Toksisitas Rhodamin B dan Sakarin Terhadap Kadar Malondialdehid (MDA) dan Gambaran

Histopatologi Lambung Tikus Putih (Rattus Norvegicus)

Toxicity of Rhodamine B and Saccharin on Gastric Malondialdehyde (MDA) Level and

Histopathology of White Rat (Rattus Norvegicus)

Syakina Wahyu Endah Puspita*1, Edwin Widodo2, Ajeng Erika Prihastuti Haskito3
1
Program Studi Pendidikan Dokter Hewan
2
Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Brawijaya.
Syakinanaa@gmail.com

ABSTRAK

Rhodamin B dan sakarin merupakan zat xenobiotik yang berbahaya bagi tubuh. Konsumsi rhodamin B dan
sakarin secara terus menerus dapat menyebabkan kanker serta gangguan beberapa fungsi organ seperti hati, saluran
pernafasan, dan saluran pencernaan. Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui pengaruh toksisitas rhodamin B dan
sakarin terhadap kadar MDA dan gambaran histopatologi lambung tikus putih (Rattus norvegicus). Tikus putih (Rattus
norvegicus) dibagi menjadi 4 kelompok perlakuan, yaitu kelompok kontrol negatif, P1, P2, dan P3. Kelompok kontrol
negatif tidak diberikan rhodamin B dan sakarin, kelompok P1 diberikan rhodamin B dengan dosis 22,5 mg/kgBB,
kelompok P2 diberikan sakarin dengan dosis 157,77 mg/kgBB, dan kelompok P3 diberikan kombinasi rhodamin B
dengan dosis 22,5 mg/kg BB ditambah sakarin dengan dosis 157,77 mg/kgBB. Pemberian rhodamin B dan sakarin
dilakukan selama 30 hari per-oral menggunakan sonde lambung. Parameter yang diamati adalah kadar MDA dengan
menggunakan uji Asam Tiobarbiturat (TBA) dan gambaran histopatologi lambung tikus putih (Rattus norvegicus) dengan
menggunakan pewarnaaan Hematoksilin Eosin (HE). Analisa kadar MDA dilakukan secara kuantitatif menggunakan
analisa ragam ANOVA dilanjutkan dengan uji Tukey (Beda Nyata Jujur) dengan α = 0,05 dan data gambaran
histopatologi lambung dilakukan secara deskriptif kualitatif. Hasil penelitian menunjukkan pengaruh toksisitas rhodamin
B dan sakarin terhadap peningkatan kadar MDA dan gambaran histopatologi lambung. Pada kelompok P3 memberikan
pengaruh lebih toksik ditandai dengan kadar MDA tertinggi dibanding kelompok lain, yaitu 2,799 ± 0,309 ng/mL.
Gambaran histopatologi lambung pada kelompok P3 menunjukkan adanya erosi, hemoragi, infiltrasi sel radang,
karioreksis, kariolisis, dan piknosis.

Kata kunci: Rhodamin B, Sakarin, MDA, Histopatologi, Lambung

ABSTRACT
Rhodamine B and saccharin are xenobiotic substances that are harmful to the body. The continuous consumption
of rhodamine B and saccharin can lead to cancer and disruption of function in some organ such as the liver, respiratory
tract, and gastrointestinal tract. This study was conducted to determine the toxicity effect of rhodamine B and saccharine
on gastric MDA levels and histopathology in white rats (Rattus norvegicus). White rats (Rattus norvegicus) were divided
into 4 treatment groups: negative control, P1, P2, and P3 group. Negative control group were not given rhodamine B and
saccharin, P1 group were given rhodamine B at dose of 22,5 mg/kgBW, P2 group were given saccharin at dose of 157,77
mg/kgBW, and P3 group were given the combination of both of rhodamin B and saccharine. The administration of
rhodamine B and saccharin was performed for 30 days per-orally. The parameters which observed in this reseach were
gastric’s MDA level with Tiobarbituric Acid (TBA) test and gastric histopathology of white rats (Rattus norvegicus) with
Hematoxylin Eosin (HE) staining. Measurement of gastric MDA level was analyzed statistically with ANOVA and
followed by Fisher’s exact test with α = 0,05. Gastric histopathology was analyzed in descriptive qualitative. The result
showed that there were differences of rhodamine B and saccharin administration effects to MDA levels and gastric
histopathology. P3 group showed the most toxic effect marked by highest MDA levels compared to the other groups of
2.799±0,309 ng/mL. Histopathology observation showed erotion, hemorrhage, inflammatory cell infiltration,
karyorrhexis, karyolysis, and pyknosis were found in gastric histopathology of P3 group.

Key words: Rhodamine B, Saccharin, MDA level, Histopatology, Gastric.

1
PENDAHULUAN
Pada industri makanan dan minuman,
secara umum produsen mengolah bahan
makanan sedemikian rupa, sehingga makanan
dan minuman dapat digemari oleh konsumen,
yaitu dengan menambahkan bahan kimia sebagai
Bahan Tambahan Makanan (BTM). Bahan
Tambahan Makanan (BTM) atau sering pula
disebut Bahan Tambahan Pangan (BTP)
merupakan bahan yang ditambahkan ke dalam
makanan untuk mempengaruhi sifat ataupun
bentuk makanan (Yuliarti, 2007). Penambahan
bahan tambahan pada makanan memiliki dosis
tertentu karena bahan tambahan makanan dapat
menyebabkan bahaya kesehatan (Kaunang dkk.,
2012).
Pewarna makanan dan pemanis
merupakan salah satu BTP. Dalam Peraturan
Pemerintah Republik Indonesia Nomor 28 tahun
2004 tentang keamanan, mutu, dan gizi pangan
serta Peraturan Menteri Kesehatan Republik
Indonesia Nomor 1168/Menkes/Per/X/1999
tentang bahan tambahan yang dilarang
digunakan dalam makanan, rhodamin B
merupakan salah satu bahan yang dilarang
digunakan dalam kegiatan atau proses produksi
pangan. Tetapi penggunaan rhodamin B masih
terus digunakan oleh produsen dalam mewarnai
produk makanan dan minuman, seperti untuk
mewarnai terasi, gulali, kerupuk, saus tomat,
cabai giling, dan minuman sirup (Cahyadi,
2009). Rhodamin B merupakan zat pewarna
sintesis yang memberikan warna merah dan
merupakan zat pewarna sintetis yang sangat
berbahaya (Tanty, 2009). Dari hasil beberapa
penelitian tentang uji toksisitas menunjukkan
rhodamin B memiliki LD50 lebih dari
2000mg/kg, serta dapat menimbulkan iritasi
pada membran mukosa (Wirasto, 2008).
Sedangkan, pada hewan percobaan tikus
ditemukan bahwa LD50 yang diberikan per-oral
sebesar 887mg/kg dan dosis terendah sebesar
500mg/kg. Rhodamin B bersifat karsinogenik
dan genotoksik (Brantom, 2005).
Demikian juga dengan pemanis buatan.
Pada industri makanan, sakarin sering digunakan
untuk menggantikan sukrosa atau sering dikenal
gula pasir atau gula tebu. Walaupun memiliki
2
rasa yang enak (sangat manis), penggunaan
sakarin harus dibatasi karena dapat
membahayakan kesehatan. Menurut Yuliarti
(2007), tikus yang diberi sakarin akan menderita
kanker kantong kemih, karena hasil metabolisme
sakarin bersifat karsinogenik, sehingga
pembuangan sakarin melalui air seni dapat
merangsang pertumbuhan tumor. Batas
maksimum penggunaan sakarin menurut SNI 01-
6993-2004 berdasarkan kategori pangan gula
dan beberapa sirup yang lain, yaitu 500mg/kg
BB. Fungsi utama sakarin adalah digunakan
untuk penderita diabetes, namun pada kenyataan
sehari-hari masih terdapat sakarin yang
dicampur kedalam makanan dan minuman
dengan kadar yang melebihi batas (Fatimah dkk.,
2015).
Menurut data BPOM (2007),
menunjukkan bahwa dari 2903 sampel Panganan
Jajan Anak Sekolah (PJAS) yang diambil dari
478 Sekolah Dasar (SD) di 26 provinsi, 49,43%
tidak memenuhi persyaratan, 20% minuman
berwarna merah menggunakan zat pewarna
buatan berupa rhodamin B dan 26,19%
menggunakan zat pemanis buatan berupa sakarin
dan siklamat. Rhodamin B dan sakarin
merupakan zat xenobiotik, karena senyawa
kimia yang dimiliki kedua zat tersebut
merupakan senyawa yang asing bagi tubuh. Zat
xenobiotik yang dimetabolisme didalam hati
melalui dua tahap, yaitu fase pertama, adalah
oksidasi yang dikatalis oleh sekelompok enzim
yang dinamakan monooksigenase atau sitokrom
P450 dan fase kedua, adalah senyawa hasil dari
produksi tahap pertama yang diubah menjadi
berbagai metabolit polar oleh enzim spesifik. Zat
xenobiotik yang dimetabolisme oleh sitokrom
P450 akan menghasilkan radikal bebas. Radikal
bebas yang terbentuk didalam hati akan
didistribusikan ke seluruh tubuh, salah satunya
adalah organ lambung. Jumlah radikal bebas
yang berlebih mengakibatkan peningkatan
proses peroksidasi lipid, sehingga produksi
malondialdehid (MDA) juga meningkat.
Peningkatan peroksidasi lipid dapat memicu
peningkatan pada kerusakan sel (Shkolnik et al.,
2011). Kerusakan pada sel lambung yang
disebabkan oleh zat xenobiotik dapat dilihat dari
gambaran histopatologi lambung. Gambaran
histopatologi mukosa lambung akibat paparan
zat xenobiotik dapat terlihat abnormalitas pada
sel-sel mukosa lambung, antara lain: erosi pada
sel-sel epitel, vasodilatasi pembuluh darah
kapiler, edema, dan tampak adanya infiltrasi sel
radang (Fadlina dkk., 2008).
Uji toksisitas merupakan suatu uji yang
digunakan untuk mendeteksi efek toksik suatu
zat pada sistem biologi. Hasil uji toksisitas tidak
dapat digunakan secara mutlak untuk
membuktikan keamanan suatu bahan atau
sediaan, namun dapat memberikan petunjuk
terdapat toksisitas relatif dan membantu
identifikasi efek toksik apabila terjadi
pemaparan (BPOM, 2014). Pada penelitian
terdahulu, belum ada yang menjelaskan tentang
toksisitas kombinasi rhodamin B dan sakarin
terhadap kadar MDA dan gambaran
histopatologi lambung. Maka, pada penelitian ini
akan dilakukan uji toksisitas rhodamin B dan
sakarin terhadap kadar MDA dan gambaran
histopatologi lambung.
MATERI DAN METODE
Alat dan Bahan
Peralatan yang digunakan untuk
persiapan hewan coba, antara lain kandang,
pakan, dan air minum. Peralatan yang digunakan
untuk perhitungan dosis rhodamin B dan sakarin,
antara lain gelas ukur dan timbangan digital.
Peralatan yang digunakan untuk pemberian
rhodamin B dan sakarin, antara lain sonde
lambung. Peralatan yang digunakan untuk
euthanasi hewan coba, yaitu sarung tangan kain.
Peralatan yang digunakan untuk preparasi organ
lambung, antara lain scalpel, blade, pinset
anatomis, gunting, papan bedah, dan pot organ.
Peralatan yang digunakan untuk pengukuran
kadar MDA, antara lain tabung reaksi,
microtube, vortex, plastik wrap, water bath, dan
sprektofotometer Shimadzu UV-visible
®
spectofotometer UV-1601 . Peralatan yang
digunakan untuk pembuatan preparat
histopatologi lambung, antara lain inkubator,
penjepit (block holder), mikrotom, kuas, obyek
glass, hot plate, inkubator, cover glass, dan
mikroskop cahaya Olympus BX52®.
3
Bahan yang digunakan untuk persiapan
hewan coba, yaitu tikus putih (Rattus
norvegicus). Bahan yang digunakan untuk
perhitungan dosis rhodamin B dan sakarin,
antara lain rhodamin B, sakarin, dan akuades.
Bahan yang digunakan untuk pemberian
rhodamin B dan sakarin, antara lain rhodamin B
dan sakarin. Bahan yang digunakan untuk
preparasi organ lambung, antara lain NaCl
fisiologis 1%, Phospate Buffer Saline (PBS), dan
Paraformaldehide (PFA) 4%. Bahan yang
digunakan untuk pengukuran kadar MDA antara
lain akuades, TCA 10%, HCl 1N, Na-Thio, dan
NaCl fisiologis. Bahan yang digunakan untuk
pembuatan preparat histopatologi lambung,
antara lain PFA 4%, etanol 70%, xylol, parafin,
pewarna HE, alkohol, dan entellan.
Persiapan Hewan Coba
Hewan coba yang digunakan pada
percobaan ini adalah tikus putih (Rattus
norvegicus), strain Wistar, dengan jenis kelamin
jantan, berumur 8-12 minggu dengan berat
badan rata-rata 150-200 gram. Tikus putih
(Rattus norvegicus) ditempatkan pada kandang
berupa bak plastik bersekat dengan jumlah 4
ekor/kandang. Sebelum penelitian dimulai,
dilakukan aklimatisasi pada tikus putih (Rattus
norvegicus) selama tujuh hari dengan pemberian
pakan berupa BR-1 comfeed® dan air minum ad-
libitum.
Perhitungan Dosis Rhodamin B dan Sakarin
Dosis rhodamin B yang diberikan pada
tikus putih (Rattus norvegicus) kelompok P1
mengacu pada penelitian terdahulu tentang uji
toksisitas Rhodamin B. Dosis rhodamin B yang
diberikan pada tikus putih (Rattus norvegicus)
pada penelitian Siswati (2000), yaitu 150 ppm,
300 ppm, dan 600 ppm. Dari hasil penelitian
tersebut dijelaskan bahwa hasil pemberian dosis
terendah, yaitu 150 ppm dapat menimbulkan
kerusakan hepar yang ditunjukkan dengan
perubahan bentuk dan susunan sel. Sehingga,
pada kelompok P1 dalam penelitian ini
digunakan dosis terendah, yaitu 150 ppm. Dosis
tersebut kemudian dikonversikan dalam berat
badan tikus putih (Rattus norvegicus) menjadi
22,5 mg/kgBB. Pada penelitian Suciati (2014),
digunakan dosis terendah 22,5 mg/kgBB yang
dilarutkan dalam 1 ml akuades. Larutan tersebut
diberikan pada masing-masing tikus putih
(Rattus norvegicus) dalam kelompok P1.
Dosis sakarin yang diberikan pada tikus
putih (Rattus norvegicus) kelompok P2 mengacu
pada penelitian terdahulu tentang uji toksisitas
sakarin. Dosis sakarin yang diberikan pada tikus
putih (Rattus norvegicus) pada penelitian
Indraswari (1998), yaitu 15,78 mg/kgBB, 31,55
mg/kgBB, dan 63,11 mg/kgBB selama 75 hari.
Dari hasil penelitian tersebut dijelaskan bahwa
hasil pemberian dosis terendah, yaitu 15,78
mg/kgBB dapat menimbulkan kerusakan ginjal
berupa degenerasi sel. Tetapi dalam penelitian
ini digunakan dosis tertinggi, yaitu 63,11
mg/kgBB supaya hasil yang didapatkan lebih
signifikan. Sehingga, pada kelompok P2 dalam
penelitian ini digunakan dosis, yaitu 157,77
mg/kgBB dikarenakan waktu pemaparan yang
dilakukan pada penelitian ini hanya 30 hari.
Dosis sebesar 157,77 mg/kgBB tersebut
dilarutkan dalam 1 ml akuades. Larutan tersebut
diberikan pada masing-masing tikus putih
(Rattus norvegicus) dalam kelompok P2.
Dalam penelitian ini dosis kombinasi
rhodamin B dan sakarin yang diberikan pada
tikus putih (Rattus norvegicus) kelompok P3
merupakan dosis kombinasi dari rhodamin B
22,5 mg/kgBB ditambah dengan dosis sakarin
157,77 mg/kgBB. Kombinasi antara rhodamin
B dan sakarin tersebut dilarutkan dalam 1 ml
akuades. Larutan tersebut diberikan pada
masing-masing tikus putih (Rattus norvegicus)
dalam kelompok P3.
Pemberian Rhodamin B dan Sakarin
Pemberian rhodamin B dan sakarin pada
kelompok P1, kelompok P2, dan kelompok P3
dilakukan per-oral dengan menggunakan sonde
lambung selama 30 hari. Tikus putih (Rattus
norvegicus) dalam satu hari diberikan rhodamin
B dan sakarin sebanyak satu kali pemberian pada
pukul 11.00 WIB setelah makan. Pemberian
rhodamin B dan sakarin dimulai pada hari ke-8
sampai hari ke-37.
Euthanasi Hewan Coba
4
Proses euthanasi pada hewan coba tikus
putih (Rattus norvegicus) dilakukan pada hari
ke–38 setelah seluruh perlakuan penelitian
dilakukan. Langkah awal yang harus dilakukan
adalah melakukan euthanasi pada hewan coba
dengan cara dislokasi leher. Setelah dilakukan
euthanasi, tikus putih (Rattus norvegicus)
diletakkan pada posisi rebah dorsal dan
dilakukan pembedahan pada bagian abdomen.
Preparasi Organ Lambung
Preparasi organ lambung, dilakukan
dengan melakukan pengambilan organ lambung.
Dicuci dalam NaCl fisiologis 0,9%. Dipotong
menjadi dua dengan potongan longitudinal,
sebagian potongan lambung dimasukkan dalam
larutan PBS dan sebagian lagi dimasukkan pada
larutan PFA 4%.
Pengukuran Kadar Malondialdehid (MDA)
Pembuatan homogenat lambung
dilakukan dengan mengambil dan memotong
lambung menjadi bagian yang lebih kecil.
Ditimbang 0,5 gram kemudian digerus dengan
menggunakan mortar streril yang diletakkan
diatas balok es. Ditambahkan 0,5 ml NaCl
fisiologis 0,9% dingin. Dimasukkan dalam
tabung ependorf 1,5 ml dan disentrifugasi pada
kecepatan 8000 rpm selama 20 menit. Diambil
supernatan untuk penentuan kadar MDA dengan
melakukan uji TBA. Supernatan lambung yang
terbentuk diambil 100 µl dimasukkan kedalam
eppendorf, ditambah 550 µl akuades, 100 µl
TCA 10%, 250 µl HCL 1N, 100 µl Na-Thio.
Larutan tersebut selanjutnya dihomogenkan
dengan cara disentrifugasi 500 rpm selama 10
menit. Supernatan diambil dan diinkubasi dalam
penangas air 100oC selama 30 menit. Supernatan
dibiarkan dalam suhu ruang lalu diukur
absorbansi dengan spektofotometer Shimadzu
UV-visible spectophotometer UV-1601® pada
panjang gelombang maksimum 532 nm (Lovric
et al., 2008). Absorbansi yang diperoleh
kemudian diplotkan pada kurva baku MDA.
Pembuatan Preparat Histopatologi Lambung
Sampel lambung yang diperoleh, dicuci
dengan NaCl fisiologis 0,9%. Proses pembuatan
preparat histologi terdiri dari fiksasi, dehidrasi,
penjernihan, infiltrasi parafin, embedding,
sectioning, penempelan pada glass objek serta
pewarnaan. Tahapan fiksasi yaitu dengan
memasukkan jaringan ke dalam larutan PFA 4%,
kemudian direndam dalam etanol 70% selama 24
jam. Kemudian dilanjutkan dengan proses
dehidrasi bertingkat. Tahapan selanjutnya yaitu
penjernihan dengan cara dipindakan jaringan
dari alkohol absolut ke dalam larutan
penjernihan yaitu xylol I (20 menit), xylol II (30
menit) (Junquiera and Carneiro, 2003).
Proses embedding dilakukan dengan
mencelupkan jaringan dalam parafin cair yang
telah dituang ke dalam cetakan. Sectioning
diawali dengan mengatur ketebalan irisan
dengan ukuran ± 4-5 µm dengan menggunakan
mikrotom. Potongan terpilih dikeringkan dan
diletakkan di atas hot plate suhu 38-40oC sampai
kering kemudian dilakukan pewarnaan dengan
hematoksilin eosin (HE) (Junquiera and
Carneiro, 2003). Preparat histopatologi diamati
menggunakan mikroskop cahaya (Olympus
BX52) dengan perbesaran 200x dan 400x.
Analisa Data
Data hasil pengukuran MDA dianalisis
secara kuantitatif dengan menggunakan
Microsoft Excel dan Statistical Product of
Service Solution (SPSS) 20.0 for Windows untuk
One Way Analysis of Variance (ANOVA) dan
uji lanjutan dengan uji Tukey atau BNJ dengan α
= 0,05. Data pengamatan hasil histopatologi
lambung dianalisa secara kualitatif. Analisa
kualitatif untuk histopatologi lambung dilakukan
dengan membandingkan gambaran histopatologi
lambung dari masing-masing kelompok
perlakuan penelitian dengan melihat kerusakan
pada mukosa lambung. Gambaran histopatologi
mukosa lambung akibat paparan zat xenobiotik
dapat terlihat abnormalitas pada sel sel mukosa
lambung, antara lain erosi pada sel epitel,
hemoragi, infiltrasi sel radang, dan nekrosis.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil penelitian tentang toksisitas
rhodamin b dan sakarin terhadap kadar
malondialdehid (MDA) dan gambaran
5
histopatologi lambung tikus putih (Rattus
norvegicus) dengan analisis statistika
menggunakan uji ANOVA yang dilanjutkan
dengan uji BNJ disajikan pada Tabel 1.
Tabel 1. Rata-rata Kadar Malondialdehid
(MDA) Lambung Tikus Putih (Rattus
norvegicus)
Perlakuan Rata-rata Kadar
Kadar MDA ± Malondialdeh
SD (ng/mL) id (MDA)
Peningkatan
terhadap K(-)
K(-) 0,864 ± 0,102a -
P1 2,209 ± 0,215c 155,67 %
P2 1,582 ± 0,251b 83,10%
P3 2,799 ± 0,309d 223,96%
Keterangan: Perbedaan notasi a, b, c, d menunjukkan
adanya perbedaan yang signifikan (p<0,05) antara
kelompok perlakuan.
Hasil analisa statistika terhadap kadar
MDA lambung tikus putih (Rattus norvegicus)
diperoleh rata-rata kadar MDA pada masing-
masing kelompok perlakuan yaitu pada
kelompok K(-) tanpa diberi rhodamin B dan
sakarin didapatkan hasil rata-rata kadar MDA
0,864 ± 0,102 ng/mL, pada kelompok P1 yang
diberi rhodamin B dengan dosis 22,5 mg/kgBB
didapatkan hasil rata-rata MDA 2,209 ± 0,215
ng/mL, pada kelompok P2 yang diberi sakarin
dengan dosis 157,77 mg/kgBB didapatkan hasil
rata-rata MDA 1,582 ± 0,251 ng/mL, dan pada
kelompok P3 yang diberi kombinasi rhodamin B
dengan dosis 22,5 mg/kgBB dan sakarin dengan
dosis 157,77 mg/kgBB didapatkan hasil rata-rata
kadar MDA 2,799 ± 0,309 ng/mL.
Kelompok K(-) merupakan kelompok
kontrol tanpa induksi rhodamin B dan sakarin,
memiliki rata-rata kadar MDA lambung sebesar
0,864 ± 0,102 ng/mL, hal tersebut menunjukkan
bahwa secara normal tubuh memproduksi MDA.
Menurut Valko et al. (2007), MDA secara
normal diproduksi oleh sel dikarenakan radikal
bebas yang terbentuk ketika terjadi metabolisme
dalam sel. Winarsi (2007) menambahkan bahwa,
radikal bebas dalam jumlah rendah mampu
dinetralisir oleh antioksidan endogen dalam
tubuh tetapi apabila jumlah senyawa radikal
bebas melebihi jumlah antioksidan endogen
dalam tubuh, maka radikal bebas akan merusak
komponen lipid sehingga mengakibatkan stres
oksidatif.
Pada kelompok P1 dan P3 rata-rata kadar
MDA lambung tikus putih (Rattus norvegicus)
mengalami peningkatan dibandingkan dengan
kelompok kontrol negatif K(-). Peningkatan
tersebut dapat disebabkan karena, rhodamin B
memiliki ikatan dengan klorin (Cl), dimana
senyawa ini merupakan senyawa anorganik
reaktif dan berbahaya. Klorin (Cl) yang terdapat
dalam rhodamin B dapat menyebabkan efek
toksik apabila masuk ke dalam tubuh
(Purnamasari, 2013). Proses metabolisme dari
rhodamin B itu sendiri, yaitu rhodamin B
(tetraethyl-3’,6’-diaminofluran) masuk kedalam
tubuh melalui proses ingesti, akan diserap oleh
vena mesenterika, dan melalui vena porta
hepatika akan dimetabolisme di hepar. Proses
metabolisme rhodamin B paling utama terjadi
melalui tahap satu metabolisme. Rhodamin B
akan dimetabolisme melalui fase oksidasi dan
hidrolisis dengan bantuan enzim sitokrom P450.
Proses ini disebut dengan de-etilasi, dimana
rhodamin B akan dipecah menjadi 3’,6’-
diaminofluoran dan N,N’-diethyl-3’,6’
diaminofluoran (Webb, et al., 2014). Senyawa
tersebut merupakan senyawa radikal yang dapat
beredar melalui pembuluh darah hingga merusak
jaringan tubuh termasuk lambung. Metabolisme
rhodamin B pada fase ini juga mengaktivasi
senyawa Cl dengan bantuan enzim sitokrom
P450 (Lu Yongke and Caderbaum, 2008).
Klorin (Cl) termasuk senyawa halogen dan
radikal, senyawa halogen sangat berbahaya dan
memiliki reaktivitas yang tinggi untuk mencapai
kestabilan dalam tubuh dengan menyerang
molekul terdekat dan mencari pasangan elektron,
sehingga akan merusak bentuk molekul tersebut.
Akibat dari aktivitas radikal senyawa Cl, maka
sel-sel makromolekul, seperti protein,
karbohidrat, lemak, dan asam nukleat akan
hancur sehingga menimbulkan efek toksik dan
menyebabkan kerusakan sel tubuh (Manurung,
2011). Kerusakan sel tubuh dapat disebabkan
oleh jumlah radikal bebas dengan jumlah
berlebih. Proses peroksidasi lipid terjadi apabila
6
radikal bebas bertemu dengan enzim atau PUFA.
Proses peroksidasi lipid ini menghasilkan
beberapa produk akhir antara lain adalah
senyawa MDA. Sehingga apabila peroksidasi
lipid meningkat, maka produksi MDA juga
meningkat (Yustika, 2013).
Pada kelompok P2 dan P3 rata-rata kadar
MDA lambung tikus putih (Rattus norvegicus)
mengalami peningkatan dibandingkan dengan
kelompok kontrol negatif K(-). Hal tersebut
dapat disebabkan karena, sakarin merupakan zat
karsinogenik yang dapat menyebabkan kanker
setelah tubuh terpapar 5-10 tahun. Sakarin
merupakan xenobiotik yang tidak dimetabolisme
oleh tubuh, dan dieksresikan melalui urin dalam
bentuk sakarin itu sendiri (Yusuf, 2013).
Sehingga pada proses metabolisme sakarin
membutuhkan lebih banyak molekul O2 untuk
proses oksidasi yang dikatalis oleh enzim
sitokrom P450. Proses tersebut yang akhirnya
akan membentuk senyawa radikal superoxide
(O2-) dan dapat memicu stress oksidatif. Jika
superoxide (O2-) bereaksi dengan SOD, maka
akan membentuk H2O2, tetapi jika bereaksi
dengan Fe, maka akan terbentuk hidroksi
radikal. Hidroksi radikal ini yang dapat
menyebabkan stres oksidatif (Sobinoff, et al.,
2012). Stres oksidatif adalah suatu keadaan
ketidakseimbangan antara radikal bebas dengan
antioksidan, dimana jumlah radikal bebas lebih
banyak apabila dibandingkan dengan antioksidan
(Halliwell, 2006). Jika produksi radikal bebas
melebihi dari kemampuan antioksidan untuk
menetralkan maka kelebihan radikal bebas dapat
menyebabkan kerusakan sel (Kevin et al.,
2006). Selain itu, jumlah radikal bebas yang
berlebih akan mengakibatkan proses peroksidasi
lipid, sehingga produksi MDA juga meningkat
(Yustika, 2013).
Berdasarkan Tabel 5.1. rata-rata kadar
malondialdehid (MDA) kelompok P1, P2, dan
P3 mengalami peningkatan dan memiliki
perbedaan yang signifikan dibandingkan
kelompok K(-). Kelompok P3 menunjukkan
peningkatan rata-rata kadar MDA lebih tinggi
daripada kelompok P1 dan P2. Hal tersebut
menunjukkan bahwa pemberian kombinasi
rhodamin B dan sakarin akan menimbulkan efek
toksik yang lebih besar dibandingkan dengan
pemberian rhodamin B (P1) atau sakarin (P2)
saja.
Hasil penelitian tentang toksisitas
rhodamin b dan sakarin terhadap kadar
malondialdehid (MDA) dan gambaran
histopatologi lambung tikus putih (Rattus
norvegicus) dengan menggunakan pewarnaan
HE disajikan pada Gambar 1.
A. Kontrol Negatif

*Gambar 1. Gambaran histopatologi lambung tikus

putih (Rattus norvegicus) yang tidak
diberi rhodamin B dan sakarin (A) dan
diberi rhodamin B (B), sakarin (C), serta
kombinasi rhodamin B dan sakarin (D)
B. Perlakuan 1 *Keterangan:
M: Mukosa; SM: Submukosa; Panah merah ( ):
menunjukkan erosi mukosa lambung; Panah kuning (
): menunjukkan hemoragi pada beberapa area di
mukosa lambung; Panah biru ( ): menunjukkan
infiltrasi limfosit pada mukosa lambung; Panah hijau (
): menunjukkan infiltrasi makrofag pada mukosa
lambung; Panah ungu
( ): menunjukkan inti sel yang mengalami kariolisis
pada mukosa lambung; Panah abu-abu ( ):
menunjukkan inti sel yang mengalami karioreksis pada
mukosa lambung; Panah merah muda ( ): menunjukkan
inti sel yang mengalami piknosis pada mukosa lambung.
C. Perlakuan 2 Gambaran histologi lambung tikus putih
(Rattus norvegicus) pada kelompok K(-) terlihat
dalam keadaan normal dan tidak ditemukan
kerusakan. Hal ini ditunjukkan dengan
terlihatnya epitel pada vili mukosa lambung
berbentuk silindris selapis yang teratur dan rapat
dengan inti sel berbentuk bulat. Lamina propria
dari tunika mukosa lambung tikus putih (Rattus
norvegicus) pada kelompok K(-) juga terlihat
normal dan tidak terlihat adanya abnormalitas
(Gambar 5.2.A). Menurut Bloom and Fawcett
(2002), mukosa lambung mempunyai epitel
silindris selapis yang berlekuk-lekuk (foveolae
gastricae). Lamina propria terdiri atas anyaman
serat retikuler, kolagen dan sedikit elastin serta
anyaman fibrosa yang mengandung limfosit,
D. Perlakuan 3
eosinofil, sel mast, dan sel plasma. Gambaran
histopatologi lambung tersebut kemudian
digunakan sebagai acuan untuk melihat kondisi
histopatologi lambung pada kelompok perlakuan
dengan pemberian rhodamin B dan sakarin.

7
 Gambaran histopatologi lambung tikus
putih (Rattus norvegicus) pada kelompok P1
yaitu kelompok yang diinduksi rhodamin B
dengan dosis 22,5 mg/kgBB terlihat
abnormalitas pada lambung jika dibandingkan
dengan kelompok K(-). Hal ini ditandai dengan
adanya erosi epitel (epitel mengalami ruptur),
hemoragi, infiltrasi sel radang, dan nekrosis pada
mukosa lambung, ditunjukkan inti sel
mengalami piknosis, karioreksis, dan kariolisis
(Gambar 1.B). Pada kelompok P2 yaitu
kelompok yang diinduksi sakarin dengan dosis
157,77 mg/kgBB terlihat kerusakan pada tunika
mukosa lambung. Kerusakan yang terjadi pada
lambung tikus putih (Rattus norvegicus)
kelompok P2 hampir menyerupai kerusakan
yang terjadi pada kelompok P1, namun dengan
kondisi yang lebih ringan. Pada kelompok P2 ini
hanya terjadi infiltrasi sel radang, hemoragi, dan
nekrosis yang ditunjukkam imti mengalami
piknosis, karioreksis, dan kariolisis pada mukosa
lambung, tanpa disertai erosi sel epitel (epitel
mengalami ruptur) (Gambar 1.C). Gambaran
histopatologi lambung tikus pada kelompok P3
yang diinduksi rhodamin B dengan dosis 22,5
mg/kgBB dan sakarin dengan dosis 157,77
mg/kgBB juga terlihat kerusakan pada mukosa
lambung, bahkan kerusakan yang terjadi lebih
parah apabila dibandingkan dengan kelompok
P1 dan P2. Pada kelompok P3 menunjukkan
erosi (epitel mengalami ruptur), hemoragi,
infiltrasi sel radang, dan nekrosis ditunjukkan
dengan inti mengalami piknosis, karioreksis, dan
kariolisis pada mukosa lambung (Gambar 1.D).
Zat xenobiotik berupa rodamin B dan
sakarin dapat meningkatkan radikal bebas
didalam tubuh. Radikal bebas didalam tubuh
dapat diseimbangkan oleh antioksidan endogen.
Namun apabila jumlah radikal bebas tinggi
didalam tubuh, antioksidan endogen tidak dapat
menetralisasi radikal bebas tersebut, sehingga
memicu peningkatan ROS yang akan
menyebabkan terjadi stres oksidatif dan
menginisiasi proses peroksidasi lipid membran
dengan mengambil atom hidrogen dari PUFA
untuk membentuk molekul yang lebih stabil
(Sharma et al, 2003). Hal tersebut dapat memicu
terjadi kerusakan membran sel akibat radikal
8
bebas tersebut. Selain itu, kerusakan membran
sel dapat terjadi karena ikatan kovalen antara
radikal bebas dengan komponen membran,
sehingga terjadi perubahan struktur dari fungsi
reseptor serta terjadi oksidasi gugus thiol pada
komponen membran oleh radikal bebas yang
menyebabkan proses transport membran
terganggu (Slatter, 1984). Dengan ada kerusakan
membran sel, akan memicu inflamasi sebagai
respon pertahanan tubuh. Inflamasi adalah
respon pertahanan terhadap jejas seluler
pada jaringan berpembuluh darah dan
dimaksudkan untuk mengeliminasi penyebab
awal dari kerusakan sel maupun nekrosis sel
atau jaringan. Inflamasi dapat berupa akut
dan kronik. Inflamasi akut memiliki onset
cepat dan durasinya pendek, berakhir dalam
hitungan menit atau paling lambat beberapa
hari, dan ditandai dengan cairan dan protein
plasma eksudasi serta didominasi oleh
akumulasi neutrofil. Inflamasi kronik dapat
lebih berbahaya, memiliki durasi yang panjang,
yaitu dalam hitungan hari sampai tahun, serta
ditandai dengan perjalanan limfosit dan
makrofag (Klaassen, 2001). Apabila respon
pertahanan tubuh tidak normal seperti, ada
gangguan pada respon inflamasi dan kekurangan
oksigen, maka akan mengakibatkan sel
beradaptasi secara berlebih, atau sel tidak
memungkinkan untuk beradaptasi secara normal
(jejas). Berdasarkan tingkat kerusakan, jejas sel
dibedakan menjadi dua kategori utama yaitu
jejas reversible (degenerasi sel) dan jejas
irreversible (kematian sel) (Slatter, 1984).
Degenerasi sel dapat disebabkan oleh zat
xenobiotik berupa rhodamin B dan sakarin,
karena memiliki senyawa radikal yang
cenderung membentuk molekul stabil dengan
mengambil atom hidrogen pada ikatan PUFA.
Poly Unsaturated Fatty Acid (PUFA) merupakan
struktur utama, dari membran sel, sehingga jika
atom hidrogen pada PUFA digunakan akan
terjadi kerusakan membran yang berakibat pada
gangguan permiabilitas membran. Hal tersebut
dapat mengakibatkan gangguan pada pompa ion
natrium maka terjadi kelebihan ion natrium
didalam sel. Apabila kondisi tersebut
berlangsung terus menerus organela-organela
dapat mengalami pembengkakan, termasuk Brantom, P. G. 2005. Review of the Toxicology
retikulum endoplasma. Namun apabila penyebab of a Number of Dyes Illegally Present in
keadaan ini segera teratasi maka sel akan Food in the EU. The EFSA Journal
berangsur kepada fungsi dan struktur semula, (263):15-71.
akan tetapi jika faktor penyebab tidak hilang dan
BPOM. 2007. Instruksi Kerja Pengujian Bidang
terpapar terus menerus terjadi kematian sel
II Laboratorium Pangan dan Bahan
(nekrosis) (Sarhan, et. al., 2011).
Berbahaya. Badan Pengawas Obat dan
Makanan. Departemen Kesehatan RI.
KESIMPULAN
Jakarta.
Pemberian kombinasi rhodamin B
BPOM. 2014. Pedoman Uji Toksisitas Nonklinik
dengan dosis 22,5 mg/kgBB dan sakarin dengan
secara In Vivo. Badan Pengawas Obat dan
dosis 157,77 mg/kgBB lebih toksik
Makanan. Direktorat Obat Asli Indonesia.
dibandingkan pemberian rhodamin B saja dan
Jakarta.
sakarin saja secara terpisah. Pemberian
Cahyadi, W. 2009. Analisis dan Aspek
kombinasi rhodamin B dan sakarin terbukti
Kesehatan Bahan Tambahan Pangan.
menimbulkan efek toksik pada tikus putih
Edisi Kedua. Jakarta: Bumi Aksara.
(Rattus norvegicus) yang ditunjukkan dengan
Fatimah, S., D. Arisandi., dan D. Yunanto. 2015.
adanya peningkatan secara signifikan (p<0,05)
Penetapan Kadar Sakarin Minuman
terhadap kadar malondialdehid (MDA) lambung
Ringan Gelas Platik yang Dijual di Pasar
sebesar 223,96% dibandingkan dengan
Beringharjo, Yogyakarta. Seminar
kelompok kontrol negatif dan ditunjukkan
Nasional Teknologi Kimia, Industri, dan
dengan kerusakan pada lambung tikus putih
Informasi. Yogyakarta.
(Rattus norvegicus) berupa erosi (epitel
Fadlina C. S., P. S. Santi., dan M. Abdul. 2008.
mengalami ruptur), hemoragi, infiltrasi sel
Pengembangan Metode Induksi Tukak
radang, serta nekrosis pada bagian mukosa
Lambung. Majalah Ilmu Kefarmasian Vol.
lambung.
5 ISSN: 1693-9883. Departemen Farmasi
FMIPA UI. Jakarta.
SARAN
Halliwell B. 2006. Reactive Spesies And
Diperlukan penelitian yang lebih lanjut
Antioxidants: Redox Biology Is A
tentang pemberian rhodamin B dan sakarin
Fudamental Theme Of Aerobic Life. Plant
dengan variasi paparan yang lebih singkat
Physiol. 141:312-322.
dengan dosis yang lebih rendah, sehingga nanti
Indraswari, G. N. P. R. 1998. Metode Analisa
dapat diketahui efek pemberian rhodamin B dan
Sel untuk Uji Toksisitas Sub Kronik Na
sakarin dalam jangka waktu yang lebih singkat
Sakarin pada Ginjal Tikus Putih Jantan
pada tubuh.
[Tesis]. Universitas Surabaya. Surabaya.
Junqueira L. C., J. Carneiro., dan R. O. Kelley.
UCAPAN TERIMAKASIH 2007. Histologi Dasar. Edisi ke-V.
Terimakasih kepada seluruh staff
Laboratorium Biosains Universitas Brawijaya, Penerjemah: Tambayang J. EGC. Jakarta.
Farmakologi Fakultas Kedokteran Universitas Kaunang, J., Fatimawati., dan F. Fatimah. 2012.
Brawijaya, dan Patologi Anatomi Fakultas Identifikasi dan Penetapan Kadar
Kedokteran Universitas Brawijaya Malang atas Pengawet Benzoat pada Saus Tomat
dukungan, bantuan, dan kerjasama untuk Produksi Lokal yang Beredar di Pasaran
penyelesaian penelitian ini. Kota Manado [Skripsi]. FMIPA
UNSRAT. Manado.
DAFTAR PUSTAKA
Bloom dan Fawcett. 2002. Buku Ajar Histologi.
Kevin, C., Kregel., J. Hannah., and Zhang. 2006.
Edisi 9. EGC. Jakarta.
An Integrated View Of Oxidative Stress In

9
 Aging: Basic Mechanisms, Functional
Effects, And Pathological Considerations.
Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol.
292:R18-R36.
Klaassen, C. D. 2001. Casarett and Doull’s
Toxicology: The Basic Science of Poisons,
6th Edition. Mc Graw Hill. United States
of America.
Lovric, J., M. Mesic., M. Macan., M.
Koprivanae., M. Kelava and V.
Bradamante. 2008. Level of
Malondialdehida (MDA) Level in Ren
after Simvastatin Treatment. Periodicum
Biologrum. Vol. 110, No.I, p. 63-67. ISSN
0031-5362.
Lu, Y., dan A. Caderbaum. 2008. CYP2E1 and
Oxidative Liver Injury by Alcohol.
National Institutes Of Health Public
Access. Free Radic Biol Med. 2008 March
1; 44(5): 723-738.
Yuliarti, N. 2007. Awas Bahaya Dibalik
Lezatnya Makanan. Edisi Pertama.
Yogyakarta: CV. ANDI offset : 92-93.
Purnamasari, D. S., dan Saebani. 2013.
Pengaruh Rhodamin B Peroral Dosis
Bertingkat Selama 12 Minggu Terhadap
Gambaran Histofotometri Limpa. Fakultas
Kedokteran. Universitas Diponegoro.
Sarhan, O. M M., and Z. Y. Al Sahhaf. 2011.
Histological and Biochemical Effects of
Diazinon on Liver and Kidney of Rabbits.
Life Science Journal, 2011; 8 (4).
Sharma, A, S. Bansal, and R.K. Nagpal. 2003.
Lipid Peroxidation in Bronchial Asthma.
Indian Joumal of Pediatrics 70(9). pp.
715-717.
Skholnik, K., A. Tadmor., S. Ben-Dor., N.
Nevo., D. Galiani., and N. Dekela. 2011.
Reactive Oxygen Species are
Indispensable in Ovulation. Proc Nati
Acad Sci USA 108.
Slater K. F., H. Cheesemamn, and J.K.
Davies.1984. Free Radical Mechanisms In
Relation to Tissue Injury. Proceedings of
the Nutritia Society. 46,1-12.
Sobinoff, A. P., I. R. Bernstein, and E. A.
Mclaughlin. 2012. All Your Eggs in One
Basket: Mechanism of Xenobiotic Induced
10
Female Reproductive Senescence. Priority
Research Centre in Chemical Biology.
Suciati, S. 2014. Pengaruh Paparan Rhodamin B
Terhadap Jumlah Folikel Ovarium dan
Kadar Malondialdehyde (MDA) Ovarium
Tikus Rattus Novergicus Galur Wistar
[Tesis]. Universitas Brawijaya. Malang.
Tanty, H. 2009. Uji Faktor Tingkat Pemahaman
dan Penggunaan Rhodamine B Pedagang
Cabe Merah Giling Menggunakan Fisher
Exact Probability Test. Jurnal Mat Stat,
Vol. 9 No. 2. Universitas Bina Nusantara.
Jakarta.
Valko, M., C. J. Rhodes, J. Moncol, M.
Izakovic, and M. Mazur. 2007. Free
Radical, Metal and Antioxidants in
Normal Physiological Function and
Human Diseases. Inter J Biochem Cell
Biol. 2007;39 44-84
Webb J. M., and W. H Hansen. 2014. Studies of
The Metabolism of Rhodamine B.
Toxicology and Applied Pharmacology
Vol. 3, 86-95
Winarsi, H. 2007. Antioksidan Alami dan
Radikan Bebas. Penerbit Kanisius.
Yogyakarta.
Wirasto. 2008. Analisis Rhodamin B dan
Metanil Yellow dalam Minuman Anak SD
di Kecamatan Laweyan Kota Madya
Surakarta dengan Metode Kromatografi
Lapis Tipis [Skripsi]. Universitas
Muhammadiyah Surakarta. Surakarta.
Yustika, A. R., Aulanni’am, dan S. Prasetyawan.
2013. Kadar Malondialdehid (MDA) dan
Gambaran Histologi pada Ginjal Tikus
Putih (Rattus norvegicus) Pasca Induksi
Cylosporine-A. Kimia Student Journal
1(2): 222-228
Yusuf, Y., dan N. Fatimah. 2013. Analisa
Pemanis Buatan (Sakarin, Siklamat dan
Aspartam) secara Kromatografi Lapis
Tipis Pada Jamu Gendong Kunyit Asam di
Wilayah Kelapa Dua Wetan Jakarta
Timur. UHAMKA.Jakarta.