Art. Revisión.

MICROORGANISMOS Y SU
APLICACIÓN INDUSTRIAL POR MEDIO
DE LA BIOTECNOLOGÍA.
Biological Systems And Industrial
Application Through Biotechnology.

HURTADO SÁENZ ANDRES AUGUSTO1

1 Colombia. Universidad de los Llanos, Facultad de Ciencias Básicas e Ingeniería, Programa Biología,
Electiva II: Ecología Microbiología. Cód. 164003415. andres.hurtado@unillanos.edu.co

RESUMEN
The discoveries over the last decade have
Los descubrimientos de la última década han demonstrated that microbiology is a central
demostrado que la microbiología es una scientific discipline with practical applications in
disciplina científica central con aplicaciones agriculture, medicine, bioremediation,
prácticas en la agricultura, la medicina, biotechnology, engineering, and other fields. It
biorremediación, biotecnología, ingeniería y is clear that the roles of microbes in nature are
otros campos. Es claro que el papel de los so diverse that the process of mining this
microorganismos en la naturaleza es tan genetic variation for new applications will
diverso que el proceso de exploración de esta continue long time into the future. However,
variación genética para nuevas aplicaciones these opportunities demand a deep
continuará por mucho tiempo en el futuro. Sin understanding of basic microbial physiology,
embargo, estas posibilidades exigen un genetics, and ecology. Major challenges that
profundo conocimiento de la fisiología básica lay ahead are to impart the broad training
microbiana, la genética y la ecología. Los needed to entice and enable the next
principales desafíos que se avecinan son generation of microbiologists, and to educate
impartir una amplia formación necesaria para the public and government representatives
atraer y activar la siguiente generación de about the continued and critical importance of
microbiólogos, y educar a los representantes this field for health and the economy.
públicos y gubernamentales sobre la
importancia crítica y continuidad de este campo Keywords: Biotechnology, Bioremediation,
de la salud y la economía. recombinant DNA plasmids, genes, metabolic
pathways engineering.
Palabras clave: Biotecnología,
Biorremediación, ADN recombinante,
plásmidos, genes, Ingeniería de vías DE LA GENÉTICA CLÁSICA A LA ERA
metabólicas. GENÓMICA
ABSTRACT

1
Hurtado. A. Universidad de los llanos
Art. Revisión.
La forma de estudiar la genética ha progresado
notablemente en las últimas décadas. El
desarrollo de nuevas y potentes tecnologías en
el período post Segunda Guerra Mundial llevó a
una revolución en la biología. La introducción
de herramientas genéticas tales como
transposones, junto con la capacidad para
clonar genes y determinar secuencias de ADN,
y la posterior explosión de técnicas basadas en
estos métodos hizo posible diseccionar la
genética molecular de esencialmente cualquier
organismo. (Maloy y Schaechter, 2006; Michán
y Castillo, 2011). Sus orígenes se remontan al
estudio de los caracteres hereditarios, seguido
por el descubrimiento de los genes y los
cromosomas hasta conocer la estructura del
ADN. (Gamboa y Trujillo 2009; Michán y
Castillo, 2011). Los factores fundamentales de
la herencia. El estudio de la herencia biológica
ha sido un tema de interés a lo largo de la
historia pero fue a mediados del siglo XIX con
los experimentos realizados por Mendel cuando
se lograron establecer las primeras respuestas
a este enigma. Mendel observó que las
características de los organismos eran
heredables de padres a hijos y de una forma
independiente, lo cual dio origen al concepto de
unidades de la herencia, los genes. (Michán y
Castillo, 2011).
En la primera década del siglo XX, Thomas
Morgan sugirió que los genes se localizaban
físicamente en los cromosomas con base en
observaciones de transmisión de caracteres
ligados al sexo en la mosca de la fruta
Drosophila melanogaster. (Michán y Castillo,
2011). Todos estos descubrimientos han
promovido la evolución de la biomedicina hacia
las eras de la genómica y posgenómica en las
que el uso de la genética reversa impera sobre
la genética básica o directa. (Gamboa y Trujillo
2009; Michán y Castillo, 2011). Además, surge
la genética molecular, la genómica funcional y
las diversas tecnologías “ómicas” que en
Hurtado. A. Universidad de los llanos
conjunto pretenden comprender de manera
integral la función de todos los componentes
del genoma y sus productos. (Michán y Castillo,
2011).
Entender la forma en la que se encuentra
codificada la información genética promovió el
desarrollo de la tecnología de ADN
recombinante, lo cual permitió aislar, manipular
y editar material genético; obtener un gran
número de copias de fragmentos específicos
de este ácido nucleico para su estudio; clonar
genes en vectores y estudiar su estructura,
organización, función y expresión. (Maloy y
Schaechter, 2006; Gamboa y Trujillo 2009;
Michán y Castillo, 2011). Posteriormente se
describió la secuencia de todo el material
genético o “genoma” contenido en los mismos,
incluyendo el ADN del núcleo, mitocondria y los
diferentes tipos de plástidos. En 1977 se
publicó la secuencia completa del primer
genoma, la del fago X174 de 5368 pb y pocos
años después se dieron a conocer las 16.569
pb que constituyen el genoma de la mitocondria
humana. Posteriormente se desarrolló la
secuenciación automatizada, la cual permitió
secuenciar ADN con mayor eficiencia, rapidez y
a gran escala. (Michán y Castillo, 2011).
La biotecnología ha impactado el área de la
medicina, principalmente con su contribución al
conocimiento a nivel molecular de la causa de
diversas enfermedades, lo cual ha generado
una revolución en la industria farmacéutica con
la producción de biofármacos contra
enfermedades específicas. (Gamboa y Trujillo
2009). Estos acontecimientos nos permiten
responder a las preguntas que se consideraban
anteriormente incomprensibles, y tuvo un gran
impacto en todas las disciplinas de la biología.
(Maloy y Schaechter, 2006; Gamboa y Trujillo
2009). Un biofármaco es una molécula
biológica con fines terapéuticos obtenida a
partir de un organismo vivo, ya sea a partir de
2
Art. Revisión.
bacterias, hongos, células animales, levaduras,
entre otros. Estas moléculas presentan mayor
acción terapéutica y menos reacciones
secundarias, al ser prácticamente homólogas a
las producidas por el organismo. La gran
mayoría de estos biofármacos son proteínas
recombinantes. (Gamboa y Trujillo 2009).
La obtención de proteínas recombinantes se
logra mediante la inserción del gen que
expresa la proteína de interés en un organismo
diferente. (Gamboa y Trujillo, 2009; Michán y
Castillo, 2011). La elección del microorganismo
para expresar la proteína de interés depende
en gran medida de las características
fisicoquímicas de la proteína a producir. Los
sistemas procariontes expresan proteínas
solubles o en forma de agregados
intracelulares o cuerpos de inclusión, sin
plegamiento, lo que implica su estructuración
in-vitro. (Gamboa y Trujillo, 2009).
La expresión de estas proteínas se ha
convertido en una herramienta muy popular, ya
que es posible obtener altas cantidades de
proteína con bajos costos de producción y altas
purezas de una o varias proteínas de interés.
(Gamboa y Trujillo, 2009; Michán y Castillo,
2011). El desarrollo de la tecnología del ADN
recombinante y de la secuenciación masiva y
automatizada, permitieron determinar
posteriormente la anatomía de los genomas.
(Michán y Castillo, 2011).
Las bases de datos que alojaban secuencias
de genes crecieron rápidamente, al tiempo que
se iniciaron varios proyectos para secuenciar
genomas de diversas especies, incluyendo el
del ser humano, el cual empezó en 1990 y
concluyó una década después. A la fecha se
conocen un total de 3.918 genomas completos
de los cuales 40 pertenecen a eucariontes,
1.377 a procariontes, 2.460 a virus y 41 a
viroides. (Michán y Castillo, 2011). Los avances
Hurtado. A. Universidad de los llanos
en microscopía, la nanotecnología y la biología
estructural permiten el análisis de los
mecanismos químicos subyacentes a un nivel
más profundo y más profundo. (Maloy y
Schaechter, 2006).
El área de la biotecnología que se relaciona al
estudio y la modificación del metabolismo es la
ingeniería de vías metabólicas (IVM). Ésta
puede definirse como la modificación racional y
directa de las reacciones que constituyen el
metabolismo de un organismo, con el propósito
de mejorar sus propiedades o su productividad.
(Martinez y Gosset, 2007; Gamboa y Trujillo
2009). La IVM surge como una nueva área
dentro de la biotecnología como resultado del
cúmulo de conocimientos generados por varias
disciplinas biológicas que incluyen
principalmente a la bioquímica, la genética, la
biología molecular y las ciencias genómicas.
(Martinez y Gosset, 2007).
MICROORGANISMOS Y APLICACIONES DE
INTERES.
Los microorganismos en la biosfera, mediante
sus propios metabolismos y las interacciones
con otros organismos bióticos y abióticos,
conllevan al mantenimiento del equilibrio y a la
dinámica en los ecosistemas y a la vida misma
en el planeta. En la actualidad sólo se conoce
el 10% de las bacterias de la naturaleza, con la
desventaja de que la mayoría de éstas no son
cultivables, posiblemente por los
requerimientos nutricionales y condiciones
fisicoquímicas de su entorno, las cuales no se
pueden reproducir en el laboratorio, y tampoco
recrear in vitro las interrelaciones simbióticas y
antagónicas en las que ellas sobreviven. Las
técnicas de biología molecular para caracterizar
el ADN microbiano son consideradas
complementarias a las técnicas
microbiológicas. La unión de estos métodos,
permiten validar en forma más efectiva la
3
Art. Revisión.
identificación microbiana, sobre todo para
microorganismos que son de difícil desarrollo in
vitro. (Gutiérrez et al., 2009)
La capacidad de manipular ADN y conocer las
secuencias de los genes en combinación con la
necesidad de entender en detalle su estructura
y función de los mismos, ha revolucionado la
forma de aproximarnos a la genética y
promovido el desarrollo de un nuevo campo de
la biología, la genética molecular. (Michán y
Castillo, 2011; Gericke, 2012). En la revolución
genómica el objeto de estudio principal se
enfocó a los genomas más que a los genes y
este interés permitió esclarecer detalladamente
la composición de la molécula esencial que
forma a los seres vivos, dejando atrás aquello
que hace un siglo y medio se planteaba como
un enigma. (Maloy y Schaechter, 2006; Michán
y Castillo, 2011; Gericke, 2012). La capacidad
de estudiar microorganismos en su propio
entorno en lugar del tubo de ensayo, junto con
la capacidad para diseccionar los detalles
moleculares de las células microbianas ha
hecho de la biología microbiana fundamental
para casi todas las disciplinas de la ciencia.
(Maloy y Schaechter, 2006). Las hidrolasas
producidas por microorganismos halófilos han
sido usadas en la industria farmacéutica para la
elaboración de algunos medicamentos como
antibióticos, hormonas y pesticidas también
han sido usadas para el tratamiento de
superficies marinas contaminadas con petróleo.
(Castillo y Barragan, 2001).
La ingeniería genética y sus técnicas de ADN
recombinante surge en los años setenta como
resultado del conocimiento acumulado en el
campo de la biología molecular. Con ello se
abre la posibilidad de aislar, editar y modificar
el material genético, lográndose incluso el
trasplante de genes entre especies diferentes.
Una importante aplicación de la ingeniería
genética ha sido el desarrollo de cepas
Hurtado. A. Universidad de los llanos
bacterianas con la capacidad de producir
cantidades elevadas de proteínas terapéuticas,
como es el caso de la insulina y la hormona de
crecimiento humanas. (Martinez y Gosset,
2007).
Bioremediación
Desde hace un tiempo, se han comenzado a
estudiar, como alternativa, una serie de
métodos biológicos utilizando microorganismos.
El uso de los mismos para tratar aguas
residuales contaminadas con metales es un
campo emergente, ya que en un principio se
desarrollaron para remediar las aguas
contaminadas con metales e hidrocarburos,
pero actualmente se utilizan como alternativa
de tratamiento. Éstos podrían reducir
significativamente los costos de los productos
químicos y el consumo de energía, en
comparación con los procesos convencionales
de tratamiento fisicoquímico. (Panigatti et al.,
2011).
La presencia de salinidad y sodio en los suelos
interfiere en el crecimiento adecuado de la
mayoría de los cultivos y por lo tanto constituye
uno de los problemas más serios que enfrenta
la agricultura sostenible a nivel de todo nuestro
planeta. Las prácticas agrícolas inadecuadas
han sido la causa del aumento de los suelos
salinos–sódicos en todo el planeta. Su
recuperación se ha hecho principalmente
cambiando el sodio por otro catión,
generalmente calcio, remediando en forma
mecánica y usando plantas halotolerantes. Sin
embargo, no es fácil ni económico eliminar o
disminuir las concentraciones de sodio del
suelo (Sánchez y Arguello, 2006).
En la actualidad está creciendo el interés por
conocer mejor la diversidad de
microorganismos halófilos es decir que
dependen para su supervivencia del sodio, y
cada vez es mayor el número de
4
Art. Revisión.
investigaciones relacionadas con el tema ya
que estos organismos producen una amplia
variedad de metabolitos secundarios estables
que pueden tener aplicaciones prácticas.
(Castillo y Barragan, 2001; Sánchez y Arguello,
2006). Las aplicaciones biotecnológicas de los
microorganismos extremófilos halófilos son
diversas entre las cuales se pueden citar:
producción de alimentos fermentados,
producción de salsa de soya, colorantes,
extremozimas resistentes a altas
concentraciones de sal (amilasas, proteasas,
etc.), aditivos utiliza-dos en cosméticos,
plásticos biodegradables y producción de
agentes gelificantes como exopolisacáridos.
(Castillo y Barragan, 2001).
Estos microorganismos pertenecientes a la
familia Halobacteriaceae abundan en salinas y
lagos hipersalinos, ambientes bajo los cuales
muy pocos seres vivos pueden crecer. Una
característica fundamental de los miembros de
esta familia es que son halófilos obligados,
necesitando concentraciones de NaCl mayores
de 1.5 M para crecer, además, toleran bastante
bien las temperaturas elevadas, ya que los
ambientes que habitan, por la posición
geográfica y por tratarse de aguas estancadas,
suelen ser lugares muy cálidos con
temperaturas que pueden llegar a mas de
50°C. (Castillo y Barragan, 2001). Estudios
actuales exploran la posibilidad de usar estos
microorganismos bacterianos con capacidad
halófila, podrían ser utilizados como posibles
remediadores de suelos sódicos y salinos.
(Sánchez y Arguello, 2006). Estudios han
demostrado que los microorganismos halófilos
cuentan con estrategias que les permiten
enfrentar el estrés osmótico manteniendo altas
concentraciones intracelulares de sal y
sintetizando solutos compatibles que les
permiten balancear su presión osmótica.
(Castillo y Barragan, 2001).
Hurtado. A. Universidad de los llanos
La contaminación causada por metales
pesados en aguas superficiales ha sido
siempre un problema muy grave, ya que estos
elementos no son biodegradables y se
acumulan en los tejidos vivos. El cromo es
ampliamente utilizado en diversas aplicaciones
industriales como la producción de acero,
galvanoplastía, curtido de pieles, industrias
textil, de conservación de la madera, de
aluminio anodizado y refrigeración por agua. El
tratamiento de suelos contaminados con
hidrocarburos también es esencial para
mantener la calidad del medio ambiente.
Muchos microorganismos son conocidos por
ser capaces de concentrar especies de metales
de soluciones acuosas diluidas y de
acumularlas dentro de su estructura celular.
Estos microorganismos incluyen levaduras,
hongos, algas y bacterias. Los
microorganismos pueden movilizar o
inmovilizar metales, metaloides y compuestos
organometálicos a partir de procesos de
oxidación y reducción. La presencia de
residuos y de metabolitos de plaguicidas en el
alimento, agua y suelo representa actualmente
uno de los temas importantes para la química
ambiental. Existe una gran variedad de
métodos físicos y químicos para tratar los
suelos y mantos acuíferos contaminados, pero
muchos de estos tratamientos no destruyen los
compuestos peligrosos sino que los transfieren
de una fase a otra, por lo que el tratamiento
biológico en el que se transforman estos
compuestos peligrosos en compuestos más
simples sigue siendo un desafío importante en
la actualidad. Especies tales como
Acinetobacter sp. Pseudomonas sp., Bacillus
coagulans, E. coli ATCC 33456 y
Desulfomicrobium norvegicum fueron
estudiados bajo diferentes condiciones
operativas, en el estudio de la reducción de Cr
(VI), tanto en sistemas de suspensión como
adheridos. Los mecanismos fisiológicos
involucrados en la reducción de cromo
5
Art. Revisión.
hexavalente varían ampliamente entre las
diferentes especies. En algunos casos la
reacción es catalizada por enzimas asociadas a
la membrana celular, mientras que en otros las
mismas se encuentran en la fracción soluble.
En particular, la reducción biológica de Cr (VI) a
Cr (III) permite considerar a los
microorganismos como una herramienta
biotecnológica para el tratamiento de las aguas
residuales contaminadas con cromatos.
(Panigatti et al., 2011).
Biofarmaceutica
Desde el descubrimiento del modelo del ADN
por Watson y Crick en el año 1953 se ha
avanzado mucho en su manipulación y
aplicaciones. Numerosas investigaciones han
permitido un mejor entendimiento de como el
ADN y otras moléculas portan y transmiten la
información genética. Desde comienzos del
siglo pasado, se sabe que algunas
enfermedades ocurren debido a fallas
metabólicas, por deficiencia en una enzima,
proteína ausente o menos activa que la
proteína normal; lo anterior es debido a
mutaciones en los genes que codifican la
síntesis de esas proteínas. Este conocimiento
ha estimulado a muchos investigadores en la
búsqueda de alternativas para el tratamiento de
enfermedades genéticas empleando la terapia
de reemplazo enzimático. (Córdoba et al.,
2003).
Actualmente, algunas moléculas de interés
farmacológico se obtienen mediante procesos
basados en refinación y síntesis química o a
partir del petróleo y derivados. Esto permite
producir estos compuestos útiles con un costo
de producción relativamente bajo. Sin embargo,
la mayoría de estos procesos generan
subproductos que contaminan el medio
ambiente. Por otra parte, depender del petróleo
como materia prima tiene la desventaja de que
no es renovable, por lo tanto, en el futuro su
Hurtado. A. Universidad de los llanos
disponibilidad será limitada. Por estos motivos,
ha surgido el interés en la búsqueda de
alternativas tecnológicas para producir
compuestos útiles mediante procesos no
contaminantes y que no dependan del petróleo.
Una de las alternativas más promisorias es la
biotecnología. (Martinez y Gosset, 2007).
El surgimiento de nuevas enfermedades en el
mundo moderno (enfermedades emergentes y
reemergentes) y la aparición cada vez mayor
de patógenos antibiótico-resistentes, han
generado la necesidad de evaluar diversos
compuestos naturales con actividad
antimicrobiana como una alternativa en el
tratamiento de enfermedades
infectocontagiosas y, de esta manera,
contrarrestar algunos de estos problemas de
salud pública y veterinaria. (León et al., 2010).
Un claro ejemplo de esto es el interferónbeta
1a y 1b, el cual ha elevado la calidad de vida
de los pacientes diagnosticados con esclerosis
múltiple.4,5 En diversos estudios se ha
demostrado que la importancia de las proteínas
terapéuticas recombinantes se ha
incrementado exponencialmente en los últimos
30 años. (Gamboa Trujillo 2009).
Muchos organismos marinos que incluyen
bacterias, hongos, fitoplancton y algas
mayores, así como algunos invertebrados son
actualmente considerados como virtuales
fuentes promisorias de substancias bioactivas.
Hallazgos de nuevos microorganismos marinos
muestran la existencia de cepas nativas que
producen una variedad de metabolitos
secundarios química y biológicamente
interesantes para el desarrollo y producción de
nuevos compuestos de importancia en la
industria farmacológica, cosmética, de
suplementos nutricionales, biomoléculas,
biocatalizadores, agroquímicos, química fina,
entre otras. Tradicionalmente las algas han
sido fuentes de aislamiento de metabolitos con
6
Art. Revisión.
principios activos útiles en medicina. (León et
al., 2010; Martinez y Gosset, 2007).
Estudios sobre las interacciones microbio-
anfitrión indican que los microbios influyen en el
anfitrión en formas que nunca se imaginaba.
Por ejemplo, la presencia de la biota
microbiana normal en el intestino de los ratones
promueve el desarrollo adecuado del tejido
vascular, así como la inmunidad del huésped
frente a patógenos invasores. (Maloy y
Schaechter, 2006). Estos descubrimientos nos
proporcionan nuevos conocimientos sobre las
interacciones huésped-microbio, beneficiosos
que pueden conducir al diseño racional de los
probióticos. Sin embargo, también estamos
empezando a aprender que los microbios
pueden causar enfermedades crónicas que se
pensaba previamente que a debido a la
genética o dolencias medio ambiente tales
como úlceras y cáncer de estómago causadas
por Helicobacter pylori, artritis causada por
Borrelia burgdorferi, y muchas otras
enfermedades. (Maloy y Schaechter, 2006).
La insulina es una proteína con actividad
hormonal que regula los niveles de glucosa en
la sangre, aunque también participa en la
regulación de otros procesos fisiológicos como
la utilización de algunos nutrientes,
estimulación de la síntesis de glucógeno,
aminoácidos, proteínas y consumo de lípidos.
Las deficiencias en su modo de acción se dan
cuando su biosíntesis es insuficiente y
deficiente, provocando alteraciones en sus
funciones fisiológicas, directamente la
concentración de glucosa en la sangre,
produciendo así el padecimiento conocido
como diabetes. La insulina humana
recombinante se ha expresado en diversos
organismos, incluyendo bacterias, levadura,
hongos, células y órganos de animales y
plantas transgénicas. Actualmente su
producción comercial se ha limitado a
Hurtado. A. Universidad de los llanos
microorganismos como Escherichia coli y
Saccharomyces cerevisiae, sin embargo los
sistemas basados en biotecnología vegetal en
algunos casos ofrecen ventajas tanto en
producción, como en bioseguridad y economía.
Esas biotecnologías basadas en plantas
pueden utilizar plantas transgénicas completas
o sus células, tejidos u órganos cultivados en
biorreactores de manera similar a los sistemas
de fermentación para microorganismos. (García
et al, 2010).
La melanina es uno de los pigmentos más
comunes y de mayor distribución en la
naturaleza. Es responsable de la coloración de
plantas y animales; se encuentra en los ojos, el
cabello, la piel, el plumaje, la cáscara de los
huevos, la cutícula de los insectos, la tinta de
los cefalópodos y en la pared y el citoplasma
de muchos microorganismos. En los humanos
este pigmento se ha encontrado también fuera
de la piel, en las neuronas de la sustancia
negra y en los hepatocitos. Hasta el momento
han sido muchas las características que se le
ha conferido a la melanina. Se sabe que
protege las bacterias como Vibrio cholerae del
choque térmico e hiperosmolar en los
estuarios, generando así bacterias resistentes
estos cambios ambientales. En relación con los
hongos, se han estudiado tanto en aquellos
patógenos de importancia para el humano, co-
mo en otros de tipo ambiental y de interés
biotecnológico, en los cuales se ha encontrado
que las melaninas son importantes para la
supervivencia y la longevidad de las propágulas
micóticas. La melanina también funciona como
sistema de evasión de los mecanismos
inmunológicos del huésped. (Uran y Cano,
2008).
La tirosinasa (monofenol monooxigenasa EC
1.14.18.1) es una enzima que contiene cobre
que participan en la síntesis de melanina. El
uso de oxígeno molecular, esta enzima cataliza
7
Art. Revisión.
la hidroxilación de L-tirosina a L-
dihidroxifenilalanina (L-dopa) (actividad
cresolasa), su posterior oxidación para
dopacromo (actividad catecolasa), que a través
de una serie de reacciones de óxido-reducción
no enzimáticamente catalizadas se polimeriza
para formar melanina. En la forma silvestre
Escherichia coli no tiene el gen que codifica
para la tirosina y por lo tanto no puede
sintetizar melanina. (Cabrera et al., 2005; Uran
y Cano 2008). Las técnicas de ingeniería
genética permiten el aislamiento de genes de
cualquier organismo y su modificación para que
sean funcionales en otra especie. Siguiendo
este esquema, ha sido posible generar cepas
de E. coli con la capacidad de sintetizar
proteínas humanas de uso terapéutico. De la
misma manera, se ha logrado la transferencia a
E. coli de genes que codifican para enzimas y
con esto modificar su metabolismo. Es así
como se abre la posibilidad de dotar a esta
bacteria con la capacidad de sintetizar
metabolitos que se encontrarían normalmente
fuera de su repertorio natural. En el caso de los
compuestos aromáticos, existen ya varios
ejemplos de cómo se pueden extender las vías
biosintéticas naturales para que este
microorganismo pueda sintetizar nuevos
compuestos. (Robledo et al., 2007; Martinez y
Gosset 2007; Urán y Cano, 2008; Sabido et al.,
2009). Más recientemente, tirosinasas de
orígenes bacterianos se han reportado y
caracterizado bioquímicamente. Estos estudios
proporcionan información útil sobre la
diversidad bioquímica en esta familia de
enzimas y su potencial para la aplicación en la
industria. (Cabrera et al., 2005).
Mientras algunas proteínas recombinantes
necesitan producirse en grandes cantidades,
como la insulina, de la que se planea una
demanda de 16,000 kilogramos en 2012 la
mayoría de biofarmacéuticos son producidos
en bajas cantidades (algunos kilogramos por
Hurtado. A. Universidad de los llanos
año), por las cantidades necesarias para
colmar la demanda mundial. En la industria
biofarmacéutica, parece ser que un par de
miles de litros son los volúmenes más grandes
a ser utilizados y el volumen de cultivo está
normalmente limitado a la estabilidad de la
clona o a los fenómenos de transferencias de
oxígeno y calor para mantener el cultivo en
condiciones óptimas. (Gamboa y Trujillo 2009).
La vitamina C es un derivado de una hexosa,
sintetizada por las plantas a partir de la glucosa
y la galactosa. El ser humano y algunas
especies animales carecen de las enzimas
capaces de catalizar la conversión de la
glucosa en vitamina C (ácido L-ascórbico), por
lo que requiere ser ingerida en la dieta. El 2,5-
Diketo-D-Gluconato es un compuesto
intermediario para la síntesis de vitamina C,
que se puede obtener por un proceso de
transformación microbiana a partir de la
glucosa, las bacterias comprometidas en este
proceso como Pseudomonas oryzihabitans y
Pseudomonas cepacia son aisladas del suelo y
de las frutas en descomposición. Se ha
demostrado que estas bacterias
individualmente no tienen funcionalidad, es así
como en el proceso de producción de la
vitamina las cepas se disponen en un cultivo
mixto (Gutiérrez et al., 2009).
Biotecnología alimentaria.
Los microorganismos halófilos juegan un
importante papel en los procesos de
fermentación que ocurren en presencia de sal;
estos microorganismos catalizan la
fermentación y generan los compuestos
encargados de dar características de sabor,
consistencia y aroma a los productos
resultantes, adicionalmente los
microorganismos halófilos producen
compuestos que pueden servir como control de
microorganismos no deseados. Estos
microorganismos han sido usados para la
8
Art. Revisión.
producción de suplementos alimenticios y
colorantes para alimentos; una alternativa
promisoria para la producción de ácidos grasos
poliinsaturados de cadena larga, son las
bacterias marinas, las cuales permiten
procesos de purificación convencionales,
rápidos rangos de producción y buena
consistencia del producto y rendimiento. En el
caso de los colorantes, los β-carotenos son
usados en la industria de alimentos como
colorantes naturales, como precursores de la
vitamina A, como aditivos en cosméticos,
preparaciones multivitamínicas, y productos
saludables. Se ha reportado que las bacterias
halófilas extremas tienen un óptimo crecimiento
y un buen rendimiento en la producción de
carotenoides en presencia de 25% de NaCl
(Castillo y Barragan, 2001).
La riboflavina es una vitamina hidrosoluble
ampliamente distribuida en el reino vegetal y
animal, habiendo sido obtenida por primera vez
a partir del suero de leche por Giorgy y
colaboradores en 1.933. La síntesis de
riboflavina por microorganismos puede ser
dividida según el grado de acumulación de la
vitamina; así, se encuentran sobreproducciones
débiles, moderadas y fuertes, tal como la
presentan varias bacterias, algunas levaduras y
hongos. Esta vitamina es de gran importancia
terapéutica y alimenticia, es utilizada para el
consumo humano, la cual es producida
comercialmente por síntesis química, los
procesos fermentativos con el empleo de
microorganismos, originan la forma que tiene
aplicación como suplemento en los piensos
concentrados para la alimentación animal, este
es un proceso mucho más económico que la
síntesis química y no ha sido explotado a
cabalidad. (Lara et al., 2001).
Fermentación mediante la introducción de
genes heterólogos (etanol carburante)
Hurtado. A. Universidad de los llanos
El etanol anhidro o etanol carburante es un
excelente combustible que, además, puede
usarse como oxigenante de combustibles
fósiles, o bien como sustituto de gasolina. Los
combustibles fósiles tienen una disponibilidad
finita y, dado el extensivo uso que actualmente
se hace de ellos, se agotarán en el presente
siglo. (Martínez y Gosset 2007). El etanol
carburante se produce mediante tecnologías
biológicas a partir de material renovable, no es
contaminante como el petróleo, su uso no
incrementa la concentración neta de bióxido de
carbono en la atmósfera. Por tanto, el uso del
etanol carburante no propicia el incremento de
temperatura ni el cambio climático en el
planeta. (Martínez y Gosset 2007; Peña y
Arango, 2008). Actualmente existen
tecnologías consolidadas y bien desarrolladas
para producir etanol carburante. Dichas
tecnologías utilizan como fuente de carbono a
la sacarosa proveniente de la caña de azúcar,
en Brasil, y a la glucosa proveniente del
almidón de maíz. En EE.UU. México no es
autosuficiente en la producción de maíz, es
más, se importan más de ocho millones de
toneladas al año de este grano para satisfacer
las necesidades directas de alimentación de la
población, o indirectas a través de la engorda
de ganado para consumo humano. Entonces
esta materia prima no es viable para la
producción de etanol carburante. Por su
abundancia y capacidad de renovación
sustentable, las materias primas más viables
para la producción de biocombustibles resultan
ser los azúcares presentes en los residuos
agroindustriales (la lignocelulosa o biomasa),
siendo su bajo o nulo costo otro factor que
favorece su uso. Los residuos de la industria
azucarera, y potencialmente cualquier residuo
agroindustrial, son sustratos más económicos,
pero más complejos que la glucosa y la
sacarosa, y pueden ser convertidos en
productos útiles mediante procesos de
fermentación. (Martínez y Gosset 2007). La
9
Art. Revisión.
mayoría de los microorganismos en la
naturaleza utilizan glucosa para llevar a cabo
sus actividades metabólicas. No obstante, la
variedad de microorganismos que metabolizan
pentosas y otras hexosas, diferentes a la
glucosa, es restringida; más aún, no existen
microorganismos silvestres capaces de
metabolizar eficientemente xilosa o arabinosa o
mezclas de glucosa-xilosa o glucosa-celobiosa
en productos de fermentación. Los
microorganismos más eficientes en la
producción de etanol, la levadura
Saccharomyces cerevisiae y la bacteria
Zymomonas mobilis, únicamente pueden usar
glucosa, sacarosa y fructosa para producir
etanol, pero no tienen la capacidad de
metabolizar xilosa, arabinosa y celobiosa, o
mezclas de ellas. Mediante el uso de la IVM se
pueden diseñar y desarrollar cepas de
bacterias y levaduras con el propósito de
metabolizar y canalizar el flujo de esqueletos
de carbono hacia la formación de etanol a partir
de pentosas como xilosa y arabinosa. (Martínez
y Gosset 2007; Peña y Arango, 2008).
Desde el punto de vista técnico e industrial, las
cepas más exitosas han sido las construidas
por IVM a partir de E. coli mediante la
introducción de vías foráneas para producir
etanol. Entre las estrategias utilizadas están: la
integración a cromosoma de los genes que
codifican para la piruvato descarboxilasa (pdc)
y alcohol deshidrogenasa (adh) de Zymomonas
mobilis, la interrupción de vías que compiten
con el piruvato por la producción de etanol y la
construcción de cepas que eliminen el
fenómeno de represión catabólica y puedan
metabolizar pentosas y hexosas
simultáneamente. Una de los microorganismos
más exitosos que pretende ser utilizado a
escala industrial para producir etanol a partir de
hidrolizados de residuos agroindustriales es la
cepa E. coli KO11. Esta cepa es capaz de
convertir todos los azúcares presentes en los
Hurtado. A. Universidad de los llanos
hidrolizados del bagazo de caña de azúcar en
etanol con rendimientos mayores a 90% del
teórico, con concentraciones de etanol de 45
g/L. Sorprendentemente, esta cepa en cultivos
anaerobios con glucosa o xilosa incrementa
sustancialmente su velocidad específica de
crecimiento, el flujo glicolítico y de consumo de
azúcares. (Martínez y Gosset 2007).
Bacterias productoras de plásticos
biodegradables.
Algunas de las propiedades del plástico que lo
ha hecho tan ampliamente consumido en la
actualidad son: la facilidad con que pueden ser
trabajados o moldeados, su impermeabilidad,
su baja densidad (pesan poco con relación al
volumen), baja conductividad eléctrica,
resistencia a la corrosión y a la intemperie, su
resistencia a diversos factores químicos y
biológicos y, en buena medida, su bajo costo.
La palabra plástico se refiere a ciertos tipos de
materiales sintéticos obtenidos mediante
fenómenos de polimerización o multiplicación
artificial de los átomos de carbono en largas
cadenas moleculares de compuestos
orgánicos. En general, son derivados del
petróleo, aunque algunos se pueden obtener a
partir de otras sustancias naturales. Sin
embargo, aún con propiedades, favorables
desde el punto de vista de las aplicaciones, se
han presentado inconvenientes para el manejo
de los desechos que se generan con el uso
creciente de este material. La degradación de
los plásticos sintéticos es muy lenta. Como
ejemplo, la descomposición de productos
orgánicos tarda 3 ó 4 semanas, la de telas de
algodón 5 meses, mientras que la del plástico
puede tardar 500 años. Incluso su
“degradación” simplemente genera
partículas de plástico más pequeñas que, a
pesar de ya no ser evidentes, se acumulan en
los ecosistemas. (Segura et al., 2011).
1
0
Art. Revisión.
La problemática generada por el uso
indiscriminado de plásticos sintéticos y su
permanencia en el ambiente ha estimulado la
investigación para desarrollar nuevos
materiales y métodos de producción que
permitan generar plásticos que presenten las
mismas propiedades pero que tengan un
periodo de degradación más corto. Esto se ha
logrado con la creación de plásticos con
componentes completamente degradables
naturalmente, entre los que se encuentran los
ácidos poliláctidos, los poliésteres alifáticos, los
polisacáridos y copolímeros derivados de ellos,
y los polihidroxialcanoatos (PHA). Los PHA son
polímeros naturales producidos por bacterias.
Son poliésteres conformados por unidades o
monómeros de hidroxiacilos polimerizados en
forma lineal. Las bacterias que los producen los
utilizan como reserva de nutrientes. (Segura et
al., 2011).
Desde que en 1926 se descubrió que la
bacteria Bacillus megaterium produce el PHA
denominado, se han reportado más de 300
bacterias capaces de producir PHA. Las
bacterias productoras los usan como material
de reserva que puede ser utilizado
posteriormente, bajo condiciones de limitación
de nutrientes, para mantener su metabolismo.
Desde 1982 se ha creado plástico a partir de
PHA y se ha comercializado hasta la fecha
siendo usado para la fabricación de botellas,
fibras, rastrillos desechables y varios productos
de empaquetamiento de alimentos, de aceite
para motores, de shampoo y cosméticos cuyo
principal atractivo es el de ser ambientalmente
mas amigables. (Segura et al., 2011).
La mayor parte de las investigaciones sobre
PHA se ha hecho con la intención de
introducirlos en el mercado de los plásticos
industriales de gran demanda. Sin embargo, los
PHA, además de ser biodegradables y
renovables, tienen características adicionales
Hurtado. A. Universidad de los llanos
que también los hacen interesantes. Una de
ellas es que no causan efectos tóxicos, son
biocompatibles. Esto permite utilizarlos en la
producción de materiales para aplicaciones
médicas, como por ejemplo en la generación
de implantes, que con el tiempo pueden ser
eliminados del cuerpo espontáneamente por
degradación, o implantes con fármacos
encapsulados para su liberación controlada, o
bien en la obtención de telas hechas con fibras
de PHA para el tratamiento de heridas.
Adicionalmente se han investigado aplicaciones
de los PHA en un área nueva de la medicina, la
ingeniería de tejidos. La idea es generar
tejidos, y potencialmente órganos, en cultivos
sumergidos de células troncales totipotenciales
que crecerían sobre estructuras de PHA
preformados que funcionarían como
“moldes”al ser recubiertos con factores de
crecimiento y
morfógenos. En la agricultura los PHA también
pueden tener aplicaciones. Un ejemplo sería el
de los dispositivos en los que la degradación
natural de los PHA permite la liberación de
compuestos químicos de manera dosificada,
para aplicación de fertilizantes, fungicidas,
herbicidas, etc. (Segura et al., 2011).
REPLICACIÓN DE LOS PLÁSMIDOS
BACTERIANOS Y EL PROCESO DE
PRODUCCIÓN DE PROTEÍNAS
RECOMBINANTES
Ingeniería metabólica se denomina
generalmente como la alteración específica y
deliberada de las vías metabólicas que se
encuentra en un organismo con el fin de
entender mejor y utilizar vías celulares para la
transformación química, la transducción de
energía, y el montaje supramolecular. Este
campo multidisciplinario dibuja principios de la
ingeniería química, ciencias computacionales,
bioquímica y la biología molecular. En esencia,
1
1
Art. Revisión.
la ingeniería metabólica es la aplicación de
principios de ingeniería de diseño y análisis de
las rutas metabólicas con el fin de lograr un
objetivo particular. (Yang et al., 1998).
A partir del desarrollo de tecnologías como la
del DNA recombinante ha sido posible la
generación de microorganismos con la
capacidad de sobreproducir compuestos de
interés industrial. La bacteria Escherichia coli
ha sido utilizado en procesos biotecnológicos,
como cepa hospedero para la expresión de
genes propios, así como de otras especies
(heterólogos) con el objetivo de producir
proteínas y metabolitos específicos. (Yang et
al., 1998; Sabido et al., 2011). Las estrategias a
considerar para incrementar la producción de
un metabolito de interés en el contexto de la
IVM son: 1° incremento de la disponibilidad de
la fuente de carbono utilizada como sustrato
para la obtención de precursores utilizados
para la biosíntesis de productos de interés; 2°
incremento en la disponibilidad de los
intermediarios obtenidos del catabolismo de la
fuente de carbono, a través del metabolismo
central de carbono; 3° mejoramiento de la
reacción que cataliza la canalización de los
intermediarios del metabolismo central de
carbono (MCC), a la vía de interés; 4°
eliminación de los mecanismos de control
transcripcional y alostérico de la vía; 5°
identificación y eliminación de reacciones
limitantes de la vía; y 6° prevención de la
pérdida de carbono hacia otras vías. (Escalante
et al., 2001).
Muchas bacterias poseen además ADN
extracromosómico, también circular y cerrado,
denominado ADN plasmídico. (Gamboa y
Trujillo 2009). Los plásmidos son elementos
genéticos extracromosómicos que se han
encontrado esencialmente en todos los tipos de
bacterias estudiadas hasta la fecha.
Dependiendo de su tamaño pueden codificar
Hurtado. A. Universidad de los llanos
desde unas cuantas proteínas hasta cientos de
ellas. (Loeza et al., 2004). Éstos, portan
información genética para muchas funciones
que no son esenciales para la célula en
condiciones normales de crecimiento. (Loeza et
al., 2004; Gamboa y Trujillo 2009). Los
plásmidos varían ampliamente en tamaño,
desde miles a cientos de miles de pares de
bases (un tamaño comparable al cromosoma
bacteriano) y son, con mayor frecuencia,
moléculas circulares de ADN de doble cadena.
(Loeza et al., 2004). En términos bioquímicos la
composición y estructura de los ácidos
nucleicos bacterianos, es la misma que para
cualquier célula. Conviene recordar
brevemente, que los ácidos nucleicos son
macromoléculas compuestas de nucleótidos
unidos en forma covalente por medio de
enlaces fosfodiester entre los carbonos de las
posiciones 3´ y 5´ de dos residuos de azúcares
adyacentes. Esta estructura forma un esqueleto
de azúcares y fosfatos constante en toda la
macromolécula. (Gamboa y Trujillo 2009). La
transferencia de la información genética
contenida en el plásmido de una bacteria
donadora a una receptora se conoce con el
nombre de conjugación. Este proceso requiere
de la expresión de genes y de la presencia de
regiones en el ADN del plásmido necesarios
para su movilización. El plásmido se moviliza a
través de un puente de conjugación entre las
células. (Loeza et al., 2004).
Desde los puntos de vista básico y aplicado, los
plásmidos han servido como herramientas
importantes en estudios de Biología Molecular
y Biotecnología. En este sentido, la mayoría de
los plásmidos naturales no son vectores de
clonación o de expresión convenientes. Sin
embargo, pueden ser modificados para su uso
como tales. Para lograr el diseño y
construcción de vectores de clonación, es
necesario conocer las características o factores
moleculares que les permiten a estos
1
2
Art. Revisión.
plásmidos colonizar y mantenerse en diferentes
hospederos;de ahí la importancia de estudiar
los mecanismos de replicación. (Loeza et al.,
2004).
El proceso general de producción de proteínas
recombinantes comienza con la selección e
identificación del gen responsable de la
producción de la proteína de interés. Después
de la identificación y selección, se deben
colocar en plásmidos e insertarlos dentro del
hospedero que puede ser una bacteria,
levadura o célula animal. (Yang et al., 1998;
Gamboa y Trujillo 2009). Una vez expresado el
gen de interés en la célula, la proteína
resultante puede proveer al hospedero de
nuevas capacidades metabólicas, como son la
habilidad de producir nuevos metabolitos o bien
sobreproducir compuestos nativos. (Yang et al.,
1998; Martinez y Gosset 2007; Sabido et al.,
2011).
A pesar de la versatilidad y utilidad de los
plásmidos como vectores de clonación, es
sabido que la presencia de múltiples copias y la
alta expresión del DNA que contienen,
representa una “carga metabólica” para el
organismo hospedero, ocasionando
frecuentemente efectos adversos en su
metabolismo, como lo es una disminución en la
tasa específica de crecimiento (μ) de la
bacteria. Sin embargo, si el interés es obtener
una gran cantidad de una proteína en
particular, entonces resulta conveniente el uso
de vectores de expresión en multicopia.
(Martinez y Gosset 2007; Sabido et al., 2011).
Biotecnología y Escherichia coli
La expresión de proteínas recombinantes se ha
favorecido con el uso de Escherichia coli
debido a su relativo bajo costo, alta densidad
de cultivo, su fácil manipulación genética y a
las diversas herramientas biotecnológicas
disponibles que son compatibles. La bacteria
Hurtado. A. Universidad de los llanos
Escherichia coli (E. coli) es ampliamente
utilizada en la industria biotecnológica para la
producción de proteínas recombinantes con
fines diagnósticos, terapéuticos o vacúnales,
por procedimientos relativamente baratos, ya
que ha sido muy bien caracterizada desde el
punto de vista genético y fisiológico. Entre las
ventajas que este microorganismo brinda como
hospedero están: mayor velocidad específica
de crecimiento que las levaduras y células de
mamíferos; fácil manipulación genética, no
posee requerimientos costosos asociados a
medios de cultivo o equipamiento a diferencia
de las células de organismos superiores;
existencia de gran variedad de vectores de
expresión estables, y ser un microorganismo
aprobado por las entidades reguladoras para
su utilización como hospedero en la producción
de biofármacos. Entre los parámetros más
importantes en la producción exitosa de
proteínas recombinantes en E. coli se
encuentran: la eficiencia transcripcional y
traduccional, la estabilidad del vector de
expresión y de los ácidos ribonucleicos (ARN)
transcriptos, la estabilidad de las moléculas
ante el ambiente proteolítico del hospedero y la
localización y plegamiento de la proteína.
También es necesario hacer un estudio con
diferentes cepas del organismo hospedero, con
vistas a seleccionar la más adecuada para la
expresión de la proteína recombinante
deseada, ya que estudios muestran que esta
puede variar al usar una cepa determinada u
otra. (García et al., 2013).
CONCLUSIONES
Los microorganismos presentan un gran
potencial de aplicación en diferentes campos
de la biotecnología, el uso de microorganismos
para la degradación de contaminantes es un
campo de investigación en desarrollo. El uso de
microorganismo para la obtención de
metabolitos o enzimas presenta ventajas
1
3
Art. Revisión.
biotecnológicas debido a que las condiciones
extremas requeridas para su crecimiento
impiden los problemas de contaminación
inherentes a los procesos fermentativos.
Hay que destacar que aunque la secuencia de
los genomas ya es un conocimiento finito, aún
sigue siendo incalculable lo que desconocemos
sobre la organización y función de todos los
elementos contenidos en éstos, incluyendo los
genes, diferentes secuencias codificantes y no
codificantes; sus interacciones y su regulación
transcripcional; el funcionamiento de los
productos codificantes; los mecanismos
traduccionales y postraduccionales que los
regulan; y el diálogo que se establece entre
éstos y sus reguladores para coordinar y
mantener la homeostasis de las funciones
celulares en los seres vivos.
El mejoramiento genético de las cepas, los
vectores de expresión y los métodos de cultivo
y purificación de estas proteínas utilizadas en
las diferentes investigaciones, se han ido
perfeccionando a través de los años. Sin
embargo, aún existen retos que deben
afrontarse, entre los que se encuentran:
superar los niveles de expresión de proteínas
alcanzados; realizar un adecuado estudio del
espacio de diseño durante la etapa de
desarrollo de los procesos de fermentación y
recobrado, para establecer los parámetros que
influyen significativamente en su eficiencia;
realizar una adecuada selección del medio de
cultivo que facilite tanto la expresión como el
crecimiento celular.
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