MICROBIOLOGIA INDUSTRIAL

Y BIOTECNOLOGIA
INGENIERÍA QUÍMICA

DOCENTE:
Dr. Chabaco Armijos

FECHA:
25/07/2018

Tema
Obtención de Ácido cítrico con Aspergillus Nigger
a partir de Glucosa
Resúmen
En esta práctica se procedió a realizar la obtención del ácido cítrico con Aspergillus
nigger a partir de Glucosa, por medio de fermentación, purificación y cristalización
del mismo. Para ello en la etapa de fermentación se controló los parámetros de
crecimiento del hongo como lo son: pH, ºBrix, gasto de NaOH ; luego inocular medios
de cultivo se agita por 11 días para obtener los resultados del hongo. Teniendo así
una obtención del ácido cítrico de 0.245 g

Abstract
In this practice we proceeded to obtain the citric acid with Aspergillus nigger
from Glucose, by means of fermentation, purification and crystallization
thereof. For this, in the fermentation stage, the growth parameters of the
fungus were controlled, such as: pH, ºBrix, NaOH expenditure; Then inoculate
culture media is shaken for 11 days to obtain the results of the fungus. Thus
obtaining a citric acid yield of 0.245 g

Palabras Clave
Ácido cítrico, aspergillus nigger, glucosa, fermentación, purificación y cristalización.

Introducción

La producción de ácidos orgánicos mediante el uso de microorganismos constituye

una fuerza motriz de gran importancia para el estudio de regulaciones metabólicas,
lo cual permite el desarrollo de la biotecnología. El ácido cítrico fue aislado por
primera vez por Scheels Karls en 1874, en Inglaterra, a partir del jugo de limón
importado de Italia. Empresarios italianos tenían el monopolio por su producción
durante casi 100 años, el cual fue vendido a un alto costo. Esto llevó numerosos
esfuerzos de todo el mundo para encontrar alternativas para su producción, que
incluye técnicas químicas y microbianas. En 1923, Wehmer observó la presencia de
ácido cítrico como un subproducto de oxalato de calcio producido por Penicillium
glaucum. Otras investigaciones mostraron el aislamiento de dos variedades de
hongos pertenecientes al género Citromyces (Belén y col. 2010). Sin embargo, los
ensayos industriales no tuvieron éxito debido a los problemas de contaminación y
de larga duración de la fermentación. El proceso industrial se abrió por primera vez
por James Currie, en 1917, quien encontró que Aspergillus niger tenía la capacidad
de producir cantidades significativas de ácido cítrico en medio a base de azúcar.
(David, 2003)

Ácido cítrico
El ácido cítrico es un producto con una demanda mundial creciente, debido
a sus aplicaciones en la industria de alimentos (bebidas, embutidos),
farmacéutica, cosmética, plásticos y detergentes ; por este motivo se ha
estudiado su producción a partir de diferentes sustratos como la melaza de
caña Se ha reportado que la sacarosa es la fuente de carbono más
favorable seguida por glucosa, fructosa y lactosa. Entre los microorganismos
capaces de producir y acumular ácido cítrico se encuentran las especies de
los géneros Aspergillus, Citromyces, Penicillium, Monilia, Candida y Pichia.
Aspergillus Nigger
Las especies de Aspergillus negros y especialmente Aspergillus niger, son las
más empleadas en este tipo de producción; las más efectivas son las que
presentan baja actividad de las enzimas isocitrato deshidrogenasa y
aconitasa hidratasa y una alta actividad de la citrato sintetasa. La
producción de metabolitos con hongos filamentosos se ve favorecida
cuando se presenta un crecimiento en forma de pellets; en los pellets
grandes la región central sufre de autolisis debido a la limitación de
nutrientes como el oxígeno; por el contrario los pellets pequeños son
deseables en el desarrollo de las fermentaciones. En la producción de ácido
cítrico con Aspergillus niger los niveles de los nutrientes y las condiciones
ambientales, como pH, agitación, temperatura, iones metálicos,
concentración de fosfato, fuente de nitrógeno y carbono, alcoholes y
aditivos, son factores importantes que regulan la morfología del
microorganismo y el proceso fermentativo (Papagianni, 2004)
Glucosa
La glucosa es un carbohidrato, y es el azúcar simple más importante en el
metabolismo humano. La glucosa se llama un azúcar simple o un
monosacárido, porque es una de las unidades más pequeñas que tiene las
características de esta clase de hidratos de carbono. La glucosa también se
llama a veces dextrosa. El jarabe de maíz es principalmente glucosa. La
glucosa es una de las principales moléculas que sirven como fuentes de
energía para las plantas y los animales. Se encuentra en la savia de las
plantas y en el torrente sanguíneo humano, donde se conoce como "azúcar
en la sangre". La concentración normal de glucosa en la sangre es de
aproximadamente 0,1%, pero se vuelve mucho más alta en personas que
sufren de diabetes. (Nave, 2012)

Metodología
Se obtuvo la materia prima para la realización de la práctica que en este caso fue
glucosa con un peso inicial de 78 gr añadiéndole agua para diluir sobre una
plancha de calentamiento hasta que esté disuelto completamente la glucosa.
Luego se procede a medir el pH, acidez, grados brix una vez obtenidos estos valores
se procede ajustar el PH que debe estar ente 5.4 – 5.8 luego se adiciona los nutrientes
como el NH4 NO3 y KH2 PO4 , se esteriliza por 10 minutos a 0.5 atm en el autoclave
se realiza la activación de Aspergillus Níger esporas más arena estéril suspendidos en
agua y esporas se coloca en una caja Petri y se coloca medio cultivo de Ager
saboroth un nutriente especifico la zeolita un gramo se adiciona sobre la caja Petri
agitamos para que se destruya y se libere esporas Aspergillus Níger. Se coloca en 10
ml de agua estéril se inocula medios de cultivos de la suspensión 1ml esto se controla
por tres semanas a temperatura ambiente los dos cultivos tanto el cultivo por
agitación y el cultivo estático durante el control del proceso se realiza dejando dos
días donde se saca 1ml de cultivo y se añade 10ml de agua destilada más
fenolftaleína hasta que cambie de color y se calcula los grados brix, PH, gasto de
NaOH, se tiene en cuenta durante ese proceso forma del micelio y cuantos días se
demora en crecer el hongo.
En la recuperación del ácido cítrico se realiza la filtración al vacío y se obtiene el
micelio posteriormente se hace la precipitación del citrato de calcio agregando cal
poco a poco hasta regular el PH 7 con temperatura de 30 ºC y se deja que suba
hasta 90ºC y se adiciona tres cucharaditas de cal y se deja que llegue hasta 95ºC
por 10 minutos, filtración para separar el precipitado que luego se disuelve con
ácido sulfúrico y el líquido que queda de eso se lo vuelve a filtrar hasta obtener un
color clarito se mide pH que este en 3 sino se le adiciona ácido sulfúrico y se realiza
filtración para separar el precipitado que luego se disuelve con ácido sulfúrico y el
líquido que queda de eso se lo vuelve a filtrar hasta obtener un color clarito se mide
pH que este en 3 sino se le adiciona ácido sulfúrico y se realiza filtración.

Resultados y Discusión

𝟐𝟎𝟎∗𝟏𝟗𝟓
Glucosa= 𝟏𝟎𝟎𝟎
= 𝟕𝟖𝒈
𝟐𝟎𝟎∗𝟐.𝟑
Nitratos NH3(NH4)= = 0.92 g
𝟏𝟎𝟎𝟎

𝟒𝟎𝟎∗𝟏𝒈
KH2PO4= 𝟏𝟎𝟎𝟎
= 0.4g

Parámetros iniciales:

º Brix 22
pH 4.171
Acidez 4.2 ml

Parámetros del control del matraz con un volumen de 250 ml (Agitado)

Dia pH °Brix Gastados en Crecimiento del Color del
titulación hongo micelio
NaOH
1 4.188 20 0,5 No Amarillo claro
2 3.905 19.6 2.2 No Amarillo claro
3 3.301 19.5 2 Si Amarillo claro
4 3.403 19.5 1.2 Si Amarillo claro
5 3.176 21.5 1.9 si Amarillo claro

Parámetros del control del matraz con un volumen de 250 ml (Estático)

Dia pH °Brix Gastados en Crecimiento del Color del
titulación hongo micelio
NaOH

1 3.988 20.3 0.6 No Amarillo claro

2 3.325 20 2.0 Si Café claro
3 2.609 19.8 1.5 Si Café claro
4 2.668 19.8 1.5 Si Café claro
5 2.579 20 1.6 Si Café claro

Como resultado de la dinámica de fermentación del ácido cítrico para la variante

realizada, con sus replicas en la formación del ácido cítrico, acorde a las
posibilidades existentes. Las variables que se tomaron en cuenta para dar un criterio
 fueron la acidez total, pH y se aplicaron las técnicas explicadas anteriormente para
la determinación del ácido cítrico. El proceso de elaboración del ácido cítrico es un
proceso largo que requiere mucha precisión. la variedad de cambios que ocurre
en el transcurso de los dias que se fermenta y el hongo crece tiene gran influencia
en las características finales de la obtencion del acido citrico junto con las
condiciones de proceso, por lo tanto es de vital importancia si queremos obtener el
ácido cítrico con ciertas características necesarias para poder realizar la
recuperacion del mismo. El total de ácido cítrico obtenido fue de 0.245 g.

Conclusiones

 El acido citrico si se puede elaborar por medio de Aspergillus nigger es un buen

microorganismo para la producción del mismo a partir de glucosa por la capacidad
de producir cantidades significativas de ácido cítrico, observando el crecimiento
del hongo en el medio de cultivo.
 Se obtuvo poca cantidad de acido cítrico por el corto tiempo de cultivo como lo
es 0.245g; cabe recalcar que en este poco tiempo si se pudo obtener ya sea poca
recuperación de ácido cítrico.

Recomendaciones

- El acido cítrico deseado depende de las condiciones a las que esta sometido el
proceso durante la fermentación, a las condiciones climáticas y al debido
cuidado en el crecimiento del hongo.
- Durante el proceso de fermentación es necesario que esta se realice
homogéneamente de lo se esta produciendo, por ello es necesario no agitar a
la muestra estática para que no se dañe el hongo que esta en crecimiento.
- Para obtener el acido cítrico se deben controlar los parámetros para que se
pueda obtener un buen resultado.

Bibliografía

- Nave, M. O. (14 de Julio de 2012). Quimica . Obtenido de Glucosa:

http://hyperphysics.phy-astr.gsu.edu/hbasees/Organic/sugar.html
- David, B. (Mayo de 2003). Obtencion de acido citrico. Obtenido de Articulo acido
citrico: http://www.redalyc.org/articulo.oa?id=49615003
- Papagianni. (Mayo de 2004). Acido citrico. Obtenido de Obtencion del acido
citrico: http://www.redalyc.org/articulo.oa?id=49615003

Anexos