PRACTICA Nº 06

METABOLISMO BACTERIANO

EXPERIMENTO 1

I. MATERIALES:
 Muestras biológicas: Cultivo positivo
 Tubos de medios de cultivo: citrato, TSI, LIA Y MIO
 Asas bacteriológicas
 Gradillas
 Mechero de alcohol
 Estufa
 Guantes

II. PROCEDIMIENTO
1) Disponer los tubos de citrato, TSI, LIA Y MIO en una gradilla.
2) Esterilizar el asa bacteriológica en el mechero de alcohol.
3) Luego tocar con el asa bacteriológica la colonia seleccionada en el
medio de cultivo.
4) Sembrar cuidadosamente: los tubos de citrato en estría y
agotamiento, el TSI y el LIA en puntura y estría y finalmente el
medio MIO en puntura. Como se muestra a continuación:
 5) Cerrar las tapas de los tubos que contiene los medios de cultivo
6) Colocar los tubos en la estufa a 37°C durante 18 horas
7) Realizar la lectura y la interpretación correspondiente

III. RESULTADOS

Agar TSI LIA MIO

Agar TSI LIA MIO
citrato
citrato

Medios para identificación bacteriana Reacción bacteriana en medios de

Identificación (VIRAJE)

IV. INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS

 Agar citrato
Positivo: crecimiento bacteriano con un intenso color azul en el pico del
tubo.
Negativo: ausencia de crecimiento y permanencia del color verde del medio
de cultivo.
 Agar TSI
Si la bacteria problema fermenta la glucosa, acidificará el medio haciendo
virar a amarillo el indicador en el fondo del tubo, mientras que si no es
fermentadora de glucosa, el medio permanecerá de color rojo.
 Agar LSI
Una vez completado el período de incubación, observar el desarrollo
microbiano en la superficie tendida y en la columna del tubo. Considerar el
viraje de pH por alcalinización (púrpura) o acidificación (amarillo)
Observe además la producción de H2S como color negro en el tubo, y la
generación de gas.
Compare los resultados de acuerdo a los siguientes patrones:
1. Producción de H2S
Resultado positivo: el desarrollo microbiano produce coloración negra en el
medio de cultivo en todo el tubo.
Resultado negativo: ausencia de coloración negra.
2. Lisina decarboxilasa
Resultado positivo: se verifica como alcalinización (K) del medio de cultivo
con un viraje hacia el púrpura en todo el tubo, o como medio de cultivo
neutro.
Resultado negativo: se observa acidificación (A) con viraje hacia el amarillo
en la columna del tubo, y alcalinización (color púrpura) en la zona inclinada.
3. Lisina deaminasa:
Resultado positivo: producción de color rojo granate (R) en la superficie
inclinada.
Resultado negativo: ausencia de color rojo granate.
 Agar MIO
Al observar la movilidad y el color del medio de cultivo se pueden obtener
los siguientes resultados:
Movilidad:
Resultado positivo: presencia de turbidez más allá de la línea de siembra.
Resultado negativo: crecimiento solamente en la línea de siembra.
Color:
Resultado positivo: color purpura
Resultado negativo: color negativo: a veces se puede desarrollar un color
violáceo en la superficie del medio
 EXPERIMENTO 2

I. MATERIALES
 Placas petri con medio de cultivo de agar sabouraud
 Asas bacteriologicas
 Mechero de alcohol
 Muestras de alimentos: en este caso tenemos : cebada, queso,
mayonesa, pollo, yogurt y piña
II. PROCEDIMIENTO
1) Esterilizar el asa bacteriologica en el mechero de alcohol
2) Luego coger con el asa bacteriologica las muestras de alimentos e
irlos sembrando en las placas petris correspondientes ( la cual se
encuentra con medio de cultivo de agar sabouraud )
3) tapar y sellar las placas petri y esperar de 5 a 7 dias para observar
los resultados
III. RESULTADOS

Placa Petri con cultivo de pollo y queso Placa Petri con cultivo de yogurt y piña
IV. INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS

 Pollo = ›100 000 UFC/ml

 Cebada = 80 000 UFC/ml
 Queso= ›100 000 UFC/ml
 Mayonesa = 77 000 UFC/ml
 PRACTICA Nº 07
CARACTERIZACION FENOTIPICA DE COLONIAS BACTERIANAS

I. PROCEDIMIENTO
 Observar e identificar las características fenotípicas de:
Staphylococcus sp.
 Escribir las características observadas
II. RESULTADOS

i. Colonia de Staphylococcus sp. En medio solido

Cepa bacteriana Staphylococcus sp.

Tamaño 0,8 a 1.5 u
Borde Lisos
Forma Coco
Elevación Convexa
Superficie Plana
Aspecto Macroscópicos
Consistencia Cremosas
Color Amarillento

i. Colonia de Staphylococcus sp. En medio liquido

Cepa bacteriana Turbidez Sedimento Película

Staphylococcus Si presento Si presento Adherente
aureus (polisacáridos)
 PRACTICA Nº 08
PREPARACIÓN DE MEDIO DE CULTIVO PARA HONGOS

I. MATERIALES
 Agar sabouraud dextrosa al 4%
 Balanza
 Agua destilada
 Erlenmeyer estéril
 Placas Petri
 Estufa
II. PROCEDIMIENTO
1) La práctica nos sugiere una cantidad de 6.5 gr de agar sabouraud por
100 ml de agua, pero nosotros queremos utilizar 250 ml de agua, por
lo que averiguaremos cuanta cantidad de agar sabouraud vamos a
utilizar, por lo cual emplearemos la regla de tres para obtener los
resultados:

6.5 gr agar sabouraud 100 ml de agua

X gr agar sabouraud 250 ml de agua

100x = 1 625

X= 16.25 gr

2) Pesamos los 16.25 gr de agar sabouraud dextrosa al 4% y lo

agregamos en un Erlenmeyer estéril
3) Disolver el agar con 250 ml de agua destilada en una estufa a baño
María y hervir 1 minuto hasta disolver completamente.

4) Controlar el PH a 5,6
5) Verter en tubos o placas Petri
6) Esterilizar en autoclave a 121 °C por 15 minutos
7) Poner a solidificar. En caso de usarse tubos de ensayo, se debe
solidificar poniéndolos en una posición inclinada.
 PRACTICA Nº 09
OBSERVACION MICROSCOPICA Y RECONOCIMIENTO DE
ESTRUCTURAS FUNGICAS LEVADURIFORMES

I. MATERIALES
 Placas Petri con cultivo de agar sabouraud
 Asas bacteriológicas
 Muestras biológicas: cultivo de Candida, chicha de jora
 Reactivos: Hidróxido de potasio al 10% y azul de lactofenol
 Laminas y laminillas
 Mechero
 Microscopio
 Respirador
II. PROCEDIMIENTO

Experimento 1

 En una lámina portaobjeto colocar una pequeña muestra de cultivo

de levaduras (chicha de jora)
 Agregar 1 a 2 gotas de Hidróxido de potasio al 10% sobre la
muestra
 Colocar sobre la muestra una laminilla
 Observar al microscopio a objetivos de 4OX
 Esquematizar la estructura observable

Resultados

En la muestra de cultivo de
chicha se observa la presencia
de Saccharomyces
Experimento 2
 En el centro de una lámina portaobjeto colocar una gota de agua
destilada
 Tomar con el asa de kolle previamente flameada una alícuota de la
cepa de Candida sp ( secreción bronquial)
 Fijar la preparación con ayuda del mechero en forma suave.
 Cubrir el preparado con azul de metileno dejando actuar por un
minuto.
 Lave suavemente con agua a chorro lento
 Dejar secar la lámina a medio ambiente
 Agregar una gota de aceite de inmersión sobre la muestra.
 Observar la muestra con el objetivo 100X del microscopio
 Esquematizar las observaciones

Resultados

Cándida sp con azul de lactofenol

Cándida sp en hidróxido de potasio

 PRACTICA Nº 10
OBSERVACION MICROSCOPICA Y RECONOCIMIENTO DE
ESTRUCTURAS FUNGICAS AMBIENTALES

I. MATERIALES
 Alimentos en descomposición: mandarina, pan, maracuyá
 Azul de lactofenol
 Hidróxido de potasio al 10%
 Laminas y laminillas portaobjetos
 Microscopio
II. PROCEDIMIENTO
1) Hacer un raspado del alimento con hongos
2) En dos láminas portaobjetos colocar una pequeña muestra del raspado
de la región afectada y colonizada del pan y de las frutas.
3) A una de las láminas agregar 1 gota de Hidróxido de potasio al 10%
sobre la muestra y en la otra lamina una gota de azul de lactofenol
4) Colocar sobre la muestra una laminilla
5) Observar al microscopio a objetivos de 4OX
6) Esquematizar la estructura observable
III. RESULTADOS
Experimento 1
MANDARINA

A. Raspado de la mandarina
 B. Observación al microscopio

Resultados: se observa la presencia de hifas y esporas o conidios

PAN
A. Raspado del pan
 B. Observación al microscopio

Resultados: se observa la presencia del Penicillium

MARACUYA

A. Raspado de la maracuyá

B. Observación al microscopio
 Primera muestra
Resultados: se ve la presencia de macroconidias alternarias sp
 Segunda muestra

Resultados: se observa la presencia de Mucor Sp

Experimento 2:
 Se colocan placas Petri que contengan cultivos de agar sabouraud
abiertas por unas horas para que entren los distintos hongos que se
encuentran en el medio ambiente
 Luego se tapan y se sellan
 Se guardan a la temperatura adecuada para que permita el
crecimiento de los microorganismos por varios días
 Se observa lo que se formo

Observaciones

Se observa que dentro de la placa petri

se formó una estructura fúngica de
color verdosa y esponjosa
 PRACTICA Nº 11
GRUPOS SANGUÍNEOS

I. MATERIALES
 Muestras de sangre
 Antisueros A,B Y D para determinación de los grupos
sanguíneos
 Algodón
 Alcohol 70%
 Laminas portaobjetos
 Palillos mondadientes
 Lancetas
II. PROCEDIMIENTO
➢ Limpiar la yema del dedo índice con alcohol al 70%
➢ Con ayuda de una lanceta hacer un pinchazo en la yema del dedo
➢ Eliminar la primera gota de sangre con ayuda de un algodón
➢ Obtener 3 gotas de sangre separadas entre sí en una lámina
portaobjetos.
➢ Agregar el antisuero A a la primera gota de sangre, el antisuero B a la
segunda y el antisuero D sobre la tercera gota de sangre.
➢ Mezclar la sangre con el antisuero correspondiente con ayuda de un
mondadientes
➢ Realizar movimientos de vaivén de la lámina durante 1 minutos.
➢ Formación de grumos gruesos, reacción positiva.
➢ Ausencia de grumos, reacción negativa.
 III. RESULTADOS
Se escoge a tres personas y se les hace la respectiva muestra de sangre
para determinar sus grupos sanguíneos

 Primera muestra de sangre

Resultado:

Se observa que la sangre se aglutino en

presencia del anti A, por lo tanto el
grupo de esta persona será A; PERO
también se observa que se aglutino en
presencia de Rh, por lo tanto esta
persona tendrá el grupo sanguíneo A-
Rh+

 segunda muestra de sangre

Resultado:

Se observa que la sangre se encuentra aglutinada

en la parte que contiene el Anti-B, PERO también
se aglutina en presencia del factor Rh, por lo tanto
el grupo sanguíneo de esta persona será B-Rh-

 tercera muestra de sangre

Resultado:

Se observa que la sangre solo se

aglutino en presencia del factor
Rh, por lo tanto el grupo sanguíneo
de esta persona será O+