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𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛 𝑆𝑡
𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛 ¿ ? = ×𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 (𝐴𝑏𝑠 𝑜 𝐷𝑂)¿ ?
𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑆𝑡
𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛
𝐹𝐴𝐶𝑇𝑂𝑅 𝐷𝐸 𝐶𝐴𝐿𝐼𝐵𝑅𝐴𝐶𝐼𝑂𝑁 (𝐹𝐶) =
𝐴𝑏𝑠 𝑜 𝐷𝑂
Absorbancia es lo mismo que densidad óptica (DO).
𝐴𝑏𝑠 𝑜 𝐷𝑂 = 2 − 𝑙𝑜𝑔𝑇
APLICACIÓN:
N° tubo St 1 St 2 St 3 St 4 St 5 Pb
Calcular Absorbancia ¿? ¿? ¿? ¿? ¿? ¿?
Calcular mg % ¿? ¿? ¿? ¿? ¿? ¿?
Xmg 2ml
X = 0.1 mg
0.1mg 10 ml
Xmg 100ml
X = 1mg%
St2:
5mg 100 ml
Xmg 4ml
X = 0.2 mg
0.2mg 10 ml
Xmg 100ml
X = 2mg%
St3:
5mg 100 ml
Xmg 6ml
X = 0.3 mg
0.3mg 10 ml
Xmg 100ml
X = 3mg%
St4:
5mg 100 ml
Xmg 8ml
X = 0.4 mg
0.4mg 10 ml
Xmg 100ml
X = 4mg%
St5:
5mg 100 ml
Xmg 10ml
X = 0.5 mg
0.2mg 10 ml
Xmg 100ml
X = 5mg%
TERCER PASO, para calcular los mg% o [ ] de la muestra problema se realiza un procedimiento distinto:
∑ 𝐹𝐶𝑠𝑡
𝐹𝐶 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙 =
5
St1 => 1/0.068 = 14.71
St2 => 2/0.150 = 13.34
St3 => 3/0.228 = 13.16
St4 => 4/0.301 = 13.29
St5 => 5/0.39 = 12.82
TOTAL = 67.32
FC total = 57.32/5=13.46
Pb => [ ]¿? = 13.46 x 0.37= 4.98 mg%.
[Sustrato]:
ORDEN 0
[Enzima]
TIPO DE REACCION: 1er ORDEN
Esto va en relación a la cantidad de sustrato que se
disponga, si esta cantidad es infinita entonces al aumentar
la [ ] de enzima la velocidad de la reacción seguirá
aumentando progresivamente hacia el infinito.
IMPORTANTE:
Para calcular la actividad enzimática en la prueba con pH:
Actividad enzimática = DO (blanco) – DO (1) – DO(2) – DO(3) – DO(4) – DO(5).
Para calcular la actividad enzimática en la prueba con [enzima]:
Actividad enzimática = DO (blanco) – DO (1) – DO(2) – DO(3) – DO(4) – DO(5).
Para calcular la actividad enzimática en la prueba con temperatura:
Actividad enzimática = DO (blanco) – DO (1) – DO(2) – DO(3) – DO(4) – DO(5).
Para calcular la actividad enzimática en la prueba con [sustrato]:
Actividad enzimática = Lectura inicial – Lectura final (esto se hace en cada tubo ya que se mide la DO
2 veces, una cada 5 minutos; notar que esta formula es para cada tubo).
1/[S] y 1/V2
𝐾𝑚
= 𝑏
𝑉𝑚𝑎𝑥
1
= 𝑎
𝑉𝑚𝑎𝑥
1 1
= 𝑎𝑥
𝐾𝑚 𝑏
V1 = Sin inhibidor:
Aplicando las formulas obtenemos:
1/Km = 0.132
1/Vmax = 0.0614
Vmax = 16.28
V2 = Con inhibidor:
Aplicando las formulas obtenemos:
1/Km = 0.136
1/Vmax = 0.078
Vmax = 12.82
Observando la Vmax demostramos que la velocidad con inhibidor es menor que sin usar un inhibidor.
-0.078
-0.0614
-0.132 -0.136
PRACTICA 5: DIGESTION ENZIMATICA DEL ALMIDON
ALMIDON: Polimero de glucosa con enlaces α1-4 (amilosa) y α1-6 (amilopectina).
En presencia del reactivo de Benedict (CuSO4 principalmente) un azúcar “reductor” precipita Cu2O que es de un
color rojo ladrillo.
GLUCOSA FRUCTOSA
ALMIDON
AMILOPECTINA (20%)
α1-4
α1-6 AMILOSA (80%)
PARA LA DETERMINACION DEL SUSTRATO: Se agrega HCl a todas la muestras para detener la reacción y se agrega
LUGOL que es el indicador.
El tubo 5 es de la preparación realizada en el tubo 1, el tubo 6 es de la preparación realizada en el tubo 2 y asi
sucesivamente.
TUBO 5: Tenemos todas las condiciones pero no la enzima por tanto el ALMIDON sigue completo y la solución se tiñe
de COLOR AZUL.
TUBO 6: Tenemos todas las condiciones y la enzima por tanto el ALMIDON se ha HIDROLIZADO y el lugol no se puede
fijar al producto de la hidrolisis que es la ACRODEXTRINA con un COLOR TRANSPARENTE.
TUBO 7: Falta el activador por tanto la reacción se da a medias, la solución se tiñe de ROSA PALIDO por que queda la
ERIDEXTRINA.
TUBO 8: Hemos agregado el HCl que es un acido y por tanto altera el pH optimo para el funcionamiento de la enzima
e inclusive la desnaturaliza por tanto el ALMIDON NO SE HIDROLIZA, obtenemos por tanto COLOR AZUL.
SEGUNDA PARTE: DETERMINACION DEL PRODUCTO
Como en la anterior prueba de las preparaciones que habíamos realizado agregamos REACTIVO DE BENEDICT, el
tubo 9 proviene del tubo 5, el tubo 10 proviene del tubo 6 y asi sucesivamente, el tubo 13 es GLUCOSA pura con
reactivo de BENEDICT.
TUBO 9: Teniamos ALMIDON, en reactivo de BENEDICT NO DA PRECIPITADO por tanto NO ES AZUCAR REDUCTOR.
TUBO 10: Teniamos ACRODEXTRINA o DEXTRINA que con BENEDICT da una solución celeste verdosa con precipitado
rojo por tanto ES AZUCAR REDUCTOR.
TUBO 11: Teniamos ERIDEXTRINA que da un resultado similar al tubo 10 siendo AZUCAR REDUCTOR.
TUBO 12: En reactivo de BENEDICT no forma precipitado, recordemos que quedaba ALMIDON que NO ES AZUCAR
REDUCTOR.
TUBO 13: Glucosa al 1% con BENEDICT forma precipitado ROJO LADRILLO por tanto es AZUCAR REDUCTOR.
Tenemos Glucosa, Fructosa, Maltosa y Sacarosa “puras” que exponemos al reactivo de Benedict:
AZUCARES REDUCTORES: GLUCOSA, FRUCTOSA, MALTOSA.
NO SON AZUCARES REDUCTORES: SACAROSA, ALMIDON.
PRACTICA 6: PRUEBA DE TOLERANCIA ORAL DE LA GLUCOSA
En sospecha de metabolismo anormal de la glucosa (DIABETES).
Para realizar la prueba en un paciente:
75g de glucosa (idealmente es 100g pero se obtiene el mismo resultado) + 400ml de H2O + 2 limones (para ayudar a
que el paciente tome la solución).
Aplicando lo aprendido en la PRACTICA 5:
Tenemos 2 muestras: 1 de nosotros (estamos sanos) y 1 de nuestro paciente del que tenemos sospecha de diabetes.
Exponemos esas 2 muestras al reactivo de Benedict y obtenemos:
Nuestra muestra de orina no forma precipitado.
La muestra de nuestro paciente forma precipitado ROJO LADRILLO => CONCLUSION: El paciente esta
eliminando azucares reductores (no sabemos si es glucosuria u otras, solo sabemos que es un azúcar).
Nosotros en el laboratorio vamos a tener muestras de suero de un paciente al que se le han tomado dichas muestras
cada 30 minutos, mezclamos con Reactivo de glucosa y luego incubamos para luego medir su DO (Abs).
Con los mg/dl que obtengamos (ver mas adelante) realizamos una grafica que va a ser similar a las que están en la
parte superior.
Los valores estándar que debemos conocer son:
A los 0 minutos: Menor a 115 mg/dL.
A los 60 minutos: Menor a 180 mg/dL.
A los 120 minutos: Menor a 140 mg/dL.
Si la glucosa supera los 180 mg/dL a los 60´ el paciente generalmente presenta glucosuria.
100
𝐹𝐶𝑠𝑡 = = 433
0.231
A los 60´ el paciente supero los 180 mg/dl y a 120´ (generalmente tiende a disminuir) sigue sobre los niveles
normales.
CONCLUSION: El paciente no metaboliza bien la glucosa, presenta una curva de tolerancia a la glucosa anormal y
probablemente sea diabético.
DIABETES
Un diabético presenta generalmente:
Polidipsia (sed).
Polifagia (hambre).
Poliuria (orina excesiva).
Al haber menos insulina la glucosa se eleva = Hiperglucemia, la glucosa en exceso no puede ser usada por el
organismo y en respuesta se inicia la gluconeogénesis que eleva aun mas la glucosa en sangre.
Se requieren sustratos para la gluconeogénesis (aminoácidos y lípidos) lo que lleva a proteólisis muscular causando
atrofia y que se manifiesta como polifagia (requiere materia prima para reparar el musculo que se esta
destruyendo), aumenta la lipolisis que a su vez aumenta los acidos grasos séricos que se transforman a cuerpos
cetónicos (acidos) los cuales reducen el bicarbonato (HCO3) en sangre derivando hacia una ACIDOSIS DIABETICA.
PRACTICA 7: ACIDOSIS DIABETICA
Cuerpos cetónicos: Aceto acetato, Acetona (volátil) y B-hidroxibutirato.
Estos en sangre reducen el pH.
El bicarbonato en sangre esta asociado a sodio.
La muestra del Beacker 1 se encuentra en los valores normales pero la muestra del Beacker 2 esta disminuido.
Enfermedad cardiaca coronaria = 1ra causa de morbilidad prematura causada por aumento en el colesterol
plasmático.
El HDL aumenta con los flavonoides, ejercicio y dieta adecuada.
La hipercolesterolemia no da síntomas, da signos.
Lipidos séricos = Colesterol + Trigliceridos.
Triglicerido = Glicerol + 3 acidos grasos (cadena carbonada con un grupo carboxilo).
HDL = Transporte en reversa del colesterol (hacia el hígado), de protección.
Muestra Muestra
Tubo N° Blanco Standard
1 2
St-Colesterol: 200 mg/dl - 30 ul - -
Suero –Pb - - 30 ul 30 ul
1) Calcular el FC:
2) Muestra 1:
3) Muestra 2:
M2 = 668.9 X 0.383 = 256 mg/dl => Calculando el riesgo coronario se determina si hay riesgo.
DETERMINACION DE TRIGLICERIDOS
Muestra Muestra
Tubo N° Blanco Standard
1 2
Suero -Pb - - 30 ul 30 ul
1) Calcular el FC:
FC = 200/0.384 = 520.84
2) Muestra 1:
3) Muestra 2:
FD = 76.5/0.291 = 262.89
2) Muestra 1:
3) Muestra 2:
MUESTRA 1:
MUESTRA 2:
RIESGO CORONARIO
COLESTEROL/HDL < 5
MUESTRA 2:
CONCLUSION:
Paciente 1 no presenta ningún riesgo, en estado correcto de salud.
Paciente 2 presenta un alto riesgo, debe mejorar sus habitos de vida.
PRACTICA 9: ICTERICIA E HIPERBILIRRUBINEMIA
Se presenta ictericia si la bilirrubina > 2 – 2.5 mg/dl => Se acumula en tejidos con mayor numero de fibras
elásticas (piel + mucosas) = ICTERICIA.
Hiperbilirrubinemia (No conjugada o Indirecta): En anemia hemolítica, Sindrome de Gilbert (Deficiencia parcial
de glucoroniltransferasa con leve ictericia, es benigno) y Sindrome de Crigler Najar (No glucoroniltransferasa =
ictericia no hemolítica con alto nivel de bilirrubina en sangre que ocasiona daño cerebral en el infante).
Hiperbilirrubinemia (Conjugada o Directa): Insuficiente capacidad de excreción como en hepatitis aguda,
obstrucción biliar, cirrosis hepática o colestasia.
FC = 2/0.09 = 22.23
BT = FC (Abs – Blanco)
BD = FC (Abs – Blanco)
BT = BD + BI
4.33 = 2.66 + BI
BI = 1.67
CONCLUSION:
Todos los niveles de bilirrubina en este paciente se encuentran aumentados, sufre de hiperbilirrubinemia.
PRACTICA 10: TRANSAMINACION
AA en el hígado Eliminacion de α-amino = TRANSAMINACION => Paso del amino desde el aminoácido entrante al
α-cetoglutarato formando además un α-cetoacido, es una reacción REVERSIBLE.
DATO: Prolina, hidroxiprolina, lisina y treonina no participan en transaminacion.
Aminacion de α-cetoglutarato
quedando como glutamato.
Transportador de aminos
Racemizacion (Cα)
Descarboxilacion
Desaminacion de α-aminacido
quedando como α-cetoacido.
Creatina quinasa => Primera en liberarse al suero sanguíneo tras un ataque cardiaco, ellas dan
información sobre la gravedad de la lesión.
Creatina quinasa GOT GTP
Tubo N° 1 1 2
Creatina:
Derivado de Arginina, Glicina y Metionina, se sintetiza en el hígado y páncreas, esta
presente en el musculo y la neurona, se usa como vector para el transporte de ATP
hacia la miofibrilla.
Urea:
Producto de la degradación de compuestos nitrogenados mediante el ciclo de la urea.
Urea por accion de UREASA => 2NH3 + CO2
Peso Molecular = 60
# de N = 2
DETERMINACION DE LA CREATININA
N° TUBO BL ST Muestra 1 Muestra 2
ORINA 1/10 ml 0.04 0.04
AGUA ml 0.8 0.2 0.8 0.8
St. 1.5 mg/dl ml 0.2
R. Pícrico ml 1.6 0.8 1.6 1.6
Buffer Alcalino ml 0.4 0.2 0.4 0.4
ABSORBANCIA - 0.159 0.8 0.099
1) Creatinina en orina:
Muestra 1:
Muestra 2:
Muestra 1:
Muestra 2:
Muestra 1:
Muestra 2:
Muestra 1:
Muestra 2:
Muestra 1:
Muestra 2:
BALANCE NITROGENADO
PACIENTE 1:
PACIENTE 2:
CONCLUSION:
El paciente numero 1 presenta un catabolismo leve, necesita reponer las perdidas.
El paciente numero 2 esta sano, es normal.
PRACTICA 12: EVALUACION DE MASA PROTEICA VISCERAL Y ESQUELETICA
Compartimiento visceral midiendo: Transferrina, Pre-albumina, Albumina => Proteina total.
Compartimiento esquelético: Excrecion de la creatinina.
Nivel alto de albumina: Inflamacion o infección (hepatitis) además de transtornos en la medula osea.
Nivel bajo de albumina: Hemorragia, transtorno hepático, glomerulonefritis, desnutrición, absorción insuficiente o
quemaduras.
La albumina mantiene la presión oncotica (carga -), para sintetizar hormonas tiroideas, transporte de acidos
grasos, control del pH.
KWASHIORKOR MARASMO
Observamos que hay poca diferencias de genero en cuanto a la PROTEINA TOTAL y ALBUMINA SERICA.
Indicadores para el Kwashiorkor: PROTEINA TOTAL y ALBUMINA SERICA.
Indicadores para el Marasmo: CREATININA URINARIA e INDICE PESO Y TALLA.
KWASHIORKOR
En niños de 1-3 años, dieta baja en proteínas pero ingesta de CH normal o excesiva.
Sintomatologia: Irritabilidad, diarrea, falta de crecimiento, infecciones, cambios en el color del pelo, piel escamosa,
infiltración grasa en el hígado, menor masa muscular y edema masivo.
MARASMO
Carencia de alimentos en general (poca proteínas y poco CH), mas común en el primer año de edad.
Cuasado también por infecciones o parasitosis, también parto prematuro, malabsorción o interrupción temprana de
la lactancia.
Sintomatologia: Crecimiento deficiente, poca grasa subcutánea, delgadez extrema, anemia, ulceraciones por presión,
cambio en la textura del cabello el color normal.
KWASHIORKOR MARASMICO
Malnutricion grave con edema y peso menor al 60% de lo esperado de su edad. Presentan caracterisiticas del
marasmo y edema, además se puede observar dermatosis y hepatomegalia.
Suero 20 ul 20 ul
FC = Concentracion/Abs estándar
FC = 5.7/0.162 = 35.185
MUESTRA 1:
MUESTRA 2:
BL Problema Problema St
Agua destil. 20 ul
Suero 20 ul 20 ul
FC = Concentracion/Abs estándar
FC = 3.3/0.435 = 7.586
MUESTRA 1:
MUESTRA 2:
MUESTRA 1:
MUESTRA 2:
MUESTRA 1:
MUESTRA 2:
INTERPRETACION: Si ambos pacientes son varones entonces ambos pueden ser marasmaticos, si ambos son mujeres
entonces están dentro del rango normal.
GLOBAL
Paciente 1:
Si el paciente es varon: El índice
Indice peso/talla: 27.27
peso/talla y la creatinina urinaria
Proteina total sérica: 4.468g/dl
corresponden a un marasmatico.
Albumina sérica: 5.135g/dl
Creatinina urinaria: 433.09 mg/24hrs/m
Paciente 2:
Si el paciente es mujer: El único índice
Indice peso/talla: 32.05 bajo es el de proteína total, no se
Proteina total sérica: 4.609g/dl concluye que tenga Kwahiorkor, esta
Albumina sérica: 4.179g/dl normal.
Creatinina urinaria: 624.43 mg/24hrs/m
PRACTICA 13: METODOS PARA LA EVALUACION NUTRICIONAL
PESO CORPORAL:
%𝑃𝑒𝑠𝑜 𝐼𝑑𝑒𝑎𝑙 = 𝑃𝑒𝑠𝑜 𝐴𝑐𝑡𝑢𝑎𝑙⁄𝑃𝑒𝑠𝑜 𝐼𝑑𝑒𝑎𝑙 𝑥100
+120% = OBESIDAD
110-120 = SOBREPESO
90-110 = NORMAL
80-90 = DESNUTRICION LEVE
70-80 = DESNUTRICION MODERADA
-69% = DESNUTRICION GRAVE
HOMBRES MUJERES
1.45->1.5 => 53±1 1.40->1.45 => 46±1 +3
+3
1.5->1.55 => 56±1 1.45->1.5 => 49±1
+3 +3
1.55->1.6 => 59±1 1.5->1.55 => 52±1
1.6->1.65 => 62±1 +3 1.55->1.6 => 55±1 +3
1.65->1.7 => 65±1 +3 1.6->1.65 => 58±1 +3
1.7->1.75 => 68±1 +3 1.65->1.69 => 61±1 +3
1.75->1.8 => 72±1 +4
1.8->1.85 => 76±1 +4
ADECUACION DE LA DIETA:
𝐸𝑛𝑒𝑟𝑔𝑖𝑎 𝑑𝑒 𝐷𝑖𝑒𝑡𝑎
𝐴𝑑𝑒𝑐𝑢𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛 𝑑𝑒 𝐷𝑖𝑒𝑡𝑎 = ⁄𝑁𝑒𝑐𝑒𝑠𝑖𝑑𝑎𝑑 𝐸𝑛𝑒𝑟𝑔𝑒𝑡𝑖𝑐𝑎 𝑥100%
V.N. = 100%, aumento = sobrepeso, disminución = desnutrición.
GASTO CALORICO:
𝐷𝑢𝑟𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛 𝑑𝑒 𝑎𝑐𝑡𝑖𝑣𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑥 𝐾𝑐𝑎𝑙 𝑥 𝑃𝑒𝑠𝑜
Hombres = 2800 Kcal/24h, Mujeres = 2200 – 2500 Kcal/24h.
En el paciente su metabolismo basal:
Varon = (1xpesox24)+50%
Mujer = (0,9xpesox24)+50%
PLIEGUE CUTANEO:
Estimado del almacenamiento de lípidos.
Varon = 12,5 mm.
Mujer = 16,5 mm.
CIRCUNFERENCIA MUSCULAR DEL BRAZO:
𝐶𝑖𝑟𝑐𝑢𝑛𝑓𝑒𝑟𝑒𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑀𝑢𝑠𝑐𝑢𝑙𝑎𝑟 𝑑𝑒𝑙 𝐵𝑟𝑎𝑧𝑜 = 𝐶𝑖𝑟𝑐𝑢𝑛𝑓𝑒𝑟𝑒𝑛𝑐𝑖𝑎 𝐵𝑟𝑎𝑧𝑜 − (3,34 𝑥 𝑃𝑙𝑖𝑒𝑔𝑢𝑒 𝑐𝑢𝑡𝑎𝑛𝑒𝑜)
VN Circunferencia Muscular:
Varon = 25,3 mm.
Mujer = 23,2 mm.
VN Circunferencia Brazo:
Varon = 29,3 mm.
Mujer = 28,5 mm.
En esta pagina se encuentran la cantidad de proteínas, grasas, carbohidratos y demás en determinados alimentos:
http://www.ins.gob.pe/insvirtual/images/otrpubs/pdf/Tabla%20de%20Alimentos.pdf