FACULTAD DE CIENCIAS BÁSICAS E INGENIERÍA

PROGRAMA DE BIOLOGÍA
LABORATORIO DE BIOQUÍMICA

AMINOACIDOS: CURVAS DE TITULACIÓN Y SEPARACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA

OBJETIVOS:

 Comprobar el carácter anfotérico de los aminoácidos y determinar mediante curvas de

titulación, los valores de pK de los grupos ionizables.
 Hallar el punto isoeléctrico de los aminoácidos.
 Separar e identificar una mezcla de aminoácidos por cromatografía en capa fina.

RESULTADOS:

Tabla 1. Datos obtenidos de la titulación del aminoácido vs acido/base

Volumen Temperatura
pH 26 4,507
(ml) °C 27 4,659 23,2ºC
1 1,59 28 4,844
2 1,625 22,9ºC 29 5,128 23,3 ºC
3 1,664 30 5,591
4 1,706 31 7,935 23,4 ºC
5 1,755 32 8,886
6 1,805 22,8ºC 33 9,156
7 1,861 34 9,391 23,5 ºC
8 1,915 35 9,536
9 2,057
36 9,681
10 2,133 22,6ºC
37 9,821
11 2,217
12 2,305 38 9,954 23,6 ºC
13 2,401 22,4°C 39 10,089
14 2,51 40 10,23
15 2,633 41 10,385
16 2,769 22,2 ºC 42 10,573
17 2,927 43 10,811 23,7ºC
18 3,107 22,1ºC 44 11,115
19 3,312 45 11,5
20 3,52 22,0ºC 46 11,759
21 3,691
47 11,928
22 3,992 23,0 ºC 48 12,074 23,8ºC
23 4,123 49 12,13
24 4,229 50 12,209
25 4,375 23,1 ºC

51 12,264
52 12,317
 54 12,406
55 12,442
53 12,361 56 12,473

Grafica 1. Curva de titulación aminoácido vs acido/base

Ácido glutamico vs acido/base

14

12
pKN: 9,67
10

8
pH

6
pKR: 4,25
PI: 5,915
4
pKC: 2,16
2

0
0 10 20 30 40 50 60
Volúmen

Curva de ácido glutámico al agregarse ácido y base

ANÁLISIS

Se empleó la valoración con el aminoácido L-Acido Glutámico como muestra de un aminoácido

acido, obteniéndose tres pK (tres grupos ionizables: 1. El grupo alfa-carboxilo, 2. El grupo alfa-
amino y 3. El grupo carboxilo de la cadena lateral) al realizar la curva de valoración acido-base.
(Ver grafica 1) Por lo tanto, la adición de equivalentes de base produce la liberación secuencial de
protones al medio, y estos equilibrios están determinados por sus correspondientes constantes: el
grupo α- carboxilo (pKC=2,16), el grupo carboxilo de la cadena lateral (pKR=4,25) y el grupo amino
(pKN=9,67). En este caso, existen tres regiones de capacidad amortiguador, y el PI se calcula como
el promedio del pKC y del Pkr dando como resultado 5,915.

Al comenzar la titulación la carga neta del aminoácido es negativa al hacer frente con los
equivalentes de H del ácido (ácido clorhídrico) se presenta un primer equilibrio en el pH de 9,95
que al compararse con la constante teórica (9,67) se encuentra similitud lo que proporciona mayor
fiabilidad en el dato obtenido experimentalmente, entre la forma desprotonada con carga
negativa de -1 y carga negativa -2 el grupo amino a pH más bajos (menores que el pKN)comienza a
protonarse (NH2 -----N H3) (Clark J. 1966); al añadir más volumen del ácido patrón alcanza el
punto del pKR donde el pH es de 3,59 donde se compara con la constante teórica (4,25), en este
punto hay un equilibrio ente el aminoácido que representa una carga neta de cero y el aminoácido
con una carga neta de -1 obtenida por la pérdida de un protón por el grupo carboxilo de la cadena
lateral. Al seguir añadiendo mililitros de HCl se alcanza un volumen de 56 mL donde la carga neta
de la molécula es cero y su eléctrica es neutra, generando por el grupo carboxilo de la cadena
lateral que se protoniza (COO --- COOH) (Clark J. 1966)es decir, se alcanza el punto isoeléctrico del
aminoácido en un pH de 3,185 pero son la formula donde se tiene en cuenta el pKR y pKc el valor
obtenido en el desarrollo del laboratorio fue 2,5 lo que se acerca a la constante teórica de (3,22) lo
cual lleva a considerar un valor aceptable para ser considerado como el pH del aminoácido, al
llegar a niveles más bajos de pH la molécula con carga neta cero y con carga neta positiva se
encuentran en equilibrio este punto es alcanzado a un pH de 3,26 en el desarrollo de la práctica, la
constante teórica es de (2,16) al disminuir el pH volviéndose más ácido el grupo alfa-carboxilo se
convierte de su forma desprotonada a su forma protonada (COO----COOH) dando a la molécula
una carga neta positiva de +1 (Lieberman, 2013).

Nótese como el valor de pKC es más pequeño del pKN, lo que quiere decir que el grupo carboxilo
es más es un ácido más fuerte, el cual se disocia más fácilmente que el grupo amino. Esto hace que
la valoración permita determinar tres valores de pKa, 2,19 para el grupo carboxilo, 4,25 para la
cadena lateral (observado en el grafico como pKR) y 9,67 para el grupo amino, la cercanía de los
dos valores (PI y pKR) hacen que en la curva de valoración no estén tan claro los puntos medio
para el cálculo.

CONCLUSIONES

Las formas iónicas en las que puede existir un aminoácido, están determinadas por el pH del
medio en el que se encuentra disuelto.

BIBLIOGRAFÍA

CLARK, J.M. 1966. Bioquímica Experimental, 1a Ed, Editorial Acribia, Zaragoza

RENDINA G. 1974. Técnicas de Bioquímica Aplicada.

LIEBERMAN, 2013. Marks bioquímica medica básica. 4ta ed. Mexico, D.F. Lippincott