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ENDOCRINOLOGIA

INDICE

1.- Introducción a las Hormonas y a la Endocrinología. Principales glándulas


endócrinas y hormonas que producen………………………………… pág. 02- 05

2.- Hipófisis anterior y posterior, Tiroides, Paratiroides, Suprarrenales


Páncreas………………………………………………………………………

3.- Endocrinología reproductiva Estructura, ubicación y hormonas que se


producen en el sistema reproductor masculino……………………………………

5.- Estructura, ubicación y hormonas que se producen en el sistema


reproductor femenino……………………………………………………….

5.- Ciclo hormonal femenino………………………………………………

6.- Principales alteraciones patológicas de las hormonas………………

7.- Metodología para la determinación de hormonas……………………

8.- Bibliografía……………………………………………………………….

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ENDOCRINOLOGIA

INTRODUCCION A LAS HORMONAS Y A LA ENDOCRINOLOGIA

La endocrinología es la rama de la medicina encargada del estudio de los


desórdenes producidos por alteraciones de las glándulas endocrinas, que son
aquellas que vierten su producto a la circulación sanguínea. Estas substancias
dotadas de gran actividad biológica regulan todos los procesos metabólicos del
organismo y son en consecuencia indispensables para el mantenimiento de la
vida.

Las hormonas son sustancias segregadas por células especializadas,


localizadas en glándulas de secreción interna o glándulas endócrinas (carentes
de conductos), o también por células epiteliales e intersticiales con el fin de
afectar la función de otras células. Hay hormonas animales y hormonas
vegetales como las auxinas, ácido abscísico, citoquinina, giberelina y el etileno.
Las hormonas pertenecen al grupo de los mensajeros químicos, que incluye
también a los neurotransmisores. Las hormonas más estudiadas en animales
(y humanos) son las producidas por las glándulas endocrinas, pero también
son producidas por casi todos los órganos humanos y animales.

La especialidad médica que se encarga del estudio de las enfermedades


relacionadas con las hormonas es la endocrinología.

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ENDOCRINOLOGIA

Tipos de hormonas según su naturaleza química

Hormonas peptídicas.

Son derivados de aminoácidos (como las hormonas tiroideas), o bien


oligopéptidos (como la vasopresina) o polipéptidos (como la hormona del
crecimiento). En general, este tipo de hormonas no pueden atravesar la
membrana plasmática de la célula diana, por lo cual los receptores para estas
hormonas se hallan en la superficie celular. Las hormonas tiroideas son una
excepción, ya que se unen a receptores específicos que se hallan en el núcleo.

Hormonas lipídicas.

Son esteroides (como la testosterona) o eicosanoides (como las


prostaglandinas). Dado su carácter lipófilo, atraviesan sin problemas la bicapa
lipídica de las membranas celulares y sus receptores específicos se hallan en
el interior de la célula diana.

Mecanismo de acción

Las Hormonas tienen la característica de actuar sobre las células diana, que
deben disponer de una serie de receptores específicos. Hay dos tipos de
receptores celulares:

Receptores de membrana: los usan las hormonas peptídicas. Las hormonas


peptídicas (1er mensajero) se fija a un receptor proteico que hay en la
membrana de la célula, y estimula la actividad de otra proteína (unidad
catalítica), que hace pasar el ATP (intracelular) a AMP (2º mensajero), que
junto con el calcio intracelular, activa la enzima proteína quinasa (responsable
de producir la fosforilación de las proteínas de la célula, que produce una
acción biológica determinada). Esta es la teoría o hipótesis de 2º mensajero o
de Sutherland.

Receptores intracelulares: los usan las hormonas esteroideas. La hormona


atraviesa la membrana de la célula diana por difusión. Una vez dentro del
citoplasma, penetra incluso en el núcleo, donde se fija el DNA y hace que se
sintetice ARNm, que induce a la síntesis de nuevas proteínas, que se
traducirán en una respuesta fisiológica.

Farmacología

Una gran cantidad de hormonas son usadas como medicamentos. Las más
comúnmente usadas son estradiol y progesterona en las píldoras
anticonceptivas y en la terapia de reemplazo hormonal, la tiroxina en forma de
levotiroxina en el tratamiento para el hipotiroidismo, los corticoides para
enfermedades autoinmunes, trastornos respiratorios severos y ciertos cuadros
alérgicos. La insulina es usada por muchos diabéticos. Preparaciones locales
usadas en otorrinolaringología frecuentemente contienen equivalentes a la
adrenalina. Los esteroides y la vitamina D son componentes de ciertas cremas
que se utilizan en dermatología.

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ENDOCRINOLOGIA

Principales glándulas endócrinas y hormonas que producen

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Glándula hormonas tejido Acciones principales
endocrina blanco
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Hipotálamo Oxitocina Útero Estimula las contracciones
Hipófisis anterior y posterior, Tiroides, Paratiroides, Suprarrenales y
(producción)
Hipófisis,
neurohipófisis Glándulas Estimula la expulsión de
(almacenamiento mamarias leche hacia los conductos
y liberación)
Hormona Riñones Estimula la reabsorción de
antidiurética (conductos agua; conserva agua
(vasopresina) colectores)

Hormona del General Estimula el crecimiento al


crecimiento (GH) promover la síntesis de
proteínas

Hipófisis
(producción) Prolactina Glándulas Estimula la producción de
Lóbulo anterior mamarias leche
de la hipófisis

Hormona tiroides Estimula la secreción de


estimulante del hormonas tiroideas;
tiroides (TSH) estimula el aumento de
tamaño del tiroides.

Hormona Corteza Estimula la secreción de


adrenocorticotrópic suprarrenal hormonas
a (ACTH) corticosuprarrenales.

Hormonas Gónadas Estimula el funcionamiento


gonadotrópicas y crecimiento gonadales
(foliculoestimulante,
FSH; luteinizante,
LH)

Tiroides Tiroxina (T4) y General Estimulan el metabolismo;


triyodotironina (T3) esencial para el
crecimiento y desarrollo
normal

Calcitonina Hueso Reduce la concentración


sanguínea de calcio
inhibiendo la degradación
ósea por osteoclastos

Glándulas
Trabajo final Hormona Hueso, Incrementa Página 5 la
paratiroides paratiroidea riñones, tubo concentración sanguínea
digestivo de calcio estimulando la
degradación ósea;
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La hipófisis o glándula pituitaria

Es la glándula que controla el resto de las glándulas, entre ellas la tiroides. Es


una glándula compleja que se aloja en un espacio óseo llamado silla turca del
hueso esfenoides, situada en la base del cráneo, en la fosa cerebral media,
que conecta con el hipotálamo a través del tallo pituitario o tallo hipofisario.
Tiene un peso aproximado de 0,5 g.

Etimología

El término «hipófisis» proviene del griego hipo (‘debajo’) y fisis (‘crecer’).

Partes

La hipófisis consta de tres partes:

• Lóbulo anterior o adenohipófisis: procede embriológicamente de un


esbozo faríngeo (bolsa de Rathke) y es responsable de la secreción de
numerosas hormonas (ver más adelante).

• Hipófisis media o pars intermedia: produce dos polipéptidos llamados


melanotropinas u hormonas estimulantes de los melanocitos, que
inducen el aumento de la síntesis de melanina de las células de la piel.

• Lóbulo posterior o neurohipófisis: procedente de la evaginación del


piso del tercer ventrículo del diencéfalo, al cual se le conoce con el
nombre de infundíbulo, queda unido a través del tallo hipofisario;
almacena a las hormonas ADH y oxitocina secretadas por las fibras
amielínicas de los núcleos supraópticos y paraventriculares de las
neuronas del hipotálamo.
• Adenohipófisis

La adenohipófisis segrega muchas hormonas de las cuales seis son relevantes


para la función fisiológica adecuada del organismo, las cuales son segregadas
por 5 tipos de células diferentes. Estas células son de origen epitelial y como
muchas glándulas endocrinas, están organizadas en lagunas rodeadas de
capilares sinusoides fenestrados a los cuales se vierte su secreción hormonal.
Los tipos de células se clasificaban antes de acuerdo a su tinción, y eran
acidófilas, basófilas y cromófobas (o que no se tiñen). Pero en la actualidad se
cuenta con técnicas de inmunohistoquímica, y se han podido identificar 5 tipos
celulares:

• Células somatótropas que segregan GH (acidófilas).


• Células lactotropas, o mamótropas que segregan PRL (acidófilas).
• Células corticótropas que segregan ACTH (basófila).
• Células gonadótropas que segregan las gonadotropinas LH, y FSH
(basófila).

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• Células tirotropas que secretan la TSH (basófila).

Las células cromófobas son en realidad células desgastadas y pueden haber


sido cualquiera de las cinco anteriores.

Hormonas de la adenohipófisis

Hormona del crecimiento o somatotrofina (GH). Estimula la síntesis proteica, e


induce la captación de glucosa por parte del músculo y los adipocitos, además
induce la gluconeogénesis por lo que aumenta la glucemia; su efecto más
importante es quizás que promueve el crecimiento de todos los tejidos y los
huesos en conjunto con las somatomedinas. Por lo que un déficit de esta
hormona causa enanismo y un aumento (ocasionado por un tumor acidófilo)
ocasiona gigantismo en niños, y acromegalia en adultos, (consecuencia del
previo cierre de los discos epifisiarios).

• Prolactina (PRL) u hormona luteotrópica. Estimula el desarrollo de los


acinos mamarios y estimula la traducción de los genes para las
proteínas de la leche.

Las demás hormonas son hormonas tróficas que tienen su efecto en algunas
glándulas endocrinas periféricas:

• Hormona estimulante del tiroides (TSH) o tirotropina. Estimula la


producción de hormonas por parte del tiroides
• Hormona estimulante de la corteza suprarrenal (ACTH) o corticotropina.
Estimula la producción de hormonas por parte de las glándulas
suprarrenales
• Hormona luteinizante (LH). Estimulan la producción de hormonas por
parte de las gónadas y la ovulación.
• Hormona estimulante del folículo (FSH). Misma función que la anterior.

La LH y la FSH se denominan gonadotropinas, ya que regulan la función de las


gónadas.

Neurohipófisis

La neurohipófisis tiene un origen embriológico diferente al del resto de la


hipófisis, mediante un crecimiento hacia abajo del hipotálamo, por lo que tiene
funciones diferentes. Se suele dividir a su vez en tres partes: eminencia
media, infundibulo y pars nervosa, de las cuales la última es la más
funcional. Las células de la neurohipófisis se conocen como pituicitos y no son
más que células gliales de sostén. Por tanto, la neurohipófisis no es en realidad
una glándula secretora ya que se limita a almacenar los productos de secreción
del hipotálamo. En efecto, los axoplasmas de las neuronas de los núcleos
hipotalamicos supraóptico y paraventricular secretan la ADH y la oxitocina
respectivamente, que se almacenan en las vesículas de los axones que de él
llegan a la neurohipófisis; dichas vesículas se liberan cerca del plexo primario
hipofisiario en respuesta impulsos eléctricos por parte del hipotálamo.

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• Hormona antidiurética (ADH) o vasopresina. Se secreta en estímulo a


una disminución del volumen plasmático y como consecuencia de la
disminución en la presión arterial que esto ocasiona, y su secreción
aumenta la reabsorción de agua desde los túbulos colectores renales
por medio de la translocación a la membrana de la acuaporina II;
también provoca una fuerte vasoconstricción por lo que también es
llamada vasopresina.

• Oxitocina. Estimula la contracción de las células mioepiteliales de las


glándulas mamarias lo que causa la eyección de leche por parte de la
mama, y se estimula por la succión, transmitiendo señales al hipotalamo
(retroalimentación) para que secrete mas oxitocina. Causa contracciones
del musculo liso del útero en el orgasmo y también los típicos espasmos
de la etapa final del parto.

Regulación hipotalámica

La hipófisis y el hipotálamo están conectados por un sistema capilar


denominado sistema portal, el cual proviene de la arteria carótida interna y del
polígono de Willis e irriga primero al hipotálamo formando el plexo capilar
primario, que drena en los vasos porta hipofisiarios que a su vez forman el
plexo capilar hipofisiario.

La importancia de este sistema es que transporta las hormonas liberadoras o


hipofisiotrópicas que secreta el hipotálamo con fines reguladores de la
secreción adenohipofisiaria. Estas hormonas son:

• Somatoliberina (GHRH). Estimula la secreción de GH por parte de la


hipófisis.
• Corticoliberina (ARH). Estimula la secreción de ACTH por parte de la
hipófisis.
• Tiroliberina (TRH). Estimula la secreción de TSH por parte de la
hipófisis.
• Gonadoliberina (LHRH). Estimula la secreción de LH y FSH por parte de
la hipófisis.
• Hormona inhibidora de la GH (GHIH) o somatostatina. Inhibe la
secreción de la GH por parte de la hipófisis.

La prolactina está regulada negativamente por dopamina, un neurotransmisor.

Hay que tener en cuenta que la regulación de la secreción de las hormonas


hipofisiarias se realiza mediante un mecanismo de retroalimentación negativa
el cual se establece entre el hipotálamo, la hipofisis y los receptores específicos
para cada hormona, localizado en los órganos diana.

El proceso se realiza en el momento en que el sistema nervioso central recibe


un estímulo, el hipotálamo recibe parte de ese estímulo y actúa sobre la
hipófisis, a su vez, el hipotálamo secreta las respectivas hormonas en la
adenohipófisis o libera las de la neurohipófisis; estas se incorporan a la
circulación, viajan por medio de la sangre y son captados por receptores

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ENDOCRINOLOGIA

específicos ubicados en los órganos diana, un ejemplo es la captación de la


TSH por parte de los lóbulos tiroideos de la glándula tiroides.

En ese momento el órgano diana, que en todo caso es cualquiera de las


glándulas endocrinas comienzan a secretar sus propias hormonas, con lo que
se envía un estímulo al sistema nervioso, específicamente al hipotálamo, o
directamente a la hipófisis con lo cual se contrarresta el estímulo inicial.

TRASTORNOS ASOCIADOS A LA HIPOFISIS

Condición Etiología Hormona

Acromegalia sobreproducción hormona de crecimiento

Gigantismo sobreproducción hormona de crecimiento

Deficiencia de la hormona de baja producción hormona de crecimiento


crecimiento

Síndrome de secreción sobreproducción vasopresina


inadecuada de la hormona
antidiurética

Diabetes insípida baja producción vasopresina

Síndrome de Sheehan baja producción cualquier hormona hipofisaria

Adenoma hipofisario sobreproducción cualquier hormona hipofisaria

Hipopituitarismo baja producción cualquier hormona hipofisaria

HORMONAS DEL HIPOTALAMO

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El hipotálamo es una glándula endocrina que


forma parte del diencéfalo, y se sitúa por
debajo del tálamo. Libera al menos nueve
hormonas que actúan como inhibidoras o
estimulantes en la secreción de otras
hormonas en la adenohipófisis, por lo que
se puede decir que trabaja en conjunto con
ésta.

Suele considerarse el centro integrador del sistema


nervioso vegetativo (o sistema nervioso autónomo),
dentro del sistema nervioso periférico. También se
encarga de realizar funciones de integración somato-vegetativa.

En conjunto con la hipófisis, realiza la homeostasis del organismo, por medio


de un sistema de realimentación negativa.

Anatomía

El diencéfalo está constituido por el tálamo, el hipotálamo, el epitálamo y el


subtálamo. El tálamo son dos masas en el medio del cerebro, entre los dos
hemisferios cerebrales. El hipotálamo está debajo del tálamo y sus límites
están constituidos por:

• superior: el piso del III ventrículo.


• anterior: el quiasma óptico.
• inferior y lateral: subtálamo.
• posterior: línea imaginaria entre los cuerpos mamilares y la comisura
posterior del cerebro.

Núcleos neuronales

• núcleos laterales: se relacionan con el hambre


• preóptico: función parasimpática
• supraóptico: produce hormona antidiurética
• paraventricular: produce oxitocina
• hipotalámico anterior: centro de la sed
• supraquiasmático: regulación del ciclo circadiano
• ventromedial: centro de la saciedad
• arcuato: interviene en la conducta emocional y actividad endócrina
• mamilar: función simpática
• hipotalámico posterior: participan en la memoria

Funciones

El hipotálamo regula el hambre, el apetito y la saciedad por medio de hormonas


y péptidos como la colecistoquinina, el nivel de glucosa y ácidos grasos en
sangre, y el neuropéptido Y entre otros.

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ENDOCRINOLOGIA

El hipotálamo anterior o rostral (parasimpático) disipa (difunde) el calor y el


hipotálamo posterior o caudal (simpático) se encarga de mantener la
temperatura corporal constante5 aumentando o disminuyendo la frecuencia
respiratoria y la sudoración.

La porción anterior y posterior del hipotálamo regula el ciclo del sueño y de la


vigilia (ritmo circadiano).

Hormonas

El hipotálamo, en cuanto órgano endocrino, se ocupa de liberar factores


liberadores o inhibidores a la sangre, pero también es capaz de producir
neurohormonas listas para su secreción.

Neurohormonas

El hipotálamo produce en los núcleos supraópticos y paraventriculares la ADH


(hormona antidiurética) o vasopresina, la cual se acumula en la neurohipófisis,
desde donde es secretada. La vasopresina regula el balance de agua en el
cuerpo actuando sobre los riñones. Esta hormona se almacena en la hipófisis
posterior de donde es liberada. La disfunción del hipotálamo en la producción
de ADH causa diabetes insípida.

La oxitocina es también producida por el hipotálamo y almacenada y liberada


por la neurohipófisis; también comparte similitudes en su estructura proteínica y
llegan a compartir algunas funciones. En el caso de los hombres, se desconoce

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su funcionalidad, pero se la asocia con los genitales externos y con receptores


de la vesícula seminal.

En el caso de las mujeres, la oxitocina acelera el número de contracciones en


el parto e influye al útero a que se reacomode después del parto. También
incita a las fibras musculares que rodean a las células secretoras de leche de
las glándulas mamarias a secretar leche en respuesta al acto de mamar del
niño.

Factores hipotalámicos

Aparte de las dos hormonas de acción directa mencionadas, el hipotálamo


secreta diversas hormonas o factores que regulan la secreción de hormonas
hipofisarias.

• Hormona liberadora de gonadotropinas (GnRH, LHRH o LHRF). Es


un decapéptido (una cadena de 10 aminoácidos) que actúa sobre la
hipófisis, estimulando la producción y la liberación de la hormona
luteinizante (LH) y la hormona foliculoestimulante (FSH). El balance de
estas hormonas coordina el ciclo menstrual femenino y la
espermatogénesis en los hombres.

• Hormona liberadora de tirotropina (TRH). Es un tripéptido (molécula


compuesta por tres aminoácidos). Estimula la secreción de prolactina
(PRL) y de tirotropina (TSH) por parte de la adenohipófisis.

Corte sagital medio del cerebro. El punto blanco en frente del hipotálamo es el
quiasma óptico, debajo del cual está la pituitaria. La línea blanca entre la
pituitaria y el espacio negro es la silla turca (hueso)

• Hormona liberadora de corticotropina (CRH o CRF). Se sintetiza en


los núcleos paraventriculares, a partir de un precursor polipeptídico de
unos 41aminoácidos y posee una vida larga (minutos). Las neuronas
secretoras se encuentran en la porción anterior de los núcleos
paraventriculares y sus axones terminan en la capa externa de la
eminencia media. Estimula la liberación de adrenocorticotropina (ACTH)
y β-endorfina por parte de la adenohipófisis. La hormona antidiurética y
la angiotensina II potencian el efecto liberador de CRH.

• Somatocrinina hormona liberadora de somatotropina (STH) o factor


liberador de hormona del crecimiento (GRF). Las neuronas productoras

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de este factor se encuentran en el núcleo arcuato del hipotálamo. Se


sintetiza a partir de un precursor de 107 o 108 aminoácidos. Estimula la
liberación de la hormona del crecimiento hipofisaria (GH).

• Somatostatina u hormona inhibidora de la liberación de somatotropina


(GIH). Como su nombre indica, inhibe la secreción de somatotropinay de
otras hormonas como la insulina, el glucagón, el polipéptido pancreático
y la TSH. La zona secretora se encuentra en la región periventricular del
hipotálamo. Es un tetradecapéptido que se encuentra en el hipotálamo y
en las células D de los islotes de Langerhans. Su precursor posee 116
aminoácidos. Hormona liberadora de corticotropina

• PIF (Factor inhibidor de la liberación de prolactina). Actúa en forma


constante inhibiendo la secreción de prolactina hipofisaria. Dado que la
dopamina inhibe también la producción de prolactina al unirse a las
células lactotropas de la hipófisis, durante algún tiempo se pensó que se
trataba de PIF; la dopamina puede ser un PIF secundario. Las neuronas
secretoras de PIF se encuentran en el núcleo arcuato hipotalámico.

• Angiotensina II (AII). Es un octapéptido que estimula la acción de la


hormona liberadora de corticotropina; libera algo de adrenocorticotropina
hipofisaria.

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Hormona tiroidea

Las hormonas tiroideas son producidas por la glándula tiroides. Su efecto es


el aumento del metabolismo basal, lo cual es indispensable para un correcto
desarrollo fetal, y el funcionamiento adecuado de los sistemas cardiovascular,
musculoesquelético, hematopoyético, así como para respuestas corporales
adecuadas en cuanto a producción de calor, consumo de oxígeno y regulación
de otros sistemas hormonales.

Tipos de hormona tiroidea

T4 T3

Existen tres hormonas circulantes:circulantesco grande

• T4, tetrayodotironina o tiroxina.


• T3, o triyodotironina.
• T3 reversa. Esta es biológicamente inactiva.

Los niveles plasmáticos de estas hormonas se mantienen estables durante


toda la vida, con excepción del período neonatal y en algunas enfermedades o
con el uso de algunos fármacos.

Síntesis y liberación de hormonas tiroideas

Los yoduros, que se ingieren en los alimentos y en el agua, son concentrados


de forma activa por la glándula tiroides, convertidos a yodo orgánico por la
peroxidasa tiroidea e incorporados a la tirosina en la tiroglobulina intrafolicular
contenida en el coloide de la superficie apical de la célula folicular del tiroides.

Las tirosinas son yodadas en un lugar (monoyodotirosina) o en dos


(diyodotirosina) y se acoplan para formar las hormonas activas:

• diyodotirosina + diyodotirosina (r) --> tetrayodotironina [tiroxina, T4].


• diyodotirosina + monoyodotirosina( r) --> triyodotironina [T3].

Otra fuente de T3 en el interior de la glándula tiroides es el producto de la


monodesyodación del anillo externo de la T4 por una selenoenzima: la
desyodasa tipo I (5'-D-I). Esta enzima se encuentra también en el hígado y los
riñones. La T3 resultante pasa a la circulación. También existe una isoenzima
que efectúa la misma reacción llamada desyodasa tipo II, que se encuentra en
el cerebro y la hipófisis. La T3 resultante actúa localmente.2

La tiroglobulina, una glucoproteína que contiene T3 y T4 en su matriz, es


captada por el folículo en forma de gotitas de coloide por las células tiroideas.

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Todas las reacciones necesarias para la formación de T3 y T4 son influidas y


controladas por la hormona estimulante del tiroides (TSH), llamada también
tirotropina, que estimula las células foliculares en la glándula tiroides.

Metabolismo y eliminación de las hormonas tiroideas

Las hormonas tiroideas se metabolizan principalmente en el hígado. Producto


de una conjugación con los ácidos glucorónico y sulfúrico por medio de un
grupo hidroxilo fenólico, se genera una forma excretable a través de la bilis.

Una parte de los productos conjugados eliminados por la bilis, se hidroliza y se


absorbe como hormona activa en el intestino. Es un fenómeno conocido como
circulación enterohepática. El resto se elimina por las heces.

En la circulación sanguínea, la T4 se metaboliza a T3 y T3 reversa, las que a


su vez se desyodan producéndose diyodotironinas inactivas

Efectos de las hormonas tiroideas

Las hormonas tiroideas tienen dos efectos fisiológicos principales:

1. Aumentan la síntesis de proteínas prácticamente en todos los tejidos del


organismo. (La T3 y la T4 penetran en las células, donde la T3, que se
obtiene de la circulación y por la conversión de T4 en T3 dentro de la
célula, se une a receptores nucleares individuales e influye sobre la
formación de ARNm.)
2. La T3 incrementa el consumo de oxígeno mediante el aumento de
actividad de la Sodio-potasio ATPasa (bomba sodio-potasio), sobre todo
en los tejidos responsables del consumo basal de oxígeno (es decir,
hígado, riñón, corazón y músculo esquelético). El aumento de actividad
de la Sodio-potasio ATPasa es secundario al incremento de la síntesis
de esta enzima; por consiguiente, el aumento del consumo de oxígeno
probablemente también está relacionado con la fijación nuclear de
hormonas tiroideas. No obstante, no se ha descartado un efecto directo
de la T3 sobre la mitocondria. Se cree que la T3 es la hormona tiroidea
activa, aunque la misma T4 pueda ser biológicamente activa.

Efectos fisiológicos

• Desarrollo normal del sistema nervioso central en el feto.


• Funcionamiento normal del sistema nervioso central. Su falta enlentece
su funcionamiento.
• Generación de calor.
• Efectos cronotrópico e inotrópico en el sistema cardiovascular.
• Aumenta el número de receptores para catecolaminas y amplifica la
respuesta postreceptor en el sistema simpático.3
• Aumenta la eritropoyetina.
• Regula el metabolismo óseo.
• Permite la relajación muscular.

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• Interviene en los niveles de producción de hormonas gonadotrofinas y


somatotropa o GH.
• Permite la correcta respuesta del centro respiratorio a la hipoxia e
hipercapnia.

Medición del nivel de hormonas tiroideas en el plasma

Las hormonas tiroideas circulan unidas a proteínas plasmáticas. Un porcentaje


bajo de T4 y T3 circula libremente por la sangre, y es de este porcentaje bajo
de hormona, que depende la acción hormonal sobre los receptores celulares.

Las proteínas a las que se unen las hormonas tiroideas son:

• Globulina transportadora de tiroxina o TBG (del inglés Thyroxin Binding


Globulin).
• Prealbúmina transportadora de tiroxina o TBPA (del inglés Thyroxin
Binding Pre Albumin).
• Albúmina.

Ya que existen factores que afectan la unión de las hormonas tiroideas a las
proteínas mencionadas, modificando la cantidad de hormona libre, es muy
importante medir la hormona libre en el plasma para evaluar la condición
fisiopatológica en estudio.

Por ejemplo, los siguientes fármacos compiten con las hormonas tiroideas por
su unión con las proteínas transportadoras:

• Salicilatos.
• Hidantoínas.
• Algunos antiinflamatorios no esteroideos como el Diclofenaco y el ácido
mefenámico.
• Furosemida.

Por el contrario, los siguientes fármacos incrementan la unión de las hormonas


tiroideas a las proteínas transportadoras:

• Estrógenos.
• Metadona.
• Clofibrato.
• Heroína.
• Tamoxifeno.

En el embarazo, también se modifica la afinidad de las hormonas tiroideas por


las proteínas transportadoras, aumentando esta unión y disminuyendo la
hormona libre.

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Paratiroides

Las glándulas paratiroides son glándulas


endocrinas
Situadas en el cuello, generalmente localizadas en
los polos
De la glándula tiroides, que producen
La hormona paratiroidea o paratohormona.
Por lo general, hay cuatro glándulas paratiroides,
Dos superiores y dos inferiores, pero de forma
ocasional
puede haber cinco o más. Cuando existe alguna
glándula
adicional, ésta suele encontrarse en el mediastino,
en relación con el timo, o dentro de la glándula tiroides.

La hormona paratiroidea participa en el control de la homeostasis del


calcio y fósforo, así como en la fisiología del hueso.

El exceso de función de las glándulas paratiroides se conoce como


hiperparatiroidismo, y suele cursar con elevación de los niveles plasmáticos
de calcio y fragilidad ósea, que condiciona una mayor susceptibilidad a
padecer fracturas. La función insuficiente de las glándulas paratiroides
(hipoparatiroidismo) es mucho menos frecuente, y generalmente se
presenta tras una cirugía sobre la glándula tiroides, que conlleva la
existencia de hipocalcemia. Existen algunas enfermedades mucho más
raras, que parecen deberse a alteraciones en el receptor de la hormona
paratiroidea, como la condroplasia metafiseal de Jansen y la condroplasia
de Blomstrand.

Hormona paratiroidea o parathormona

Es secretada por las células principales de la glándula paratiroides, es


un polipéptido de 84 aminoácidos cuyo peso molecular es de
aproximadamente 9500 Daltons.

Facilita la absorción del calcio, Vitamina D (en su forma natural), y


fosfato; conjuntamente en el intestino.

Aumenta la resorción de los huesos. Mediante la producción de más


osteoclastos a partir de las células madre mesenquimatosas de la
médula ósea, y retrasando la conversión de estas en osteoblastos. Los
osteoclastos absorben el hueso mediante la liberación de hormonas
proteolíticas liberadas por lisosomas, y la secreción de varios ácidos
entre ellos el ácido cítrico y el ácido láctico.

Aumenta la reabsorción del calcio y reduce la resorción del fosfato en


los túbulos renales provocando que este salga en la orina en mayor
concentración.

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ENDOCRINOLOGIA

Aumenta la resorción del calcio en el intestino. Induce un incremento


en la formación del 1,25-dihidroxicolecalciferol (forma activa de la
Vitamina D, calitriol o Vitamina D3) a partir del 25-hidroxicolecalciferol
(calcifediol) en los riñones, la vitamina D3 luego actúa a nivel del epitelio
intestinal aumentando la absorción del calcio, aumentando así los
niveles de calcio plasmáticos (valor normal del calcio plasmático: 9.2-
10.4 mg/dl). Luego por un mecanismo de retroacción o retroalimentación
negativa, elevadas concentraciones de calcio plasmáticos inhiben la
secreción de la PTH (Hormona paratiroidea)además ayuda a la
reabsorcion del calcio por medio de los riñones.

Calcitonina

Secretada por las células parafoliculares en la Tiroides, es un


polipéptido de 32 aminoácidos con un peso molecular aproximado de
3000 Daltons, aproximadamente.

Tiene una función opuesta a la Hormona Paratiroidea: disminuye la


actividad osteoclástica, desacelera la formación de los osteoclastos, y
acelera la formación de osteoblastos (células encargadas de la
formación del hueso).

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ENDOCRINOLOGIA

Glándula suprarrenal

Las glándulas , con forma de triángulo que están situadas encima de los
riñones, cuya función es la de regular las respuestas al estrés, a través de la
síntesis de corticosteroides (principalmente cortisol) y catecolaminas
(adrenalina sobre todo).

Capas de la glándula suprarrenal.

Introducción

Anatómicamente las glándulas suprarrenales están separadas situadas en la


cara anterosuperior de los riñones y están irrigadas por la sangre que reciben
de las suprarrenales (las suprarrenales superiores, las suprarrenales medias y
las suprarrenales inferiores). Están formadas por estructuras diferentes que son
la médula suprarrenal y la corteza suprarrenal, ambas inervadas por el sistema
nervioso autónomo. Como su nombre sugiere, la médula suprarrenal está
situada dentro de la glándula, rodeada por la corteza suprarrenal que forma la
superficie.

Médula suprarrenal La suprarrenal o médula adrenal está compuesta


principalmente por células cromafines productoras de hormonas, siendo el
principal órgano de conversión del aminoácido tirosina en catecolaminas
epinefrina y norepinefrina, también llamadas adrenalina y noradrenalina,
respectivamente. Las células de la médula suprarrenal derivan
embriológicamente de la cresta neural, como neuronas modificadas. Realmente
estas células son células postganglionares del sistema nervioso simpático, que
reciben la inervación de células preganglionares. Como las sinapsis entre fibras
pre y postganglionares seon ganglios nerviosos autonómicos, la médula

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ENDOCRINOLOGIA

suprarrenal puede considerarse como un ganglio nervioso del sistema nervioso


simpático.

En respuesta a una situación estresante como es el ejercicio físico o un peligro


inminente, las células de la médula suprarrenal producen catecolaminas a la
sangre en una relación 70 a 30 de epinefrina y norepinefrina, respectivamente.
La epinefrina produce efectos importantes como el aumento de la frecuencia
cardíaca, vasoconstricción, broncodilatación y aumento del metabolismo, que
son respuestas muy fugaces.

Corteza suprarrenal

La corteza suprarrenal o corteza adrenal está situada rodeando la


circunferencia de la glándula suprarrenal. Su función es la de regular varios
componentes del metabolismo con la producción de mineralcorticoides y
glucocorticoides que incluyen a la aldosterona y cortisol. La corteza suprarrenal
también es un lugar secundario de síntesis de andrógenos.

La corteza suprarrenal secreta hormonas esteroideas (de naturaleza lipidica),


por lo que sus células presentan abundante REL (reticulo endoplasmático liso)
y mitocondrias con crestas longitudinales al MET. Se dispone en tres capas
diferentes de tejido basado en los tipos celulares y la función que realizan.

• Zona glomerular: Producción de mineralocorticoides, sobre todo,


aldosterona.
• Zona fascicular: Producción de glucocorticoides, principalmente cortisol,
cerca del 95%.
• Zona reticular: Producción de andrógenos, incluyendo testosterona.

Zona glomerular

Las células de la zona glomerular de la corteza suprarrenal, segregan


mineralocorticoides, como la aldosterona y la desoxicorticosterona, en
respuesta a un aumento de los niveles de potasio o descenso del flujo de
sangre en los riñones. La aldosterona es liberada a la sangre formando parte
del sistema renina-angiotensina, que regula la concentración de electrolitos en
la sangre, sobre todo de sodio y potasio, actuando en el túbulo contorneado
distal de la nefrona de los riñones:

• Aumentando la excreción de potasio.


• Aumentando la reabsorción de sodio

La Aldosterona es una hormona que ayuda a regular la presión osmótica de mi


organismo. Por ejemplo, si en el plasma sanguíneo hay una escasez de sales
([osmolaridad] baja), se secretará mayor cantidad de Aldosterona para
reabsorber más sodio, y por consiguiente normalizar los niveles. Lo mismo si
hay una concentración muy elevada de sales en la sangre (osmolaridad alta),
se secretará menos, o se inhibirá la secreción de Aldosterona para no tener
que reabsorber el Sodio, y por consiguiente eliminarlo, normalizando las
concentraciones.

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ENDOCRINOLOGIA

Zona fascicular

Capa predominante en la corteza suprarrenal, cuyas celulas se disponen en


hileras separadas por tabiques y capilares. Sus células se llaman espongiocitos
porque son voluminosas y contienen numerosos granulos claros dando a su
superficie un aspecto de esponja. Estas células segregan glucocorticoides
como el cortisol o hidrocortisona y la cortisona al ser estimuladas por la
hormona adrenocorticotropica (ACTH). La ACTH es producida por la hipófisis
en respuesta al factor hipotalámico estimulante de corticotropina (CRH). Estos
tres órganos del sistema endocrino forman el eje hipotálamo-hipofisario-
suprarrenal.

El principal glucocorticoide producido por las glándulas suprarrenales es el


cortisol, que cumple diferentes funciones en el metabolismo en múltiples
células del organismo como:

• Estimulación de la producción de aminoácidos por el cuerpo, rompiendo


proteínas, proteólisis.
• Estimulación de la lipólisis, es decir, rompiendo la grasa.
• Estimulación gluconeogénesis, la producción de glucosa a partir de
nuevas fuentes como los aminácidos y la glicerina de los ácidos grasos.
• Mantenimiento de la glucosa, inhibiendo su liberación desde el músculo
y del tejido adiposo.
• Los glucocorticoides aumentan las concentraciones de glucosa en
sangre pues actúan como antagonistas de la insulina e inhiben su
liberación, lo que produce una disminución de la captación de glucosa
por los tejidos; esto favorece que aumente la síntesis de glucosa en el
hígado y aumente la cantidad de glucógeno en este mismo.
• Los glucocorticoides también tienen propiedades antiinflamatorias que
están relacionadas con sus efectos sobre la microcirculación y la
inhibición de las citocinas pro-inflamatorias (IL-1 e IL-6), prostaglandinas
y linfocinas. Por lo tanto, regulan las respuestas inmunitarias a través del
llamado eje inmunosuprarrenal.
• También el cortisol tiene efectos importantes sobre la regulación del
agua corporal, retrasando la entrada de este líquido del espacio
extracelular al intracelular. Por lo que favorece la eliminación renal de
agua.
• El cortisol inhibe la secreción de la propiomelanocortina (precursor de
ACTH), de la CRH (Hormona liberadora de Corticotropina producida por
las células de la eminencia media del hipotálamo) y de Vasopresina.

Zona reticular

Es la más interna y presenta células dispuestas en cordones entrecruzados o


anastomosados que segregan esteroides sexuales como estrógenos y
andrógenos.

Las células de la zona reticular producen una fuente secundaria de andrógenos


como testosterona, dihidrotestosterona (DHT), androstendiona y
dehidroepiandrosterona (DHEA). Estas hormonas aumentan la masa muscular,

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ENDOCRINOLOGIA

estimulan el crecimiento celular, y ayudan al desarrollo de los caracteres


sexuales secundarios.

Páncreas

El páncreas órgano que segrega


enzimas digestivas que pasan al intestino delgado.
Estas enzimas ayudan en la ruptura
de carbohidratos, lípidos, proteinas y ácidos
nucléicos
en el quimo. Tiene forma cónica con un proceso
uniforme medial e inferior. En la especie humana,
su longitud oscila entre 20 y 30 cm, tiene una
anchura
de unos 4 cm y un grosor de 5 centímetros;
con un peso 30g. La cabeza se localiza en la
concavidad del duodeno o asa duodenal formada
por la segunda porción del duodeno.

Histología del páncreas

El páncreas tiene una parte exocrina y una parte endocrina.

La parte exocrina contiene unas glándulas llamadas ácinos serosos que son
redondos u ovalados con células epiteliales. Formados por las celúlas acinosas
y en parte por las centroacinosas.

La parte endocrina se agrupa en islotes de Langerhans, que consisten en


cúmulos de células secretoras de hormonas que producen insulina, glucagón y
somatostatina. Estos tipos de células son los siguientes:

Célula alfa (Alfa cell)

Estas células alfa sintetizan y liberan glucagón. El glucagón aumenta el nivel de


glucosa sanguínea al estimular la formación de este carbohidrato a partir del
glucógeno almacenado en hepatocitos. También ejerce efecto en el
metabolismo de proteínas y grasas. La liberación del glucagón es inhibida por
la hiperglucemia. Representan entre el 10 - 20% del volumen del islote y se
distribuyen de forma periférica.

Célula beta (Beta Cell)

Las células beta producen y liberan insulina, hormona que regula el nivel de
glucosa en la sangre (facilitando el uso de glucosa por parte de las células, y
retirando el exceso de glucosa, que se almacena en el hígado en forma de
glucógeno).

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ENDOCRINOLOGIA

En los diabéticos tipo I, las células beta han sido dañadas y no son capaces de
producir la hormona.

Célula delta (Delta Cell)

Las células delta producen somatostatina, hormona que se cree que regularía
la producción y liberación de la insulina por las células beta y la producción y
liberación de glucagón por las células alfa.

Célula epsilon (Epsilon Cell)

Estas células hacen que el estómago produzca y libere la hormona Grelina.

Célula F (PP CELL)

Estas células producen y liberan Polipéptido Pancreático.

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ENDOCRINOLOGIA

Estructura, ubicación y hormonas que se producen en el sistema


reproductor masculino

HORMONAS DEL ISTEMA REPRODUCTOR MASCULINO

La mayoría de las especies tienen dos sexos: macho y hembra. Cada sexo
tiene su sistema reproductor. Difieren en forma y estructura, pero ambos están
específicamente diseñados para producir, nutrir y transportar, bien ovocitos o
bien espermatozoos.

A diferencia de la mujer, cuyo sistema reproductor está localizado íntegramente


en la pelvis, los órganos reproductores del hombre, o genitales, se encuentran
tanto dentro como fuera de la pelvis. Los genitales masculinos incluyen:

• los testículos
• el sistema de conductos, integrado por el epidídimo y el conducto
deferente
• las glándulas accesorias, que incluyen las vesículas seminales y
la glándula prostática
• el pene.

En un chico que ya ha alcanzado la madurez sexual, los dos testículos


producen y almacenan millones de diminutos espermatozoides. Los testículos
son ovalados y crecen hasta alcanzar aproximadamente 5 cm de longitud por 3
cm de diámetro. Los testículos también forman parte del sistema endocrino, ya
que producen hormonas, incluyendo la testosterona. La testosterona
desempeña un papel muy importante en la pubertad y, a medida que un chico

Trabajo final Página 24


ENDOCRINOLOGIA

va recorriendo esta etapa de su vida, sus testículos van produciendo


cantidades cada vez mayores de esta hormona. La testosterona es la hormona
que determina que los chicos cambien la voz, desarrollen músculos más
voluminosos y fuertes y les crezca la barba y el vello corporal, aparte de
estimular la producción de espermatozoides.

Muy cerca de los testículos, se encuentran el epidídimo y el conducto


deferente, que constituyen el sistema de conductos de los órganos
reproductores masculinos. El conducto deferente es un tubo muscular que
discurre junto a los testículos y transporta en sentido ascendente el fluido que
contiene los espermatozoides, denominado semen. El epidídimo es un
conjunto de tubos en forma de espiral (uno para cada testículo) que está
conectado al conducto deferente.

El epidídimo y los testículos están suspendidos en el interior de una estructura


similar a una bolsa, ubicada fuera de la pelvis y denominada escroto. Esta
bolsa de piel ayuda a regular la temperatura de los testículos, que debe ser
inferior a la temperatura corporal para que puedan fabricar espermatozoides. El
escroto cambia de tamaño para mantener la temperatura adecuada. Cuando el
cuerpo está frío, el escroto se encoge y se tensa para mantener el calor
corporal en su interior. Cuando el cuerpo está caliente, el escroto se agranda y
se vuelve flácido para eliminar el exceso de calor. Esto ocurre sin que el
hombre tenga que pensar en ello. El cerebro y el sistema nervioso dan al
escroto las instrucciones pertinentes para que cambie de tamaño cuando
convenga hacerlo.

Las glándulas accesorias, que incluyen las vesículas seminales y la glándula


prostática, proporcionan los fluidos que lubrican el sistema de conductos y
nutren a los espermatozoides. Las vesículas seminales son estructuras con
aspecto de bolsa unidas al conducto deferente, a lado de la vejiga. La glándula
prostática, que produce algunos de los componentes del semen, rodea a los
conductos eyaculatorios en la base de la uretra, justo debajo de la vejiga. La
uretra es el conducto que conduce el semen hacia el exterior del cuerpo a
través del pene. La uretra también forma parte del sistema urinario, ya que es
el conducto a través del cual pasa la orina cuando es expulsada del cuerpo
desde la vejiga.

El pene consta de dos partes: el cuerpo y el glande. El cuerpo es la parte


principal del pene, mientras que el glande es la punta (a veces, denominada
"cabeza"). En el extremo del glande, hay una pequeña ranura o abertura, que
es por donde salen del cuerpo el semen y la orina a través de la uretra. El

Trabajo final Página 25


ENDOCRINOLOGIA

interior del cuerpo del pene está formado por un tejido esponjoso y otro
cavernoso que se puede expandir y contraer.

Todos los niños nacen con prepucio, un pliegue de piel en el extremo del
pene, que cubre el glande. Algunos niños son circuncidados, es decir, un
médico o un sacerdote les extirpa el prepucio. La circuncisión suele llevarse a
cabo durante los primeros días de vida. Si bien la circuncisión no es necesaria
desde el punto de vista médico, algunos padres deciden circuncidar a sus hijos
por creencias religiosas, por cuestiones higiénicas o por motivos sociales o
culturales. Los penes de los niños circuncidados no son diferentes de los penes
de los niños no circuncidados: todos los penes funcionan de la misma manera y
tienen la misma sensibilidad, independientemente de que se les haya extirpado
el prepucio o no.

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ENDOCRINOLOGIA

Estructura, ubicación y hormonas que se producen en el sistema


reproductor femenino

El hipotálamo excreta la hormona liberadora de las gonadotropinas (GnRH,


Gonadotropin-Releasing Hormone) también conocida como hormona
liberadora de la hormona luteiníca (LHRH) o gonadorelina. Es un decapéptido
sintetizado a partir de una pre-hormona de mayor tamaño en las neuronas
hipotalámicas de las áreas arqueada y preóptica. Desde estas áreas la
hormona es transportada axonalmente para su almacenamiento en la
eminencia medial. La GnRH es excretada en las venas portales de la pituitaria
para su transporte a las células gonadotróficas de la pituitaria anterior donde se
une a los receptores de la membrana. Una vez fijada a sus receptores la GnRH
provoca una entrada de calcio que se actúa como segundo mensajero
uniéndose a la calmodulina y haciendo que las células liberen simultáneamente
hormona luteínica (LH) y hormona estimulante del folículo (FSH) de sus
gránulos secretores. La GnRH también actúa estimulante la transcripción de los
genes que dirigen la síntesis de las dos gonadotropinas.

La producción de GnRH es estimulada por la norepinefrina e inhibida por las


endorfinas, la dopamina y el stress.

Pituitaria
El lóbulo anterior de la pituitaria excreta la hormona luteínica (LH) y la hormona
estimulante del folículo (FSH). Ambas son glicoproteínas y reciben en nombre
de gonadotropinas por sus efectos sobre el testículo y el ovario. Se asemejan a
la hormona estimulante del tiroides (TSH) y como ésta, están compuestas de
dos subunidades a y b. La primera es igual para las tres y consta de 91
aminoácidos. La cadena b, por su parte, tiene 120 aminoácidos. En ambas
gonadotropinas son necesarias ambas subunidades y la parte de carbohidrato
para mantener la actividad.

La LH tiene tres acciones distintas

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ENDOCRINOLOGIA

• Estimula las células de la teca ovárica y las células de Leydig del


testículo para producir andrógenos y, en menor proporción estrógenos.
Gracias a ella se forma la testosterona y androstendiona que luego
serán transformadas a estrona y estradiol. En el testículo sólo se forman
andrógenos.
• Determina la rotura del folículo y por lo tanto la ovulación
• Al seguir actuando sobre el ovario después de la ovulación determina la
formación del cuerpo lúteo.

La FSH estimula las células de la granulosa y de Sertoli para que estas


excreten estrógenos. Uniéndose a sus receptores en la membrana de estas
células y actuando el AMP-c como segundo mensajero, la FSH aumenta la
transcripción del gen de la aromatasa, la enzima específica de la síntesis del
estradiol. La FSH también incrementa el número de receptores a la LH en las
células diana, aumentando por tanto su sensibilidad a esta hormona.
Finalmente, estimula la producción de inhibina y otros péptidos en las células
de la granulosa y de Sertoli.

Ovarios
En los ovarios se sintetizan y excretan varios tipos de hormonas:

• las hormonas esteroídicas entre las que se encuentran los estrógenos,


los andrógenos y la progesterona.
• las hormonas peptídicas inhibina, relaxina y activina.
• otras hormonas y factores de crecimiento

Hormonas esteroídicas

Los andrógenos, estrógenos y progesterona son todos ellos hormonas


esteroídicas que se sintetizan en el ovario o el testículo a partir del colesterol
aunque también pueden ser producidas en las glándulas suprarrenales.

Estrógenos: los estrógenos cuyos miembros más importantes son el estradiol,


la estrona y el estriol tienen tres importantes funciones:

• Promueven el desarrollo y el mantenimiento de las estructuras


reproductoras de la mujer (en particular la mucosa del endometrio), de
sus características sexuales (voz, distribución de la grasa, distribución
del vello, etc)
• Ayudan al mantenimiento del control del balance electrolítico
• Aumentan el anabolismo de las proteínas, siendo sinérgicos en este
aspecto con la hormona del crecimiento.

Unos niveles moderados de estrógenos en sangre inhiben la liberación de la


GnRH hipotalámica con la consiguiente reducción de la producción de LH y
FSH por la pituitaria. Esta inhibición es el fundamento del mecanismo de acción
de las píldoras contraceptivas.

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ENDOCRINOLOGIA

Progesterona: la progesterona actúa principalmente en el útero preparando el


endometrio para la implantación de un ovocito fertilizado mediante la secreción
de glucógeno y algunas proteínas específicas y aumentando el desarrollo de
los capilares del estroma endometrial. También actúa sobre la mama
produciendo el desarrollo de los acini mamarios.

A nivel hipotalámico la progesterona actúa frenando la liberación de la GnRH


(aunque menos que los estrógenos) y excitando el centro térmico, lo que
provoca el aumento de temperatura que se observa, como veremos, en la
segunda mitad del ciclo.

Una importante acción de la progesterona es la disminución del número de


receptores estrogénicos del endometrio y el aumento de las enzimas que
metabolizan el estradiol. Por ambos mecanismos, la progesterona tiene un
efecto antiestrogénico que previene el efecto cancerígeno que tienen los
estrógenos. Este es uno de los motivos que esplican porqué en la terapia
hormonal sustitutiva siempre se asocia progesterona a andrógenos.

Andrógenos: los andrógenos sirven fundamentalmente como precursores de


los estrógenos aunque tienen algunos efectos sobre el vello pubiano y axilar y
sobre el desarrollo del clítoris. La transformación de andrógenos a estrógenos
tiene lugar en las células intersticiales del folículo y en la grasa. Esta última
reviste una gran importancia en la importancia en el mantenimiento de unos
niveles de estrógenos después de la menopausia.

Hormonas peptídicas
La inhibina es un péptido formado por dos subunidades de 230 y 134
aminoácidos producido por el cuerpo lúteo del ovario. Inhibe la secreción de
GnRH y de FSH y, en menor extensión, de LH. Como veremos, la inhibina es
juega un importante papel en la disminución de FSH y LH que se observa al
final del ciclo ovárico.

La activina es, asimismo un péptido dimérico constituido por dos unidades b


de la inhibina (268 aminoacidos). Estimula la secreción hipofisiaria de FSH.

La relaxina es producida por el cuerpo lúteo y la placenta. Consta de dos


subunidades de 13 y 26 aminoácidos unidas por una puente de cisteína.
Durante el parto, la relaxina relaja los músculos del cuello uterino para facilitar
la dilatación y la sínfisis pubiana.

Otras hormonas
La renina que se produce en el folículo ovárico da lugar a la formación
angiotensina II que juega un importante papel en la vascularización del cuerpo
lúteo.

Los factores de crecimiento insulinérgicos ILGF-I e ILGF-II son también


producidos en el folículo y promueven la síntesis de la aromatasa, la enzima
implicada en la transformación de los andrógenos en estrógenos.

Trabajo final Página 29


ENDOCRINOLOGIA

CICLO HORMONAL FEMENINO

Desde la aparición de la primera menstruación (menarquía) hasta la


desaparición de la regla (menopausia), las mujeres no embarazadas
experimentan unos cambios cíclicos secuenciales en los ovarios y el útero.
Cada ciclo tiene una duración de unos 28 días e implica la preparación de un
ovocito por el ovario y la adecuación del endometrio para recibir a este en el
supuesto de que quede fertilizado. Si la fertilización no se produce el
endometrio se desprende del lecho compacto y esponjoso que había preparado
dejando unas áreas hemorrágicas que producen el sangrado menstrual.

Se producen dos ciclos simultáneamente:

• El ciclo ovárico que consiste en la maduración de un folículo y expulsión


de un ovocito
• El ciclo menstrual (o ciclo endometrial) que consiste en la preparación de
un lecho apto para recibir al ovocito y, si este no está fertilizado, en la
eliminación del mismo.

Ambos ciclos están regulados por un conjunto de hormonas procedentes del


hipotálamo, de la pituitaria y de los folículos ováricos. Todas ellas son
interdependientes y forman un cascada hormonal retroalimentada.

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ENDOCRINOLOGIA

Principales alteraciones patológicas de las hormonas

Hormona Hiposecreción Hipersecreción

Enanismo hipofisiario Gigantismo


Hormona del
crecimiento Causas: Causas: excesiva
STH o individuos cuya glándula producción de la hormona
somatotropina hipófisis no sintetiza durante la infancia o la
suficiente hormona adolescencia. Desorden
Hormona durante el crecimiento. causado por un tumor
Producida por la Síntomas: seres humanos hipofisiario que si no se
Adenohipófisis en miniatura; poseen trata, puede producir la
inteligencia normal y muerte.
suelen tener proporciones Síntomas: los brazos y las
corporales normales. piernas crecen
desmesuradamente, y las
personas afectadas pueden
sobrepasar los 2,4 m de
altura.

Acromegalia
Causas: tumor aparecido
después del crecimiento
completo de los huesos.
Síntomas: cara larga,
mandíbulas
prominentes y pies y mano
grandes.
Bocio

Causas: déficit de yodo.


Síntomas: crecimiento
anormal de la glándula Hipertiroidismo
Hormonas tiroideas tiroides.
Producidas en la Causas: aumento de
glándula Cretinismo producción
tiroides
Causas: ausencia Síntomas: aumento de la
congénita de tiroxina. / El tasa metabólica
yodo es un componente (nerviosismo, irritabilidad...).
esencial para la
síntesis de la tiroxina; su
ausencia bloquea su
producción y produce
déficit de tiroxina.

Trabajo final Página 31


ENDOCRINOLOGIA

Síntomas: retraso físico y


mental (un enfermo adulto
alcanza una edad mental
de 4 años), estatura corta,
escoliosos, abdomen
en péndulo, extremidades
deformadas, facciones
toscas, y pelo escaso y
aspero.
Hormona Tetania
paratiroides
Parathormona Causas: alteración de
Producida en la determinados iones Hipercalcemia (cantidad
glándula sanguíneos, excesiva de calcio en la
Paratiroides especialmente cuando sangre)
existe hipocalcemia
(huesos débiles y
quebradizos).
Síntomas: accesos de
contracción tónica de los
músculos.
Diabetes mellitus

Insulina Causas: En un diabético,


Producida por el hay un déficit en la
páncreas, glándula cantidad de insulina que Hiperglucemia (exceso de
de secreción mixta produce el páncreas, o glucosa en la sangre).
una alteración de los
receptores de insulina de
las células, dificultando el
paso de glucosa.
Síntomas produce un
aumento de los llamados
cuerpos cetónicos en la
sangre, cuyo PH se torna
ácido interfiriendo con la
respiración

Enfermedad de Addison
Enfermedad de Cushing
Hormonas Causas: Puede Causas: el edema confiere
corticosuprarrenale desarrollarse tras una al rostro el aspecto de una
s infeccióngrave como la Luna llena; se acumula
Producidas por las tuberculosis, tras grasa en el tronco; aumenta
cápsulas sangrado masivo en las la concentración de glucosa
suprarrenales suprarrenales, o tras en sangre.
cirugía ablativa de las
glándulas, como la
realizada para extirpar un
tumor.

Trabajo final Página 32


ENDOCRINOLOGIA

Síntomas: la secreción
insuficiente de la hormona
corticosteroide, origina
debilidad y astenia,
pérdida de peso, baja
tensión arterial,
desequilibrio iónico,
alteraciones
gastrointestinales,
hipoglucemia en sangre,
depresión e irritabilidad.

Metodología para la determinación de hormonas

Los exámenes de sangre o de orina para determinar los niveles de cualquiera


de las diferentes hormonas en el cuerpo, incluyendo las hormonas
reproductivas, las tiroideas, las suprarrenales, las pituitarias y muchas otras.
Los exámenes de hormona(s) específica(s) dependen de la causa del trastorno
que se sospeche o de los síntomas en cuestión.

Análisis que se pueden realizar

• 5-HIAA • Cortisol en orina


• 17-OH progesterona • Sulfato DHEA
• 17-hidroxicorticosteroides • FSH
• 17-cetosteroides • Hormona del crecimiento
• Tasa de excreción de • HCG (cualitativa en suero)
aldosterona urinaria en 24 • HCG (cualitativa en orina)
horas • HCG (cuantitativa)
• 25-OH Vitamina D • Prueba de insulina
• Análisis de ACTH • LH
• Prueba de estimulación de • Respuesta de la LH a la
Análisis de ACTH (cortrosin) GnRH
• prueba de supresión de • Parathormona
Análisis de ACTH • Renina
• ADH • Pregnandiol
• Análisis de Aldosterona • Progesterona en suero
• Calcitonina • Prolactina
• Catecolaminas en sangre • Péptido semejante a la PTH
• Catecolaminas en orina • RT3U
• Nivel de cortisol

Trabajo final Página 33


ENDOCRINOLOGIA

• Prueba de estimulación de
secretina
• Serotonina
• Análisis de T3
• Análisis de T4
• Testosterona
• TSH

INTRODUCCION

En la actualidad, mediante las técnicas de unión se realizan cotidianamente la


detección de hormonas así como también de otro tipo de biomoléculas que se
encuentran en cantidades muy pequeñas en fluídos biológicos. Son varias las
técnicas de unión, algunas de éstas son: los inmunoanálisis, el ensayo de
enlace competitivo con proteína transportadora y el ensayo de unión con
receptor. La técnica que frecuentemente se ha utilizado es el
radioinmunoanálisis. A partir de 1960,año en que Yalow y Berson dieron a
conocer esta técnica, otros grupos de investigación la han desarrollado aún
más. Sin embargo los principios teóricos sobre los que se fundamenta
hanpermitido el avance de técnicas derivadas de la misma como el
enzimoinmunoanálisis, fluoroinmunoanálisis y viroinmunoanálisis.

RADIOINMUNOENSAYO

El Radioinmunoensayo (o abreviado RIA del inglés Radioimmunoassay) es


tipo de inmunoensayo o método radioinmunométrico que se basa en la
formación específica de los complejos Antígeno-Anticuerpo (Ag-Ac) lo que le
dota de una gran especificidad unido a la sensibilidad de los métodos
radiológicos. La técnica ha sido prácticamente reemplazada por el método
ELISA el cual mide la unión Ag-Ac mediante colorimetrías en lugar de
radiometrías. Casi todas las moléculas pueden ser antigénicas y esto se usa
para que los anticuerpos puedan unirse a esa molécula y marcarla
radiactivamente. Una buena manera de provocar que una molécula sea
antigénica está basada en que un hapteno combinado con un coadyugante da
respuesta inmune. Un coadyugante muy usado es la Albúmina de suero bovino
(BSA) por lo que al conjugar un hapteno con BSA e introducirlo en otra especie
aparecerán Anticuerpos contra el hapteno.
El RIA, como un ejemplo de los ensayos de unión, también se le ha
denominado ensayo de saturación, análisis de desplazamiento, análisis
deenlace insaturado, análisis de fracción no enlazada, radioensayo de dilución,
análisis competitivo, radioensayo de enlace competitivo y ensayo
inmunoradiométrico.

Trabajo final Página 34


ENDOCRINOLOGIA

La naturaleza de esta metodología ha permitido que se le asignen tales


nombres. Todos los ensayos de unión, se caracterizan por estar constituidos
por tres componentes básicos, la molécula enlazadora (ligador o unidor), la
molécula que se desea enlazar (analito o ligando) y otro ligando marcado
(trazador). En la actualidad algunas técnicas de unión marcan al ligador en vez
del ligando; en cualquier caso siempre está presente el trazador ya sea como
ligando o ligador.
La molécula ligadora debe ser capaz de unirse únicamente con aquella que
interesa medir. Es decir debe ser específica. Además la unión tiene que ser
Suficientemente estable, propiedad que se le denomina afinidad (6). Esto
permite al unidor enlazarse con un tipo de molécula a pesar de existir varias
moléculas estereoquímicamente semejantes. Cuando se utilizan anticuerpos
como ligadores, el análisis recibe el nombre de inmunoanálisis.; si es un
receptor se llama .ensayo receptor. o si es una proteína transportadora, se
denomina ensayo de proteína de enlace competitivo. (CPBA) Se han diseñado
análisis de unión que emplean en cada caso uno de estos unidores, sin
embargo, el principal obstáculo para hacer práctico estos ensayos es la
carencia de altas cantidades del unidor que presenten elevada afinidad y
especificidad. Por esta razón se utilizan principalmente anticuerpos policlonales
o monoclonales. Los primeros se producen en altas cantidades a través de la
inmunización activa de conejos, cuyos, borregos, caballos o gallinas.
Los anticuerpos monoclonales se obtienen por la fusión de plasmacitoma con
linfocitos B de algún animal inmunizado previamente. Los hibridomas
resultantes forman clonas que producen un tipo de inmunoglobulinas dirigidas
hacia un específico determinante antigénico. Una ventaja adicional que tiene la
utilización de estos anticuerpos es la posibilidad de seleccionarlos por tecnicas
de union.

Técnicas de unión.
La afinidad y especificidad hacia cada uno de los determinantes antigénicos y
no contra todos aquellos que constituyen el inmunógeno .
Cuando la sustancia que interesa medir es una hormona, droga o metabolito
presente en el fluido biológico, recibe el nombre de ligando y es la molécula
que no está marcada. A ésta se le llama ligando .frío.. El trazador es el
mismo ligando, pero marcado, ya sea con radioisótopo, enzima, virus o
compuesto fluorescente. La marca sirve para detectar el complejo de unión
formado entre el ligando de la muestra biológica con el ligador. Originalmente
se usó como marca al yodo radiactivo 131 (I-131) y al tritio (H-3). Sin embargo
la baja eficiencia del conteo de la radiación emitida y el efecto de la extinción
del centelleo ha originado que se sustituyan por yodo-125, que no presenta las
desventajas anteriores. Las técnicas de unión que utilizan como componentes
a anticuerpos y ligandos radiactivos son los RIA. Por otro lado, si la marca
es una enzima que mediante la reacción con el sustrato específico produce
color, el cual se detecta por absorción de luz, entonces se llama
enzimoinmunoanálisis (EIA). Los viroanálisis utilizan a virus como marca y los
fluoroinmunoanálisis (FIA) compuestos

Trabajo final Página 35


ENDOCRINOLOGIA

METODO DE ELISA

PRINCIPIO DEL FUNCIONAMIENTO DEL KIT

Se presenta una placa recubierta de un anticuerpo (de hormona, corticoide,


beta-agonista… dependiendo del análisis que llevemos a cabo). Los
estándares (controles positivos y negativos de dichas sustancias) y las
muestras son añadidos a sus pocillos correspondientes e incubados durante un
período de tiempo determinado a temperatura ambiente. Posteriormente se
añade un marcador enzimático e incubado durante un tiempo. Transcurrido
éste, los pocillos son lavados, se añade un substrato enzimático y el
cromógeno, que permitirá una reacción de color. Después del período de
incubación, indicado en cada Kit, se añade una solución de paro de la reacción
y se lee la placa en el lector de microplacas a una determinada longitud de
onda pudiendo así interpretar los resultados por comparación con los
estándares

FUNDAMENTOS Y TIPOS DE ELISA


El ELISA se basa e el uso de antígenos o anticuerpos marcados con una
enzima, de forma que los conjugados resultantes tengan actividad tanto
inmunológica como enzimática. Al estar uno de los componentes (antígeno o
anticuerpo) marcado con una enzima e insolubilizado sobre un soporte
(inmunoadsorbente) la reacción antígeno-anticuerpo quedará inmovilizada y,
por tanto, será fácilmente revelada mediante la adición de un substrato
especifico que al actuar la enzima producirá un color observable a simple vista
o cuantificable mediante el uso de un espectrofotómetro o un colorímetro.

Los diferentes tipos de ELISA son los que se enumeran a continuación:


• Anticuerpos marcados:
1. ELISA Directo
2. ELISA Indirecto
3. ELISA sándwich
4. Doble (DAS)
5. Heterólogo (HADAS)
• Antígeno marcado
1. ELISA competitivo

ELISA Directo.
Consta de las siguientes etapas:
• Fijación al soporte insoluble (“tapizado”) de antígenos específicos. Lavado
para eliminar los antígenos fijados deficientemente o no fijados.
• Adición de anticuerpos marcados (“conjugados”) con una enzima; si los
anticuerpos reaccionan con los antígenos, el complejo quedará solubilizado.
Lavado para eliminar los anticuerpos marcados que no hayan reaccionado.
• Adición de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima
marcadora. Se puede parar la reacción si se desea.
• Lectura visual o colorimétrica del producto final coloreado.

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ENDOCRINOLOGIA

ELISA Indirecto.

Consta de las siguientes etapas:


• Fijación al soporte insoluble de antígenos específicos para los anticuerpos
objeto de estudio. Lavado para eliminar los antígenos fijados deficientemente o
no fijados.
• Adición del suero problema, de tal forma que sus anticuerpos reaccionarán
específicamente con los antígenos fijados al soporte. Lavado para eliminar los
anticuerpos marcados que no hayan reaccionado.
• Adición de anti-anticuerpos conjugados con una enzima, los cuales
reaccionan con los anticuerpos específicos añadidos en el paso anterior y que
se encuentran fijados a los antígenos. Lavado para eliminar los anti-anticuerpos
marcados que no hayan reaccionado.
• Adición de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima
marcadora. Se puede parar la reacción si se desea.
• Lectura visual o colorimétrica del producto final coloreado.

Pasos generales de un ELISA.


1. Tapizado del pocillo con el antígeno o anticuerpo.
2. Adición de la muestra problema con la mezcla de antígenos o anticuerpos.
3. Unión del antígeno o anticuerpo específico al anticuerpo o antígeno tapizado
en el pocillo
4. Lavado del pocillo para eliminar el exceso de antígeno o anticuerpo no unido
5. Adición del anticuerpo secundario marcado con la enzima
6. Unión del anticuerpo secundario al antígeno o anticuerpo
7. Lavado del pocillo para eliminar el exceso de enzima no unida
8. Adición del substrato
9. Unión del substrato a la enzima
10. Desarrollo del color

ELISA Sándwich “DAS” (Double Antibody Sandwich).


Consta de las siguientes etapas:
• Fijación al soporte insoluble de anticuerpos específicos del agente patógeno a
detectar. Lavado para eliminar los anticuerpos fijados deficientemente o no
fijados.
• Adición de la muestra problema (extracto vegetal, sangre, suero, plasma,
etc.), de tal forma que si está presente el agente patógeno de diagnóstico
(antígeno), reaccionará específicamente con los anticuerpos fijados al soporte.
Lavado para eliminar los antígenos que no hayan reaccionado y los restos de la
muestra no fijados.
• Adición de anticuerpos específicos del antígeno a detectar (deben tener un
epítopo diferente de los anticuerpos con los que se han tapizado el soporte)
conjugados con una enzima, los cuales reaccionan con los antígenos añadidos
con la muestra problema y que se encuentran fijados a los anticuerpos. Lavado
para eliminar los anticuerpos marcados que no hayan reaccionado.
• Adición de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima
marcadora. Se puede parar la reacción si se desea.
• Lectura visual o colorimétrica del producto final coloreado.

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ENDOCRINOLOGIA

ELISA Sándwich “HADAS”.


Consta de las siguientes etapas:
• Fijación al soporte insoluble de anticuerpos específicos del agente patógeno a
detectar. Lavado para eliminar los anticuerpos fijados deficientemente o no
fijados.
• Adición de la muestra problema (extracto vegetal, sangre, suero, plasma,
etc.), de tal forma que si está presente el agente patógeno de diagnóstico
(antígeno), reaccionará específicamente con los anticuerpos fijados al soporte.
Lavado para eliminar los antígenos que no hayan reaccionado y los restos de la
muestra no fijados.
• Adición de anticuerpos específicos del antígeno a detectar (deben tener un
epítopo diferente de los anticuerpos con los que se han tapizado el soporte),
los cuales reaccionan con los antígenos añadidos con la muestra problema y
que se encuentran fijados a los anticuerpos. Lavado para eliminar los
anticuerpos que no hayan reaccionado.
• Adición de anticuerpos conjugados con una enzima anti-anticuerpos
empleados en el paso anterior. Lavado para eliminar los anti-anticuerpos
marcados que no hayan reaccionado.
• Adición de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima
marcadora. Se puede parar la reacción si se desea.
• Lectura visual o colorimétrica del producto final coloreado.

ELISA Competitivo.
Consta de las siguientes etapas:
• Fijación al soporte insoluble de anticuerpos específicos del agente patógeno a
detectar. Lavado para eliminar los anticuerpos fijados deficientemente o no
fijados.
• Adición en concentración conocida de una mezcla de antígenos del
anticuerpo utilizado en el paso anterior, marcados con una enzima y antígenos
desconocidos objeto de estudio. Paralelamente, añadir únicamente antígenos
del anticuerpo usado en el paso anterior, marcados con una enzima. Lavar
para eliminar los antígenos que no hayan reaccionado.
• Adición de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima
marcadora. Se puede parar la reacción si se desea.
• Lectura visual o colorimétrica del producto final coloreado de ambas pruebas
y comparar los resultados. Si las lecturas de ambas pruebas son análogas, el
antígeno a estudio no tienen nada que ver con los anticuerpos empleados para
tapizar el soporte. Si hay diferencia en las lecturas de ambos pocillos, el
antígeno objeto de estudio, está relacionado serológicamente con el anticuerpo
empleado para tapizar el soporte y la diferencia de densidad óptica, es
proporcional a la concentración del antígeno problema en la muestra.

Todos los tipos de ELISAs descritos se pueden resumir en dos grandes grupos:
• ELISAs para detectar antígenos: ELISAs sándwich.
• ELISAs para detectar anticuerpos: ELISAs indirectos.

La fase sólida debe ser de un tipo que permita un fácil manejo (especialmente
en los procesos de lavado) y la reproducibilidad de la unión de antígenos o
anticuerpos sobre su superficie. Las microplacas de 96 pocillos y un volumen
de 350μL son especialmente ventajosas para procesar un elevado número de

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ENDOCRINOLOGIA

muestras y un vez tapizadas, el material inmovilizado permanece reactivo


mucho tiempo siempre que se mantenga seco y a baja temperatura.
Normalmente se utilizan microplacas de poliestireno de fondo plano que
pueden adquirirse estériles y con o sin tapa.

Microplacas de poliestireno de 96 pocillos


Las técnicas de ELISA se realizan mediante la adición secuencial de todos los
reactivos necesarios separados por etapas de lavado. Cada una de las
operaciones puede realizarse manualmente con micropipetas o con
equipamiento para la automatización de todas y cada una de las etapas.
Esta completa automatización se justifica por la necesidad de procesar y
analizar un gran número de muestras y necesitar una elevada repetibilidad de
resultados.
1. Lavador de placas de 96 pocillos
2. Lector de placas de 96 pocillos

1) 2)

Adsorción de antígenos y anticuerpos (“tapizado”).

Los métodos empleados son dos fundamentalmente:


• Dilución del antígeno o anticuerpo en tampón carbonato (pH 9,6) e incubación
posterior durante 3h a 37°C o 16h a 4°C.
• Tratamiento a 40-50°C en tampón fosfato (PBS) o en agua fisiológica
tamponada pH 7,2-7,4 hasta desecación.
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ENDOCRINOLOGIA

Solución de lavado.
Solución salina con Tween 20 como agente tensioactivo:
ClNa ................................................... 8,5gr
Tween 20 ........................................... 0,5mL
Agua destilada .................................... 1000mL

Conjugados.
La enzima escogida como marcador debe unirse fácilmente a antígenos y
anticuerpos, encontrarse en estado puro a un precio razonable y tener un
substrato cromogénico o fluorogénico conveniente y de fácil preparación. Las
enzimas más utilizadas son fosfatas alcalina, peroxidasa de rábano y ß-
galactosidasa; a continuación se muestra una tabla con las ventajas y
desventajas de cada una así como los substratos que se emplean con cada
una de ellas.
Las operaciones de marcado o conjugación, llevan implícitas dos etapas:
• Purificación de los anticuerpos a partir de un antisuero bruto mediante una
precipitación generalmente salina de las proteínas del antisuero, seguida de
una diálisis y purificación de la fracción de anticuerpos mediante filtración
molecular, cromatografía o separación en gradiente de densidad mediante
ultracentrifugación. Finalmente, se suele concentrar los anticuerpos purificados
y ajustarlos a una dosis de 1mg/mL.
• Marcado de los anticuerpos con la enzima mediante el uso de un agente
puente que normalmente suele ser el glutaraldehído o el del mperiodato sódico
(apenas existen diferencias entre ellos en cuanto a los resultados finales).

Trabajo final Página 40


ENDOCRINOLOGIA

Trabajo final Página 41


ENDOCRINOLOGIA

Actualmente existe otra posibilidad para sustituir el conjugado anti-especie para


la detección de IgGs y es la utilización de proteína A o G a. Aquella dilución del
conjugado que produzca menor reacción inespecífica del conjugado aún a
costa de aumentar el tapizado. de la parada de la H o tanto, el método de
detección de los complejos antígeno-anticuerpoy así tenemos sistemas de
detección colorimétricos, fluorescentes y luminiscentes que a continuación
pasamos a desarrollar: marcadas con peroxidasa.
Una vez se disponga del conjugado debe ser conservado hasta el momento de
su utilización; esta conservación se suele realizar mediante liofilización,
congelación a –70°C o filtrado estéril y conservación a -20°C mezclado con
igual volumen de glicerol bidestilado estéril.
La búsqueda de la concentración óptima de uso depende ligeramente del tipo
de ELISA empleado; para cualquier ELISA que utilice antianticuerpos
conjugados, se suele probar diferentes diluciones del conjugado (desde 1:100
hasta 1:2000) frente a sucesivas diluciones de antisuero en placas tapizadas
con antígeno a concentración idóne (menor color de fondo o “background”) con
muestras negativas e implique una clara distinción de las muestras positivas,
será la óptima. La elección de una concentración de conjugado óptima va
completamente ligada a planteamientos económicos en los que se ha de
procurar el mayor ahorro La elección del substrato es de gran importancia para
la estandarización del método ELISA y hay que tener varios factores en cuenta,
como son sensibilidad, especificidad, repetibilidad, facilidad de lectura y
complejidad de preparación, así como estabilidad después de la reacción. hoy
en día existen muchas variaciones en cuanto a los substratos y, por la cual da
lugar a productos de reacción solubles o necesario la utilización de un
substrato que tenga una tasa de reacción “lenta” (15- alizar ensayos cinéticos
de la reacción

COLORIMETRIA . Los ensayos colorimétricos dan un producto de reacción


coloreado que absorbe luz en el espectro visible, siendo la densidad óptica
(DO) del mismo proporcional a la cantidad de producto medido.
Para todos los ensayos enzimáticos, la etapa final es la adición del substrato
enzimático, el insolubles y es elegido por su rendimiento cuantitativo de
producto de reacción. Para ensayos colorimétricos, la tasa de desarrollo de
color es proporcional, dentro de un cierto rango, a la cantidad de conjugado
enzimático presente.
Tanto la peroxidasa como la fosfatasa alcalina, tienen substratos que dan
productos de reacción coloreados solubles. La decisión de qué substrato es el
mejor para cada tipo de ensayo, depende de la sensibilidad deseada, los
requerimientos de tiempo y el sistema de detección que se vaya a utilizar. Para
ensayos que necesitan ser muy sensibles, el substrato ideal debe producir
color intenso con una tasa de reacción muy rápida; sin embargo, para ensayos
que requieren un rango dinámico amplio, son deseables substratos que den
producto de reacción en un período de tiempo largo(15-30 minutos) y den un
rango de intensidad de color amplio, dependiendo de la cantidad de muestra
presente.
Para ensayos que se vayan a parar (se vaya a añadir a la reacción, tras una
cantidad de tiempo definido, un inhibidor químico que pare el desarrollo de
color y permita la detección dentro de un período razonable de tiempo), 30

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ENDOCRINOLOGIA

minutos hasta su finalización; sin embargo, cuando se vayan a reyenga una


tasa de reacción “rápida” (5 minutos o menos).
Aunque muchos son los factores que afectan la medida de la actividad
enzimática (temperatura, pH, fuerza iónica, composición del tampón, reducción
del substrato, formación de productos inhibidores, feed-back por formación del
producto final, desnaturalización de la enzima y, en ie del pocillo (donde la
enzima está localizada) y el lector no estará midiendo la verdadera DO del
pocillo. Cuando sí se mezcla, ele los lectores de microplaca llevan incorporados
• s colorimétricos; la enzima convierte el substrato presente. El substrato
debería ser estable a temperatura ambiente y en presencia de luz. Asimismo, el
producto de la y utilizar algunos casos, exposición a la luz), los que más
afectan al ensayo, hoy en día, son el tiempo de reacción, la temperatura y la
exposición a la luz.
Antes de leer la DO y/o tras la adición de la solución de parada, es importante
mezclar completamente el contenido de los pocillos para asegurar el cese por
completo de la reacción (ensayos de punto final solamente) y la total dispersión
del producto de color. La precisión del ensayo puede ser drásticamente
mejorada añadiendo este simple paso al protocolo. El efecto físico que la
agitación de la placa antes de la lectura tiene en la DO resultante es muy
importante. Los colorímetros de microplaca solamente leen el centro exacto del
pocillo, lo cual implica que una placa no agitada tendrá pocillos que se
asemejarán más al formato “A” de la figura, ya que, debido a que la disolución
del producto de la reacción es lenta, si no es mecánicamente agitada o
mezclada, el producto coloreado de la reacción estará concentrado en la
superficie producto coloreado es completamente homogeneizado en el pocillo
(formato “B” de la figura), y el lector detectará la verdadera DO del pocillo.
Hay varias formas de realizar esta mezcla: hay agitadores de microplaca para
2-4 placas a la vez, de tal manera que esas placas puedan ser agitadas en
grupo antes de ser introducidas en el lector; hoy día, muchos, si no la mayoría,
d
agitadores que permitan que las placas sean homogeneizadas justo antes de
ser leídas. Ambos métodos (agitadores internos o externos), cuando son
usados correctamente, pueden tener efectos positivos en la precisión del
ensayo.
FLUORESENCIA . Los inmunoensayos de fluorescencia (ELFIA) son una
simple variación de lo en un producto de reacción que emite fluorescencia
cuando es excitado a una determinada longitud de onda, siendo las unidades
relativas de fluorescencia (fotones de luz emitidos) proporcionales a la cantidad
de producto analizado.
En comparación con los métodos colorimétricos, los ensayos de fluorescencia
son ligeramente más sensibles y, lo que es más importante, amplían el rango
de medida, en oposición al límite de 2,0-4,0 DO impuesto en los ensayos
colorimétricos.
Un substrato fluorogénico es elegido por la cantidad de luz emitida tras su
excitación, la cual debería ser proporcional a la cantidad de conjugado
enzimático presenta reacción enzima-substrato debería tener distintas
longitudes de onda de emisión y de excitación, ya que el substrato, por si
mismo, no debería ser fluorescente.
Los ensayos fluorimétricos están sujetos a distintos problemas que reducen o
aumentan la señal inespecíficamente. La detección por fluorescencia es

Trabajo final Página 43


ENDOCRINOLOGIA

susceptible a cambios en el pH, temperatura, concentración iónica,


concentración de detergente, secado, y a la matriz sólida, lo cual puede
conducir a distorsión de luz, un elevado background, y fenómenos de
“apagamiento” y/o “blanqueamiento”. El fenómeno de “light scattering”
(dispersión de luz) está ocasionado porque la luz emitida rebota cuando entra
en contacto con moléculas, partículas en suspensión o la superficie de la
microplaca. Por esta razón, es importante eliminar las burbujas que se puedan
formar en los pocillos
reactivos químicos de elevado grado de pureza. Las placas negras opacas y
las tiras de la más alta calidad están diseñadas para reducir esta dispersión de
luz, ya que absorben la luz que rebota en la superficie del pocillo y solamente
se mide la luz dirigida hacia el detector.
El “background” (fluorescencia de fondo) y/o la autofluorescencia son el
principal problema para la realización de ensayos en placas de 96 pocillos. Las
fuentes de este background son los propios componentes de la muestra
(hemoglobina, bilirrubina, partículas de celulosa, drogas), los componentes de
los diluyentes (iones metálicos), el material de la placa (tipo de plástico
utilizado) y la contaminación variable (partículas de polvo, huellas digitales). El
background puede ser eliminado de tres formas: mediante el diseño del ensayo
(dilución de la muestra para ensayos homogéneos y filtrado de los reactivos a
través de una membrana de 0,45μm para ensayos heterogéneos), mediante
la instrumentación y mediante una estricta limpieza. El fenómeno de
“apagamiento” (“quenching”) se caracteriza por una reducción inespecífica de
la señal y es causado por la absorción de la emisión por el oxígeno disuelto,
por lo que los reactivos pueden ser desgasificados pueden distorsionar las
lecturas de fluorescencia incluyen las variaciones de temperatura, la estabilidad
de la fuente permitido aumentar la versatilidad asociada con el diseño del
experimento, p.e., usando una variación del método estándar de ELISA.
� excitación se alcanza mediante luz de una determinada longitud de onda, es
decir, igual que en la fluorescencia.
uesto que emite luz al ser degradado, por ejemplo, perdura ambiente durante
todo el período que dure el ensayo, y debe ser elegido por su capacidad para
producir luz intensa en estado activado, por su capacidad exitacion
suspensación interna y mezcla dentro del propio lector, la simplicidad del
procedimiento, la elevada sensibilidad, la posibilidad de utilizan ndose lecturas
seriadas hasta encontrar el óptimo, que será aquel en el que se encuentre
mayor diferencia de color entre positivos y negativos de referencia. Las
reacciones enzimáticas colorimétricas siguen curvas del tipo del que se
muestra en la gráfica para muestras positivas y negativas, por lo que existe un
tiempo de lectura para el cual la diferencia colorimétrica entre muestras
positivas y negativas es máximo. antes de su utilización para eliminar este
efecto. El fenómeno de “blanqueamiento” (“bleaching”) o “decoloración”
(“fading”) está también caracterizado por una reducción en la señal, pero está
causado por un exceso en el tiempo de excitación. Actualmente, no suele ser
un
problema debido a la baja energía y corto tiempo de excitación de los
fluorímetros actuales.
Otras interferencias que de luz y el ancho de la banda de excitación. La
fluorescencia aumenta cuando disminuye la temperatura, por lo que es
importante mantenerla constante en cada ensayo y entre diferentes ensayos,

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ENDOCRINOLOGIA

ya que, pequeñas variaciones de un ensayo a otro, pueden ocasionar cambios


en la sensibilidad del mismo.
Muchos de los plásticos usados para fabricar placas y tiras son
autofluorescentes; por ello, es importante elegir una placa que esté fabricada
específicamente para fluorescencia. Estas placas normalmente son negras
(aunque las blancas pueden ser usadas para compuestos fluorescentes que
emitan luz a longitudes de onda más altas), ya que se reduce
significativamente el background (no son autofluorescentes y absorben la luz
dispersada) y se eliminan, prácticamente, las contaminaciones cruzadas. Estas
placas negras pueden tener fondo opaco o transparente. Las de fondo
transparente se utilizan normalmente para ensayos fluorescentes basados en
células, lo cual permite su visualización durante el crecimiento de las mismas,
al mismo tiempo que reducen la transmisión de luz lateral o la contaminación
cruzad durante la detección. Con la llegada de los fluorímetros para placas de
96 pocillos, que son capaces de efectuar lecturas desde el fondo o desde la
parte superior del pocillo, una placa de fondo transparente, se puede realizar
un ensayo doble en el que se utilice un anticuerpo marcado con peroxidasa
(detectado colorimétricamente con TMB) para la primera parte del ensayo, y
otro anticuerpo marcado con fosfatasa alcalina (detectado fluorimétricamente
con 4-MUP) para la segunda parte.

LUMINISCENCIA. Al igual que la fluorescencia, la luminiscencia es u su rato


en un producto que emite fotones en lugar de dar color visible. La luminiscencia
se describe como la emisión de luz por parte d una sustancia, que regresa
desde un estado electrónicamente excitado a su estado original. Las diferentes
formas de luminiscencia difieren precisamente, en la forma en que se alcanza
dicho estado excitado:
Fotoluminiscencia: la excitación mediante luz de una determinada longitud de
onda, es decir, igual que en la fluorescencia.
Bioluminiscencia: la excitación se alcanza mediante la utilización de un
compuesto luciferina o luciferasa.

QUIMIOLUMINISCENCIA

QUIMIOLUMINISCENCIA: la excitación se alcanza mediante una reacción


química.

Actualmente, es el método disponible más sensible debido a la posibilidad de


multiplicación y amplificación de la señal. Las reacciones de luminiscencia se
miden en RLU (Unidades Relativas de Luz), que son típicamente
proporcionales a la cantidad de muestra presente.
El substrato luminiscente debe ser estable a temperatura
baja luminiscencia de fondo en estado basal (“background)
de emitir luz estable durante un período prolongado de tiempo (minutos) y por
su disponibilidad comercial (calidad y consistencia).
Existen dos métodos de detección de luminiscencia:
FLASH: es inestable en la Naturaleza y alcanza una intensidad máxima de luz
en segundos o milisegundos, por lo que es necesario comenzar la reacción
mientras los reactantes están frente al sistema de detección (fotomultiplicador).

Trabajo final Página 45


ENDOCRINOLOGIA

Es de capital importancia que el intervalo de tiempo transcurrido entre la


adición de los reactivos y el proceso de detección sea siempre constante.
GLOW: consiste en una serie de estados transitorios secuenciales que originan
una señal constante. La luz emitida, a diferencia del color o la fluorescencia, no
se acumula, por lo que la ésta debe ser intensa y la reacción enzimática
prolongada para obtener suficiente señal.
Los aspectos positivos de este tipo de luminiscencia son: la reacción puede ser
iniciada fuera del aparato de detección, por lo que se elimina la necesidad de
incrementar la señal y que el procedimiento es muy adecuado para sistemas de
placas de 96 pocillos. Además, este tipo de reacción luminiscente puede ser
medido usando un luminómetro, capturando la imagen en una película
fotográfica o mediante sistemas de análisis de imagen.
Aunque en teoría estas reacciones son estables durante al menos 20 minutos,
los resultados entre pocillos y entre diferentes placas son más homogéneos
cuando el tiempo de incubación enzima-substrato es corto (se recomienda
efectuar un período de estabilización de 2 minutos tras la adición del substrato
y entonces leer inmediatamente las placas).
Elegir la mejor placa para luminiscencia es crucial para desarrollar un ensayo
fiable, y ésta ha de estar diseñada específicamente para luminiscencia.
Habitualmente son blancas y opacas, con el fondo transparente u opaco;
ambas versiones están diseñadas para reducir contaminación cruzada y el
background ocasionado por la composición de la resina blanca. Las placas con
fondo transparente s habitualmente para ensayos luminiscentes basados en
células, tales como ensayos de proliferación celular, ya que permiten la
visualización de las células durante su crecimiento y también previenen de la
transferencia lateral de luz entre pocillos durante el paso de detección.
También son útiles para ensayos dobles con un producto colorimétrico para un
primer análisis y otro luminiscente para un segundo.
Finalmente, se debe optimizar el tiempo de incubación, realizá Variación de la
absorbancia en función del tiempo para muestras positivas y negativas y
tiempo óptimo de lectura o parada de la reacción.
\
Lectura e interpretación de los resultados.
La lectura de los resultados puede ser valorada tanto visual como
colorimétricamente. A simple vista, pueden ser leídos ciertos ensayos rutinarios
en los que no haga falta una cuantificación y no se presenten abundantes
casos dudosos (el ojo humano no es capaz de discernir una variación de 0,1 de
densidad óptica) ya que dicha lectura visual tendrá el inconveniente de la
subjetividad y el de diagnosticar equivocadamente los casos límite. No
obstante, evita la adquisición de aparatos relativamente costosos como son los
lectores de microplacas.
Una de las grandes ventajas de la técnica ELISA es la posible automatización
de la lectura y, por lo tanto, su objetividad. Dicha automatización se puede
conseguir con un simple colorímetro o espectrofotómetro de cubeta o con
sofisticados equipos de lectura automática de microplacas.
Los resultados finales de la lectura colorimétrica se reflejan numéricamente
mediante valores de absorbancia o densidad óptica que se obtendrán a la
longitud de onda más adecuada para la coloración final alcanzada.
Aplicaciones del ELISA.
1. Patología Animal

Trabajo final Página 46


ENDOCRINOLOGIA

2. Enfermedades producidas por parásitos


3. Babesias y tripanosomas
4. Toxocara canis
5. Toxoplasmosis
6. Triquinosis
7. Enfermedades producidas por Micoplasmas
8. Enfermedades producidas por bacterias
9. Mycobacterium tuberculosis
10. Brucelas
11. Enterotoxinas Vibrio cholerae
12. Estreptococos
13. Salmonelas
14. Enfermedades producidas por virus
15. Enfermedad de Aujeszky
16. Enfermedad de Newcstle
17. Fiebre aftosa
18. Leucemia felina
19. Peste porcina africana
20. Peste porcina clásica
21. Rinotraqueitis infecciosa
22. Rotavirus
23. Artritis vírica
24. Otras aplicaciones
25. Hormonas
26. Gonadotropina coriónica
27. Progesterona
28. Testosterona
29. Hormonas tiroideas
30. Cuantificación de inmunoglobulinas
31. IgG
32. IgE
33. IgA
34. Inmunopatología
35. Anticuerpos anti-DNA
36. Factor reumatoide
37. Inmunocomplejos circulantes
38. Patología Vegetal
39. Enfermedades producidas por virus
40. En frutales
41. PPV
42. CLSV
43. TRSV
44. En cítricos
45. CTV
46. En patata
47. PLRV
48. PVY
49. PVX
50. PVA
51. TRV

Trabajo final Página 47


ENDOCRINOLOGIA

52. En cereales
53. En guisante
54. En lúpulo
55. En soja
56. En ornamentales
57. En plantas hortícolas
58. Enfermedades producidas por bacterias
59. Enfermedades producidas por Micoplasmas
60. Enfermedades producidas por hongos

Determinación de beta-agonistas, corticosteroides y hormonas


anabolizantes en piensos y correctores minerales, suero sanguíneo,
orinas y pelo.
Realizamos un método analítico por el cual podemos detectar la presencia de
numerosas sustancias por la técnica ELISA, que consiste, en primer lugar, en
una homogeneización de la muestra, una purificación de la misma,
concentración del analito y finalmente en una aplicación al Kit. Paralelamente
se dopará una muestra exenta del metabolito/analito a detectar llamada
muestra fortificada que llevará el mismo proceso de extracción y que en caso
de no dar resultado positivo se realizará un método de confirmación por
CG/MS.
Efecto de los antitiroideos
Los antitiroideos son sustancias que inhiben la síntesis de hormona tiroidea
(tiroxina).
Se administran mezclados con el pienso durante 40 días antes del sacrificio de
los animales, por ello se conocen normalmente como “finalizadores cárnicos”.
Producen un síndrome de hipotiroidismo caracterizado por apatía,
engrosamiento de la piel, edemas subcutáneos duros, retención de agua,
hipertrofia tiroidea y a veces cardiaca, debilidad muscular y un rápido aumento
de peso.
El empleo de estas sustancias constituye un auténtico fraude ya que la
ganancia ponderal se debe a la retención hídrica en los tejidos muscular y
subcutáneo y a un aumento de la grasa subcutánea. La utilización de
antitiroideos como promotores del crecimiento animal está prohibida en la UE
desde 1981.
Determinación de tireostáticos en tiroides
Método analítico por el cual se puede detectar la presencia de determinados
tireostáticos por cromatografía líquida de alta resolución en la glándula tiroides.
El procedimiento consiste en homogeneizar la glándula tiroidal, someterla a un
ataque con un disolvente orgánico y purificar la muestra, obteniéndose así un
residuo que será llevado a un vial

cromatográfico para proceder a la identificación de sustancia mediante la


identificación de picos en función de su separación en un tiempo de retención y
longitud de onda determinados.

Trabajo final Página 48


ENDOCRINOLOGIA

BIBLIOGRAFIA

• ↑ Apuntes de Fisiopatología de Sistemas

• a b
2.4.7. Tirotropina. Hormona estimulante del tiroides - N3: Participación
Funcional - psicobiologia net

• Catedra de Fisiopatología de la Universidad Nacional Experimental


Romulo Gallegos - San Juan de los Morros – Venezuela

• Patología General, semiología clínica y fisiopatología - J. García –Conde

Trabajo final Página 49


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http://www.cultek.com/inf/otros/soluciones/Soluciones-ELISA-
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http://www.revbiomed.uady.mx/pdf/rb95616.pdf

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