Departamento de Ingeniería Química - Ingeniería en Biotecnología

Cátedra Diseño de Bioreactores

GUÍA DE EJERCICIOS CRECIMIENTO Y REACTORES MICROBIANOS

1.- En un experimento de laboratorio se cultiva E. Coli en medio mínimo aeróbico.

Diseñar el medio de cultivo con Mg como nutriente limitante, si se desea un
incremento total de biomasa de 7 g/L, donde el coeficiente de rendimiento
respecto a la fuente de carbono es 0,48. Los demás nutrientes deben estar en un
exceso de 100%. La composición celular y las fuentes recomendadas son las
siguientes:

Elemento Fuente % en célula

C C6H12O6 50
N NH4Cl 14
S K2SO4 1
Mg MgCl2 0,5
P K2HPO4 2
(Resp: Sglucosa = 29,17 g/L; SNH4Cl = 7,32 g NH4Cl)

2.- Se requiere producir un metabolito en un cultivo por lotes aerobio de cierto

microorganismo en un fermentador piloto de 100 litros de trabajo. El inóculo
consistirá en 5 litros de un cultivo de 7 g/L, y se espera lograr una concentración
celular de 20 g/L en el fermentador piloto. Los nutrientes disponibles son glucosa,
NaNO3, MgSO4 y K2HPO4. Se conoce experimentalmente que f = 0,54. Diseñe un
medio mínimo limitado por carbono, si se sabe que estas células contienen 47%
de C, 10% de N, 0,7% de Mg y 1,5% de P. (Resp: S glucosa = 43,88 g/L; SNaNO3 =
17,87 g NaNO3)

3.- Se quiere preparar un cultivo aerobio de Klebsiella aerogenes en un

fermentador de 10 litros, inoculando con 500 mL de inóculo (4,1 g/L). El nutriente
limitante, glucosa, estará inicialmente presente en una concentración de 18 g/L.

a) Estimar el tiempo de cultivo para el consumo total de glucosa, si la velocidad

específica de crecimiento a la temperatura de fermentación (28 ºC) es de 0,67 hr-1.
Considere despreciable la fase de latencia y que la célula posee 50% de carbono.
(Resp: tb = 5,62 h)

b) Cuando transcurría la mitad del tiempo determinado en (a), se agregaron 3 litros

de una solución estéril de glucosa de 25 g/L, además de los otros componentes de
medio. Además, se cambia la temperatura de 28 ºC a 34 ºC. Calcular el tiempo
total de cultivo y la concentración celular final, si la energía necesaria para activar
su metabolismo reproductivo es de 13 kcal/mol (Resp: tb = 4,98 h; X = 9,57 g/L).

4.- En un experimento de laboratorio se cultiva E. Coli en medio mínimo. El cultivo

se realizó en un incubador rotatorio, primero a 37 ºC hasta consumir la mitad del
nutriente limitante, y después a 24 ºC hasta alcanzar la fase estacionaria. Si se ha
determinado que la cepa utilizada tiene un tiempo de duplicación de 49 minutos a
37 ºC, y que la energía necesaria para activar su crecimiento es de 16200 cal/mol,
calcule el tiempo al cual se realizó el cambio de Tº y el tiempo total de cultivo si se
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inocula 1 mL de cultivo de 4 g/L a un matraz conteniendo 80 mL de medio estéril.

Suponga que S0 = 1 g/L y YX/S = 0,45 g X/g S. (Resp: tcambio = 2 h; ttotal = 4,24 h)

5.- Una fermentación batch de una bacteria aeróbica que usa como fuente de
carbono metanol entrega los resultados siguientes:
Tiempo, 0 2 4 8 10 12 14 16 18
h
Biomasa 0,2 0,211 0,305 0,98 1,77 3,2 5,6 6,15 6,2
(X), g/l
Sustrato 9,23 9,21 9,07 8,03 6,8 4,6 0,92 0,077 0
(S), g/l
Determine:
a.- velocidad de crecimiento específico, . (Resp: 0,28 h-1)
b.- Coeficiente de rendimiento observado, YX/S (Resp: 0,65)
c.- tiempo de duplicación, td (Resp: 2,48 h)

6.- Se requiere producir un metabolito en un cultivo discontinuo aerobio de cierto

microorganismo en un fermentador piloto de 100 litros de trabajo. Se sabe que la
generación del metabolito esta indirectamente relacionado al crecimiento. El
inóculo consistirá en 5 litros de un cultivo de 7 g/L, y se espera lograr una
concentración celular de 20 g/L en el fermentador piloto, usando glucosa como
fuente de carbono. Se conoce experimentalmente que en este medio el t d es de
1,5 horas, YP/S = 0,66, f = 0,6 y el coeficiente de mantención es 0,1.

a) Determinar la concentración inicial mínima de glucosa y el tiempo total de

cultivo para lograr 20 g/L de biomasa si se sabe que la fase de latencia es de 2
horas y la fase estacionaria es de 4 horas. La cinética de generación de metabolito
esta dada por:
dP dX
 0, 27   2  X  qP  X
dt dt
La biomasa contiene un 47% de C. (Resp: S0 = 179,89 g/L, tb = 14,79 h).
b) Determinar la concentración final de P, conociendo que inicialmente no hay P
presente. (Resp: 90,54 g/L)

7.- En el desarrollo de una tecnología microbiana para tratar un efluente industrial

se requiere operar un quimiostato de 120 litros de volumen de trabajo con un flujo
de 20 L/h, que corresponde a una velocidad de dilución equivalente a un 82% del
valor crítico. La población presenta un μm de 0,22 h-1, un KS de 1000 mg/l y un
rendimiento de sustrato en células de 0,28 g/g. Bajo estas condiciones, determinar
la concentración de sustrato en la alimentación, en la descarga y la concentración
celular en estado estacionario. (Resp: S0 = 12,41 g/L; S = 3,151 g/L; X = 2,59 g/L)

8.- Usted dispone de la siguiente información experimental del crecimiento de una

bacteria, obtenida en cultivo batch:

Tiempo, 0 0,50 1,00 1,50 2,00 2,50 3,00 3,50 4,00 4,50 5,00 5,50 6,00
h

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Biomasa 0,10 0,13 0,16 0,21 0,27 0,35 0,45 0,57 0,74 0,94 1,21 1,56 2,00
(X), g/l
Sustrato 100 99,93 99,84 99,72 99,57 99,38 99,13 98,82 98,41 97,89 97,22 96,36 95,26
(S), g/l

Tiempo, 6,50 7,00 7,50 8,00 8,50 9,00 9,50 10,00 10,50 11,00 11,50 12,00 12,50
h
Biomasa 2,56 3,29 4,22 5,42 6,95 8,93 11,45 14,70 18,86 24,19 31,01 39,60 41,0
(X), g/l
Sustrato 98,34 92,02 89,69 86,70 82,86 79,94 71,62 63,51 53,11 39,78 22,71 1,25 0,00
(S), g/l

a) ¿Cuál es la velocidad específica de crecimiento? (Resp: 0,5 h-1)

b) Cuál es el valor del rendimiento global de sustrato en células, YX' / S (Resp:
0,409)
c) En un quimiostato ideal, cuál sería el rango de velocidad de flujo de
alimentación que usted usaría si el reactor tiene una capacidad de 20 litros (Resp:
10 L/h)
d) Usted realiza un experimento de cultivo continuo a velocidad de dilución 0,35 h-
1
. Transcurrido un tiempo se observa que el cultivo está contaminado. El
microorganismo contaminante se identifica y se sabe que éste tiene una velocidad
máxima de crecimiento de 0,4 h-1. ¿Es posible eliminar el contaminante?
Justifique.

9.- Los siguientes datos fueron obtenidos en un quimiostato para el crecimiento de

E. aerogenes en un medio limitado por glicerol con un S0 = 10 mg/ml.

D, h-1 0,05 0,1 0,2 0,4 0,6 0,7 0,8 0,84

Biomasa 3,2 3,7 4,0 4,4 4,75 4,9 4,5 0,5
(X),
mg/ml
Sustrato 0,012 0,028 0,05 0,1 0,15 0,176 0,8 9,0
(S),
mg/ml

Determine los valores de KS, μmax, YX/S y ms. (Resp: Ks = 0,1346 mg/ml; μmax =
0,925 h-1; YX/S = 0,496 mgX/mgS; mS = 0,0593.

10.- Considere la operación en estado estacionario de un quimiostato. Suponga

que el crecimiento bacteriano esta inhibido por sustrato y que el metabolismo
endógeno es despreciable tal que:
S
net  max
S2
KS  S 
KI

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a.- Derive una expresión para la concentración de sustrato residual (S) como
función de la tasa de dilución y los parámetros cinéticos ( max , KS, KI).
b.- ¿Cuales son las implicancias de operar un quimiostato cuando el organismo
esta sujeto a inhibición por sustrato?

11.- Pseudomona putida con un max = 0,5 h-1 es cultivada en un reactor continuo
bajo condiciones aeróbicas usando un D = 0,28 h-1. La fuente de carbono y
energía es lactosa, la cual es alimentada con una concentración de S 0 = 2 g/L. Si
la velocidad de crecimiento esta limitada por la transferencia de O 2, usando la
siguiente información: YX / S = 0,45 gX/gS; YX / O2 = 0,25 gX/gO2, KH = 1,19x10-3
mol/atm L, kLa = 30 h-1 calcule:
a.- la concentración de biomasa en estado estacionario y la velocidad específica
de consumo de oxígeno ( qO2 ). (Resp: X = 186 mg/L; qO2 = 1,12 gO2/gX h)
b.- ¿Cuál debe ser el coeficiente de transferencia de oxígeno (k La) a 1 atm de
presión total para superar la limitación por transferencia de O2, es decir, tener
concentraciones de O2 en la fase líquida superiores a 2 mg/L?

12.- Considere un reactor de mezcla completa de 1 m 3 de volumen (Quimiostato)

donde se produce biomasa con glucosa como sustrato. El sistema sigue una
cinética tipo Monod con μmax = 0,4 h-1 y KS = 1,5 g/L, con un factor de rendimiento
de 0,5 g biomasa/g sustrato. Si la operación normal es con una alimentación
estéril de 100 l/h que contiene 10g/l de glucosa:
a.- ¿Cuál es la tasa específica de producción de biomasa (g/L h) en estado
estacionario? (Resp: Qx = 0,475 g/l h)
b.- Si se usara un reciclo de 10 l/h y una concentración de biomasa en el reciclo 5
veces mayor a la concentración a la salida del reactor, ¿Cuál será la nueva tasa
específica de producción de biomasa (g/L h)? (Resp: Qx = 0,81 g/l h)
c.- Explique cualquier diferencia entre los valores encontrados en a y b.

13.- Un quimiostato de 12 m3 de volumen con recirculación de células y sin purga,

posee una alimentación fresca de 6240 L/h con una concentración de 1,2 g/L. Se
pide determinar el factor de concentración en el separador, la concentración
celular en el fermentador y la concentración de sustrato en el efluente para un
factor de recirculación de 0,6.
Datos: μmax = 0,62 h-1 μ = 0,35 h-1 KS = 0,2 g/L Yx/s = 0,5 g/g.
(Resp: S = 0,259 g/L; Xreactor = 0,7 g/L; c = 1,55).

14.- En un sistema de 2 quimiostatos en serie, el volumen del primer y segundo

reactor son V1 = 500 l y V2 = 300 l, respectivamente. El primer reactor es usado
para producción de biomasa y el segundo es para formación de un metabolito
secundario. El caudal de alimentación al primer reactor es de 100 l/h, con una
concentración de S = 5,0 g/l. Usando las siguientes constantes: μmax = 0,3 h-1; KS =
0,1 g/L; YX/S = 0,4 g X/g sustrato:
a.- Determine la concentración de biomasa y sustrato en el efluente de la primera
etapa. (Resp: S1 = 0,2 g/L; X1 = 1,92 g/L)

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b.- Suponga que el crecimiento es despreciable en la segunda etapa y que la

velocidad específica de formación de producto es qP = 0,02 g P/g biomasa h, con
YP/S = 0,6 g P/g S. Determine la concentración de sustrato y producto en el
efluente del segundo reactor. (Resp: P2 = 0,1152 g/L; S2 = 8 mg/L)

15.- Se propone un sistema de fermentación continua en régimen estacionario que

consta de un fermentador con reciclo de células cuyo efluente alimenta un
segundo fermentador. Sugiera una expresión que relacione la tasa específica de
crecimiento en el segundo reactor con los parámetros D, S0, μ1, Ks, max y X2.
Considere:
 D=F/V es la tasa (velocidad) de dilución, igual en ambos fermentadores
 La alimentación fresca es estéril.
  f es el factor de concentración.

16.- En una planta piloto se dispone de un sistema de fermentación continua

consistente en dos quimiostatos en serie de 50 litros de volumen de trabajo cada
uno. Se desea cultivar una determinada bacteria (55% C; 11% N; 1,2% S; 2,0%
Mg; 1,3% P) cuya velocidad específica de crecimiento máxima es de 0,45 h -1 en
las condiciones del ensayo y su constante de afinidad es de 28 mg/L para glicerol,
que será utilizado como nutriente limitante. Considere un rendimiento en células
constante de 0,45 g/g. La primera etapa se operará a D= 0,23 h -1, con una
concentración de glicerol en la alimentación de 18 g/L. La segunda etapa tiene una
alimentación secundaria de 6 L/h con 100 g glicerol/L.
a) Determinar los valores estacionarios de X, S y  en cada etapa.
(Resp: S1 = 0,029 g/L; X1 = 8,09 g/l; 1 = 0,23 h-1; S2 = 0,0384 g/L; X2 = 20,67 g/l;
2 = 0,26 h-1)
b) Determinar las productividades volumétricas de células en la primera y en la
segunda etapa. (Resp: Qx1 = 1,86 g/l h; Qx2 = 7,24 g/l h
c) ¿Cómo varían los resultados de (a) si la alimentación secundaria incluye
además 5 g/L de células?
(Resp: S2 = 0,032 g/L; X2 = 22,45 g/l; 2 = 0,24 h-1)