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Continúa el legado
de las columnas HPLC
Columnas HPLC
de ellas.
2
CORTECS
XBridge
XSelect
Atlantis
SunFire
Symmetry
XTerra
Waters Spherisorb
Nova-Pak
Resolve
Delta-Pak
µBondaPak/BondaPak
µPorasil/Porasil
3
Reducción de la contrapresión
Las columnas CORTECS reducen la contrapresión de trabajo, lo que
le permite analizar métodos con instrumentos LC convencionales
sin comprometer la eficacia ni la resolución. Además, se pueden usar
columnas más largas para mejorar la resolución de los picos que
Las columnas con partículas de núcleo sólido CORTECS® de 2,7 µm coeluyen en mezclas complejas de muestras.
maximizan la resolución y la capacidad de picos para todas las sepa-
raciones por LC y están optimizadas para incrementar el rendimiento Ventajas de las columnas CORTECS de 2,7 µm en cuanto a la eficacia
de los instrumentos HPLC. La innovadora tecnología de núcleo sólido
y la química enlazada que utilizan las columnas CORTECS le pueden Mejor eficacia de su clase
ayudar al proporcionar:
Eficacia (USP)
contrapresión sin sacrificar la eficacia
■■ Aumento de la sensibilidad: mejora de la relación señal-ruido CORTECS C18+, 2,7 μm
para las aplicaciones LC-MS Caudal 2,1 x 50 mm 0,17 0,35 0,52 0,69
C18 totalmente poroso, 2,5 μm
0,87
C18 de1,77
núcleo sólido
1,04
(mL/ 3,0 x 50 mm 0,35 0,71 1,06 1,41 2,12del competidor A, 2,6 μm
min) 4,6 x 50 mm 0,83 1,66 2,49 3,32 4,15 4,99
La selección de columnas CORTECS de 2,7 µm, tanto de fase reversa Es posible que las separaciones mostradas en las comparativas no sean
como de fases HILIC, le aportan flexibilidad para separar rápidamente representativas de todas las aplicaciones.
una amplia gama de clases de compuestos. La mejora de la eficacia
Las columnas CORTECS de 2,7 µm muestran una eficacia excelente si se comparan con
de las columnas con núcleo sólido CORTECS de 2,7 µm produce picos las columnas con partículas de núcleo sólido y totalmente porosas de tamaño similar.
mejor definidos y estrechos si se comparan con los que generan las Condiciones experimentales: columnas: 2,1 x 50 mm; fase móvil: agua/acetonitrilo
(25/75, v/v); temperatura de la columna: 30 ˚C; detección: UV a 254 nm; volumen de
columnas que utilizan substratos totalmente porosos; asimismo, le
inyección: 0,5 µL; compuestos: acenafteno (200 µg/mL), octanofenona (100 µg/mL).
permiten utilizar caudales más rápidos para poder incrementar la
velocidad de análisis de muestras.
Ventajas de las columnas CORTECS de 2,7 µm en cuanto a la
contrapresión
CORTECS C18+, 2,7 μm
C18, totalmente poroso, 2,5 μm
O O C18 de núcleo sólido del competidor A, 2,6 μm
Si Si
O
O
O C18 de núcleo sólido del competidor B, 2,7 μm
Presión de la columna (psi)
Tipo de ligando C18 trifuncional C18 trifuncional Ninguno Un 25% menos contrapresión
que la columna de partículas
Densidad del ligando 2,4 µmol/m2 2,6 µmol/m2 N/A de núcleo sólido de 2,6 µm
de la competencia
Carga de carbono 5,7% 6,6% No enlazada Caudal
(mL/
2,1 x 50 mm
3,0 x 50 mm
0,17
0,35
0,35
0,71
0,52
1,06
0,69
1,41
0,87
1,77
1,04
2,12
min) 4,6 x 50 mm 0,83 1,66 2,49 3,32 4,15 4,99
Velocidad lineal (cm/min)
Tipo de recubrimiento
Patentado Patentado Ninguno
final 2,1 x 50 mm 0,17 0,35 0,52 0,69 0,87 1,04
Caudal
3,0 x 50 mm 0,35 0,71 1,06 1,41 1,77 2,12
Clasificación USP L1 L1 L3 (mL/min)
4,6 x 50 mm 0,83 1,66 2,49 3,32 4,15 4,99
Rango de pH 2–8 2–8 1–5 Es posible que las separaciones mostradas en las comparativas no sean
Límite de temp. a representativas de todas las aplicaciones.
45 ˚C 45 ˚C 45 ˚C
pH bajo
Las columnas CORTECS de 2,7 µm consiguen reducir la contrapresión de trabajo en un
Límite de temp. a 25% sin sacrificar la eficacia. Condiciones experimentales: columnas: 2,1 x 50 mm;
45 ˚C 45 ˚C 45 ˚C
pH alto
fase móvil: agua/acetonitrilo (25/75, v/v); temperatura de la columna: 30 ˚C;
Diámetro de poro 90 Å 90 Å 90 Å detección: UV a 254 nm; volumen de inyección: 0,5 µL; compuestos: acenafteno
(200 µg/mL), octanofenona (100 µg/mL).
4
Aumento de la sensibilidad
La tecnología de superficie cargada mejora la forma de los picos y la carga de compuestos al usar fases móviles con baja fuerza iónica, tales como
las preparadas con ácido fórmico. La carga superficial permanente de bajo nivel usada durante el proceso de enlace del C18+ mejora la relación señal-
ruido al no tener que utilizar aditivos ni reactivos de par iónico que, de otro modo, afectarían negativamente a las aplicaciones LC-MS.
C18 de núcleo sólido de la competencia, 2,6 μm 1: SIR de 1 canal ES+ CORTECS C18+, 2,7 μm 1: SIR de 1 canal ES+
TIC (impureza adicionada al 0,1%) TIC (impureza adicionada al 0,1%)
Presiónmáx: 3250 psi Presiónmáx: 2750 psi
3,68e7 3,68e7
100
la relación S/N
0
0,4 0,6 0,8 1,0 1,2 1,4 1,6 min 0,4 0,6 0,8 1,0 1,2 1,4 1,6 min
(1) PDA, canal 1, 254 nm a 4,8 nm (1) PDA, canal 1, 254 nm a 4,8 nm
Rango: 8e-1 Rango: 1
4,0e-2
3,5e-2
5,0e-3
0,0
0,4 0,6 0,8 1,0 1,2 1,4 1,6 min 0,4 0,6 0,8 1,0 1,2 1,4 1,6 min
Es posible que las separaciones mostradas en las comparativas no sean representativas de todas las aplicaciones.
El análisis por HPLC-UV/MS de la imipramina, un antidepresivo básico de baja fuerza iónica, revela la presencia de una impureza de baja concentración. El uso de la columna
CORTECS C18+ de 2,7 µm, diseñada para utilizarse con fases móviles ácidas de baja fuerza iónica, da como resultado picos más estrechos y una mejor relación señal-ruido.
Condiciones de LC
Columnas: 3,0 x 50 mm
Fase móvil A: ácido fórmico al 0,1% en agua
Fase móvil B: ácido fórmico al 0,1% en acetonitrilo
Gradiente: del 25 al 35% de B en 4,6 minutos
Caudal: 0,8 mL/min
Temp. de la columna: 30 SDgrC
Detección: UV a 254 nm y ESI+ MS
Volumen de inyección: 10 μL
Compuestos
Imipramina (0,5 mg/mL)
Impureza adicionada al 0,1% (0,5 μg/mL)
5
Transferencia de métodos sencilla
Se puede usar una selección específica de 3 fases para separar una amplia gama de clases
de compuestos. Las fases enlazadas de fase reversa CORTECS C18 y C18+ proporcionan a los
técnicos en cromatografía un perfil de retención equilibrado de ácidos, bases y compuestos
neutros, mientras que la fase CORTECS HILIC ortogonal no enlazada ofrece una retención
superior de analitos polares. Gracias a tamaños de partículas que son compatibles con las
plataformas HPLC, UPLC® y UHPLC, cualquier método desarrollado puede transferirse de
forma óptima y sencilla sin que surjan limitaciones por el tamaño de partícula, la configura-
ción de la columna o el fabricante del instrumento.
0,01 3
4 Columna C: columna CORTECS C18 de 1 6 μm, 2,1 x 50 mm
0,00 5 Gradientes escalados geométricamente (es decir, los mismos volúmenes de
columna por paso de gradiente):
12,0 14,0 16,0 18,0 20,0 22,0 24,0 26,0 28,0 30,0 min Columna A: del 5 al 30% de B en 23,6 minutos y
del 30 al 90% de B en 14,8 minutos
Columna B: del 5 al 30% de B en 6,4 minutos y
CORTECS C18+, 2,7 μm, 4,6 x 75 mm
Caudal: 1,85 mL/min Transferencia a 2,7 µm del 30 al 90% de B en 4,0 minutos
Volumen de inyección: 4 μL Método 4 veces más rápido Columna C: del 5 al 30% de B en 2,5 minutos y
0,02
Sistema: Alliance® HPLC Dos veces menos eluyente del 30 al 90% de B en 1,6 minutos
Fase móvil A: ácido trifluoroacético al 0,1% en agua
UA
0,01
Fase móvil B: metanol al 85% en agua
0,00 Compuestos
1. Desciclopropilabacavir
3,5 4,0 4,5 5,0 5,5 6,0 6,5 7,0 7,5 8,0 min 2. Abacavir
3. 1R,4R trans-abacavir
4. o-(4-cloro-2,5-diaminopirimidina)-abacavir
CORTECS C18+, 2,7 μm, 4,6 x 75 mm
5. o-t-butilo-abacavir
Caudal: 1,85 mL/min Compatible con sistemas
0,02 Volumen de inyección: 4 μL HPLC, UHPLC y UPLC
Sistema: ACQUITY UPLC® H-Class
UA
0,01
0,00
3,5 4,0 4,5 5,0 5,5 6,0 6,5 7,0 7,5 8,0 min
0,01
0,00
1,8 2,0 2,2 2,4 2,6 2,8 3,0 3,2 3,4 3,6 min
Es posible que las separaciones mostradas en las comparativas no sean representativas de todas las
aplicaciones.
Se pueden escalar y transferir métodos desarrollados con columnas totalmente porosas de 5 µm a columnas
más cortas de 2,7 µm. Para mejorar aún más la eficacia y la productividad, se pueden usar columnas UPLC con
tamaños de partícula inferiores a 2 µm, lo que permite una mayor flexibilidad y reproducibilidad de métodos al
realizar la transferencia entre laboratorios de una misma organización o a socios con vinculación contractual.
www.waters.com/cortecs
6
[ENC ABEZADO INTERIOR DEL FOLIO]
7
Estabilidad frente al pH
Las columnas XBridge se han diseñado de manera específica para
contener las fases enlazadas cromatográficas más estables desde
el punto de vista químico que se encuentran disponibles, lo que le
Las columnas para HPLC XBridge ® están concebidas para un permitirá explorar todas las ventajas que aporta el poder utilizar
único propósito: maximizar la productividad. Tanto si su objetivo fases móviles con un amplio rango de pH (1-12). La estabilidad
es crear un método de control de calidad como desarrollar un química, especialmente para los valores extremos de pH, se
ensayo LC/MS de vanguardia, las columnas XBridge le pueden incorpora a las partículas durante el proceso de síntesis y no se
ayudar al proporcionar: puede reproducir mediante el proceso convencional de enlace a la
base de sílice. Ninguna otra columna puede igualar la estabilidad
química de una columna XBridge.
■■ Mejora de la estabilidad frente al pH: aumento de la vida
útil de la columna Prueba acelerada de estabilidad a pH alto de las columnas de la
competencia
■■ Mejora de la fiabilidad de la columna: análisis más
110
robustos
■■ Maximización de la eficacia de las partículas: forma y 90 XBridge C18
Gemini™ C18
70
Luna® C18(2)
Con una selección de 10 fases enlazadas diferentes para YMC™ Pro C18
proporciona las herramientas necesarias para los retos Horas con 50 mM de TEA, pH 10, 50 °C
O
Si
O
cromatográficos más exigentes. Tanto si se necesitan métodos O
con la versatilidad de una columna XBridge. pocos cambios en la forma de los picos o en el tiempo de retención.
up
Gro
lar
CH
3
Po
O O
Si Si
Si O
O CH
O 3
O O
up
Gro
lar
CH
3
Po
O O O
Si Si Si Si
O O O O
CH
3
O O O
up
Gro
lar
CH
3
Po
O O
Si Si Si
O O
XBridge CH
3 O
C18 O
C8 Shield RP18 O
Fenilo HILIC
up
Gro
lar
CH
3
Po
O
Si
O
Si
Grupo polar integrado Fenilo-hexilo Partícula BEH
Tipo de ligando C18 trifuncional CH
C8 trifuncional O
3
O
monofuncional trifuncional no enlazada
Densidad del ligando* 3,1 µmol/m2 O
3,2 µmol/m2 3,3 µmol/m2 3,0 µmol/m2 N/A
Si
O
Carga de carbono* 18% O 13% 17% 15% No enlazada
Tipo de recubrimiento final Patentado Patentado TMS Patentado N/A
Clasificación USP L1 L7 L1 L11 L3
Rango de pH 1–12 1–12 2–11 1–12 1–9
Límite de temp. a pH bajo 80 °C 60 °C 50 °C 80 °C 45 °C
Límite de temp. a pH alto 60 °C 60 °C 45 °C 60 °C 45 °C
Diámetro de poro* 130 Å 130 Å 130 Å 130 Å 130 Å
Área superficial* 185 m2/g 185 m2/g 185 m2/g 185 m2/g 185 m2/g
2,5; 3,5; 5; 2,5; 3,5; 5; 2,5; 3,5; 5;
Tamaño de partícula 2,5; 3,5; 5 µm 2,5; 3,5; 5 µm
10 µm 10 µm 10 µm
8
Fiabilidad de la columna Factores de asimetría USP de la familia XBridge
Eficacia de las partículas La combinación de la excelente estabilidad tanto de los ligandos como de las
partículas, así como la elevada eficacia cromatográfica, convierte a las columnas
Las partículas híbridas con puentes de etileno (BEH) ofrecen XBridge en la elección ideal para los métodos a pH bajos e intermedios.
H9
CH
3
C4
Si
O
CH
O 3
2
ker NH H9
CH
3
Lin C4
O O O O
Si Si Si Si Si
O O O O O
CH
3
O O O O
O O O
Si Si Si
O O O
Amida Péptidos BEH C18, 130 Å O
Péptidos BEH C18, 300 Å O
Proteínas BEH C4, 300 Å Oligo BEH C18 O
up up up
Gro Gro Gro
lar
CH
3 lar
CH
lar 3
CH
3 Po
Po Po
Si Si Si
O O O
Amida C18 trifuncional C18 trifuncional CH
C4 monofuncional C18 trifuncional
3
CH
3
CH
3
9
Transferencia de métodos con columnas de 2,5 μm
Todas las columnas para HPLC XBridge y XSelect® (que se describen en la siguiente página)
se ofrecen con los formatos eXtended Performance [XP] de 2,5 µm a fin de ayudarle a
transferir los métodos de los instrumentos HPLC a los UPLC. Las columnas XP de 2,5 µm
mejoran el rendimiento de los instrumentos HPLC actuales y permiten conseguir una efica-
cia de separación máxima mediante la tecnología ACQUITY UPLC con tamaños de partícula
inferiores a 2 µm.
Separaciones escalables
5 µm – 150 mm
Inyección: 5,0 µL
Caudal: 0,2 mL/min
0,0 2,0 4,0 6,0 8,0 10,0 min
3,5 µm – 100 mm
Inyección: 3,3 µL
Caudal: 0,3 mL/min
0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5 4,0 min
2,5 µm – 75 mm
Inyección: 2,5 µL
Caudal: 0,5 mL/min
0,0 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 1,2 1,4 1,6 1,8 2,0 min
1,7 µm – 50 mm
Inyección: 1,7 µL
Caudal: 0,6 mL/min
0,0 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 1,1 min
Columnas de diferentes longitudes y tamaños de partículas se han utilizado para reducir satisfactoriamente los
tiempos de análisis y mantener la resolución.
Condiciones de LC
Sistema: ACQUITY UPLC con detector TUV
Columnas: XBridge C18, 5 μm, 2,1 x 150 mm
XBridge C18, 3,5 μm, 2,1 x 100 mm
XBridge C18, 2,5 μm, 2,1 x 75 mm
ACQUITY UPLC BEH C18, 1,7 μm, 2,1 x 50 mm
Fase móvil A: ácido fórmico al 0,1% en agua
Fase móvil B: ácido fórmico al 0,1% en acetonitrilo
Caudal: consultar el cromatograma anterior
Volumen de inyección: consultar el cromatograma anterior
Isocrática: 95% A:5% B
Diluyente de la muestra: acetonitrilo al 3% en agua con ácido fórmico al 0,1%
Conc. de la muestra: 25 μg/mL
Temp. de la columna: 38 °C
Detección: UV a 280 nm
Velocidad de adquisición: 40 pts/s
Constante de tiempo: 0,05
www.waters.com/xbridge
10
[ENC ABEZADO INTERIOR DEL FOLIO]
11
Las columnas para HPLC XSelect están concebidas para los
científicos encargados de desarrollar métodos, que exigen la
selección más diversa de fases enlazadas para separar con
facilidad las coeluciones de analitos más dificultosas. Las
columnas XSelect son herramientas que están:
Los substratos o partículas base influyen de manera
■■ Diseñadas para la selectividad: mejoran la capacidad para fundamental en la selectividad del analito; el ligando enlazado
separar picos que eluyen muy cerca ejerce una influencia secundaria. Cada uno de ellos, cuando
■■ Concebidas para el aislamiento y la purificación: se usa por separado, no genera cambios de selectividad
proporcionan la mayor capacidad de carga de analito que se notorios; sin embargo, juntos, el substrato y el ligando crean
encuentra disponible las herramientas definitivas para mejorar la selectividad del
analito. Es por este motivo que la familia de columnas XSelect
■■ Ideales para el rápido desarrollo métodos: reducen el
contiene tanto la tecnología de partículas de sílice de alta
tiempo y los costes asociados al desarrollo de métodos
resistencia (HSS) como la de partículas híbridas de superficie
cargada (CSH™ ) con una optimización única de ligandos
enlazados. El resultado es una gran reproducibilidad y una alta
selectividad.
F F
F F F F
F O O F CN
O O O O O
Si Si Si F Si Si Si Si F Si
O O O O O O O O
O O O O O O O
CSH CSH
XSelect CSH C18
fenilo-hexilo fluorofenilo
HSS T3 HSS C18 HSS C18 SB HSS PFP HSS CN
Densidad del ligando* 2,3 µmol/m2 2,3 µmol/m2 2,3 µmol/m2 1,6 µmol/m2 3,2 µmol/m2 1,6 µmol/m2 3,2 µmol/m2 2,0 µmol/m2
Carga de carbono* 15% 14% 10% 11% 15% 8% 7% 5%
Tipo de recubrimiento
Patentado Patentado Ninguno Patentado Patentado Ninguno Ninguno Ninguno
final
Clasificación USP L1 L11 L43 L1 L1 L1 L43 L10
Rango de pH 1–11 1–11 1–8 2–8 1–8 2–8 2–8 2–8
Límite de temp. a
80 ˚C 80 ˚C 60 ˚C 45 ˚C 45 ˚C 45 ˚C 45 ˚C 45 ˚C
pH bajo
Límite de temp. a
45 ˚C 45 ˚C 45 ˚C 45 ˚C 45 ˚C 45 ˚C 45 ˚C 45 ˚C
pH alto
Diámetro de poro* 130 Å 130 Å 130 Å 100 Å 100 Å 100 Å 100 Å 100 Å
Área superficial* 185 m /g2
185 m /g 2
185 m /g 2
230 m /g2
230 m /g 2
230 m /g 2
230 m /g 2
230 m2/g
2,5; 3,5; 5;
Tamaño de partícula 2,5; 3,5; 5 µm 2,5; 3,5; 5 µm 2,5; 3,5; 5 µm 2,5; 3,5; 5 µm 2,5; 3,5; 5 µm 2,5; 3,5; 5 µm 2,5; 3,5; 5 µm
10 µm
12
Mejora de la selectividad
La selectividad y la capacidad de retención son las herramientas más poderosas que poseen
los desarrolladores de métodos para influir en el comportamiento cromatográfico. La
familia XSelect ofrece una variada gama de columnas C18 de fase reversa (por ejemplo, CSH
C18, HSS C18 y HSS C18 SB) para separaciones de fines generales, así como columnas que
proporcionan un incremento de la retención polar (T3) y mayores opciones de selectividad
(fenilo-hexilo, fluorofenilo y ciano) para el desarrollo de métodos.
CSH C18
1 3 4 Sistema: ACQUITY UPLC con
5,6 detector PDA
CSH fenilo-hexilo Columnas: 2,1 x 50 mm
2
6
7 5 Fase móvil A: 10 mM de formiato de
1 3
4
CSH fluorofenilo de amonio, pH de 3,0
7
4 3
6
5 Fase móvil B: metanol
HSS CN
2 6 7
Caudal: 0,4 mL/min
1
4
3
5 Volumen de inyección: 1 μL
HSS PFP
2
7
Diluyente de la muestra: agua
1 5,6
HSS T3
3 4 Temp. de la columna: 30 °C
Gradiente: Tiempo
HSS C18
%A %B
(min)
0,00 70 30
4 3
HSS C18 SB 3,00 15 85
0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5 min 3,50 15 85
3,51 70 30
Diferencias de selectividad observadas para una mezcla de analitos básicos. Compuestos: [1] aminopirazina, 4,50 70 30
Detección: UV a 260 nm
[2] pindolol, [3] quinina, [4] labetalol, [5] verapamilo, [6] diltiazem, [7] amitriptilina.
Velocidad de adquisición: 20 pts/s
Respuesta del filtro: normal
Aislamiento y purificación
Las aplicaciones de alta capacidad de carga, como la purificación de compuestos, la
obtención de perfiles de impurezas y las pruebas de disolución, exigen que las columnas
tengan un excelente rendimiento. En el caso de estos tipos de aplicaciones, la carga de la
columna está limitada por su incapacidad para mantener una forma de picos simétrica. Esto
se pone de manifiesto por el excesivo ensanchamiento del pico del compuesto principal,
el cual, con frecuencia, oculta las impurezas traza que se tratan de eliminar durante la
purificación. Las columnas XSelect CSH proporcionan de forma sistemática picos estrechos
bajo condiciones de carga altas y otorgan al técnico en cromatografía la posibilidad de
separar productos de degradación o impurezas a nivel de trazas y, por tanto, permiten una
mayor capacidad de carga reduciendo el tiempo y el consumo de eluyente.
Condiciones de LC
Mantenimiento de la forma de los picos con una alta capacidad de carga Sistema: ACQUITY UPLC H-Class con
detector PDA para ACQUITY UPLC
0,08 Columnas: 2,1 x 50 mm
ACQUITY UPLC CSH C18 2,0% Concentraciones de imipramina
0,06
mantenidas constantes a 0,5 mg/mL Fase móvil A: agua
Imipramina
1,0% Amitriptilina
Fase móvil B: acetonitrilo
0,04
Fase móvil C: ácido fórmico al 2% en agua
UA
0,5%
0,02 0,1% Gradiente: Tiempo Flujo
0,00
(min) (mL/min) %A %B %C Curva
0,0 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 1,2 1,4 1,6 1,8 2,0 min
inicial 0,6 70 25 5 inicial
2,0 0,6 60 35 5 6
0,08 3,0 0,6 0 95 5 6
Kinetex® C18
0,06
3,1 0,6 70 25 5 6
5,0 0,6 70 25 5 6
Imipramina
1,0% Amitriptilina
0,02 0,5% Diluyente de la muestra: agua
0,1%
0,00
Conc. de la muestra: imipramina: 0.5 mg/mL; amitriptilina:
0,0 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 1,2 1,4 1,6 1,8 2,0 min
como se indica (% de la imipramina)
Temp. de la columna: 40 °C
Es posible que las separaciones mostradas en las comparativas no sean representativas de todas las aplicaciones.
Detección: UV a 254 nm
La mejora de la capacidad de carga de las columnas XSelect permite la separación, identificación y cuantificación Eluyente de lavado: acetonitrilo/agua 50/50
de productos de degradación o impurezas que eluyen muy cerca. Eluyente de purga: acetonitrilo/agua 50/50
13
Desarrollo y transferencia de métodos
Al desarrollar métodos, los técnicos en cromatografía experimentados se dan cuenta
de que el desarrollo de cualquier método que utilice únicamente columnas selectivas
debe poder transferirse con facilidad entre un laboratorio y otro, independientemente
de la plataforma de LC usada. Las columnas XSelect se han diseñado para el
desarrollo de métodos y son completamente compatibles con todos los modos de
detección modernos.
Separaciones reproducibles y escalables
Condiciones de LC
XSelect CSH fluorofenilo, 5 µm 8 10 Sistema: ACQUITY UPLC con detector
2 6 PDA para ACQUITY UPLC
1 5
4 7 9
Columnas: 2,1 x 50 mm
3 Caudal: 0,5 mL/min
Fase móvil A: 15,4 mM de formiato de amonio, pH de 3,0
Fase móvil B: acetonitrilo
Gradiente: lineal del 5% al 90% de B en 5 minutos
Volumen de inyección: 5 μL
Diluyente de la muestra: agua
Temp. de la columna: 30 °C
Detección: UV a 254 nm
Velocidad de adquisición: 20 pts/s
Respuesta del filtro: normal
Compuestos
XSelect CSH fluorofenilo, 3,5 µm
1. Tiourea
2. Resorcinol
3. Metoprolol
4. 3-nitrofenol
5. Ácido 2-clorobenzoico
6. Amitriptilina
7. Dietilftalato
8. Fenoprofeno
9. Dipropilftalato
10. Ácido pirenosulfónico
0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5 4,0 min
Reproducibilidad y escalabilidad de separaciones por gradiente con columnas de 2,1 x 50 mm que
contienen nueve lotes diferentes de CSH fluorofenilo que representan tres tamaños de partículas (1,7, 3,5
y 5 µm).
www.waters.com/xselect
14
[ENC ABEZADO INTERIOR DEL FOLIO]
15
Larga vida útil de las columnas con
fases móviles de pH bajo
Las columnas Atlantis resisten la hidrólisis del ligando cuando se usan
fases móviles muy ácidas, lo que mantiene la eficacia del método, la
retención del compuesto y la selectividad crítica del analito.
Las columnas para HPLC Atlantis ® no solo ofrecen un rendimiento,
una versatilidad y una retención excepcionales para los 20 horas de exposición a TFA al 0,5% y a una temperatura de 60 °C
compuestos polares, sino además una retención equilibrada para
las mezclas complejas de analitos.
90
totalmente acuosas 70
estacionaria.
20
10
O 0
Si
™
O
18
us
ua
18
18
AQ
AQ
SP
dC
P
C
T3
C
r-R
Pl
-R
Aq
ire
K®
S-
®
™
is
is
S
ro
®
la
se
D
nF
D
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PA
yd
ex
Po
O
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he
tla
tla
Su
il ®
en
k™
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ll
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A
A
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ro
ax
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ap
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-P
en
ne
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In
rb
ne
C
Ph
H
Sy
Zo
es
do
Sy
YM
C
®
nc
ei
®
nt
YM
ex
is
ex
ie
ile
en
Sh
Sc
Atlantis
en
Ag
L
G
en
en
Ph
Ph
16
Retención de compuestos polares
sin reactivos de par iónico
La eliminación de los reactivos de par iónico mejora los límites de
detección, así como la robustez y la reproducibilidad del método;
al mismo tiempo, reduce las labores de mantenimiento del
instrumento debidas a las condiciones adversas de la fase móvil.
1 2 4
3
Atlantis T3
4
3,5
1
2
4
1 5
2
3
Thermo Hypersil Gold AQ™
3,4
1
2
5
Phenomenex® Synergi™ Hydro-RP
1 2
3 5
4
0 1 2 3 4 5 6 7 8 min
Condiciones de LC
Columna: 4,6 x 150 mm
Fase móvil: 10 mM de formiato de amonio, pH de 3,0
Caudal: 1,3 mL/min para 3 µm
Volumen de inyección: 2,0 µL
Temp. de la columna: 30 °C
Detección: 254 nm
Velocidad de adquisición: 10 pts/s
Sistema: Alliance 2695 con detector de absorbancia
de doble longitud de onda 2487
Compuestos
1. Tiourea
2. 5-fluorocistina
3. Adenina
4. Guanosina-5'-monofosfato
5. Timina
www.waters.com/atlantis
17
Excelente estabilidad a pH bajos
Con fases móviles de pH bajo, las columnas SunFire tienen una
vida útil que supera a la de muchas marcas de columnas para
HPLC basadas en sílice.
3
Carga de carbono* 12% 16% N/A
4 T USP – 1,26
SunFire C18
Tipo de recu- 4,6 x 150 mm, 5 µm
Patentado Patentado N/A 5 6
brimiento final
Clasificación USP L7 L1 L3
Rango de pH 2–8 2–8 2–8 T USP – 1,35 Phenomenex® Luna® C18 (2)
4,6 x 150 mm, 5 µm
Límite de temp. a
40 ˚C 50 ˚C 55 ˚C
pH bajo
Límite de temp. a T USP – 1,79 ACT® Ace® C18
40 ˚C 40 ˚C 45 ˚C
pH alto 4,6 x 150 mm, 5 µm
Separación isocrática
* Valor esperado o aproximado. Fase móvil A: 20 mM de fosfato de dipotasio al 35%/
20 mM de fosfato monopotásico con un pH de 7,0
Fase móvil B: metanol al 65%
Longitud de onda: 254 nm
Caudal: 1,0 mL/min
Vol. de inyección: 14 µL
Temp. de la columna: 23 ˚C
Sistema: Alliance 2695 con detector de absorbancia
de doble longitud de onda 2487
Compuestos
1. Uracilo
2. Propranolol
3. Butilparabeno
4. Naftaleno
18
Reproducibilidad entre lotes
Waters se compromete con el mantenimiento de las
especificaciones más estrictas en el sector de la HPLC. Los
procesos de fabricación y los procedimientos de empaquetado
de columnas controlados le aseguran que recibirá la mejor y
más reproducible columna HPLC que se encuentra disponible.
0 5 10 15 20 25 30 35 40 min
www.waters.com/sunfire
19
Las columnas Symmetry® se fabrican con
sílice de alta pureza y mediante procesos de
fabricación controlados de forma estricta
para garantizar que recibirá una columna
que supere los estándares establecidos
para el rendimiento de las columnas HPLC.
Ninguna otra marca de columnas para LC
basadas en sílice puede igualar la reproduc-
ibilidad entre columnas y entre lotes de la
familia Symmetry. Las columnas Symmetry
están disponibles en formatos de columna,
de cartucho y de precolumna:
up up
Gro Gro
lar 3 lar
CH
3
CH Po Po
CH 3 CH 3 CH 3
Si Si Si Si CH 3
O O O O Si Si
3 O O
CH 3 CH 3
CH
3
CH CH 3 CH 3
Recubrimiento final Si Si Si Si Si Si
Columnas Symmetry para la máxima Reproducibilidad entre lotes de las columnas Symmetry
reproducibilidad 1 2
y le ofrecen la seguridad de que, el día de mañana, podrá seguir Lote 151 (2000)
utilizando los métodos que usa hoy en día. Lote 156 (2001)
0,0 1,50 3,0 4,5 6,00 7,5 9,0 10,5 12,0 13,5 15,0 min
20
Columnas Symmetry para formas de
picos excelentes
Las columnas SymmetryShield incorporan la tecnología de grupos
polares integrados patentada por Waters; dicha tecnología protege los
silanoles residuales de la sílice de los analitos muy básicos y mejora la
forma general de los picos. Además, al colocar el grupo polar integrado
cerca de la superficie de sílice, la actividad de los silanoles superficiales
se reduce aún más. De este modo, se confiere una selectividad y una
retención diferentes de las del ligando Symmetry C18.
1 2
4
SymmetryShield RP18
3
Factor de asimetría USP = 1,2
UA
5
6
0 5 10 15 20 25 30 min
1
2
3
Symmetry C18
4 Factor de asimetría USP = 1,9
UA
7 6
0 5 10 15 20 25 30 min
Condiciones de LC
Columna: SymmetryShield RP18, 5 µm, 3,9 x 150 mm
Symmetry C18, 5 µm, 3,9 x 150 mm
Fase móvil: metanol al 65%; 20 mM de
fosfato monopotásico al 35%/
fosfato de dipotasio con un pH de 7
Caudal: 1,0 mL/min
Detección: UV a 254 nm
Temp. de la columna: 23 °C
Compuestos
1. Uracilo
2. Propranolol
3. Butilparabeno
4. Dipropilftalato
5. Naftaleno
6. Amitriptilina
7. Acenafteno
www.waters.com/symmetry
21
ción de formas de picos deficientes para las bases y un rango de pH
limitado. Una de las formas con la que los técnicos en cromatografía
han tratado de superar estas limitaciones ha sido la utilización de fases
estacionarias basadas en polímeros. Los polímeros, no obstante, no
Las columnas XTerra® MS, Shield RP y Phenyl combinan las mejores propie- han gozado de la aceptación de la sílice debido a su poca eficacia, a su
dades de la sílice y de las fases enlazadas poliméricas con la tecnología baja resistencia mecánica y a un orden de elución de picos impredecible
patentada de partículas híbridas, que reemplaza uno de cada tres silanoles cuando se transfieren métodos de columnas poliméricas a columnas
por un grupo metilo durante la síntesis de partículas. Solo se puede con- basadas en sílice.
seguir dicho reemplazo durante la síntesis de partículas inicial; asimismo,
La tecnología de partículas híbridas supera estas limitaciones; no solo
la inclusión de este grupo metilo es una parte integral de la estructura de
combina los mejores atributos de ambos materiales, sino que subsana
las partículas base. El resultado es un partícula mecánicamente fuerte que
las debilidades de cada material. El resultado es un material robusto
puede usarse para separaciones a pH altos; como consecuencia, se mejora
con una resistencia mecánica elevada, una eficacia alta, una forma de
la carga y las formas de picos de los compuestos básicos.
picos excelente para las bases y un escalado sencillo de la cromato-
grafía analítica a la preparativa.
La eficacia de la sílice con la estabilidad de Comparación entre el proceso de fabricación del relleno híbrido de
los polímeros primera generación (XTerra) y el de la sílice
Si OH Si
O O O
Si
Si Si O n Forma de picos
O O
CH 3 CH 3 CH
3
deficiente
n Rango de pH entre 2 y 8
H 3C
22
Separaciones con la eficacia típica de la sílice trabajando a pH
típicos de rellenos poliméricos
3 0,5 3
1,2
0,4
1
0,8 0,3
UA
UA
0,2
0,4 2 6
2 6
5 0,1
4
4
5
0 0
10 20 min 10 20 min
0,5 3
0,4
1
0,3
UA
0,2
2 6
0,1
4
5
0
20 min 10 20 min
Condiciones de LC
Fase móvil A: 20 mM de NH4OH, pH de 10,7
Fase móvil B: acetonitrilo
Caudal: 3 mL/min
Gradiente: Tiempo Perfil
(min) %A %B
0,00 70 30
25,00 40 60
28,00 40 60
Volumen de inyección: 5 µL
Temperatura: ambiente
Detección: UV a 220 nm
Instrumento: detector de matriz de fotodiodos
2690 y 996 de Waters
Compuestos
1. Codeína
2. Yohimbina
3. Tebaína
4. Cocaína
5. Reserpina
6. Metadona
www.waters.com/xterra
23
COLUMNAS WATERS SPHERISORB
Las columnas Waters Spherisorb ® son una de las columnas HPLC más citadas en la literatura científica. Existen más de
2000 resúmenes analíticos publicados que mencionan las columnas Waters Spherisorb, lo que brinda un intervalo extraordinario de
aplicaciones y métodos validados que le pueden servir de ayuda durante el proceso de desarrollo de métodos.
Las columnas Waters Spherisorb se fabrican en un rango amplio de tamaños de partícula (3, 5 y 10 µm) y de fases enlazadas para satisfacer
cualquier necesidad cromatográfica. Además, las fases enlazadas de calidad superior de las columnas Waters Spherisorb ofrecen muchas
selectividades de separación diferentes y únicas. Las columnas analíticas Waters Spherisorb se suministran con conectores de columna de
estilo Parker, que constituyen el estándar del sector. Los cartuchos de columna Waters Spherisorb precisan conectores de cartucho de estilo
Parker reutilizables.
Spherisorb www.waters.com/spherisorb
Tipo de ligando ODS2 (C18) ODS1 (C18) ODSB (C18) C8 C6 C1 NH2 (amino)
Tamaño de partícula 3; 5; 10 µm 3; 5; 10 µm 5 μm 3; 5; 10 µm 3; 5; 10 µm 3; 5; 10 µm 3; 5; 10 µm
Área superficial 220 m /g 2
220 m /g2
220 m /g 2
220 m /g 2
220 m /g 2
220 m /g2
220 m2 /g
Forma de las partículas Esférica Esférica Esférica Esférica Esférica Esférica Esférica
Tamaño de poro 80 Å 80 Å 80 Å 80 Å 80 Å 80 Å 80 Å
Carga de carbono 11,5% 6,2% 11,5% 7,75% 4,7% 2,15% 1,9%
Cobertura del
2,98 µmol/m2 1,49 µmol/m2 2,98 µmol/m2 3,12 µmol/m2 3,36 µmol/m2 2,97 µmol/m2 2,64 µmol/m2
ligando
Recubrimiento final Sí No Sí Sí Sí No No
24
COLUMNAS NOVA-PAK
Las fases enlazadas de las columnas Nova-Pak® cuentan con tamaños de partículas de 4 y 6 µm que ofrecen una resolución elevada, así como una
cromatografía más rápida y eficaz. El tamaño de partícula más pequeño, en combinación con unas longitudes más cortas de columnas, se puede
usar para reducir el consumo de eluyente, así como para mantener la resolución en el caso de las mezclas complejas. Las columnas analíticas que
tienen un relleno con un tamaño de partícula de 4 µm se encuentran disponibles como columnas de acero con longitudes de 75, 150 y 300 mm.
Las columnas de cartucho de acero con conectores reutilizables se encuentran disponibles en longitudes de 50, 100, 150 y 250 mm. Las columnas
semipreparativas Prep Nova-Pak HR se empaquetan con rellenos que tienen un tamaño de partícula de 6 µm y proporcionan un intervalo inigualable
de posibilidades de separación. El relleno de alta eficacia de las columnas Prep Nova-Pak HR ofrece separaciones más rápidas utilizando menos
eluyente, así como la ventaja adicional que aportan unas fracciones más concentradas; por tanto, reduce el coste de la cromatografía preparativa.
Todas las columnas Nova-Pak se empaquetan utilizando rigurosos procedimientos de control de calidad que se llevan a cabo en nuestras fábricas de
acuerdo con las buenas prácticas de fabricación actuales (cGMP); de esta forma, se garantiza la reproducibilidad entre lotes.
Nova-Pak www.waters.com/nova-pak
25
COLUMNAS RESOLVE
El relleno Resolve™ sin recubrimiento final es considerablemente diferente de otros materiales de relleno de Waters. El cambio en el
comportamiento cromatográfico se detecta, por lo general, en compuestos polares que normalmente se retienen más. Se pueden obtener
cromatogramas de compuestos básicos mediante modificadores de fase móvil, como es el caso de reactivos de par iónico que reducen la
asimetría excesiva de picos. Las columnas Resolve C18 y de sílice están disponibles para aplicaciones que precisan una resolución elevada.
Resolve www.waters.com/resolve
COLUMNAS DELTA-PAK
Las columnas Delta-Pak™ son ideales para la separación y el aislamiento de péptidos, proteínas y productos naturales; cuentan con dos
tamaños de poro diferentes que están optimizados para las separaciones de moléculas grandes. Las columnas Delta-Pak son conocidas por el
escalado sistemático y predecible entre formatos de columna, lo que ofrece a los científicos encargados de la purificación la posibilidad de
aislar los compuestos diana con cantidades que van desde varios miligramos a varios gramos. La sílice enlazada de las columnas Delta-Pak,
que es muy estable, dispone de tamaños de partícula muy eficaces de 5 y 15 μm.
Delta-Pak www.waters.com/delta-pak
26
Tecnología de partículas irregulares
Los primeros materiales de relleno de HPLC constaban de partículas con formas irregulares y no esféricas. Por lo general, estas columnas
reducen la estabilidad mecánica y hacen que disminuya la eficacia en comparación con las columnas empaquetadas con partículas esféricas.
Sin embargo, incluso con estas limitaciones, existen muchos métodos que precisan el uso de dichas fases enlazadas. Como principal fabri-
cante de sorbentes y fases enlazadas, Waters ha mostrado durante más de 40 años que sus columnas ofrecen un rendimiento sistemático y
fiable; por este motivo, continuará respaldando a estas marcas en el futuro.
Columnas µBONDAPAK/BONDAPAK
Si su método es adecuado para una columna μBondapak®, solo existe una columna que contenga el material de relleno μBondapak C18. Muchas
empresas afirman contar con una selectividad "similar a μBondapak", pero ninguna ha superado las rigurosas pruebas de control de calidad a las que
se ven sometidos los lotes de Waters. Los materiales de relleno μBondapak o BondaPak ® han demostrado su reproducibilidad un año tras otro desde
1973, lo que ha favorecido que las columnas μBondapak sean la marca de columnas HPLC que con más frecuencia se
ha citado.
µBondapak/ www.waters.com/bondapak
Bondapak
Columnas µPORASIL/PORASIL
Las partículas μPorasil™ y Porasil™ fueron de los primeros materiales de relleno totalmente porosos que se pusieron a la venta para las
separaciones por LC. Por contraste con la capacidad de separación de fase reversa de μBondapak C18, el material no enlazado basado en sílice
de las columnas μPorasil se creó para proporcionar separaciones de fase normal para una amplia gama de tipos de muestras.
µPorasil/Porasil www.waters.com/porasil
27
¿Cómo puede saber que su sistema cromatográfico funciona de forma adecuada?
Los estándares de referencia QCRM contienen mezclas de patrones seleccionadas de forma específica para ofrecer una
manera sencilla y fiable de controlar el rendimiento de cualquier sistema cromatográfico. El uso de los QCRM le puede
servir para asegurarse de que la columna y el sistema estén preparados para analizar las muestras. El uso regular de
QCRM también proporciona una oportunidad para optimizar los sistemas cromatográficos
y consultar la evolución del rendimiento de dichos sistemas a lo largo del tiempo, lo que facilita la
identificación de problemas de forma proactiva y la posibilidad de resolverlos con mayor rapidez.
Dado que los análisis cromatográficos son complejos y dependen de muchas variables diferentes, como
la composición de la fase móvil, el tipo de columna y el método de detección, Waters ha formulado
mezclas de QCRM específicas diseñadas para evaluar los sistemas teniendo en cuenta estas diferencias.
Para obtener más información acerca de los estándares específicos para la calibración, la cualificación y el ajuste de instrumentos y
detectores, así como una lista más completa de los estándares y reactivos que se encuentran disponibles, visite asr.waters.com.
28
Recursos adicionales
Descripción Referencia
Documentación técnica sobre patrones de referencia QCRM y la optimización del rendimiento del instrumento 720004535EN
Nota de aplicación sobre la resolución de problemas habituales del sistema con los patrones de referencia QCRM de compuestos neutros 720004635EN
Para obtener una lista con los números de referencia de todas las columnas mencionadas en este folleto, visite
waters.com/findmycolumn.
Herramientas on-line
Waters Reversed-P hase Column Selectivity C hart (Gráfico de Waters Column Advisor
selectividad de las columnas de fase reversa de Waters) (Asesor de columnas de Waters)
www.waters.com/selectivitychart www.waters.com/columnadvisor
Austria 43 1 877 18 07
Dinamarca 45 46 59 8080
Francia 33 1 30 48 72 00
México 52 55 52 00 1860
Waters, T he Science of W hat’s Possible, CORTECS, UPLC, Alliance, ACQUITY UPLC, XBridge, XSelect, Atlantis,
Waters Corporation Symmetry, XTerra, Waters Spherisorb, Nova-Pak, BondaPak, µBondaPak, QDa y ACQUITY son marcas comerciales
34 Maple Street registradas de Waters Corporation. BEH Technology, CSH, SunFire, Intellignet Speed, IS, OBD, SymmetryShield,
Symmetry300, µPorasil, Porasil, Resolve, Delta-Pak y SymmetryPrep son marcas comerciales de Waters Corporation.
Milford, MA 01757 EE. UU. Todas las demás marcas comerciales pertenecen a sus respectivos propietarios.
T EL 508 478 2000
Fax: 508 872 1990 ©2014 Waters Corporation. Impreso en EE. UU.
www.waters.com Septiembre de 2014 720003995ES AO-SIG