UNIVERSIDAD AUTONOMA DEL

ESTADO DE MORELOS

ESCUELA DE TECNICOS LABORATORISTAS

“PRUEBAS BIOQUIMICAS PARA LA IDENTIFICACIÓN DE

CARBOHIDRATOS”

Salvador Herrera García

Fernanda Guerrero Benítez
Diana Carolina Martínez Rodríguez

3º “B”

PRACTICA # 1

Cuernavaca, Mor. A 2 de Septiembre de 2009

INTRODUCCIÓN

El hablar de carbohidratos engloba muchos aspectos, que son importantes.

Tienen muchas funciones, una de las más importantes es proveer energía a los organismos.
Constituyen una parte importante de la materia orgánica de la tierra debido a importantes
funciones que realizan en todas las formas de vida.
Es muy importante conocer y aplicar diversas pruebas bioquímicas para identificar todas sus
características individuales.
Algunos carbohidratos son cetosas, otros aldosas, unos presentan el efecto de muta rotación
o isómeros muy parecidos entre si que solo difieren por el lugar donde se ubique el átomo de
carbono y el radical hidroxilo. Todos realizan por mas simple que se vean, distintas e
importantes funciones por eso es muy importante identificarlos en el área experimental.
La prueba de Fehling consiste en distinguir azucares reductores.

Solución de sulfato de cobre y otra hecha a base de tartarto doble de sodio y potasio. Al
reaccionar con uno o varios grupos aldehídos simples éste se oxida a ácido y reduce la sal de
cobre (ii) en medio alcalino a óxido de cobre (i), que forma un precipitado de color rojo. Un
aspecto importante de esta reacción es que la forma aldehído puede detectarse fácilmente
aunque exista en muy pequeña cantidad. Si un azúcar reduce el licor de Fehling a óxido de
cobre (I) rojo, se dice que es un azúcar reductor.

Al reaccionar con monosacáridos, se torna verdoso; si lo hace con disacáridos, toma el color
del ladrillo.

La prueba de selliwanoff consiste en diferenciar aldosas de cetosas, el reactivo es resorcinol

generalmente al 5% en acido clorhídrico
Estas biomoleculas ejercen funciones fundamentales en los seres vivos, como soporte
(celulosa) reserva de alimento (almidón)
La glucosa es un monosacárido perteneciente al grupo de las aldosas, es reductor.
Los monosacáridos son aquellos que no pueden ser hidrolizados en moléculas mas simples,
los azucares simples pueden subdividirse, dependiendo del numero de átomos de carbono
que poseen: triosas tetrosas, pentosas, hexosas, heptosas etc.… y según contengan grupos
aldehídicos o cetónicos.

Un polisacárido es una biomolecula formada por la unión de una gran cantidad de

monosacáridos, se encuentran entre ellos glúcidos y cumplen funciones diversas, sobre todo
de reservas energéticas y estructurarles.

Una aldosa es un monosacárido con un grupo aldehído por molécula.

Una cetosa es un monosacárido con un grupo cetona por molécula.

La masa molecular es un número que indica cuantas veces es mayor la masa de una
molécula de un elemento con respecto a la unidad de masa atómica.
EXOESQUELETOS
MANOSA
ALMIDON
JUSTIFICACIÓN
La importancia de este trabajo radica en comprobar si lo que investigamos es real, es
decir, comprobar mediante el método experimental las diferentes propiedades de los
carbohidratos.

HIPÓTESIS
Si se agregan mas gotas de reactivos a los carbohidratos ¿afectará el producto? ¿Será más
rápida la reacción?

OBJETIVOS
Realizar en el laboratorio las técnicas más comunes, tanto generales como específicas para el
análisis de los azúcares, con la finalidad de hacer comparaciones entre los distintos
compuestos que conforman el grupo de los carbohidratos.

METODOLOGIA
Materiales:
Parrilla 330°C (cimarec/barnstead thermo 14 inf.
Polarímetro
Vaso de precipitado (pyrex 100ml)
Pinzas para tubo de ensayo
18 tubos de ensayo (6 para prueba de Barfoed, 6 para prueba de fehling, 7 para prueba de
selliwanoff
Sacarosa, almidon, manosa, lactosa, maltosa, glucosa, fructosa.

Reactivos: selliwanoff .5%resorcinol en HCl

Fehling .5 sulfato de cobre y tartato doble de sodio y potasio
Barfoed
Agua

MÉTODO
*Se seleccionan los tubos de ensayo para cada prueba de identificación que se llevara a
cabo.

*Se elimina cualquier factor (impureza) que pudiera afectar los resultados de las
reacciones, lavando cada tubo de ensayo con agua y jabón no adicionando alcohol porque
puede afectar el resultado.
Se adicionan unos cuantos mililitros de agua destilada para que se elimine cualquier
molécula de jabón de los tubos de ensayo.

*Se procede a etiquetar cada tubo de ensayo con el nombre de la prueba y el tipo de
carbohidrato que contienen

*posteriormente a cada tubo de ensayo que se le asignó con la etiqueta el azúcar se le

agrega el carbohidrato especificado a cada tubo en particular.
* Le adiciono lentamente el reactivo o prueba correspondiente.
 *Previamente acciono la parrilla y coloco el vaso de precipitado marca pyrex dentro del
agua, caliento hasta que el agua se halle en ebullición y mantengo el vaso de precipitado.

*Coloco los tubos de ensayo dentro del vaso de precipitado (baño María)

***algunas pruebas como selliwanoff requieren de un plazo mayor de 5 minutos.

PRUEBA DE SELLIWANOFF

Carbohidrato 1°tiempo 2° tiempo 3°tiempo 4° tiempo Resultado

ALDOSA/CETOSA
( 1 minuto) (2 minutos) (3 minutos) (5 minutos)
Fructosa Incolora Rosa tenue s/cambios Naranja Aldosa
Lactosa Incolora s/cambios s/cambios s/cambios Cetosa
Sacarosa Rosa tenue Rosa tenue Naranja Mantuvo el color Aldosa
naranja
Maltosa Incolora s/cambios s/cambios s/cambios Cetosa
Glucosa Incolora s/cambios Rosa tenue Naranja Aldosa
Manosa Incolora s/cambios Naranja Naranja Aldosa
almidón incolora s/cambios s/cambios s/cambios cetosa

PRUEBA DE BARFOED
Carbohidrato 1°tiempo 2°tiempo 3° tiempo 4°tiempo Resultado
monosacárido/
oligosacáridos
Glucosa Precipitado Precipitado Precipitado Precipitado Monosacárido
s/cambio
Almidón s/cambios s/cambio s/cambio s/cambio

Sacarosa s/cambios s/cambio s/cambio s/cambio Oligosacáridos

Maltosa Coloración Conserva el color Coloración Precipitado

Lactosa s/cambio s/cambio Coloración s/cambio Monosacárido

fructosa Precipitado precipitado Precipitado precipitado

PRUEBA DE FEHLING
Carbohidrato 1° tiempo 2° tiempo 3° tiempo Resultado
Reductor/no
reductor

Sacarosa Coloración azul s/cambios s/cambios No reductor

Almidón Coloración azul Coloración azul s/cambios No Reductor

Manosa Coloración Coloración s/cambios Reductor

verde

lactosa Coloración Coloración Coloración reductor

verde naranja

* NO SE UTILIZO XILOSA Y ARABINOSA

RESULTADOS
En la prueba selliwanoff se obtuvieron distintos colores excepto el ión color rojo, el cual se
pretendía obtener para poder diferenciar aldosas de cetosas.
En la prueba Barfoed se obtuvieron reacciones rápidas
En la prueba Fehling presentaron distinta coloración los carbohidratos y algunas burbujas
transparentes.

DISCUSIÓN
En la prueba selliwanoff se obtuvieron 4 aldosas y 3 cetosas

CONCLUSIÓN
• La reacción de la prueba de Selliwanoff dio un resultado no esperado, esto debió influir a factores como:
-el tubo de ensayo no estuviera desinfectado y limpio al 100%
-el tiempo no fue el suficiente, por lo tanto se requería de mas tiempo de observación y precisión.
-se revolvieron pruebas, o no se adicionó la cantidad exacta del reactivo que se empleó.

*esta practica tuvo muchos errores y no se logró al 100% cabe mencionar que muchos factores intervinieron,
para que no se lograra exitosamente.
Se pudo comprobar mediante el método experimental que los carbohidratos poseen diferentes propiedades
bioquímicas.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
“EL MUNDO VIVO 1”
BELTRÁN, Martínez de Castro margarita;
Fernández editores.
Primera edición,
Mayo 1998.
pp.230

“BIOLOGIA”
C.Peredo, Jaime Ricardo;
Esfinge editorial
.3° edición. Edo Mex.2006
pp. 238

“BIOQUIMICA”
M.Berg.et bis;
Editorial reverté
Edición 6,
2004,
pp1152

“BIOQUIMICA”
Lehninger, Albert;
Omega editorial;
2da edición,1990.
pp1805

“ BIOQUIMICA volumen 1”
Rawn,J. David;
Editorial Mc Graw Hill, primera impresión
Madrid 1989
pp.532

ANEXOS
• POLARIMETRO:
-celda de 10 cm.
-cristal debe de estar limpio
-tapa con empaque de goma
*se debe cuidar de llenar la celda con el carbohidrato que se utilice de no formar burbujas de aire dentro de la
celda.
*se abre la porta celda y se ingresa con la luz encendida del polarímetro, cierro la porta celda y observo.

EJEMPLO DE CARBOHIDRATO DEXTROGIRO ES LA GLUCOSA

EJEMPLO DE CARBOHIDRATO LEVOGIRO ES LA FRUCTOSA

Son no reductor por enlaces glucosidicos que liberan una molécula de agua,
Estos no permiten ceder electrones a menos que haya una hidrólisis.
Azucares, parte esencial del metabolismo, reciben electrones para reaccionar-
Los cuales aceptan o rechazan carbohidratos.
UNIVERSIDAD AUTONOMA DEL ESTADO
DE MORELOS

ESCUELA DE TECNICOS LABORATORISTAS

“PRUEBAS BIOQUIMICAS PARA LA IDENTIFICACIÓN DE

CARBOHIDRATOS II”

MARIA FERNANDA GUERRERO BENITEZ

Practica # 2
 Cuernavaca, Mor. A. 21 de Septiembre de 2009

INTRODUCCIÓN:

En la reacción de Molisch- Udransky se hace reaccionar la solución de la prueba, con acido

sulfúrico concentrado en presencia de a- naftol. Los glúcidos al reaccionar con acido sulfúrico
se deshidratan formando furfurales si son pentosas o hidroximetilfurfural si son hexosas, que
por condensación con a- naftol producen complejos de color púrpura-violeta.
Debido a la diferencia de densidad el acido sulfúrico y la solución forma dos fases. La
presencia de glúcidos se pone de manifiesto por la formación de un anillo color púrpura violeta
en la interfase.
La reacción entre el acido sulfúrico y α -naftol forma un anillo color verde cuando no hay
glúcidos. Cuando la solución es alta en concentración se forma un precipitado color rojo que al
disolverse colorea la solución.
La reacción de molish-Udransky es considerada como una prueba general para la
identificación de glúcidos y un resultado negativo excluye la presencia de estos. Además de la
cantidad de estos en una solución.
Un furfural es un aldehído industrial, con una estructura en anillos su formula química es
C6H4O2. Es muy toxico en vías aéreas, dérmicas y oculares. Con este se fabrican plásticos,
síntesis de polímeros, furanos. Se obtiene por la deshidratación de carbohidratos a causa
HSO4 a-naftol=color púrpura.
La función o el efecto del acido sulfúrico en esta prueba hace que se formen furfurales1.) .

Se le denomina a la prueba de Tollens la prueba del espejo porque es un complejo acuoso de

diamina-plata presentado visualmente bajo la forma de nitrato. Recibe este nombre en
reconocimiento al Quirico alemán Bernhard Tollens. El complejo de diamina de plata I es un
agente oxidante reduciéndose a plata metálico, que en caso o tubo limpio forma un “espejo de
plata”. Esto es usado para verificar la presencia de aldehídos que son oxidados a ácidos
carboxílicos.

Un grupo aldehído: son compuestos orgánicos caracterizados por poseer el grupo funcional-
CHO. El grupo carboxilo H-C=O esta unido a un solo radical orgánico. Los aldehídos están
presentes en numerosos productos naturales y grandes variedades de ellos son de la vida
cotidiana. La glucosa es un aldehído

La palabra aldehído proviene del ingles aldehyde y a su vez del latín científico: alcohol
dehydrogenatum (alcohol deshidrogenado)

AgNO3- con el se detectan la presencia de cloruros y es una sal orgánica.

El reactivo debe ser preparado en el momento y nunca almacenado por más de muchas
horas. Después de realizar las pruebas, el producto debe ser acidificado con acido diluido
antes de ser desechado. Estas precauciones previenen la formación altamente explosiva del
reactivo nitruro de plata.

Las osazonas: los monosacárido en disolución ligeramente acida a 100° reaccionan con un
exceso de fenildecina y forman fenilosazonas que son insolubles en agua y cristalizan con
facilidad. Productos de las aldosas con fenil hidracina. Para que se forme, se requiere una
oxidación del carbono adyacente al carbono carbonilico en una aldosa (p.e glucosa) la
reacción puede ser usada para identificar monosacáridos. La glucosa, fructosa y manosa
forman una misma osazona ya que las diferencias de estructura y configuración en torno a los
átomos de carbono 1 y 2 desaparecen. Las osazonas identifican azucares. Tienen un punto
de fusión específico y color característico.

La fenilhidracina(clorhidrato) . Es un derivado de la hidrazina esta es una clase de compuesto

químico en donde se sustituyen uno o mas átomos de hidrogeno. Su estructura general es
R2-NR2 donde R pueden ser radicales alquilo o átomos de hidrogeno. La fenilhidracina es
usada comúnmente para determinar la presencia de cetonas y aldehídos en química
orgánica.

El acetato de sodio anhidro es la sal del acido acético

Es incoloro, inodoro y polvo; es poco soluble en etanol. Neutraliza corrientes residuales de

acido sulfúrico, da sabor a las papas fritas etc.

FORMULA MOLECULAR Y ESTRUCTURA QUÍMICA:

acetona

acetaldehido
 almidon

JUSTIFICACIÓN

La importancia de diferenciar todo tipo de glúcidos radica en que mediante el método

experimental se analicen las características bioquímicas de cualquier carbohidrato.

HIPOTESIS:

Se pueden diferenciar todo tipo de glúcidos, mediante el método experimental, observando las
diferentes propiedades bioquímicas y físicas de cada uno.

OBJETIVOS:

Realizar en el laboratorio las técnicas más comunes, tanto generales como específicas para el
análisis de los azúcares, con la finalidad de hacer comparaciones entre los distintos
compuestos que conforman el grupo de los carbohidratos.

METODOLOGIA:

“prueba de Molish”

*6 tubos de ensayo (pyrex)

*baño María eléctrico (chromolox)

*goteros

*acido sulfúrico concentrado

En tubos de ensayo limpio y seco se colocan 2 gotas de muestra en el tubo de ensayo y el
azúcar designado. Este reactivo sirve para encontrar en el reactivo en presencia del grupo
carbonilo, reaccionando dando lugar a la formación de furfurales

*lavar los tubos de ensaye

*secar los tubos de ensaye

* colocar 2 gotas de la muestra por analizar y agregar 1 gota de reactivo de molisch-udransky.

*con cuidado agrego resbalando por la pared del tubo 1 gota de acido sulfúrico

Esperar algunos segundos para observar cambios.

En caso necesario calentar ligeramente el tubo a baño María.

*anotar resultados obtenidos en la prueba de molisch.

“Prueba de Tollens (espejo de plata)”

Material:

4 tubos de ensaye marca pyrex de 10x150 Mm

Gradilla metálica para tubo de ensaye de 10x150mm

Vaso de precipitado 500ml marca pyrex

Gotero con bulbo genérico

Jabón para vidrieria

Aparatos:

Baño María

Parrilla cromalox l-7200419

Material de seguridad

Guantes de cirujano de látex

Bata de laboratorio.

Reactivos:

fructosa acetaldehído

Acetona
Glucosa

Reactivo de Tollens

PROCEDIMIENTO:

Lavar perfectamente los 4 tubos de ensaye

Posteriormente secarlos rápidamente y colocar 2 o 3 gotas de agua destilada para eliminar

residuos dentro de los mismos.

Después de haberlos higienizado, se procede a colocar 4 etiquetas que contengan el nombre

de la prueba y el nombre del reactivo Tollens, así como el azúcar que se desee analizar
(fructosa, acetaldehído, acetona, glucosa etc.)

coloco 2 gotas de la solución a analizar y 2 gota del reactivo de Tollens en los diferentes
tubos de ensayo.

Se coloca a baño maría durante 3 minutos y se observan cambios.

“formacion de osazonas”

material:

*4 tubos de ensaye marca pyrex

*3 gramos de algodón

*pinzas para tubo de ensaye

Aparatos:

*parrilla cromalox l-270419

*vaso de precipitado pyrex

Reactivos:

*.1g de sacarosa

*. 1g de lactosa

*.1g de fructosa

*.1g de glucosa

*.2g de fenilhidracina
*.3g de sodioanhidro

*2mlde agua

Previamente se lava cada tubo de ensaye para asegurarnos de que no haya ningún factor que
intervenga en las pruebas.

Se colocan etiquetas para identificar la sustancia y reactivo que se esta empleando.

Se coloca en cada tubo .1 g del carbohidrato, .2 de fenilhidracina y .3 g de acetato de sodio

anhidro.

Se mezcla con 2 ml de agua y se agita

Se tapa cada tubo con algodón y se coloca a baño maria agitando ocasionalmente.

Se anota el tiempo del precipitado y se observan los cristales en el microscopio.

DISCUSION:

Prueba de molisch:

en esta prueba no se obtuvo como se esperó, esto se debió a que hubo una mala limpieza,
al manejar el tiempo y a un manejo inadecuado de los reactivos, al investigar leí que primero
se adicionaba con acido sulfúrico para deshidratar a carbohidratos y se formaban los
furfurales, los cuales se teñian con el reactivo molisch. Consideramos que fue exacta la
exposición al calor de la mezcla por ello pudo variar también el producto final.

Cuando reacciona una cetosa con HCl, el carbohidrato pierde moléculas de agua y reacciona
con resorcinol para que su coloración sea roja. Algunos resultados variaron, no se obtuvo un
rojo en su totalidad. Todas las pruebas que se efectuaron de fructosa con tollens dieron
positivas para acetaldehído, ninguna demostró lo contrario, de hecho el azúcar en donde se
formaba perfectamente el espejo de plata. La fructosa es una D-hidroxiacetona por lo que
podría ser una explicación a lo que ocurrió en el laboratorio con la prueba de tollens.

CONCLUSION:

Con las pruebas anteriores, molisch, tollens y osazonas se pudo comprobar la parte teórica de
las propiedades de los azucares.

Se pudieron apreciar sus características particulares para identificarlos. Solo la reacción de

tollens-fructosa resulto fallida.

La prueba de molisch tardo en reaccionar unos cuntos minutos, tiempo en el cual se esperaba
una reacción mas rápida.

Todas las osazonas se formaron exitosamente.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

“bioquimica”
m.berg.et bis;
editorial reverté
Edición 6,
2004,
pp1152

“BIOQUIMICA”
Lehninger, Albert;
Omega editorial;
2da edición, 1990.
pp1805

ANEXOS:
LOS ESPEJOS DE PLATA SE FORMAN POR EL AGENTE OXIDANTE DE AgNO3

TUBO COMPUESTO OBSERVACIÓN RESULTADO

1 FRUCTOSA ESPEJO DE PLATA, COLOR VERDE ACETALDEHIDO
“PEPITA ” , SE MUESTRAN 2 FASES:
LIQUIDOTRANSPARENTE/RESTOS
SÓLIDOS
2 ACETALDEHIDO OLOR PECULIAR, ESPEJO DE PLATA ACETALDEHIDO
RESTOS SÓLIDOS METALICOS EN EL
FONDO, DIFICIL DE REMOVERLOS
3 ACETONA RESTOS COLOR GRIS, SE CONDENSÓ, NO
NO MUESTRA ESPEJO DE PLATA.
4 GLUCOSA ESPEJO DE PLATA PERFECTAMENTE PRESENTA
FORMADO ESPEJO DE
PLATA PERO
NO ES
ACETALDEHIDO

TIPO DE COLOR INCIAL COLOR FINAL FORMA DE TIEMPO

AZUCAR CRISTALES
SACAROSA CAFÉ AMARILLO PEQUEÑOS .50MIN
LACTOSA CAFÉ AMARILLO SEPARADOS .45 MIN
FRUCTOSA CAFÉ AMARILLO LARGOS .30 MIN
GLUCOSA CAFE TRANSPARENTE MAS OSCUROS 5.24 S
Y JUNTOS
 Glucosa
40x

Sacarosa
40x

Lactosa 40x

acetaldehído
MANOSA