J. Bras.
Nefrol
P-386
ANÁLISE DOS PARÂMETROS HEMODINÂMICOS DURANTE A PREN-
HEZ NORMAL EM RATAS: PARTICIPAÇÃO DE TRANSPORTADORES
DE SAL E ÁGUA AO LONGO DO NÉFRON
ABREU, N. P.; BOIM, M. A.; BERGAMSCHI, C. T.; SCHOR, N.; QUINTINO,
W. S.; TARDIN. J. C. B. M; CAMPOS, R. R.
UNIVERSIDADE FEDERAL DE SÃO PAULO
O fenômeno de retenção hídrica e salina é típico do período de gravidez, apesar do
rim estar envolvido na expansão de volume extracelular (VEC),a possível partici-
pação dos transportadores de íons e água neste mecanismo ainda não está total-
mente entendida. Objetivamos portanto, correlacionar os parâmetros hemodinâmi-
cos bem como a expressão dos transportadores de água e eletrólitos no rim durante
a gravidez em ratas. Utilizou-se ratas Wistar assim divididas: Prenhe (P,n=5) e
Controle (C,n=6). Foram estimados pressão arterial (PA),freqüência cardíaca(FC),
volume sistólico(VS), resistência periférica total (RPT) e débito cardíaco (DC)
através do método de termodiluição. Os níveis de expressão do trocador Na/H
(NHE3), do cotransportador Na/K/2Cl(BSC) e da aquaporina2 (AQP2) foram
avaliados pela técnica de RT-PCR utilizando RNA extraído de tecido renal. Os
resultados mostraram que as ratas prenhes apresentaram DC maior que as con-
troles (P 107±7;C 84±1 ml/mim, p=0.01) sem aumento concomitante da PA(P
118±2;C 116±3 mmHg), devido à redução não significante da RPT (C 1,4±0,07; P
1,2±0,1). Houve redução na fração de excreção de sódio (C 0,87±0,2 %; P
0,54±0,03%). Essas modificações foram acompanhadas por aumento significante
no nível de expressão dos transportadores NHE3(79%), BSC(100%) e na AQP2
(250%). A semelhança do observado em seres humanos, a gravidez em ratas tam-
bém induziu aumento do DC indicando expansão do VEC sem aumento de PA. A
supraexpressão dos transportadores de Na e água no rim podem potencialmente
mediar a expansão do VEC nesta condição fisiológica.
P-388
BLOQUEADORES DE CANAIS DE CÁLCIO ALTERAM VIABILIDADE
DE CÉLULAS DA MEDULA INTERNA RENAL EXPOSTAS À HIPEROS-
MOLARIDADE
ROMANATO, R.; SANTOS, B. F. C.; SILVA, R. G.
UNIFESP
Justificativa: O cálcio possui importante papel nas funções vitais celulares, mas a
sobrecarga celular de Ca+2 ou a alteração na quantidade intracelular de Ca+2 pode des-
encadear morte celular. Adicionalmente, o estudo de fluxo de cálcio tem sido realizado
em resposta a variações agudas de volume, em especial frente à redução da osmolari-
dade do meio. Dados preliminares mostraram que as células cronicamente adaptadas a
hiperosmolaridade (HT) têm seu conteúdo de cálcio intracelular aumentado e a re-acli-
matação a 310 mOsm (HT-ISO) determina redução do mesmo. Objetivo: Avaliar a
importância do cálcio no processo de resposta celular à variação de volume em
condições de adaptação crônica a hiperosmolaridade.
Materiais e métodos: Utilizando-se concentrações isomolares de NaCl e uréia
acrescidas ao meio de cultura (DMEM/F12, 1:1, 10% FSB) aumentou-se gradativa-
mente a osmolaridade a cada subcultivo da linhagem mIMCD-3 (mouse Inner Medular
Collect Duct). Esta adaptação possibilitou-nos células sobrevivendo em ambiente isosmo-
lar (IS0~300mOsm), em ambiente hiperosmolar (HT~1050mOsm) e células HT re-
aclimatadas ao meio isotônico (HT-ISO), expostas ao verapamil (bloqueador de canal de
cálcio de membrana), à tapsigargina (bloqueiador da bomba de Ca2+/ATPase presente no
retículo endoplasmátido) e à nifedipina (bloqueador de canal de Ca+2 voltagem depen-
dente presente na membrana plasmática), sendo submetidas a testes de viabilidade.
Resultados: A utilização de verapamil (30µM, 24hs) induziu menor viabilidade às
células HT-ISO (45%, n=64, p<0,05, Test T), demonstrando a necessidade do Ca2+
extracelular no processo de readaptação. A tapsigargina (2µM, 24hs) determinou
diminuição da viabilidade (ISO 14%, HT 32% e HT-ISO 31%, n=10, p<0,05, Test T)
nas três condições, sugerindo a importância do Ca2+ reticular para a sobrevida celular.
A nifedipina (100nM) não alterou a viabilidade (n=10, p< 0,05, Test T), sugerindo a
participação da glicoproteina-p (mdr1) na regulação do volume celular, posto que esta
droga inibe a entrada de Ca2+, mas não modula a expressão do mdr1, diferentemente
do verapamil. Além disso, a citotoxicidade de diferentes nefrotoxinas (cisplatina 25
µg/mL ciclosporina 62,5 µg/mL e H 2O2 1mM), atenuada pela hiperosmolaridade
crônica (HT), foi aumentada (40%, n=8, p<0,05, Test T) com a utilização do vera-
pamil, sugerindo a participação do Ca +2 no mecanismo de citoproteção induzido pelo
estresse osmolar.
Conclusão: O verapamil determinou variação na viabilidade celular e sua diferença
em relação ao uso da nifedipina sugere a participação do mdr1 na resposta celular à
variação de volume. A citotoxicidade determinada por diferentes nefrotoxinas (cis-
platina, ciclosporina e H 2O2) foi alterada pela utilização dos bloqueadores, sugerindo
uma participação do cálcio nos mecanismos de morte induzidos por estas drogas e na
citoproteção determinada pela hiperosmolaridade.
XXII Congresso Brasileiro de Nefrologia
Fisiologia Renal
P-387
AVALIAÇÃO DA FUNÇÃO RENAL DE RATOS TRATADOS COM ANTI-
INFLAMATÓRIO NÃO HORMONAL
MARTÍNEZ, B. B.; FRANCO, G. P.; FLORIANO, F.; PENNA, E.; MORAES, S. R.
UNIVERSIDADE DO VALE DO SAPUCAÍ
Introdução: O uso indiscriminado de antiinflamatório tem sido importante causa
de alteração da função renal. Os mecanismos da nefrotoxicidade dos AINH estão
provavelmente relacionados à inibição das cicloxigenases e conseqüentemente à
diminuição das prostaglandinas vasodilatadoras renais. Tivemos como objetivo
avaliar a nefrotoxicidade dos AINH através de técnicas de clearence (Cl) renal e
manejo tubular de eletrólitos e se esta nefrotoxicidade está relacionada ao tempo
de uso da droga.
Métodos: Ratos machos Wistar receberam uma dose de 9mg/kg de diclofenaco
intraperitoneal, durante 5 e 30 dias (grupos A5 e A30, respectivamente). Ao tér-
mino do tratamento com AINH amostras de sangue e urina foram colhidas, e foram
avaliados os parâmetros: ritmo de filtração glomerular (RFG), fluxo plasmático
renal (FPR), razão urina/plasma de Inulina (U/P), Fluxo urinário (V), fração de fil-
tração (FF), sódio plasmático (Na), carga excretada de sódio (CENa), fração de
excreção de sódio (FENa), potássio plasmático (K), carga excretada de potássio
(CEK) e fração de excreção de potássio (FEK).
Resultados: Os parâmetros RFG, FPR, U/P dos grupos A5 e A30 foram menores
que o grupo controle (C) [(RFG: 5,663±0,26 vs 4,242±0,23 em A5 e 3,620±0,016
em A30); (FPR: 24,12±2,55 vs 15,50±1,61 em A5 e 12,21±0,86 em A30); (U/P:
41,36±4,49 vs 25,24±1,59 em A5 e 30,6±2,35 em A30)]. No manejo tubular de
íons tivemos aumento da FEK em ambos os grupos tratados com AINH (FEK:
24,64±2,30 vs 45,63±2,56 em A5 e 41,10±1,78 em A30).
Conclusão: O uso de AINH durante 5 e 30 dias consecutivos alteraram de maneira
semelhante tanto parâmetros de hemodinâmica glomerular quanto função tubular,
mostrando que, pelo método estudado, o tempo de uso não foi fator agravante da
nefrotoxicidade.
P-389
CISTATINA C PARA AVALIAÇÃO DA FUNÇÃO RENAL.
SANTOS, B. C.; PAIVA, L.; LEME, A.; BECHARA, J.; PRINCE, E.; MARTI-
NO, M.; FAULHABER, M.
HOSPITAL ISRAELITA ALBERT EINSTEIN
Objetivos: Comparar e contrastar a análise isolada de cistatina C e creatinina para
avaliação da função renal de pacientes e controles normais.
Casuística e métodos: Foram realizadas dosagens de cistatina c sérica (nefelome-
tria, Behring) em 34 pacientes e controles normais submetidos a clearance de cre-
atinina para avaliação da função renal.
Considerando-se o clearance de creatinina abaixo de 75mL/min como alteração da
função renal foram calculadas as curvas ROC para creatinina sérica e cistatina C,
que mostraram área sob a curva de 0,94 para cistatina C e 0,82 para creatinina séri-
ca. Ainda, o valor do inverso da creatinina sérica (1/creatinina) tem sido utilizado
para cálculo da curva de evolução da função renal. A correlação do inverso da cre-
atinina sérica e o clearance de creatinina da população estudada foi de 0,52 e a cor-
relação do inverso da cistaina C e o clearance de creatinina foi de 0,81. Na popu-
lação hospitalar, onde ocorre significativa variabilidade da massa muscular devido
a presença de doenças consuptivas e/ou pacientes em diferentes faixas etárias, a
dosagem isolada da creatinina sérica pode superestimar a função renal, o que jus-
tifica a menor correlação com o clearance de creatinina. A cistaina c é uma proteí-
na de baixo peso molecular, pertence a grande família de inibidores das cisteínas
proteases e produzida por todas as células nucleares. A dosagem de cistatina C
sérica é menos afetada pela massa muscular ou dieta. Estas características deter-
minaram uma melhor correlação com o clearance de creatinina.
Conclusões: A dosagem de cistatina C constitui-se numa alternativa sensível e
específica para análise da função renal principalmente em pacientes com patolo-
gias consuptivas, idosos ou crianças.
147
Fisiologia Renal J. Bras. Nefrol

P-390 P-391
CONTRIBUIÇÃO DOS TRANSPORTADORES DE SÓDIO E ÁGUA PARA HIPEROSMOLARIDADE CRÔNICA DIMINUI PROLIFERAÇÃO E
A HOMEOSTASE SISTÊMICA DURANTE A GRAVIDEZ RETARDA CICLO CELULAR
TARDIN, J. C. B. M.; ABREU. N. P.; LEDITE, A. A. L. BOIM, M. A. SILVA, R. G.; SANTOS, B. F. C.; DALBONI, M. A.; CENDOROGLO, M.
UNIVERSIDADE FEDERAL DE SÃO PAULO UNIFESP

Introdução: Os efeitos sistêmicos induzidos pela gravidez são bem conhecidos, e
se caracterizam por vasodilatação e expansão do volume extracelular. A gravidez
normal é acompanhada por aumento de ~80% no fluxo plasmático renal e ~50%
na filtração glomerular (FG) com picos observados ao redor do 2º trimestre da
gravidez. Porém, pouco se conhece a respeito dos mecanismos adaptativos no
transporte tubular de sódio e água durante a gravidez normal.
Objetivos: Avaliar do ponto de vista quantitativo, se possíveis modificações nos
principais mecanismos de transporte de Na, K e água ao longo do néfron, estariam
envolvidas nas modificações na homeostase de água e eletrólitos típica da
gravidez.
Materiais e Métodos: Os parâmetros da função renal, os eletrólitos e análise do
nível de expressão dos transportadores ao longo do néfron foram avaliados nos
seguintes grupos de ratas Wistar: Virgem (V,n= 9), grávida de 7 (G7,n=9), 14
(G14, n=8), 19 (G19, n=8) dias, e grupo avaliado 3 dias após o nascimento da nin-
hada (Pós parto: PP3, n=7).Os níveis de expressão dos transportadores incluindo o
trocador Na/H (NHE3), cotransportador Na/K/2Cl (BSC) e Aquaporina 2 (AQP2),
foram avaliados pela técnica RT-PCR utilizando RNA extraído de córtex renal.
Resultados: Ocorreu aumento na FG, com valor máximo observado no grupo G14
(≠ de 50% em relação ao grupo V, p<0,05) caracterizando a hiperfiltração típica
da gravidez. Houve aumento na ingestão de água sem alteração significante na
diurese até o 14º dia de gravidez. Paralelamente observamos redução progressiva
na fração de excreção de sódio, sendo significante (p<0,05) no grupo G14 com-
parado com o grupo V ( 0,83 ±0,6% vs 0,55%±0,03%, p<0,05). Estas modifi-
cações foram acompanhadas por aumento no nível de expressão dos transporta-
dores NHE3, do BSC e da AQP2, sendo mais acentuado no grupo G14 o qual apre-
sentou aumentos significantes no NHE3 (79%), BSC (100%) e na AQP2 (250%).
Conclusão: Estes resultados sugerem uma supra-regulação na expressão gênica e
provavelmente no número destes transportadores no epitélio tubular renal com
potencial participação na manutenção da homeostase sistêmica típica da gravidez.
Justificativa: Os mecanismos responsáveis pela concentração urinária determi-
nam a sobrevivência de células da medula interna renal num ambiente hostil, com
baixa tensão relativa de oxigênio e variação da osmolaridade. É conhecido o fato
de que o aumento agudo da osmolaridade com NaCl e/ou uréia determina a
redução de proliferação de células da linhagem mIMCD-3 (mouse Inner Medullary
Collected Duct), além de retardo nas fases G0/G1 e G2/M do ciclo celular e, em
maiores concentrações, a indução de apoptose. No entanto, a adaptação crônica a
hiperosmolaridade com solução isomolar de NaCl e uréia determina resistência
frente a toxinas e estímulos agressores em linhagens celulares renais.
Objetivo: Analisar a proliferação e o ciclo celular de diferentes linhagens celu-
lares renais cronicamente adaptadas a hiperosmolaridade com NaCl+uréia.
Materiais e métodos: Utilizando-se concentrações isomolares de NaCl e uréia
acrescidas ao meio de cultura (DMEM/F12, 1:1, 10% FSB), aumentou-se gradati-
vamente a osmolaridade a cada subcultivo das linhagens celulares renais (LLC-
PK1, MDCK, CMI, IMCD-3), representativas das diferentes porções do néfron.
Com essa adaptação crônica dispomos de células sobrevivendo na máxima osmo-
laridade viável alcançada por cada linhagem. Após este processo, as células foram
submetidas a testes de viabilidade e proliferação com cristal violeta e análise do
ciclo celular por citometria de fluxo com coloração por iodeto de propídeo.
Resultado: A hiperosmolaridade crônica determinou diversas alterações fenotípi-
cas, dentre elas uma diminuição na taxa de proliferação na ordem de 3 vezes
(n=22, p < 0,05, teste t), quando comparadas às parentais não adaptadas. A análise
do ciclo celular pela distribuição das células de acordo com o conteúdo nuclear
mostrou que as quatro linhagens estudadas, quando cronicamente adaptadas a
hiperosmolaridade, tiveram um aumento de aproximadamente 10% no número de
células em G0/G1, em detrimento a uma diminuição destas em S e G2/M (média
de 12 experimentos independentes). Através da relação G1/G2M pôde-se observar
uma tendência à parada na fase G0/G1 do ciclo celular em todas as linhagens quan-
do cronicamente adaptadas (LLC-PK1=2,1, MDCK=1,3, CMI=1,5, IMCD-3=1,6).
Conclusão: A hiperosmolaridade com NaCl e uréia determinou alterações na taxa
de proliferação e ciclo celular, sugerindo um aumento na expressão de ciclinas e
parada nos check-points, o que pode estar diretamente relacionado a resistência das
células da medula interna renal frente a estímulos citotóxicos.

P-392
VARIAÇÕES DE OSMOLARIDADE ALTERAM A VIABILIDADE DE
CÉLULAS DA MEDULA INTERNA RENAL
ROMANATO, R.; SANTOS, B. F. C.; SILVA, R. G.
UNIFESP

Justificativa: As células na medula interna renal estão constantemente expostas

variações da osmolaridade e da oferta de oxigênio em conseqüência do mecanis-
mo de concentração urinária e são mais, sabidamente, resistentes a nefrotoxinas e
isquemia. A adaptação crônica de células mIMCD3 a hiperosmolariade, entre ou -
tros estresses, confere um fenótipo de maior resistência ao estímulo osmolar adi-
cional ou drogas citotóxicas devido à expressão de “fatores citoprotetores”, dentre
eles as heat shock proteins (HSPs), proteínas relacionadas com a estabilidade pro-
téica intracelular.
Objetivo: Avaliar a resposta celular frente a variações de osmolaridade quanto a
citotoxicidade e expressão de proteínas de estresse.
Materiais e métodos: Utilizando-se concentrações isomolares de NaCl e uréia
acrescidas ao meio de cultura (DMEM/F12, 1:1, 10% FSB) aumentou-se gradati-
vamente a osmolalidade a cada subcultivo da linhagem mIMCD-3 (mouse Inner
Medular Collect Duct). Esta adaptação possibilitou-nos células sobrevivendo em
ambiente isosmolar (IS0) (~300mOsm), células em ambiente hiperosmolar (HT)
(~1050mOsm) e células HT re-aclimatadas ao meio isotônico (HT-ISO), que
foram expostas a estímulos adicionais com NaCl, uréia, NaCl+uréia, manitol,
mitonicina C, cisplatina, ciclosporina, H2O2 e posteriormente submetidas a testes
de viabilidade e Western Blot.
Resultados: Observou-se um perfil de resistência das células HT-ISO inter-
mediário ao obtido com as células HT (mais resistentes) e células ISO (menos
resistentes) frente a estímulos hiperosmolares adicionais e drogas (n=8, * p<0,05,
Bonferroni). A expressão de proteínas de estresse, representada pela HSP70, foi
aproximadamente semelhante nas células HT e HT-ISO (24hs), o que decai e
chega ao grau de expressão basal das células ISO em 96hs (resultado de 3 experi-
mentos independentes). Além disso, o choque térmico, clássico modelo para a
expressão das HSPs, conferiu uma maior resistência às células ISO quando
expostas a condições de hiperosmolaridade aguda por NaCl e NaCl+uréia, mas não
por uréia.
Conclusão: A hiperosmolaridade da medula interna renal é um evento determi-
nante na aquisição da resistência celular, sendo que a adaptação e a resposta celu-
lar a variação de osmolaridade são processos complexos, dos quais participam a
expressão de proteínas de estresse, entre outros fatores.

148 XXII Congresso Brasileiro de Nefrologia