INFORME DE LABORATORIO #1

GABRIEL ANDRÉS GARCÍA

ANA MARÍA DURÁN LEÓN
ISABELLA FERNÁNDEZ CAYCEDO
ESTEBAN MAURICIO CÓRDOBA

INGENIERÍA AMBIENTAL

LINA MARÍA PÉREZ JUNCO

MICROBIOLOGÍA

UNIVERSIDAD EAN

BOGOTÁ
2018
Introducción:
La practica tiene como objetivo entender y poner en práctica las técnicas de tinción en los
cultivos ya previamente preparados, se va a realizar dos técnicas de tinción: la coloración
de Gram, técnica con la cual se puede diferenciar las células Gram positivas de las Gram
negativas, y Tinción con azul de lactofenol la cual nos va a ayudar a ver de manera mas
clara los hongos de nuestro cultivo.
La practica se desarrollo de manera minuciosa ya que tiene varios pasos a seguir los cuales
pueden cambiar el resultado de la practica si se llega a generar un error, es importante que
estemos trabajando sobre el mechero para prevenir que nuestros cultivos se infecten de
otros microorganismos. La primera practica es la tinción de Gram en la que se preparó los
cultivos PC en los cuales extrajimos distintas clases de microorganismos, los identificamos
macroscópicamente, y los colocamos en gotas de agua esparciéndolo por toda la lámina; al
dejarlo secar cerca al mechero se puede observar una película blanca sobre la lámina,
demostrando que se pudo esparcir nuestra colonia. Como siguiente medida de aplico el
cristal violeta, luego el Lugol, luego con alcohol se hizo la decoloración con alcohol y por
último se aplicó el contraste; seguido se esto ya se podía observar en el microscopio.
La practica de azul de lactofenol se aplico una gota del colorante sobre la lámina, con cinta
transparente se separó la muestra de hongo filamentoso del cultivo, y encima de puso la
cinta con la muestra de hongo. Esta practica es una de las más sencillas, pero de igual
manera toca extraer, de la manera más exacta posible, un solo tipo de hongo filamentoso.
Después de esto ya se puede observar en el microscopio los diferentes tipos de
microorganismos que se expondrán mas adelante.
Objetivos:
 Comprender la importancia que tienen las técnicas de tinción para la caracterización
e identificación de las bacterias.
 Identificar características estructurales y morfológicas de microorganismos con base
en las diferentes tinciones empleadas.
 Aprender conceptos básicos sobre las coloraciones más empleadas en
microbiología.
 Conocer y realizar los diferentes métodos de siembra.
 Conocer los aspectos básicos de bioseguridad y buenas prácticas de laboratorio que
se deben seguir durante el desarrollo de actividades en el laboratorio de
Microbiología.
Equipos y reactivos:
 Microscopio óptico
 Balanza
 Incubadora
 Plancha de calentamiento
 Cajas de Petri
 Erlenmeyer
 Probeta de 100 ml
 Mechero Bunsen
 Láminas portaobjetos
 Cristal violeta
 Solución de Lugol
 Alcohol acetona
 Fuscina básica
 Azul de metileno
 Azul de lactofenol
 Aceito de inmersión
 Medio de cultivo Plate Count
 Medio de cultivo Agar Papa Dextrosa
DIAGRAMAS DE FLUJO.

Procedimiento #1

Procedimiento #2
Procedimiento #3

Resultados del experimento de laboratorio:

El fin de nuestra práctica de laboratorio consistía en aprender el proceso mediante el cual se

identifican las bacterias gram positivas y gram negativas a través de un proceso llamado
tinción. Durante el desarrollo, realizamos una serie de pasos para lograr nuestro objetivo,
estos iniciaron con obtener una muestra bacteriana, la cual habíamos cultivado en la práctica
de laboratorio anteriormente, ubicarla en una lámina de vidrio, junto con un poco de agua, y
exponerla al calor para fijarla a dicha lamina.
A lo largo del proceso de tinción, vimos como nuestros frotis iban cambiando de aspecto a
medida que se realizaban los diferentes procedimientos. Observamos como los frotis se
teñían de azul al agregar el cristal violeta y como el color que obtenía permanecía a pesar de
los lavados que se realizaban. Luego, la adición de lugol formó parte del proceso, y
fundamentalmente nos dimos cuenta de que, al agregar alcohol a nuestras muestras y dejarlo
reposar un tiempo, las muestras gram negativas perdían su color y las gram positivas
permanecían teñidas. Por último, agregamos una última tinción de contraste, lo que hizo que
los frotis con muestras gram negativas adquirieran un color rosado/rojizo.
De esta manera, procedimos a llevar los frotis al microscopio y observamos que la diferencia
entre las muestras era mucho más notable y que el tinte nos permitía observar las
características morfológicas e incluso fisiológicas de nuestras bacterias. Observamos bacilos
morados, cocos morados, y cocos rosados, indicando la diversidad de tipos de bacterias
presente en nuestros cultivos.
En conclusión obtuvimos bacterias gram negativas y en otra muestra gram positiva.

Marcamos las láminas de vidrio Les pusimos los respectivos colorantes a cada muestra
Procedemos a observar en el microscopio Hongos

Levaduras

CUESTIONARIO

1- Cite 2 ejemplos de microorganismos gram positivos y gram negativos.

Gram positivas:
- Staphylococcus aureus: Responsable de abscesos, dermatitis, infecciones
localizadas y posibles gastroenteritis.

- Streptococcus aglactiae: Frecuente en casos de meningitis neonatal, endometritis y

neumonía.
Gram negativas:
-Escherichia coli: Habitante usual del colon humano, está involucrada en las
llamadas “diarreas del viajero”, así como en meningitis neonatal, sepsis e
infecciones urinarias.

- Salmonella typhi: Bacteria responsable de la enfermedad conocida como fiebre

tifoidea, suele transmitirse por vía fecal-oral: contaminación de aguas, mala
disposición de excretas o higiene defectuosa.
2- Enumere 3 diferencias entre gram positivos y gram negativos

Bacterias gram positivas Bacterias gram positivas

Debilidad a la penicilina Inmunidad a la penicilina
No tiene membrana externa Tiene membrana externa
Adquieren una coloración lila o violeta Adquieren una coloración roja o rosada
No contienen LPS. contienen LPS.

3- ¿Qué otras técnicas de tinción se emplean en microbiología y que estructuras se

observan en cada una de ellas?

RODAMINA-AURAMINA: Los ácidos micólicos de las paredes celulares de las

micobacterias poseen afinidad para los fluorocromos auramina y rodamina. Estos
colorantes se fijan a las bacterias, que aparecen de color amarillo o naranja brillante
contra un fondo verdoso. El permanganato de potasio, empleado como contraste,
evita la fluorescencia inespecífica. Todos los microorganismos ácido-alcohol
resistentes, incluyendo los esporozoarios parásitos, se tiñen con estos colorantes.

NARANJA DE ACRIDINA: El fluorocromo naranja de acridina se une al ácido

nucleico ya sea en su forma nativa o desnaturalizada. En algunas preparaciones de
naranja de acridina, el color de la fluorescencia puede variar, dependiendo del pH y
de la concentración. El naranja de acridina ha sido empleado como colorante vital,
que da una fluorescencia verde si el microorganismo está vivo y roja si está muerto.

BLANCO DE CALCOFLÚOR: Las paredes celulares de los hongos fijan el

colorante blanco de calcoflúor aumentando considerablemente su visibilidad en los
tejidos y otras muestras. Según fue descrito por Hageage y Harrington, este
colorante se emplea en lugar de KOH al 10% para el examen inicial de los
materiales clínicos. También se emplea para aumentar la visualización de los
elementos morfológicos de los cultivos puros de los hongos. En algunos
laboratoríos ha suplantado al azul de lactofenol en muchas aplicaciones. Los
organismos fluorescen con luz blanco-azulada o verde manzana, según la fuente
luminosa que se utilice

4- De 2 ejemplos del empleo de colorantes en el estudio de muestras de interés

ambiental.
 Azul de metileno: Usado para teñir los extendidos de sangre para ser utilizados en
citología y como colorante vital en el recuento de reticulocitos.

Azul brillante de Coomassie: Se utiliza frecuentemente para teñir las corridas de

proteínas en las electroforesis en gel.

Referencias
Admin. (30 de 01 de 2018). Diferencias entre. Obtenido de
https://diferenciasentre.org/diferencias-entre-gram-positivas-y-gram-negativas/

Ejemplos. (21 de 05 de 2016). Ejemplos. Obtenido de https://www.ejemplos.co/20-ejemplos-de-

bacterias-gram-positivas-y-gram-negativas/

Wikipedia. (08 de 22 de 2018). Wikipedia. Obtenido de

https://es.wikipedia.org/wiki/Tinci%C3%B3n3