcleos.

Es importante señalar que los micronúcleos son fragmentos o cromosomas

completos que quedan fuera del núcleo durante la mitosis; mediante su estudio se
pueden evaluar los efectos de genotóxicos ambientales y ocupacionales, esta
prueba es ampliamente utilizada y es una alternativa eficaz, sencilla y económica
para detectar la perdida de material genético.
1. Ensayos de genotoxicidad. (2018). The Zebrafish Lab. Recuperado 05-
febrero-2018, De: http://thezebrafishlab.com/es/featured_item/ensayos-de-
genotoxicidad/

2. Intermark, D. (2018). Lineas de Investigación / Genética

CACYTMAR. Cacytmar.uca.es. Recuperado 05- febrero-2018, De:
http://cacytmar.uca.es/cacytmar/portal.do?IDM=63&NM=2

3. M. Zúñiga González, G., & C. Gómez Meda, B. (2009). La prueba de

micronúcleos. Divulgación Científica, 19(1), 25-30. Recuperado De:
https://www.uv.mx/cienciahombre/revistae/vol19num1/articulos/micronucleo
s/index.htm

4. ORRES-BUGARÍN, Olivia, & Ramos-Ibarra, María Luisa. (2013). Utilidad de

la Prueba de Micronúcleos y Anormalidades Nucleares en Células
Exfoliadas de Mucosa Oral en la Evaluación de Daño Genotóxico y
Citotóxico. International Journal of Morphology, 31(2), 650-
657. https://dx.doi.org/10.4067/S0717-95022013000200050

5. Prieto, Z., Villegas-Sanchez, L., Vallejo-Rodríguez, R., Polo-Benites, E.,

Fernández, R., Quijano-Jara, C., & León, J. (2008). Genotoxic effect of
potassium dicromate in peripheral blood erythrocytes of Oreochromis
niloticus (TILAPIA). Peru Med Exp Salud Publica, 25(1), 51-58. Recuperado
05- febrero-2018, De: http://www.scielo.org.pe/pdf/rins/v25n1/a08v25n1.pdf
Observar los micronúcleos formados en Carassius auratus (pez dorado) mediante
el sometimiento de dichos peces a diferentes concentraciones de Dicromato de
potasio para evidenciar la genotoxicidad de dicho reactivo
 I

Conectar las
INICIO mangueras a la
bomba e
introducirlas a los
botes con los peces
Preparación del
habitad de los peces
Mantener los peces
Cortar los 4 botes en condiciones de
de 10 L por la aireación y
primera línea alimentación
durante 7 días

Realizar los cálculos

Esperar
necesarios para que
cada bote tenga las
siguientes ¿Transc
concentraciones de NO urrieron
Dicromato de 7 días?
potasio 0, 2, 4 y 6
ppm en 4 litros

SI
¿Están listos los
botes con sus
concentracione Tomar muestras de
s
NO
sangre del arco
correspondient
es? branquial de los
peces

Realizar extendidos
celulares
SI
Dejar secar a
temperatura
Colocar los peces
ambiente
equitativamente en cada bote

I II
 II

Fijar la muestra en
etanol absoluto por
20 min

Teñir con Giemsa 5%

durante 30 min

Observar al
microscopio a 1000x Estructura redondeada de
tamaño pequeño, diámetro
significativamente inferior al
Seguir los criterios de
núcleo principal, con
identificación de
coloración similar y clara
micronúcleos
separación del núcleo
principal

FIN
Botellas de plástico de 10 L Cortar las botellas

Colocar los peces en forma equitativa en

las botellas y darle aeración con la
ayuda de una bomba por 7 días

0 2 4 6

Concentraciones
de K2Cr2O7 en ppm

Sistema de
tratamiento

Extraer sangre de una de las branquias del pez, colocar una gota en el porta objetos y
observarla al microscopio a 10,40 x
Tras haber realizado la extracción de sangre de los peces de las diferentes
concentraciones de Dicromato de potasio, estas se observaron al microscopio a
diferentes objetivos con el fin de visualizar micronúcleos. A continuación se
muestran una serie de imágenes donde se muestran los resultados obtenidos para
las concentraciones diferentes

Imagen 1.1 observación de las Imagen 1.2 vista a 40x de las células
células extraídas debajo de la aleta extraídas de la sangre del pez en la
del pez de la concentración 0ppm concentración 2ppm de dicromato
Dicromato de potasio, vista a 10x de potasio

Imagen 1.4 observación de la

Imagen 1.3 observación de la sangre
concentración 6ppm de Dicromato de
del pez en un microscopio óptico a
potasio de la extracción de la sangre
40x correspondiente a la
del pez
concentración 4 ppm de Dicromato
de potasio
Con base a los resultados obtenidos podemos visualizar que en la imagen 1.1 no
hay presencia de micronúcleos esto se debe a que es una concentración libre de
Dicromato de potasio es por ello que al compararlas con las otras tres imágenes
luce completamente diferente a pesar de estar enfocada a 10x. Por el contrario
notamos una leve diferencia en la imagen 1.2 hay formación de micronúcleos pero
en realidad solo son algunas células que los poseen, esto indica que la
concentración de Dicromato de potasio afecta en lo que ocasiona la pérdida de
fragmentos cromosómicos o cromosomas enteros durante la división nuclear y
tienen valor en el diagnóstico de genotoxicidad así lo dijo (Zalacain, M.,
Sierrasesúmaga, L., & Patiño, A.. (2008) quien realizó un estudio de peces en
aguas contaminadas por agentes genotóxicos

Conforme aumentamos las concentraciones de Dicromato estas afectan más a las

células de los peces véase imagen 1.3 que tiene una concentración de 4ppm de
Dicromato de potasio lo que vemos en esta imagen son los micronúcleos son
masas de cromatina que se parecen al núcleo principal y son vistos como
pequeños núcleos en el citoplasma de las células interfacitas y es una clase de
núcleo de menos tamaño, en comparación con el que se encuentra habitualmente
se pueden visualizar mejor en la imagen 1.4 en donde la concentración es la
máxima y los MN(micronúcleos) presentan las características mencionadas
anteriormente descritas por (Prieto, Zulita, León-Incio, Julio, Quijano-Jara, Carlos,
Fernández, Radigud, Polo-Benites, Edgardo, Vallejo-Rodríguez, Roger, & Villegas-
Sanchez, Luis. 2008).

Los valores encontrados con el test de micronúcleos a las concentraciones de 0,4

ppm, están dentro del rango de los valores individuales reportados por ((RINCÓN
RODRÍGUEZ, 2015)) que registró valores entre 0,33 y 2,0 en células de hemolinfa
del cangrejo P. clarkii expuestas a 400 μg/L de Dicromato de potasio durante siete
días. En relación con el proceso de micronucleación, el origen de micronúcleos en
eritrocitos de sangre periférica, se debería a la ocurrencia de lesiones en el DNA
principalmente en las células en interfase-S, roturas en los brazos cromosómicos
que conducirían a delecciones en el proceso anafásico, quedando rezagados
fragmentos cromosómicos acéntricos con la consecuente formación de
micronúcleos telómeros positivos. Pero todo esto tiene que ver con el Dicromato
de potasio puesto que tiene la capacidad de ingresar a la célula utilizando la vía
general de los canales proteicos transportadores de aniones y al ingresar al
espacio intracelular, interacciona con agentes reluctantes e inicia un proceso
reductivo a los estados Cr (V), Cr (IV) y Cr (III), generando una fuerza
oxidativa capaz de producir lesiones en el DNA, aductos Cr-DNA, uniones
cruzadas DNA-DNA, DNA-proteínas, sitios apurícos, entre otros (9). Los
mecanismos de transporte del cromo a nivel celular, la interacción con agentes
reluctantes y uniones con el DNA, no se encuentran totalmente esclarecidos,
así lo describió (Torres-Bugarín, Olivia, Zavala-Aguirre, José Luis, Gómez-
Rubio, Paulina, Buelna-Osben, Héctor René, Zúñiga-González, Guillermo, &
García-Ulloa Gómez, Manuel. 20010)

 El Dicromato de potasio produce daño genético en los eritrocitos del pez

dorado (Carassius auratus)
 Los micronúcleos presentes en los eritrocitos se pueden identificar
fácilmente a través de una microscopia de luz en la célula después de sacar
la muestra respectiva, previamente preparada y con tinción del frotis
 La práctica de micronúcleos en peces es una técnica útil para medir la
genotoxicidad en ecosistemas acuáticos
BIBLIOGRAFIA

 RINCÓN RODRÍGUEZ, J. (2015). TEST DE MICRONÚCLEOS EN PECES

COMO INDICADOR DE TOXICIDAD EN ECOSISTEMAS DE AGUA
DULCE A ESCALA GLOBAL (pp. 55-56). SANTIAGO DE CALI.
Recuperado De: https://red.uao.edu.co/bitstream/10614/8584/1/T06395.pdf
 Torres-Bugarín, Olivia, Zavala-Aguirre, José Luis, Gómez-Rubio, Paulina,
Buelna-Osben, Héctor René, Zúñiga-González, Guillermo, & García-Ulloa
Gómez, Manuel. (2010). Especies de peces con potencial como
bioindicadoras de genotoxicidad en el lago "La Alberca", Michoacán,
México. Hidrobiológica, 17(1), 75-81. Recuperado en 14 de marzo de 2018,
de http://www.scielo.org.mx/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0188-
88972007000100009&lng=es&tlng=es
 Prieto, Zulita, León-Incio, Julio, Quijano-Jara, Carlos, Fernández, Radigud,
Polo-Benites, Edgardo, Vallejo-Rodríguez, Roger, & Villegas-Sanchez, Luis.
(2008). Efecto Genotóxico del Dicromato de Potasio En Eritrocitos de
sangre periférica de OreochromisNiloticus (Tilapia). Revista Peruana de
Medicina Experimental y Salud Publica, 25(1), 51-58. Recuperado en 14 de
marzo de 2018, de
http://www.scielo.org.pe/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1726-
46342008000100008&lng=es&tlng=es.
 Zalacain, M., Sierrasesúmaga, L., & Patiño, A... (2008). El ensayo de
micronúcleos como medida de inestabilidad genética inducida por agentes
genotóxicos. Anales del Sistema Sanitario de Navarra, 28(2), 227-236.
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http://scielo.isciii.es/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1137-
66272005000300007&lng=es&tlng=es.