UNIVERSIDAD NACIONAL “HERMILIO

VALDIZÁN”
FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA
AGRONÓMICA
FILIAL MONZÓN

IDENTIFICACION DE NEMATODOS FITOPATOGENOS

CURSO : fitopatología agrícola

DOCENTE : ing. Alvares Benaute, Luisa madolin
ALUMNA: Velásquez Soto, Doris

Monzón - Huánuco – Perú

 IDENTIFICACION DE NEMATODOS FITOPATOGENOS

I. INTRODUCCION

Los nematodos del suelo son pequeños invertebrados dependientes del agua, los cuales
se consideran uno de los grupos de animales más abundantes y más diversos en el
planeta. Debido a su gran capacidad de adaptación, los nematodos están presentes en
cualquier lugar donde exista carbono orgánico, en todas las latitudes del planeta y desde
fondo del mar hasta la cima de las montañas. La palabra nematodo deriva del griego
“nema” que significa “forma de un hilo”, ya que poseen un cuerpo alargado y cilíndrico.
Derivado de su evolución, los nematodos se adaptaron a la exploración de una amplia
variedad de fuentes de alimento. De esta manera, los nematodos parásitos tienen la
capacidad de colonizar y alimentarse de tejidos de plantas y animales, mientras que las
formas de vida libre se alimentan de microorganismos (bacterias y hongos),
protozoarios, algas, otros nematodos y microinvertebrados. Los nematodos en una
primera aproximación, son conocidos como una amenaza para la salud humana, animal
y de plantas; sin embargo, ellos juegan un papel importante como agentes de ciclado
de nutrientes y como reguladores de la fertilidad del suelo mediante el flujo de energía
y la movilización y utilización de nutrimentos (Procter, 1990). Aunque la biomasa de
nematodos en el suelo es pequeña (10¹ a 104 mg peso seco m-2), ellos son
responsables del 10 a 15% de la respiración de los animales del suelo (Sohlenius, 1980;
Petersen, 1982); además de estos bene- 164 Manual de biología de suelos tropicales
ficios para el ecosistema, también participan en importantes servicios del
agroecosistema al fungir como agentes de control biológico de plagas de insectos; tal
es el caso de los nematodos entomofílicos Deladenus siricidicola o los
entomopatógenos Steinernema carpocapsae y Heterorhabditis bacteriophora.

Objetivos:

Reconocer las características morfológicas que distinguen a los nematodos en

preparaciones temporales (extracción) y permanentes.
 II. REVISION LITERARIA

LOS NEMATODOS

Pertenecen al grupo de la mesofauna del suelo, aunque son prácticamente imposibles

de ver a simple vista debido a su pequeño tamaño (longitud de 0,25 a 5,5 mm) y a su
cuerpo transparente. Son el segundo grupo animal más numeroso del suelo, después
de los protozoos, pudiendo haber más de un millón de nematodos en un metro cuadrado
de suelo.

De alrededor de las 1.000 especies de nematodos que habitan en los suelos, en una
muestra de tierra es posible que solo haya entre 10 y 25 especies. Los nematodos
parasitan plantas y animales que viven en el suelo, así pues son los responsables, por
ejemplo, de los nudos de la raíz de la vid o de la formación de quistes en la soja. La
mayor parte de las infestaciones patógenas de las plantas causadas por nematodos
solo pertenecen a unas cuantas especies de nematodos patógenos de las plantas.

Características generales

 Los nematodos se encuentran distribuidos ampliamente y en cualquier nicho

ecológico conocido que tenga cierta cantidad de agua
 Aunque sobreviven en casi todos los hábitats, son esencialmente acuáticos
 Pertenecen al Reino Animal
 El Phylum Nematodo es uno de los grupos más abundantes y diversos de
organismos multicelulares
 Los insectos son los únicos que sobrepasan su diversidad
 Su tamaño varía desde 0,3 mm a más de 8 metros

Clasificación

Los nematodos suelen dividirse en 5 grupos según sus fuentes alimenticias:

 Patógenos: que viven como parásitos alimentándose a costa de un huésped

(organismo parasitado), ya sea una planta (nematods ectoparásito o endoparásito) o
un animal (nematodo zooparásito).
 Herbívoros: que se alimentan de plantas.
 Microbívoros: que se alimentan de
microorganismos.
 Carnívoros: que se alimentan de animales como
protozoos, rotíferos, tartígrados, otros
nematodos o gusanos enquitraeidos.
 Omnívoros: que se alimentan de plantas vivas y
muertas, y de tejido animal.

Para clasificar los nematodos, también se

suelen tener en cuenta características
morfológicas, como la estructura del esófago o
la presencia/ausencia del estilete, puesto que el
aparato bucal de cada uno de los grupos de
nematodos es diferente al tener una dieta
diferente. Gracias a estas diferencias se pueden distinguir y clasificar los nematodos
del suelo.

El hábitat y la alimentación

Los nematodos se presentan en casi la totalidad de los distintos ambientes, aunque las
poblaciones de nematodos son mayores en suelos orgánicos y con pH neutro, y siendo
sobre todo muy numerosas en la rizosfera (el 90% de los nematodos habitan en los
primeros 15 cm del suelo). Algunas especies parasitan las raíces vivas, mientras que
otras se alimentan de los microorganismos que habitan cerca de las raíces. Así pues,
elevadas poblaciones de nematodos reflejan el alto contenido de materia orgánica que
hay en la rizosfera.

Los nematodos no participan directamente en la descomposición de la materia orgánica,

sino que son saprofitos o depredadores, y como ya se ha mencionado, algunos también
parásitos de las raíces. Los nematodos de vida libre* consumen microorganismos,
mientras que los otros se alimentan de rotíferos y protozoos. Los nematodos pueden
consumir hasta 5.000 células por minuto, por lo que ayudan a regular las poblaciones
microbianas del suelo. Algunos nematodos, como Heterorabditis y Steinernema,
también son depredadores de larvas de coleópteros y de lepidópteros. Pero los
nematodos son también, a su vez, parasitados por otros organismos del suelo y son
consumidos en un equilibrio alimentario de la cadena trófica.

Nematodos alimentándose de una

raíz
 Funciones beneficiosas de los nematodos:
 Regulan las poblaciones de microorganismos del suelo al alimentarse de ellos, y así
pues, sirven de enlace en la cadena trófica entre las poblaciones microbianas y
organismos más complejos.
 Mineralizan nutrientes en formas disponibles para las plantas.
 Son fuente de alimento para otros organismos que influyen en la estructura del suelo.
 Consumen organismos que pueden causar enfermedades a las plantas.
 Algunos nematodos parasitan a larvas de coleópteros, equilibrando sus poblaciones,
como es el caso del nematodo Heterorabditis bacteriophora.
 Las poblaciones de nematodos reflejan la disponibilidad de materia orgánica en el
suelo.

Como extraer nematodos del suelo

No es intención de este artículo explicar las distintas técnicas existentes para extraer los
nematodos presentes en el suelo. Sin embargo, hacer mención de que existen métodos
sencillos para cuantificar la población de nematodos de nuestro suelo mediante técnicas
relativamente simples. Mencionar solamente un par de técnicas de forma aproximada:
la del embudo de Baermann y la del tamizado, mediante dos ilustraciones gráficas.
ROYA DEL CAFETO (Hemileia vastatrix Berkeley & Broome)

La Clasificación del causante de la roya del cafeto es:

División: Eumycota
Subdivisión: Basidiomycotina
Clase: Teliomycetes
Orden: Uredinales
Familia: Pucciniaceae
Género: Hemileia
Especie: H. vastatrix Berk. & Br.

IMPORTANCIA ECONÓMICA

Impacto económico de la Roya

La roya es la enfermedad más destructiva del cafeto y la de mayor importancia

económica a nivel mundial, debido a que provoca la caída prematura de las hojas,
propiciando la reducción de la capacidad fotosintética así como el debilitamiento de
árboles enfermos y en infecciones severas puede ocasionar muerte regresiva en ramas
e incluso la muerte de árboles.

El impacto económico de H. vastatrix en el cultivo del café no sólo se debe a la reducción

de la cantidad y la calidad de la producción, sino también a la necesidad de implementar
costosas medidas de control en los cultivares susceptibles.

Ciclo biológico

El proceso infectivo de la roya del cafeto comienza cuando los síntomas de la

enfermedad aparecen en el envés de las hojas, se observan manchas pálidas que con
el tiempo aumentan de tamaño y se unen formando las características manchas
amarillas o naranjas, con presencia de polvo fino amarillo, donde se producen las
esporas del hongo.

La germinación de esporas requiere de la presencia de agua libre por lo menos 6 horas,

temperaturas entre los 21-25 °C y condiciones de oscuridad. Bajo estas circunstancias,
la formación del apresorio requiere de un período de 5.3-8.5 hr. La germinación se inhibe
por la presencia de luz y por la evaporación del agua en las hojas, debido a que estos
factores afectan el crecimiento de los tubos germinativos.

Una vez que el hongo ha germinado, penetra las hojas a través de las aberturas
naturales (estomas) situadas en el envés de las hojas maduras. Posteriormente, el
hongo desarrolla unas estructuras denominadas haustorios, los cuales entran en
contacto con las células de la planta y con éstos extraen los nutrientes para el
crecimiento. Treinta días, después de la colonización, el hongo está lo suficientemente
maduro para diferenciarse en estructuras llamadas soros, que son los encargados de
producir nuevas urediniósporas. El tiempo transcurrido desde la infección hasta la
producción de esporas se denomina período de latencia.

Daños y síntomas

Los daños severos, mayores al 60 %, causan defoliación. Si la infección ocurre en

etapas tempranas se puede presentar una reducción en el rendimiento. Pero si se
presenta en etapas tardías el efecto se observará en los niveles de amarre de fruto del
siguiente ciclo del cultivo. Los síntomas inician como pequeñas manchas de 1-3 mm,
traslucidas y de color amarillo claro. La lesión crece en tamaño y puede coalescer con
otras manchas, hasta formar grandes parches con abundante polvo amarillo (esporas),
en el envés de las hojas y que en el lado opuesto se observan como manchas
amarillas. Las lesiones viejas se necrosan, pero la esporulación puede continuar en el
margen de la lesión.

ASPECTOS EPIDEMIOLÓGICOS

H. vastatrix necesita condiciones particulares para parasitar las hojas de la planta de

café. En especial, requiere de la salpicadura de la lluvia para iniciar el proceso de
dispersión entre hojas y entre plantas, así como de la presencia de una capa de agua
en el envés de las hojas para germinar, todo esto acompañado de temperaturas entre
16 y 18°C y condiciones de baja intensidad luminosa.
Sobrevivencia

H. vastatrix es un parásito obligado, sobrevive únicamente en tejido vivo del hospedante,

las urediniósporas pueden sobrevivir hasta por 6 semanas bajo condiciones ambientales
secas. No se han reportado hospedantes alternos y no sobrevive en restos del cultivo.

Dispersión

La dispersión se lleva a cabo mediante las urediniósporas, las cuales son producidas en
grandes cantidades y corresponden al polvo amarillo o naranja que se observa en el
envés de las hojas. Entre los factores abióticos que favorecen la dispersión del hongo
se encuentran el viento y la lluvia. La dispersión local de hoja o entre plantas, sobre todo
en altas densidades de plantación, es favorecida por el salpique de la lluvia. A grandes
distancias, el viento juega el rol más importante al dispersar las urediniósporas entre
regiones productoras de café. Adicionalmente, se ha reportado que algunos insectos
como trips, moscas y avispas, contribuyen a la dispersión, aunque en proporciones
mínimas. La intervención humana está involucrada en la dispersión a grandes distancias
entre continentes y países.

Multiplicación

La multiplicación del hongo ocurre 30 días después de la etapa de infección y

colonización del tejido de las hojas, el hongo está lo suficientemente maduro como para
diferenciarse en estructuras llamadas soros, que son las encargadas de producir nuevas
urediniósporas. Aproximadamente 1600 esporas por milímetro cuadrado (mm2) de hoja
son producidas, durante un período de 4 a 5 meses, para ser dispersadas e iniciar el
nuevo ciclo de infección. Para la zona cafetalera, el período de latencia puede fluctuar
entre 34 y 35 días a la sombra.

MEDIDAS DE CONTROL

Control Cultural

Se recomienda mantener un buen programa nutrimental y reducir la sombra excesiva

con el fin de evitar rangos de temperatura favorables para el desarrollo de la plaga, lo
cual también reducirá la humedad relativa y adicionalmente estimulara el incremento de
área foliar y la vida media de las hojas. Así mismo, evitar densidades de plantación altas
(superior a 10,000 plantas por sitio) para impedir la proliferación de múltiples chupones
que induzcan.
Control genético

Se ha reportado que la variedad “Catimor” presenta resistencia a la roya del café, la cual
responde bajo alta presión de inoculo manteniendo un nivel de infección menor al 15%.

Control químico

La base racional para el manejo químico de la roya del café es el aspecto fenológico de
la planta, para entender el período de mayor susceptibilidad e impacto en el manejo. Se
realizan aplicaciones con productos sistémicos para reducir o eliminar las primeras
infecciones latentes, en la fase de floración y formación de fruto, luego aplican productos
de contacto en formación de frutos.

III. MATERIALES Y METODOS

a) Materiales
 muestras de suelo
 Tubos de centrifuga
 Vasos de precipitación
 Centrifuga
 Agitadores
 Tamices de 100, 200 y 350 mallas.
 Piseta
 Cajas de Petri pequeñas
 Solución azucarada (55 gr/ 100 ml H2O)
 Plastico de 1 m2
 Probeta
 2 cubetas
 Caolín
 Microscopio.

b) Métodos
Las actividades que se llevaran a cabo en esta práctica son cuatro.
Seleccionamos la zona de muestreo que está ubicado en Pista Loli a 1km de
distancia de la universidad para luego proceder con los siguientes pasos.

3.1 Extracción de nematodos de campo

Sacar las muestras bajo 20cm 500g
Para luego llevar al laboratorio y luego homogenizar.
 1. EXTRACCION DE NEMATODOS POR EL METODO DE TAMIZADO-
CENTRIFUGADO.

Materiales para nematodos, Equipos y reactivos

Plástico de 1 m2, Balanza, Pizeta

Olla, Centrifuga, Agitadores
Tamices de 60, 150 y 300 mallas, tela delgada
Muestras de suelo del cultivo de plátano
Vasos de precipitados, colador, plato porcelana
Porta objeto, Microscopio.
1. Procedimiento
Paso n° 01
Se coloca la muestra de suelo sobre un plástico y se deshacen los terrones y se
retiran los restos vegetales como raíces, hojas, piedritas y etc. Se remueve bien
la tierra para homogenizarla.
 Después se procede a Tamizar el suelo pesar a 200 gramos.

 Tamizando el suelo

Paso n° 02
En una probeta o vaso de precipitados se ponen 200 ml de agua y se
agrega suelo hasta que la marca del agua llegue a 400ml. Esto se hace
con el objeto de tener una referencia del tamaño de la población que se
encuentra en 200ml de suelo, sobre todo si se desea hacer un estudio
cuantitativo.
Paso n° 03
Esta mezcla se vacía en la cubeta “A” con un poco más de agua, se deshacen los
grumos y se vacía y 325 sobrepuestos y se recoge en la cubeta “B”. Esta operación se
repite dos veces más.

Paso n° 04
La arenilla que quedo en el tamiz de 325 se recoge en un vaso de precipitado con una
pizeta, procurando que el ángulo que forma el chorro de agua con el tamiz sea lo más
agudo posible, nunca recto, puesto que de esta forma el agua ayudaría a pasar los
nematodos a través de la malla de tamiz y los dañaría.

Paso n° 05
El agua que se recogió en la cubeta “B” se vierta a través del tamiz de 325 y se recoge
en la cubeta “A”. esta operación se repite dos veces.

Nematodos observados en laboratorio

Se observo en el microscopio los nematodos del suelo que se saco del cultivo de
platano, donde se vio de 2 – 3 nematodos en la muestra que se saco en el porta objeto,
las caracteristicas de estos nematodos es que son gusanos cilindricos transparentes y
se pueden ver sus estructuras en la parte interior, en forma de anillos o ovaladas siendo
estas de color marron, tienen una medida aproximada de 1 mm a mas, con cuerpo
alargado, delgado y con una simetria bilateral, su cutícula es lisa, son no segmentados
y carecen de patas u otros apéndices, pero si presentan todos los sistemas fisiológicos
principales, sistemas excretor, nervioso, reproductor y digestivo

Estructuras de la Roya del cafeto observado en el microscopio

Se observó en el microscopio las características y estructura de las esporas de la roya
del cafeto encontrándose en masas, de forma reniforme y pequeña de color amarillo
pálido - amarillo naranja y hasta rojo anaranjado, las cuales son las esporulaciones del
hongo llamado uredosporas siendo la estructura reproductiva sexual del hongo. La roya
del café es producida por un hongo de la clase Urediniomycetes, perteneciente al género
Hemileia (que significa mitad liso por la característica que presentan las uredosporas),
con una medida aproximada de (30μm de largo x 20μm de ancho) en tamaño.

Estructuras germinativas y desarrollo de un patógeno del suelo

Se observa las estructuras y el desarrollo de un patógeno que no se ha podido identificar
el tipo genero del hongo, solo se pudo observar las estructuras del hongo, las cuales
son de color blanco a amarillo pálido en forma de masas algo redondas u ovaladas.
 2. EXTRACCION DE MICRO ORGANISMO BENEFICOS DE SUELOS VIRGEN

Equipos, Reactivos y Materiales para el suelo virgen

 Mortero, balanza, colador, plato porcelana,

 muestras de suelo virgen
 mechero, placas Petri con PDA, Microscopio

Procedimiento para muestras de un suelo virgen

1. Recolección de suelo virgen en la zona de muestro (parcela Pista Loli)

2. Sacar las muestras necesarias de un suelo virgen
para observar el desarrollo de algún patógeno en
el laboratorio.

3. De la muestra de suelo virgen eliminar restos vegetales y piedritas.

Poner en un mortero machacar el suelo virgen para destruir los terrones
del suelo y que estas se encuentren aptas para tamizar. Pesar 100 g.

4. Tamizar el suelo virgen por el colador y luego poner en un plato

5. Luego sacar las placas Petri que contienen PDA

 6. Por ultimo espolvorear el suelo virgen en el PDA, lado del mechero
prendido para evitar la contaminación con otros microorganismos. Luego
sellarlo y guardar en un ambiente que tenga las condiciones adecuadas
para el desarrollo del patógeno.

3. IDENTIFICACION DE ROYA EN EL CULTIVO DE CAFÉ

Equipos, Reactivos y Materiales para roya

 Cinta pequeña transparente (cinta embalaje)

 Muestras de Hojas de cafeto con presencia de roya
 Alcohol, legía, agua
 Pizeta, Porta objeto, Aza, mechero, Microscopio

Procedimiento de muestras para roya del café

1. Recolección de muestras de hojas de café con presencia de roya en la

zona de muestreo (parcela Pista Loli).
2. Llevar inmediatamente a laboratorio las muestras recogidas de roya del
café para evitar la deshidratación para luego observar el patógeno.
3. Sacar las muestras recogidas y poner en una mesa
limpia del laboratorio todas las hojas del café con roya

4. Lavar y desinfectar todos los materiales a utilizar, como porta objeto, aza
o pinzas, etc.
5. Sacar con una aza pequeña las esporas de la roya de las hojas de café
en el porta objeto que contiene un gota de agua, pero siempre en cuando
primero se pase esta aza por el mechero prendido y luego se le enfría en
el algodón mojado con un poco de agua, de ahí recién sacar las esporas
de la roya, estando a lado el mechero prendido para no tener otros
patógenos presentes en la muestra.

6. También se realiza con cintescoch (cinta pequeña) este proceso, sacando

de las hojas de café las esporas de la roya, siempre al lado del mechero
prendido, poniendo en el porta objeto que contiene una gota de agua
7. Por último se observa en el microscopio las características de la roya o su
patógeno.
 IV. CONCLUSIONES

Se pudo reconocer las características del nematodo que están presente en el suelo del
cultivo de plátanos, los cuales son gusanos cilíndricos transparentes y sus estructuras
son de forma anillo/ovaladas de color marrón, con una medida aproximada de 1 mm a
mas, el cual tiene un cuerpo alargado, delgado y con simetría bilateral, siendo su
cutícula lisa y presentan sistemas fisiológicos como sistema excretor, nervioso,
reproductor y digestivo, y por último es un nematodo Pratylenchus de forma vermiforme.
Se reconoció las características y estructuras de la roya del cafeto las cuales se
presentan en masas de forma reniforme y pequeña de color amarillo pálido a amarillo
naranja y rojo anaranjado siendo estas las esporulaciones de la Hemileia vastratix las
cuales se llaman uredosporas siendo la estructura reproductiva sexual, de forma
arriñonada, rugosas y lisas ventralmente, con medida aproximada de (30μm de largo x
20μm de ancho) en tamaño. Este de clase Urediniomycetes, perteneciente al género
Hemileia.
Se pudo observar en el PDA las estructuras germinativas y el desarrollo de un patógeno
que no se pudo identificar, pero si se observó las estructuras y su característica, siendo
este patógeno de color blanco a amarillo pálido, las cuales se presentan en masas algo
redondas a ovaladas, este patógeno están presente en el suelo virgen de la parcela
Pista Loli.
V. RECOMENDACIONES
 Sacar las mejores muestras para la identificación de nematodos y royas.
 Tener limpio el laboratorio donde se va experimentar los trabajos de investigación.
 Lavar y desinfectar todos materiales a utilizar antes de proceder al experimento.
 Estar correctamente vestido con una bata de laboratorio entre otros.
 Ser ordenados y disciplinados al momento de realizar cualquier trabajo en laboratorio.
VI. BIBLIOGRAFIA
 GSV-SINAVEF-LANREF, 2016. Escalas de severidad de roya del café en hoja y planta.
En línea:
http://www.royacafe.lanref.org.mx/Documentos/EscalaSeveridadDefoliacionPlantayHoj
a.pdf. Fecha de consulta: Abril de 2016.

 Orozco, M, Figueroa, E, Pacheco, P y Calderón, G. 2011. Manejo integrado de la Roya

del Cafeto. El cafetal. Folleto técnico, Guatemala.

 SENASICA. 2016. Roya del cafeto (Hemileia vastatrix Berkeley & Broome).
Dirección General de Sanidad Vegetal. Programa de Vigilancia Epidemiológica
Fitosanitaria. México, D.F. Ficha Técnica No. 40. 23 p.