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INFORME DE VALIDACIÓN

Determinación de Trazas de Compuestos

Oxigenados en Hidrocarburos Líquidos Mediante
la Técnica de Cromatografía de Gas.

Método UOP 960-06

ARNEL 4086

Preparado por: Magno Guzmán.

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Determinación de Trazas de Compuestos Oxigenados en

Hidrocarburos Líquidos Mediante la Técnica de Cromatografía
de Gas.

Método UOP 960-06

ARNEL 4086

Validación métodos analíticos.

La validación de los métodos analíticos es el establecimiento de la evidencia
documentada que un procedimiento analítico conducirá, con alto grado de
seguridad, a la obtención de resultados precisos y exactos, dentro de los
atributos de calidad previamente establecidos. Es necesario validar para
demostrar que los métodos son adecuados para los análisis propuestos en las
condiciones descritas, y además porque es parte integral del desarrollo de un
método analítico, También porque es necesario trabajar con métodos que
ofrezcan confianza y seguridad en los resultados, y por último, porque resulta
mucho más económico trabajar con métodos validados. Según la USP XXVII
los métodos analíticos se clasifican en varias categorías para su validación. El
método que es objeto de estudio en el presente trabajo pertenece a la categoría
“I” y se clasifica dentro de los "Métodos cuali-cuantitativos para la
determinación de compuestos oxigenados en matrices liquidas de
hidrocarburos". Para este tipo de método debe evaluarse la selectividad,
linealidad, exactitud y precisión.

Alcance del Método.

Este método es aplicado para la determinación de niveles de trazas de

compuestos oxigenados individuales, con punto de ebullición de hasta 138 °
C, en gas licuado de petróleo (GLP), isomerizados livianos y naftas.
Compuestos Hidrocarburos mono – oxigenados a ser determinados incluyen
C1 a C5 alcoholes, y C2 a C6 carbonilos y éteres. Hidrocarburos di-
oxigenados también a ser determinados incluyen C2 a C4 ésteres metílicos y
1,4- dioxano. El rango de cuantificación de 2 –butanona (MEK), usado como
estándar externo es de 0,2 a 800 ppm en masa (mg/kg). El rango de
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cuantificación para otros componentes puede estimarse en base a la tabla

mostrada en el método. Los compuestos inorgánicos que contienen oxígeno,
tales como agua, no son determinados. El monóxido de carbono y dióxido de
carbono no son determinados en este método. Los hidrocarburos oxigenados
no saturados pueden ser detectados pero no se identifican. Hidrocarburos
oxigenados que contienen otros hetero-átomos tales como nitrógeno, cloro o
azufre no son determinados, ciertos hidrocarburos oxigenados no se separan y
se reportan como grupos. Ver Tabla en el método para una lista de todos los
compuestos identificados. Algunos compuestos de azufre y nitrógeno salen en
la región de compuestos oxigenados del cromatógrama. En el presente trabajo
nos avocaremos a la evaluación de los diferentes parámetros que validan una
metodología analítica en todo lo relacionado con la determinación de
compuestos oxigenados en productos líquidos de hidrocarburos que no tengan
un punto de ebullición más allá de los 138 ° C.

Tabla de Compuestos Oxigenados

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Equipo de Cromatografía y Condiciones Cromatográficas

Para la aplicación del método UOP-960, se utilizó un Cromatógrafo de Gas
modelo CLARUS 500 (Perkin-Elmer) configurado con la Aplicación ARNEL
modelo 4086, con inyector de muestras automático, dos columnas tipo mega
boro de PDMS y PLOT de Sílice, sistema de inversión de micro flujo capilar,
detector de Ionización de llama (FID) y sistema automático de control,
integración y registro de datos (TotalChrom).

OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL
Estandarizar la técnica Cromatográfica, con columna capilar y detector de
ionización de llama (FID) para la identificación y cuantificación de trazas de
compuestos oxigenados de acuerdo con la norma UOP 960 y el uso del
Cromatógrafo Perkin-Elmer Clarus 500 Aplicación ARNEL 4086.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS
Obtener en forma experimental y para las condiciones del laboratorio los
valores de los parámetros: precisión, linealidad, límite de detección y
cuantificación, sensibilidad y correlación lineal que sirvan como criterio de
confianza para que una vez montado el método analítico pueda empezar a
reportar datos con adecuado y comprobable grado de confianza.

DESCRIPCION DE LA REALIZACION DE LOS ANALISIS.

1. Prepare la muestra de calibración, disuelva 5 µl de MEK 99,99 % de

pureza en 100 mls. de H-Heptano 99,99 %, esta mezcla será de 50
µl/Lts de MEK en N-Heptano.
2. Realice las corridas de la muestra patrón y de las muestras a analizar.
3. Determine el área del pico de MEK del patrón y calcule el factor de
respuesta, FR=Área del pico / 50.
4. De cada oxigenado identificado en el cromatógrama de la muestra,
divida su área entre el factor de respuesta del MEK, esto representa el
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contenido del oxigenado en la muestra en µl/Lts, corrija este valor para

reportar PPM peso.
5. Realice tantas corridas como considere necesario a fin de obtener la
repetitividad del método.

DIAGRAMA DE FLUJO DEL SISTEMA CROMATOGRAFICO

SEGÚN EL METODO UOP-960.
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DIAGRAMA DE FLUJO DEL SISTEMA CROMATOGRAFICO DE

ACUERDO CON LA APLICACIÓN ARNEL 4086.

PARAMETROS DEL METODO CROMATOGRAFICO

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PARAMETROS DE VALIDACION DEL METODO

SELECTIVIDAD/ESPECIFICIDAD:
Se considera selectividad como la habilidad de un método para diferenciar y
cuantificar uno o varios analitos en presencia de otros componentes que se
sospecha puedan estar presentes en la muestra. Las sustancias potencialmente
interferentes en una matriz orgánica incluyen componentes endógenos de la
matriz, metabolitos, productos de degradación, impurezas etc. La selectividad
se evalúa inyectando varias muestras de solventes comunes que pueden estar
presentes en naftas. El método se considera selectivo si ninguno de los blancos
u otras sustancias analizadas presenta el mismo tiempo de retención de los
analitos de interés. La especificidad está definida como la habilidad que tienen
el método para medir de forma inequívoca los analitos de interés en presencia
de otros componentes que pudiesen estar presente en la muestra. En Este
método se comprueba que las columnas y como ellas están dispuestas permite
diferenciar claramente en el cromatógrama los compuestos inherentes a las
naftas o gasolinas (C7-) separados de aquellos analitos de tipo oxigenados
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objeto de medición del método. A continuación se presentan varios

cromatógramas de diversos compuestos oxigenados separados claramente de
la matriz del solvente N-Heptano y de la nafta matriz de las muestras.
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Podemos observar claramente la muy buena separación que existe entre

algunos compuestos como éteres, alcoholes y cetonas con lo cual se demuestra
la especificidad del método.

CROMATOGRAMAS DE DIFERENTES COMPUESTOS OXIGENADOS

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La separación de diversos tipos de compuestos de oxigenados dentro de los

cuales podemos observar alcoholes, cetonas, aldehídos, esteres, etc.,
demuestra la capacidad de resolución del set de columnas usadas por el
sistema, con lo cual queda demostrada la selectividad y especificidad del
método.

Mezclas de Calibración – Calibración Muestras Líquidas

Se utilizara la 2-Butanona (MEK) como estándar externo para la

cuantificación de los diferentes compuestos oxigenados que se desea
determinar, para ello se debe preparar una mezcla de calibración como se
describe en el Método ASTM D 4307, " Preparación de mezclas líquidas para
uso como patrones analíticos, " La mezcla deberá contener aproximadamente
50 ppm en masa de 2 -butanona en ciclo Hexano o N-Heptano.
Correr la mezcla de calibración por triplicado diariamente cuando se analizan
muestras tal y como se describe en La Norma Técnica Cromatográfica. La
vida útil de esta mezcla de calibración se estima en una semana.

PRECISIÓN (REPLICABILIDAD)

La precisión se evaluó mediante tres determinaciones con tres niveles de

concentración. Se prepararon muestras de 50,0 µl/ml, 100,0 µl /ml y 150,0 µl
/ml, de cada uno de cuatro oxigenados y se analizaron por triplicado mediante
el método UOP 960. Los resultados obtenidos se indican en la Tabla I. Los
valores de la desviación estándar relativa (DER) mencionados en la Tabla I
son inferiores al 2%, lo cual confirma la precisión del método analítico.
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Verificación de la exactitud para 4 compuestos oxigenados

CONCENTRACION
%
COMPONENTES CONCENTRACION EXPERIMENTAL PROMEDIO DESVSTD
ERROR
REAL ( PPM-VOL) ( PPM-VOL) ( PPM-VOL)
50,00 49,89 50,21 49,12 49.15 0,236 1,48
METANOL 100,00 100,80 99,20 100,10 100,03 0,802 0,07
150,00 150,45 151,25 149,25 150,98 0.462 0,97
50,00 50,85 49,35 49,10 49,88 0.839 1,18
ETANOL 100,00 101,35 100,89 99,95 100,73 0.714 1,44
150,00 151,25 149,98 150,85 151,03 0.955 1,02
50,00 51,25 50,98 49,85 50,13 0.240 1,25
ACETONA 100,00 100,58 99,28 101,24 100,37 0.997 0,73
150,00 151,25 149,58 150,36 150,40 0.836 0,40
50,00 50,58 49,25 50,98 50,10 0.741 1.02
2-BUTANONA 100,00 101,36 100,54 100,36 100,79 0.329 1.55
150,00 150,20 150,69 149,58 150,82 1,3151 0.82

EXACTITUD

La exactitud se evaluó mediante tres determinaciones con tres niveles de

concentración. Se añadieron cantidades conocidas de cada uno de los analitos
evaluados, las mezclas analizadas previamente para obtener concentraciones
finales de 50 µl /ml, 100,0 µl /ml y 150,0 µl /ml, y se analizaron por triplicado
mediante el método UOP-960. Los resultados del ensayo obtenidos se indican
en la Tabla I anterior. Los valores porcentuales de recuperación obtenidos se
encuentran dentro del límite estándar de entre 98 y 102%, lo que confirma la
exactitud del método propuesto.
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Estimación de la Repetitividad del Tiempo de Retención, las Áreas de

siete compuestos Oxigenados.

NUMERO DE CORRIDAS TIEMP. DE RETENCION

COMPONENTES 1 2 3 4 5 6 7 PROMEDIO DESVSTD
DIME 5,60 5,07 5,62 5,60 5,13 5,12 5,11 5,32 0,268
MTBE 5,70 5,56 5,71 5,70 5,74 5,73 5,73 5,70 0,062
TAME 6,11 5,68 6,11 6,11 6,15 6,14 6,13 6,06 0,169
Methanol 7,30 7,29 7,31 7,31 7,35 7,32 7,32 7,31 0,019
Acetona 7,92 7,92 7,92 7,93 7,94 7,93 7,93 7,93 0,008
Ethanol 8,47 8,48 8,48 8,48 8,49 8,48 8,48 8,48 0,006
MEK 8,79 8,79 8,79 8,80 8,80 8,80 8,80 8,80 0,005
1-Propanol 9,98 9,99 9,99 9,99 10,00 9,99 9,99 9,99 0,006

AREA DE
1 2 3 4 5 6 7 COMPONENTE
DIME 281 441 235 255 449 499 487 378,14 115,844
MTBE 326 449 322 268 283 300 308 322,29 59,528
TAME 1580 274 1486 1449 1667 1693 1753 1414,57 514,836
Methanol 2257 2345 2395 2269 2315 2321 2475 2339,57 75,487
Acetona 2064 1160 2276 1989 1967 1957 2071 1926,29 354,950
Ethanol 477 529 590 524 611 603 584 559,71 50,119
MEK 209705 213157 215706 210320 215205 213654 217245 213570 2781,477
1-Propanol 797 826 796 788 812 802 792 801,86 13,120

1 2 3 4 5 6 7 CONCENTRACION PPM
DIME 0,27 0,42 0,22 0,24 0,43 0,48 0,46 0,36 0,112
MTBE 0,31 0,43 0,31 0,26 0,27 0,29 0,29 0,31 0,057
TAME 1,50 0,26 1,41 1,38 1,59 1,61 1,67 1,35 0,490
Methanol 2,15 2,23 2,28 2,16 2,20 2,21 2,36 2,23 0,073
Acetona 1,97 1,10 2,17 1,89 1,87 1,86 1,97 1,83 0,340
Ethanol 0,45 0,50 0,56 0,50 0,58 0,57 0,56 0,53 0,048
MEK 199,72 203,01 205,43 194,97 209,08 203,48 210,52 203,74 5,339
1-Propanol 0,76 0,79 0,76 0,75 0,77 0,76 0,75 0,76 0,014

CONCENTRACION DEL 2-BUTANONA ( MEK) USADO COMO ESTANDAR DE CALIBRACION

VALOR ESPERADO
PPM-CALCULADOS 196,38 199,61 202,00 196,96 201,53 200,08 203,44 200 ul/Lt
% RSD 1,81 0,19 1,00 1,52 0,77 0,04 1,72
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En la tabla anterior se muestran varias corridas de una muestra de calibración

de 200 ppm de MEK y trazas de otros oxigenados, podemos observar una muy
buena repetitividad de los tiempos de retención de los compuestos oxigenados
así como una precisión y exactitud inferior al 2 % del contenido de MEK en
relación al valor esperado y los valores determinados.

LINEALIDAD Y RANGO

La linealidad de la respuesta se determinó preparando soluciones con un

contenido de 200, 400, 600 y 800 µl/ml de una mezcla de 2-BUTANONA e
inyectando cada una de ellas por triplicado en el Cromatógrafo. Las áreas
obtenidas por cada solución preparada se presentan en la siguiente gráfica. A
partir de la pendiente de resultados se calcularon los coeficientes de
interceptación y de correlación (r). Al aplicar el método propuesto, se
comprobó la linealidad en el rango de concentración de 200 µl/ml – 800 µl/ml,
con un coeficiente de correlación 0,999 indicando así una muy buena
linealidad entre la concentración y él área de cada pico. El valor de la
pendiente es de 1730,5 la cual indica la sensibilidad del método estudiado,
está en el orden de los 0,50 ppm-vol. Así mismo se preparan soluciones del
analito a un rango más bajo, de 10 µl/ml a 250 µl/ml, se inyectan al
Cromatógrafo obteniéndose las áreas respectivas indicadas en la próxima
gráfica y para la cual se obtiene un valor de coeficiente de correlación (r) de
1,0 y un valor de pendiente de 1834, demostrando así la sensibilidad del
método a un rango de baja y alta concentración.

De acuerdo con los valores de pendientes obtenidos en ambas graficas

podemos inferir que de por cada 1000 unidad de área obtenida por
componentes podemos esperar una concentración mínima cuantificable de
1000 / 1730,5 = 0,58 ppm y de 1000 / 1834 = 0,55 ppm respectivamente en
ambos rangos evaluados, con esto podemos inferir que toda área de alguno de
los componentes que este por debajo de 1000 unidades de área podrá
considerarse dentro del rango mínimo de detectabilidad del método y toda
área por encima de 1000 unidades como el rango mínimo cuantificable.
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GRAFICA DE ALTO RANGO DESDE 200 A 800 PPM-VOL

CALIBRACION MEK - RANGO 200 - 800

1600000
1400000
y = 1730,5x
1200000
R² = 0,999
1000000
Area del Pico

800000
600000
400000
200000
Concentracion ul/Lt
0
0 200 400 600 800 1000

GRAFICA DE UN RANGO DESDE 10 A 250 PPM-VOL.

450000,0 LINEALIDAD DEL METODO UOP-960

400000,0
y = 1834x
350000,0
R² = 1
UNIDADES DE AREAS

300000,0

250000,0

200000,0

150000,0

100000,0

50000,0

0,0
0,0 50,0 100,0 150,0 200,0 250,0
-50000,0
CONCENTRACION EN PPM VOL
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Sensibilidad.
El límite de detección corresponde a la menor cantidad de analito en una
muestra que se puede detectar, pero no necesariamente cuantificar con
exactitud. El límite de cuantificación corresponde a la menor cantidad de
analito en la muestra que se puede cuantificar con precisión y exactitud. El
límite de cuantificación (LOQ) y el límite de detección (LOD) se
determinaron experimentalmente a partir de la ecuación de la curva de la
linealidad del método por extrapolación de la respuesta a concentración cero.
Se tomaron como Y las respuestas promedio y como X las concentraciones.

EVALUACION DEL LOQ Y EL LOD APARTIR DE LA RELACION

SEÑAL RUIDO

A partir de la línea de base del cromatógrama, se puede evaluar la relación

señal ruido (S/N) y con ella es fácil estimar la cantidad mínima detectable
(CMD) así como la cantidad mínima cuantificable (CMC), siendo estas 3
veces y diez veces el valor estimado de la S/N respectivamente.
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Tanto el límite mínimo detectable como el mínimo cuantificable definen la

sensibilidad del método, siendo estos valores los que indican la sensibilidad
del mismo.

REPETIBILIDAD:

Se refiere a la concordancia de los resultados recolectados por el mismo

investigador, los mismos reactivos, laboratorio e instrumento en un corto
periodo de tiempo, se evalúa determinando el coeficiente de variación (CV) o
desviación estándar relativa (RSD). CV o RSD = (s/x) * 100 S: desviación
estándar X: media aritmética. Se preparó una mezcla de variadas
concentraciones de varios analitos oxigenados disueltos con la gasolina
natural, la mezcla se inyectó cuatro veces obteniendo así cuatro replicas. En la
presente tabla se muestran los tiempo de retención de cada componente
obtenido, se muestra el promedio, la desviación estándar y el % de la
desviación estándar relativo (% RSD). Se observa una muy baja desviación
entre los valores obtenidos así como un % RSD muy bajo, menos del 0.1 %.
Con esto se demuestra que el sistema es totalmente estable a los tiempos de
retención.

TIEMPO DE RETENCION EN MINUTOS

Componentes 1 2 3 4 PROMEDIO DESVSTD % RSD
DME 5,11 5,11 5,12 5,11 5,11 0,0050 0,0978
DIME 5,57 5,57 5,58 5,57 5,57 0,0050 0,0897
MTBE 5,71 5,71 5,71 5,71 5,71 0,0000 0,0000
SBME 5,96 5,95 5,96 5,96 5,96 0,0050 0,0839
TAME 6,43 6,43 6,44 6,44 6,44 0,0058 0,0897
DNPE 6,88 6,88 6,89 6,89 6,89 0,0058 0,0839
I-Butilaldehido 7,14 7,14 7,15 7,15 7,15 0,0058 0,0808
Methanol 7,32 7,39 7,33 7,33 7,34 0,0320 0,4360
Acetona 7,92 7,92 7,93 7,93 7,93 0,0058 0,0729
Ethanol 8,65 8,65 8,66 8,66 8,66 0,0058 0,0667
MEK 8,80 8,79 8,80 8,80 8,80 0,0050 0,0568
1-Propanol 9,63 9,63 9,64 9,64 9,64 0,0058 0,0599
s-i-t-Butanol 10,76 10,77 10,77 10,77 10,77 0,0050 0,0464
n-Butanol 11,24 11,24 11,25 11,25 11,25 0,0058 0,0513
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De la misma forma se presenta en la siguiente tabla las áreas de cada pico así
como las concentraciones de cada componente oxigenado en PPM vol.
Igualmente se realizaron cuatro inyecciones de la mezcla a evaluar.

UNIDADES DE AREA DE CADA PICO

1 2 3 4 PROMEDIO DESVSTD % RSD
DME 546 585 597 579 577 22 3,78
DIME 3678 3922 3714 3497 3703 174 4,71
MTBE 67824 70917 69533 66509 68696 1930 2,81
SBME 1402 1478 1432 1360 1418 50 3,51
TAME 4824 5170 4912 4639 4886 221 4,52
DNPE 7512 8021 7684 8010 7807 251 3,22
I-Butilaldehido 1007 1085 1052 1027 1043 34 3,23
Methanol 2473 2443 2298 2284 2375 97 4,10
Acetona 40823 44099 44917 42925 43191 1778 4,12
Ethanol 14667 16371 15902 16149 15772 761 4,83
MEK 268636 274976 279358 267336 272577 5620 2,06
1-Propanol 29903 30620 33342 31943 31452 1517 4,82
s-i-t-Butanol 1051 993 984 967 999 36 3,65
n-Butanol 267972 279986 274914 262834 271427 7554 2,78
CONCENTRACION DEL COMPONENTE EN PPM
1 2 3 4 PROMEDIO DESVSTD % RSD
DME 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,02 3,65
DIME 3,4 3,7 3,5 3,3 3,5 0,16 4,74
MTBE 63,4 66,3 65,0 62,2 64,2 1,80 2,81
SBME 1,3 1,4 1,3 1,3 1,3 0,05 3,51
TAME 4,5 4,8 4,6 4,3 4,6 0,20 4,46
DNPE 7,0 7,4 7,0 7,7 7,2 0,35 4,85
I-Butilaldehido 0,9 1,0 1,0 1,0 1,0 0,03 3,07
Methanol 2,3 2,5 2,3 2,2 2,3 0,11 4,70
Acetona 38,2 42,1 42,0 40,1 40,6 1,82 4,49
Ethanol 15,8 17,2 16,7 15,8 16,4 0,69 4,19
MEK 251,1 266,3 261,1 249,9 257,1 7,96 3,10
1-Propanol 30,0 32,4 31,2 29,9 30,8 1,18 3,83
s-i-t-Butanol 1,0 0,9 0,9 0,9 0,9 0,03 3,65
n-Butanol 250,44 261,67 256,93 245,64 253,67 7,06 2,78
SISCHROM, C. A.
Servicio Integral de Sistemas, Cómputos y Cromatografía
Especialista en Cromatografía. http://www.sischrom.4mg.com
RIF: J-30805832-7.

En los valores mostrados en esta tabla podemos observar unos valores tanto
del área de cada pico así como las concentraciones de cada compuesto, una
desviación estándar bastante baja inferior al 5 % en ambos casos, con esto se
demuestra la repetitividad del sistema analítico validado.

CONCLUSION METODO EFECTIVO.