2.

Bahan dan Metode

2.1. Subyek
Uji coba mata yang prospektif, 4 minggu, acak, double-masked,
berpasangan ini, mengikuti prinsip Deklarasi Helsinki, yang telah disetujui
oleh Komite Etik Peserta Etika Universitas Auckland (UAHPEC-011255),
dan terdaftar sebagai uji klinis (ACTRN12616000545460). Subyek yang
dibutuhkan berusia 16 tahun atau lebih, dengan tanda klinis blepharitis pada
pemeriksaan slit lamp (krusta bulu mata, kelainan margin kelopak mata / bulu
mata atau sumbatan kelenjar meibom), tidak memakai lensa kontak atau
menggunakan obat topikal / sistemik yang diketahui mempengaruhi mata 48
jam sebelum penilaian awal atau selama masa pengobatan. Selanjutnya,
peserta diminta untuk melaporkan tidak adanya riwayat kondisi sistemik,
dermatologis atau okular, tidak menjalani operasi mata dalam tiga bulan
terakhir, dan tidak ada alergi atau hipersensitivitas terhadap obat topikal,
formulasi pembersih, atau shampo. Peserta yang memenuhi syarat didaftarkan
setelah memberikan informed consent tertulis dan diminta untuk menghadiri
dua kunjungan, pada awal dan hari ke 28.
Sebanyak 43 peserta yang memenuhi syarat direkrut, melebihi
persyaratan ukuran sampel untuk power studi yang diinginkan. Perhitungan
power dibuat dengan tear film break up time non-invasif sebagai keluaran
nya, dan menunjukkan bahwa minimal 41 peserta diperlukan untuk
mendeteksi perbedaan yang signifikan secara klinis dari 5 s dalam
perbandingan berpasangan, dengan kekuatan 80% (β 0,2) pada tingkat
signifikansi statistik 5% (α 0,05). SD nilai normal diperkirakan 8 s [12].
Perkiraan ukuran sampel ditentukan menggunakan penyesuaian non-
parametrik yang seragam, dengan NCSS PASS 2002 (Utah, USA).
2.2. Perlakuan
Peserta diacak untuk diaplikasikan pembersih kelopak mata khusus
(TheraTears® SteriLid®, Akorn, Illinois, USA) ke satu mata dan larutan
sampo bayi yang diencerkan 1:10 [11] yang disiapkan dengan air suling di
lingkungan laboratorium steril (Johnson's® No More Tears® Baby Shampoo,
 Johnson & Johnson, New Jersey, USA) untuk mata satunya, dua kali sehari,
selama 28 hari (Tabel 1). Partisipant masking dicapai dengan menyediakan
dua perlakuan dalam botol pompa busa 48 mL identik yang diberi label study
allocated eye for application. Pengaplikasian produk dicontohkan selama
kunjungan pendaftaran, dan instruksi tertulis juga disediakan. Para peserta
diinstruksikan untuk mengaplikasikan dan memijat lembut busa dari satu
botol ke kulit periokular dari kelopak mata superior dan inferior yang ditutup
dengan ujung jari yang bersih selama satu menit sebelum dibilas dengan air,
serta berhati-hati agar menghindari transfer produk sisa ke mata yang satunya
selama pembersihan dan pengeringan. Peserta juga diinstruksikan untuk
menghindari kontak langsung dengan permukaan okular, dan untuk
membersihkan tangan mereka sebelum menggunakan botol kedua untuk mata
satunya, agar mencegah kontaminasi silang. Produk yang sudah tidak
digunakan dikembalikan ke investigator pada akhir periode 28 hari uji coba,
dan ditimbang sebagai ukuran kepatuhan peserta.

2.3. Pengukuran Klinis

Kuesioner mata kering McMonnies dan Ocular Surface Disease Index (OSDI)
diberikan untuk menilai tingkat gejala mata kering pada awal, sedangkan Standard
Patient Evaluation of Eye Dryness (SPEED) dan Symptom Assessment iN Dry Eye
(SANDE) diberikan untuk tujuan membandingkan gejala simtomologi pada awal dan
hari ke 28. Keseluruhan skor SANDE dihitung sebagai akar kuadrat dari produk dari
skor frekuensi dan tingkat keparahan.
Penilaian klinis dilakukan pada awal dan 28 hari dari periode pengobatan.
Para peneliti yang melakukan penilaian klinis tertutup untuk pengacakan
pengobatan. Semua peserta dinilai di lokasi yang sama, dengan rata-rata ± SD suhu

ruang 20,8°C ± 1,4°C dan rata-rata ± SD kelembaban relatif 52,4% ± 5,1%.

Pengukuran dilakukan dalam urutan invasif naik untuk meminimalkan dampak pada
permukaan okular atau fisiologi air mata untuk tes berikutnya: ketinggian meniskus
air mata, waktu pemecahan film air mata noninvasif, tingkat lapisan lipid film air
mata, hiperemi konjungtiva, osmolaritas film air mata, pemeriksaan lampu celah ,
pewarnaan permukaan okular, ekspresi kelenjar meibomian, meibografi
inframerah, dan sitologi konjungtiva.
Tinggi meniskus air mata bagian bawah dinilai menggunakan pencitraan
digital pembesaran tinggi yang ditangkap oleh Oculus Keratograph 5M, dan tiga
pengukuran di dekat pusat meniskus bawah dirata-ratakan. Waktu pemecahan film
air mata noninvasif dan tingkat lapisan lipid film air mata juga dinilai menggunakan
Oculus Keratograph 5M. Waktu pemecahan dicatat sebagai waktu yang diambil
setelah berkedip untuk refleksi grid untuk menunjukkan distorsi pertama,
sementara subjek mempertahankan fiksasi dan diminta untuk menahan diri dari
berkedip. Tiga pengukuran waktu pemcahana rata-rata dalam setiap kasus.
Pengetesan lapisan lipid didasarkan pada sistem penilaian Guillon-Keeler yang
dimodifikasi: grade 1, meshwork terbuka; kelas 2, meshwork tertutup; kelas 3,
gelombang atau aliran; kelas 4, amorf; kelas 5, pinggiran berwarna; kelas 0, lapisan
tidak kontinyu (pinggiran warna yang tidak terlihat atau abnormal). Hiperemia
konjungtiva bulbar dinilai dengan evaluasi obyektif otomatis pencitraan digital
pembesaran tinggi menggunakan Oculus Keratograph 5M, pada skala penilaian
JENVIS eksklusif dari 0 hingga 4. Osmolaritas film air mata dievaluasi, pada awal
hanya, dengan osmometer klinis (TearLab, CA, USA), menggunakan 50 nL sampel air
mata yang dikumpulkan dari meniscus air mata bagian bawah. Dua pengukuran
diambil, dan pembacaan yang lebih tinggi dan perbedaan interokuler dalam
pembacaan dicatat.
Kelainan pada tepi kelopak dan bulu mata, termasuk penebalan,
pembulatan, penukikan, telangiektasis, krusta bulu mata oleh stafilokokus,
krusta bulu mata seboroik, kolaret berbentuk silinder, madarosis, poliosis,
trichiasis, dan penutupan kelenjar meibom, akan dinilai dengan pemeriksaan
slit lamp. Grading dari tanda klinis didasarkan pada empat poin skala: grade
0, tidak ada; grade 1, ringan; grade 2, sedang; grade 3, parah. Lipatan paralel
konjungtiva (LIPCOF) dicatat dan sodium fluorescein dan lissamine pewarna
hijau diaplikasikan pada konjungtiva bulbar untuk mengevaluasi deskiasi
pada epitel kornea dan konjungtiva. Pewarnaan dicatat dengan menggunakan
skema gradasi Oxford yang dimodifikasi dan pewarnaan wiper epitheliopathy
(LWE) dievaluasi relatif terhadap gradasi Korb menggunakan sodium
fluorescein dan lissamine pewarna hijau.
Kelenjar meibom kelopak mata inferior diekspresikan dengan

Meibomian Gland Evaluator ™ (TearScience®, North Carolina, AS). Jumlah

lubang kelenjar meibomian yang menghasilkan sekresi lipida dinilai pada

lima poin skala: 0, lebih dari 75%; 1, 50% e75%; 2, 25% e50%; 3, kurang
dari 25%; 4, tidak ada. Viskositas meibum dan ekspresiabilitasnya dinilai
sebagai: grade 0, cairan bening; grade 1, sedikit keruh; grade 2, tebal buram;
grade 3, seperti pasta gigi; grade 4, penyumbatan orifice lengkap [16].
Inframerah meibografi kemudian dilakukan dengan menggunakan Oculus
Keratograph 5M, dengan kelopak mata superior dan inferior berbalik secara
bergantian. Dari gambar yang tertangkap kelenjar meibomian bagian atas dan
bawah yang drop out dinilai menurut lima titik Meiboscale.
Preferensi subyektif perawatan kebersihan kelopak mata (pembersih
kelopak mata, sampo bayi, atau tidak ada preferensi) dicatat pada hari ke 28,
dan peserta juga diminta memberikan komentar lebih lanjut berdasarkan dua
perawatan tersebut.
Tabel 1. Komposisi Eyelid Cleanser (TheraTears® SteriLid®) and baby
shampoo (Johnson's® No More Tears®)
2.4. Pemeriksaan laboratorium
Sitologi impresi konjungtiva dilakukan pada awal penelitian dan hari
ke-28, setelah diberikan anestesi topikal dengan satu tetes oxybuprocaine
hydrochloride 0,4% (Minims, Bausch & Lomb (NZ) Ltd, Auckland, NZ). Sel
konjungtiva bulbar dari permukaan okular temporal superior dikumpulkan
dengan perangkat impresi konjungtiva EYEPRIM ™ (OPIA, Perancis). Ekstraksi
RNA sampel sel konjungtiva dan purifikasi dilakukan menggunakan Kit Mini
PureLink®RNA, dan diuji adanya inhibitor sebelum menjalani sintesis cDNA
menggunakan SuperScript® VILO cDNA Synthesis Kit (ThermoFisher,
Massachusetts, USA).PCR b-actin standar dan gel elektroforesis dilakukan
pada perwakilan dari sampel cDNA yang disintesis untuk mengkonfirmasi
sintesis cDNA. Enam gen referensi (GAPDH, b-actin, HPRT1, PPIA, GUSB dan
B2M) diuji di antara populasi sampel untuk stabilitas dengan b-aktin dan
B2M yang ditetapkan sebagai yang paling stabil menurut algoritma
Normfinder. Gen yang terlibat (MMP-9, IL-6 dan MUC5AC) dihitung relatif
 terhadap ekspresi gen referensi. Panduan MIQE diikuti untuk memastikan
validitas eksperimen qPCR, yang disiapkan dengan robot PCR QiAgility®
dengan PrimeTime® Assays, dan kalibrator internal digunakan untuk
memungkinkan kompensasi antar variasi.

2.5. Analisis statistik

Analisis statistik dilakukan menggunakan Graph Pad Prism versi 6.02
(California, USA) dan IBM SPSS Statistics versi 22 (New York, USA).
Perbandingan variabel kontinyu antara dan di dalam perawatan dilakukan
dengan menggunakan uji Sidak multiplisitas yang disesuaikan dengan analisis
ukuran metode analisis varians yang berulang, dimana distribusi normal
telah dikonfirmasi dengan uji Kolmogorov-Smirnov (p> 0,05). Pengukuran
yang tidak terdistribusi secara normal ditransformasikan secara logaritma
sebelum analisis, sedangkan data ordinal dan data kategorikal dikonversi ke
nilai peringkat sebelum dilakukan analisis multiplisitas non parametrik yang
disesuaikan. Semua tes merupakan two tail dan p <0,05 yang dianggap
signifikan.