López Cenizario, Carlos Wilfredo

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y
BIOQUÍMICA
A
IC
M
UI
Q
O
DETERMINACIÓN DEL MÉTODO DE EXTRACCIÓN DE MAYOR
RENDIMIENTO DE FLAVONOIDES TOTALES DE LAS HOJAS DE
BI
Y
IA
Sambucus peruviana H.B.K.

AC
RM
INFORME DE PRÁCTICAS PRE

FA
PROFESIONALES
DE
CA
PARA OPTAR EL TÍTULO PROFESIONAL

TE
DE
IO
QUÍMICO FARMACÉUTICO
BL
BI
AUTOR : Br. LÓPEZ CENIZARIO CARLOS WILFREDO
ASESOR : Dr. Q.F. RUÍZ REYES SEGUNDO GUILLERMO
TRUJILLO – PERÚ
2012
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú.
Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
PRESENTACIÓN
Señores miembros del Jurado Dictaminador:
De conformidad con las disposiciones legales vigentes del Reglamento de

Grados y Títulos de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad
Nacional de Trujillo - La Libertad, sometemos a vuestro elevado criterio el
presente Informe de Internado titulado:
A
IC
DETERMINACIÓN DEL MÉTODO DE EXTRACCIÓN DE MAYOR
M
UI
RENDIMIENTO DE FLAVONOIDES TOTALES DE LAS HOJAS DE
Q
Sambucus peruviana H.B.K.
O
BI
Y
Sea propicia esta oportunidad para manifestar el más profundo
IA
AC
agradecimiento a nuestra Alma Mater y a toda su plana docente, por su meritoria

labor de educadores y por la formación profesional que nos han brindado a través
RM
de sus enseñanzas.
FA
De manera muy especial agradezco la valiosa colaboración de los señores

DE
miembros del jurado.

CA
Dejo a vuestra consideración señores miembros del jurado la respectiva

TE
calificación del presente trabajo.

IO
BL
Trujillo, 07 de Mayo del 2012

BI
López Cenizario Carlos Wilfredo
DEDICATORIA
JURADO DICTAMINADOR
A
IC
Mg. Gilmer Zari Gil
M
UI
PRESIDENTE
Q
O
BI
Y
IA
AC
RM
Mg. Marilú Soto Vásquez

FA
MIEMBRO
DE
CA
TE
IO
BL
BI
Dr. Q.F. Segundo Guillermo Ruiz reyes
MIEMBRO
ii
DEDICATORIA
A Dios
Por darme la vida, por poner en mi

camino a personas maravillosas y por las bendiciones
y los regalos que recibo día tras día.
A
IC
M
UI
A Mis Padres
Q
O
Efigenia y Humberto, por ser los guías
BI
que me han ayudado a crecer, por la paciencia que
Y
IA
han tenido para enseñarme. Por haber

AC
estado al pendiente de mí durante toda esta etapa.

RM
FA
DE
A mis hermanos
CA
Que con su amor me han enseñado a salir adelante,

TE
por compartir sus vidas y experiencias conmigo,

IO
pero sobre todo por estar en otro

BL
momento tan importante en mi vida .

BI
CARLOS
AGRADECIMIENTOS
A Dios
Todopoderoso por estar conmigo
en cada paso que he dado, por iluminar
mi mente y fortalecer mi corazón y por
haber puesto en mi camino a personas
A
IC
que han sido de soporte y compañía,
M
UI
así como haberme ayudado a culminar
Q
mis estudios.
O
BI
Y
A mi Asesor
IA
AC
Dr. Q.F. Segundo Guillermo Ruiz Reyes

RM
Por su apoyo constante y desinteresado, por

FA
su amistad, por sus enseñanzas y disposición

DE
en la conducción del desarrollo de este

CA
trabajo.
TE
IO
.
BL
BI
A los miembros del jurado

Mi agradecimiento por el apoyo y
ayuda constante en la elaboración
de este Trabajo de Investigación.
CARLOS
ii
RESUMEN
El presente estudio consistió en determinar la mejor técnica de extracción de
flavonoides totales a partir de las hojas secas de Sambucus peruviana K.B.K.. recolectadas
en la ciudad de Huamachuco.
A
IC
Se recolecto las hojas de Sambucus Peruviana H.B.K. en la época de floración, las
M
UI
que fueron sometidas a limpieza, estabilización, secado, pulverización, tamizaje y
Q
O
almacenado. Luego se procedió a obtener los extractos utilizando diferentes métodos.
BI
Y
Una vez obtenidos los extractos como producto final de cada método en particular,
I A
AC
se realiza la cuantificación de flavonoides totales siguiendo el método espectrofotométrico

RM
para cuantificar flavonoides totales expresados como quercetina, descrito por Kostennikova
FA
Z.
DE
La extracción por Soxhlet fue la mejor técnica para extraer flavonoides totales a
CA
TE
partir de las hojas de Sambucus peruviana H.B.K.. obteniéndose un rendimiento de 1.01 %

IO
BL
BI
Palabras claves: Sambucus peruviana H.B.K., flavonoides totales.
iv
SUMMARY
The present study was to determine the best technique for extraction of total flavonoids
from dried leaves of Sambucus peruviana KBK. collected in Huamachuco City.
We collected the leaves of Sambucus peruviana HBK in the flowering season, which were
A
IC
subjected to cleaning, stabilization, drying, grinding, screening and storage. Then he
M
UI
proceeded to obtain the extracts using different methods.
Q
O
BI
Once extracts obtained as final product of each particular method is performed to quantify
Y
total flavonoids following the spectrophotometric method for quantifying total flavonoids
I A
AC
expressed as quercetin, described by Kostennikova Z.

RM
Soxhlet extraction was the best technique for extracting total flavonoids from the leaves of
FA
Sambucus peruviana HBK. obtained a yield of 1.01%

DE
CA
TE
Keywords: Sambucus peruviana HBK, total flavonoids, extraction methods.

IO
BL
BI
ÍNDICE
Pág.
PRESENTACION .............................. ¡ERROR! MARCADOR NO DEFINIDO.
JURADO CALIFICADOR ................ ¡ERROR! MARCADOR NO DEFINIDO.
A
IC
DEDICATORIA ....................................................................................................... I
M
AGRADECIMIENTO ........................ ¡ERROR! MARCADOR NO DEFINIDO.
UI
Q
RESUMEN ............................................................................................................ IV
O
BI
SUMMARY .......................................................................................................... IV
Y
I A
AC
I. INTRODUCCIÓN................................... ¡ERROR! MARCADOR NO DEFINIDO.

RM
II. MATERIAL Y METODO ..............................................................................XII

FA
2.1. MATERIAL ................................................................................. xii

2.2. METODOLOGIA ........................................................................ xv
DE
2.3. ETAPAS DE LA METODOLOGIA EXPERIMENTAL¡Error! Marcador

CA
no definido.
TE
2.4. ANÁLISIS ESTADÍSTICO DE DATOS¡Error! Marcador no definido.

IO
III. RESULTADOS ....................................... ¡ERROR! MARCADOR NO DEFINIDO.

BL
IV. DISCUSIÓN ............................................ ¡ERROR! MARCADOR NO DEFINIDO.

BI
V. CONCLUSIONES................................... ¡ERROR! MARCADOR NO DEFINIDO.

VI. RECOMENDACIONES ......................... ¡ERROR! MARCADOR NO DEFINIDO.
VII. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS .... ¡ERROR! MARCADOR NO DEFINIDO.
VIII.ANEXOS ................................................ ¡ERROR! MARCADOR NO DEFINIDO.
vi
I. INTRODUCCION
Para toda persona indistintamente de su profesión u oficio, no hay duda de que las
plantas son importantes para la vida. Pero además de producir sustancias como los
carbohidratos, las proteínas y las grasas, que los investigadores han denominado
METABOLITOS PRIMARIOS, dado que se encuentran en prácticamente todas las formas
A
de vida y cumplen funciones básicas para la misma, existen otras que no se encuentran tan
IC
M
distribuidas y que se hallan restringidas solo a ciertas especies, géneros o familias como son
UI
Q
los alcaloides, las saponinas esteroides, los aceites esenciales, los terpenoides, etc., a los
O
BI
cuales se les denomina METABOLITOS SECUNDARIOS. Dentro de este último grupo
Y
están los FLAVONOIDES, unas sustancias bautizadas así porque las primeras que se
I A
AC
lograron aislar eran de color amarillo, pero también las hay incoloras ó con otros colores
RM
diferentes del amarillo como son el rojo, el violeta y el azul1,2,3,4,5.

FA
DE
Los flavonoides pertenecen a un grupo de compuestos naturales arreglados bajo un

CA
TE
sistema C6-C3-C6, en el cual dos anillos aromáticos llamados A y B están unidos por una
IO
unidad de tres carbonos que pueden o no formar un tercer anillo, que en caso de existir es
BL
llamado anillo C. Se conoce más de 10 clases de flavonoides (Chalconas, flavonas,

BI
flavonoles, flavanonas, flavanonoles, antocianidinas, catequinas, epicatequinas, auronas,
isoflavonoides, pterocarpanos, rotenoides, etc) los cuales pueden encontrarse como
aglicona o bajo la forma de glicósidos con una o tres unidades de azúcar, generalmente en
los carbonos 3 y/o 7, siendo los azucares más comunes la glucosa, galactosa, ramnosa,
xilosa y arabinosa 1,3,4.
vii
Está comprobado que los flavonoides son importantes para el desarrollo y buen
funcionamiento de las plantas al protegerlas contra agentes agresores externos, como la
radiación UV, microorganismos, animales herbívoros y del medio ambiente. Pueden actuar
como señalizadores químicos, indicando a los insectos que planta es apropiada para su
alimentación, oviposición o simplemente guiándolos y facilitando así la polinización5,6.
A
IC
M
En su relación con el hombre, los flavonoides actúan como antioxidantes naturales,
UI
Q
es decir, tienen la capacidad de secuestrar y neutralizar los radicales libres, especies
O
BI
químicas muy reactivas que fácilmente conducen a reacciones incontroladas, resultando en
Y
diversas formas de daños oxidativos sobre las moléculas, organelas y diversas células y
I A
AC
tejidos; causando su degeneración, envejecimiento, pérdida de su función y otras formas

RM
importantes de daño celular. Por lo tanto los flavonoides juegan un papel importante en la
FA
prevención de varios procesos fisiopatológicos asociados con el estrés oxidativo y a la

DE
presencia de radicales libres, tales como el cáncer y diversas enfermedades

CA
neurodegenerativas y cardiovasculares 4,5,6,7,8,9.

TE
IO
BL
Otra de las propiedades de los flavonoides es su capacidad para contribuir a las

BI
propiedades de los alimentos, como el sabor o la dulzura. Además son utilizados en la
industria de los cosméticos por su actividad desodorante y reductora de la
hiperpigmentación causada por la vejez 4,5.
viii
Los flavonoides se encuentran ampliamente distribuidos en las plantas verdes
(especialmente las angiospermas). Se han encontrado en las diferentes partes de las plantas,
especialmente en las partes aéreas; y se les encuentra en forma libre (también llamados
agliconas flavonoides), como glicósidos (la mayoría de las veces), como sulfatos y algunas
veces como dímeros y polímeros.
La especie Sambucus peruviana H.B.K (sauco) no es ajena a estas sustancias,
A
encontrándose distribuidas en las hojas, flores y frutos4,5,10.
IC
M
UI
Q
El sauco es un árbol de unos 12 m. de alto, con ramas glabras y flores blancas
O
BI
perfumadas, ornamental por sus flores y frutos y que crece entre los 40 – 3900 m.s.n.m.
Y
prefiere suelos profundos, e textura variable; tolera peligrosidad baja a media y requiere
I A
AC
buen nivel de humedad10.

RM
FA
El cocimiento de las flores se emplea como sudorífico y contra la viruela, así como
DE
también en las inflamaciones de la vejiga y la próstata. El cocimiento de las hojas se

CA
emplea como galactógeno y antiséptico bucal y el de las flores es usado como

TE
antirreumático, antiséptico, depurativo y sudorífico. La infusión de la raíz en hidropesía, el

IO
BL
cocimiento de los frutos como colutorios, en las afecciones de la boca y el cocimiento de

BI
las ramas floridas contra el alcoholismo10,11,12 .
Los frutos son bayas esféricas o globosas, negras, de 5 – 6 mm. De diámetro;
semillas pequeñas, en número de 3 – 6 por fruto. Los frutos son jugosos, de sabor agradable
y sabor agridulce; se consumen al estado fresco; sirviendo también para hacer mermeladas.
Sus flores en infusión se utilizan contra la tos asma. Se propaga vegetativamente. Estudios
ix
fitoquímicos revelan la presencia de flavonoides que tienen propiedades
antiinflamatorias10,11.
El proceso de extracción de los diferentes flavonoides a partir de una planta
medicinal es diverso. Pudiéndose utilizar diferentes métodos o procesos extractivos, cada
cual con rendimientos diferentes. En cuanto a la extracción de flavonoides a partir de
A
IC
Sambucus peruviana H.B.K. esta se puede realizar a partir de muestras secas y molidas. Se
M
UI
utilizan inicialmente disolventes no polares o ligeramente polares para separar las
Q
O
clorofilas, gomas y agliconas de flavonoides altamente metoxiladas. Los flavonoides, que
BI
poseen un gran número de grupos hidroxilos insustituidos o azúcares, son considerados
Y
A
polares, por lo que son ligeramente solubles en disolventes polares, como el metanol,
I
AC
etanol, acetona, o agua. El filtrado final se concentra y todo el disolvente se remueve. Este
RM
proceso es favorable para la extracción de la mayoría de los flavonoides pero no para

FA
antocianidinas o flavonoides de baja polaridad los cuales aparecen en la superficie de las

DE
plantas. Los métodos de extracción convencionales con solventes orgánicos, como la

CA
TE
maceración o extracción caliente en Soxhlet, son ampliamente utilizados para obtener

IO
extractos de plantas. La cantidad de extracto seco de una planta depende de la técnica

BL
analítica que se emplee. Otros parámetros pueden ser utilizados, tales como: tipo de
BI
disolvente, el volumen de disolventes orgánicos, la temperatura y la duración del proceso
de extracción5,13.
La catedra de Farmacognosia del departamento de Farmacotecnia de la Universdad
Nacional de Trujillo viene realizando estudios sobre cuantificación de flavonoides con
diferentes especies de plantas con la finalidad de fomentar la investigación y aumentar el
conocimiento sobre estos, dentro de los trabajos publicados recientemente tenemos:
Determinación de la técnica de extracción de flavonoides totales de las hojas de Mangifera
indica L. realizado por el Dr. Segundo Ruiz; Identificación preliminar de los metabolitos
A
secundarios de los extractos acuosos y etanólicos del fruto y hojas de Morinda citrifolia L.
IC
M
noni y cuantificación espectrofotométrica de los flavonoides totales realizado por Chávez
UI
Q
M y Eustaquio C.; Cuantificación de flavonoides totales y taninos presentes en el decocto e
O
BI
infuso de hojas de Thea sinensis L. te verde y negro, realizado por Acevedo E y De la Cruz
R. Y
I A
AC
RM
Al realizar el internado, en la cátedra de Farmacognosia; en el tiempo comprendido

FA
desde el 03 de Febrero del 2010 hasta el 03 de Febrero del 2011, pude realizar junto a los
DE
profesores distintos trabajos de investigación, interesándome en particular por la extracción

CA
y cuantificación de flavonoides totales. Por lo que el presente informe de internado tiene la

TE
IO
finalidad de contribuir al conocimiento de los diferentes métodos de extracción de

BL
flavonoides y dar cuenta del que mejor rendimiento se obtiene. A su vez, éste informe
BI
puede servir como material de consulta, para el personal dedicado a la investigación de
plantas medicinales.
Para lo cual se planteó el siguiente objetivo:
1. Determinar el mejor método para llevar a cabo la extracción de flavonoides totales

de la hoja de Sambucus Peruviana H.B.K., mediante la comparación de distintos
xi
métodos extractivas, en términos de rendimiento, (percolación, maceración,

sonicación, extracción a reflujo y en Soxhlet) en base a la cuantificación de
flavonoides totales presentes en cada una de las muestras trabajadas, cuyo
rendimiento determinará el método más apropiado.
A
IC
M
UI
Q
O
BI
Y
I A
AC
RM
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI
II. MATERIAL Y METODO
2.1. MATERIAL DE ESTUDIO
xii
Hojas de Sambucus Peruviana H.B.K (sauco) proveniente del distrito de
Huamachuco de la provincia de Sánchez Carrión – departamento de la Libertad.
2.2. MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS
2.2.1 Materiales de Laboratorio
De uso común en el laboratorio de Farmacognosia
A
IC
2.2.2 Equipos
M
UI
Q
- Equipo de Lixiviación
O
BI
- Agitador magnético marca Ruhromag Retsch modelo GI-22
Y
- Balanza Triple Brazo 700/800 series OHAUS US PAT. Nº 2, 729,439.
I A
AC
- Balanza Analítica OHAUS GA 200 (precisión 0.0001 g)

RM
- Espectrofotómetro THERMO modelo GENESSIS 10 UV

FA
- Estufa Eléctrica Memmert TY U40

DE
- Bomba al vacío Thomas Scientific Mod 5KH33DN68

CA
- Tamiz Resh
TE
- Sonicador Transsonic 460/H Model NO 9301 – 1

IO
BL
- Alcoholímetro Cartier GAY-LUSSAC.

BI
2.2.3 Reactivos y Solventes
- Ácido sulfúrico 98% de pureza, calidad Sigma
- Agua destilada
- Etanol de 96 ° GL
xiii
- Quercetina
A
IC
M
UI
Q
O
BI
Y
I A
AC
RM
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI
xiv
2.3 METODOLOGÍA
2.3.1 Recolección
Se recolecto hojas maduras de Sambucus Peruviana H.B.K (sauco) de la
ciudad de Huamachuco. Provincia de Sánchez Carrión. Departamento de la
A
IC
Libertad (7.8° sur latitud, 78.07° Oeste longitud y 3072 m.s.n.m.), de una
M
misma población, de la parte aérea de la planta con el fin de preservar la
UI
Q
especie.
O
BI
Y
I A
AC
2.3.2 Selección
RM
Una vez realizada la recolección de la muestra se procedió a hacer la selección

FA
de la materia vegetal con el objetivo de realizar una separación de las partes

DE
deterioradas y evitar la mezcla con otra especie.

CA
TE
IO
2.3.3 Identificación taxonómica

BL
BI
La planta medicinal seleccionada, se llevó al Herbario Truxillensis de la

Universidad Nacional de Trujillo para su identificación Taxonómica.
xv
2.3.4 Clasificación Taxonómica
La especie Sambucus peruviana, nativa de nuestro país, de acuerdo al sistema

de clasificación filogenética de Adolph Engler publicada en la XII Edición
del Syllabus DER PFLANZENFAMILIEN del año 1954 – 1964, es de la
siguiente manera:
A
DIVISIÓN……………………..MAGNOLIOPHYTA
IC
CLASE…………………………MAGNOLIOPSIDA
M
UI
SUBCLASE……………………METACHLAMYDEAE
Q
ORDEN………………………..DIPSACALES
O
FAMILIA……………………...Caprifoliaceae
BI
GENERO………………………Smabucus
Y
A
ESPECIE………………………Sambucus peruviana H.B.K.
I
AC
RM
2.3.5 Desecación
FA
- DESECACIÓN
DE
Para evitar cualquier tipo de alteración que pudiera afectar a la composición

de la planta, la droga fue convenientemente desecada.
CA
TE
Las hojas seleccionadas se colocaron sobre papel kraft en un lugar fresco y

IO
seco durante 24 horas. Luego se pasaron a bolsas hechas de papel kraft y se

BL
llevaron a estufa a una temperatura de 40 ºC, durante aproximadamente 48

BI
horas.
2.3.6 Molienda y Tamización
xvi
Una vez desecado el material vegetal, se procedió a su molienda en mortero
de acero hasta tamaño de partícula adecuado. El material así pulverizado, se
procedió a tamizar (tamaño partícula 2 mm) y se almacenó adecuadamente en
frascos ámbar en un lugar desprovisto de humedad y luz directa, hasta su
posterior utilización.
A
IC
2.3.7 PREPARACION DE LOS EXTRACTOS POR DIFERENTES
M
UI
MÉTODOS1,5,7,14,15,16,17:
Q
O
BI
2.3.7.1 LIXIVIACIÓN
Y
I A
AC
Procedimiento:
RM
Pesar 250 g de droga y proceder a humectar, separar porciones equivalentes

FA
a 125 g, 75 g y 50 g de droga. Colocar la porción de 125 g previamente

DE
humectada en el percolador, macerar con alcohol de 70°GL por 48 horas. Se

CA
TE
prosigue a percolar y recoger 50 mL de extracto fluido, los cuales se separan

IO
y guardan en un frasco ámbar. Se sigue recibiendo 5 porciones sucesivas de

BL
percolado de 75 mL cada una enumerándola según el orden que se recibe.

BI
Colocar la porción equivalente a 75 g de extracto fluido en un percolador y
macerar con las porciones de 75 mL del lote anterior por 48 horas. Se
percola hasta obtener 75 mL y se guarda en el frasco ámbar. Se prosigue
percolando 5 porciones de 50 mL de extracto fluido, cada uno enumerado.
Se coloca la tercera porción equivalente a 50 g y se macera por 48 horas con
xvii
las porciones de extracto del lote anterior. Proceder a percolar hasta obtener
125 mL de extracto, los cuales se pasan al frasco ámbar. La cantidad final de
extracto fluido debe ser de 250 mL.
Medir 20 mL del extracto fluido a un balón y llevar a reflujo con 20 mL de
A
ácido sulfúrico al 10 % durante dos horas . Llevar el extracto a baño maría
IC
M
hasta disminuir aproximadamente a 50% del volumen, enfriar y llevar a
UI
refrigeración durante 1 hora. Filtrar el extracto refrigerado al vacío sobre
Q
O
BI
embudo büchner previamente acondicionado a una temperatura menor a
Y
15ºC, luego lavar el residuo con 3 volúmenes sucesivos de 50 mL de agua
I A
AC
destilada helada. Llevar el papel filtro que contiene los flavonoides totales,
RM
en forma de cristales, a la estufa a 40ºC durante 2 horas. Solubilizar los

FA
cristales obtenidos con 100 mL de etanol de 96 ºGL y 100 mL de agua

DE
destilada y llevar a baño maría hasta disminuir a 50% del volumen y repetir
CA
los pasos anteriores por 3 veces hasta obtener los cristales purificados. Los
TE
cristales purificados trasvasar a una fiola de 100 mL y aforar con etanol de

IO
96 ° GL. Luego tomar 2.5 mL de esta solución y aforar nuevamente con

BL
BI
etanol de 96 ° GL de éste aforo se tomar tres alícuotas de 3 mL
aproximadamente, y leer a 258 nm en el Espectrofotómetro THERMO
modelo GENESSIS 10 UV
xviii
2.3.7.2 MACERACIÓN CON Y SIN AGITACIÓN
Procedimiento:
Pesar 2 muestras de 5 g de droga y proceder a humectar con 10 mL de
etanol de 70°GL, colocarlos en balones de 500 mL. Adicionar 100 mL de
ácido sulfúrico al 10 % y100 mL de etanol de 70 ° GL a cada balón tratando
de homogenizar la muestra y los solventes. Colocar el balón durante 2 horas
A
IC
a reflujo en baño maría.
M
Colocar un balón en un estante protegido de la luz y el calor por 24 horas; y
UI
Q
el otro balón lleva a macerar por de 2 horas bajo agitación constante en un
O
BI
agitador magnético marca Ruhromag Retsch modelo GI-22 a 800 rpm.
Y
I A
AC
Cada una de las muestras filtrar con ayuda de vacío y el residuo lavar con
RM
100 mL. de etanol de 70°GL para desecharlo finalmente; Llevar cada

FA
extracto a baño maría hasta disminuir aproximadamente a la tercera parte

DE
del volumen, enfriar y llevar a refrigeración durante 1 hora. Filtrar el

CA
extracto refrigerado al vacío sobre embudo büchner previamente

TE
acondicionado a una temperatura menor a 15ºC, luego lavar el residuo con 3

IO
BL
volúmenes sucesivos de 50 mL de agua destilada helada. Llevar el papel

BI
filtro que contiene los flavonoides totales, en forma de cristales, a la estufa a
40ºC durante 2 horas. Solubilizar los cristales obtenidos con 100 mL de
etanol de 96 ºGL y 100 mL de agua destilada y llevar a baño maría hasta
disminuir a 50% del volumen y repetir los pasos anteriores por 3 veces hasta
obtener los cristales purificados. Los cristales purificados trasvasar a una
fiola de 100 mL y aforar con etanol de 96 ° GL. Luego tomar 10 mL de esta
xix
solución y aforar nuevamente con etanol de 96 ° GL de éste aforo se tomar
tres alícuotas de 3 mL. y leer a 258 nm en el Espectrofotómetro THERMO
2.3.7.3 EXTRACCIÓN CON ULTRASONIDO.
A
IC
Procedimiento:
M
UI
Q
- Pesar 5 g de droga y proceder a humectar con 10 mL de etanol de 70°GL,
O
BI
colocarlo en un balón de 500 mL. Adicionar 100 mL de ácido sulfúrico al
Y
10 % y100 mL de etanol al 50 % tratando de homogenizar la muestra y los
I A
AC
solventes. Colocar el balón durante 2 horas en el sonicador Transsonic

RM
460/H Model NO 9301 – 1

FA
DE
CA
Filtrar el extracto al vacío y el residuo lavar con 100 mL. de etanol de

TE
70°GL para desecharlo finalmente; Llevar el extracto a baño maría hasta

IO
BL
disminuir aproximadamente a la tercera parte del volumen, enfriar y llevar

BI
a refrigeración durante 1 hora. Filtrar el extracto refrigerado al vacío sobre
xx
96 ° GL. Luego tomar 10 mL de esta solución y aforar nuevamente con
A
IC
M
UI
Q
2.3.7.4 EXTRACCIÓN A REFLUJO.
O
BI
Y
A
Procedimiento:
I
AC
RM
Pesar 5 g de droga y proceder a humectar con 10 mL de etanol de 70°GL,

FA
colocarlo en un balón de 500 mL. Adicionar 100 mL de ácido sulfúrico al

DE
10 % y100 mL de etanol al 50 % tratando de homogenizar la muestra y los

CA
solventes. Colocar el balón durante 2 horas a reflujo en baño maría.

TE
IO
BL
Filtrar el extracto al vacío y el residuo lavar con 100 mL. de etanol de

BI
70°GL para desecharlo finalmente; Llevar el extracto a baño maría hasta
disminuir aproximadamente a la tercera parte del volumen, enfriar y llevar
a refrigeración durante 1 hora. Filtrar el extracto refrigerado al vacío sobre
xxi
96 ° GL. Luego tomar 10 mL de esta solución y aforar nuevamente con
A
IC
M
UI
Q
O
BI
2.3.7.5 EXTRACCIÓN SOHXLET. Y
I A
AC
RM
Procedimiento:
FA
DE
Pesar 20 gramos de muestra y proceder a humectar, mezclar con cantidad

CA
suficiente de arena lavada y tratada, armar el cartucho de extracción, luego

TE
introducir el cartucho en la cámara extractora del equipo Soxhlet. En el

IO
BL
balón del equipo colocar 100 mL de etanol de 70 ° GL más 100 mL de ácido

BI
sulúrico al 10 % y proceder a extraer.
El tiempo de extracción (2 horas) se considera a partir del momento en el
cual la mezcla de solventes del balón empieza a hervir.
xxii
Llevar el extracto a baño maría hasta disminuir aproximadamente a 50% del
volumen, enfriar y llevar a refrigeración durante 1 hora. Filtrar el extracto
refrigerado al vacío sobre embudo büchner previamente acondicionado a una
temperatura menor a 15ºC, luego lavar el residuo con 3 volúmenes sucesivos
de 50 mL de agua destilada helada. Llevar el papel filtro que contiene los
flavonoides totales, en forma de cristales, a la estufa a 40ºC durante 2 horas.
A
Solubilizar los cristales obtenidos con 100 mL de etanol de 96 ºGL y 100 mL
IC
M
de agua destilada y llevar a baño maría hasta disminuir a 50% del volumen
UI
Q
y repetir los pasos anteriores por 3 veces hasta obtener los cristales
O
BI
purificados. Los cristales purificados trasvasar a una fiola de 100 mL y
Y
aforar con etanol de 96 ° GL. Luego tomar 2.5 mL de esta solución y aforar
I A
AC
nuevamente con etanol de 96 ° GL de éste aforo se tomar tres alícuotas de 3

RM
mL aproximadamente, y leer a 258 nm en el Espectrofotómetro THERMO

FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI
2.3.8 Preparacion de la solución Patrón
Pesar 80 mg de quercetina patrón y disolver con c.s.p.100 mL de etanol a 96
° GL; para obtener una concentración de 800 p.p.m.
xxiii
1000 𝑚𝑙
80 mg quercetina x = 100 mL
800 𝑚𝑔
Medir 1 mL de la solución madre y aforar a 100 mL con etanol de 96 ° GL
para obtener una solución de 8 p.p.m. Posteriormente realizar la lectura a
una absorbancia de 258 nm en el Espectrofotómetro THERMO modelo
GENESSIS 10 UV
A
IC
M
UI
2.3.9 Cálculo de la Concentración de Flavonoides totales expresadas en
Q
O
Quercetina
BI
Y
Calcular la concentración de flavonoides totales expresadoss en quercetina,
A
empleando la expresión matemática descrita por Kostennikova Z.:
I
AC
Am  PR  5
RM
X   100
AR
FA
DE
Donde:
CA
X: Contenido de flavonoides totales expresados en Quercetina (%)

TE
Am: Absorbancia de la solución muestra (nm).

IO
PR: Peso de la sustancia referencia (g)

BL
AR: Absorbancia de la solución referencia (nm).

BI
xxiv
2.4 ANÁLISIS ESTADÍSTICO DE DATOS
Los datos fueron procesados en el programa Microsoft Office Excel 2007.
Caracterizados mediante parámetros estadísticos descriptivos: Media Aritmética ( X
)26,27.
A
IC
M
UI
Q
O
BI
Y
I A
AC
RM
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI
xxv
III. RESULTADOS
TABLA Nº 1: CONCENTRACION DE FLAVONOIDES TOTALES EXPRESADOS EN

QUERCETINA PARA CADA UNA DE LAS MUESTRAS SEGÚN EL MÉTODO DE
EXT
A
TECNICA DE EXTRACCIÓN CONCENTRACIÓN (g %)
RA
IC
MACERACION S/AGITACION 0.17
M
CCI
UI
MACERACION C/AGITACION 0.31 ÓN
Q
O
EXTRACCION CON ULTRASONIDO 0.35
BI
LIXIVIACION 0.47
Y
A
EXTRACCION A REFLUJO 0.56
I
GR
AC
EXTRACCION EN SOXHLET 0.63 AFI

RM
CO
FA
Nº 2: CONCENTRACIÓN DE FLAVONOIDES TOTALES EXPRESADOS EN

QUERCETINA PARA CADA UNA DE LAS MUESTRAS PROBLEMA OBTENIDAS
DE
SEGÚN EL MÉTODO DE EXTRACCIÓN

CA
TE
IO
BL
BI
xxvi
IV. DISCUSIÓN
Al realizar el presente estudio comparativo de los diferentes diferentes métodos de
extracción de flavonoides totales, debemos dejar en claro que cada una de las muestras se
ha enfrentado a la misma mezcla de solventes (ácido sulfúrico al 10 % y etanol al 50 %). La
presencia de ácido sulfúrico al 10 % persigue romper el enlace o-glucosídico, para así
A
lograr la liberación de la geninas de los flavonoides que se encuentren como o-glicósidos13,
IC
M
18
.
UI
Q
O
BI
Y
En el estudio del método de maceración en frio, bajo sus variantes con y sin
I A
agitación, se evaluó la capacidad extractiva de etanol de 70 °GL en 2 condiciones distintas,
AC
RM
cuyos resultados se muestran en la tabla Nº 1. Los resultados para la maceración de hojas

FA
secas pulverizadas de Sambucus peruviana H.B.K. dejan en claro que la maceración con
DE
agitación presenta mejor rendimiento pues la concentración de flavonoides totales es

CA
prácticamente dos veces (0.31 g %) la concentración de flavonoides totales en la muestra

TE
macerada sin agitación (0.17 g %). Esta diferencia es perfectamente explicable si

IO
consideramos que en la maceración con agitación el solvente alcanza una concentración

BL
BI
homogénea temporal más baja que la concentración de las sustancias extraíbles en el
interior de las células del material vegetal con cada agitación (balance de concentraciones);
y así sucede sucesivamente hasta que se alcanza un equilibrio de concentraciones donde la
cantidad de sustancias extraíbles dentro y fuera de la célula es el mismo, punto en el cual ya
no es posible extraer nada más1,19.
xxvii
En cuanto a la extracción con ultrasonido (sonicación), esta presenta un rendimiento
similar al obtenido en la maceración con agitación (0.35 g %) como puede verse en la tabla
Nº1. Resultado un tanto esperado pues durante la aplicación de ondas ultrasónicas a la
muestra, Las partículas sólidas y líquidas vibran y se aceleran ante la acción ultrasónica,
como resultado el soluto pasa rápidamente de la fase sólida al solvente. El ultrasonido
además facilita la rehidratación del tejido si se están utilizando materiales secos al abrir los
A
poros, lo cual a su vez incrementa el transporte de masa de los constituyentes solubles por
IC
M
difusión y procesos osmóticos20.
UI
Q
O
BI
Y
En la Tabla N°1 podemos observar que la extracción por lixiviación presenta mayor
I A
AC
rendimiento (0.47 g%) que los otros métodos mencionados anteriormente, lo cual puede
RM
deberse a que es un proceso de extracción continua donde intervienen fuerzas físicas

FA
importantes como la gravedad, viscosidad, adherencia, fricción, osmosis, capilaridad y

DE
solución1.
CA
.
TE
IO
Los resultados del estudio del método de extracción a reflujo se muestran también
BL
BI
en la tabla Nº 1. El valor 0.56 g % nos muestra un método de extracción de de mayor
rendimiento que las anteriores, pues como puede verse la cantidad obtenida. Como la
extracción es un proceso complejo que contempla varios fenómenos, al elevar la
temperatura a la cual se lleva a cabo el proceso conseguimos que el coeficiente de difusión
molecular sea mayor, por lo tanto la cantidad de flavonoides totales extraíbles será
mayor19,20.
xxviii
La extracción en Soxhlet por su parte aventajó a los otros métodos anteriores. La
extracción por esta este método registra un valor de concentración de flavonoides totales
(0.63 g %) que es casi 4 veces mayor que la concentración de flavonoides totales en la
muestra macerada sin agitación, y aproximadamente 2 veces mayor que la concentración de
flavonoides totales en las muestras procesadas por maceración con agitación y extracción
A
IC
asistida por ultrasonido. Al igual que en el caso del reflujo este resultado es consecuencia
M
UI
del aumento de la temperatura en el proceso, adicionado a que en este caso en particular el
Q
O
balance de concentraciones no existe y el proceso depende de la ley de difusión molecular
BI
libre1, 21.
Y
I A
AC
RM
Los resultados obtenidos en el presente trabajo al tratar de determinar el mejor

FA
método de extracción de flavonoides totales de las hojas de Sambucus Peruviana H.B.K.

DE
pueden conducir a posteriores investigaciones para otros especies vegetales consideradas

CA
medicinales; y también se podría extrapolar su aplicación en algún o algunos procesos

TE
industriales orientados a la industrialización de plantas medicinales con alto contenido de

IO
BL
flavonoides.
BI
xxix
V. CONCLUSIONES
1. El mejor método para extraer flavonoides totales a partir de las hojas de
Sambucus peruviana H.B.K. en el presente trabajo de investigación es la
extracción por Soxhlet.
2. El método de extracción de flavonoides totales por reflujo debe tenerse en
A
cuenta como una alternativa a la extracción por Soxhlet, pues su
IC
M
rendimiento no está muy lejos de la obtenida con este último método de
UI
Q
extracción.
O
BI
Y
I A
AC
RM
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI
xxx
VI. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
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&lng=en&nrm=iso.doi: 10.1590/S0001-37652004000300004
A
IC
M
UI
Q
O
BI
Y
I A
AC
RM
FA
DE
ANEXOS
CA
TE
IO
BL
BI
xxxiv
1. Identificación de la especie Sambucus Peruviana H.B.K.
A
IC
M
UI
Q
O
BI
Y
I A
AC
RM
FA
2. Estabilización de las hojas de Sambucus peruviana H.B.K.

DE
CA
TE
IO
BL
BI
Recolección de la muestra Selección de la muestra
Estabi
lizació
n de la
xxxv
muestra
A
IC
M
UI
Molienda y Tamizado
Q
O
3. Diferentes métodos de extracción
BI
Y
I A
AC
RM
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI
xxxvi
Lecturas de las absorbancias de cada una de las muestras problema obtenidas según el
método de extracción
MÉTODO DE NÚMERO DE
LECTURA DE ABSORBANCIA (nm)
EXTRACCION LECTURAS
1 0.0620
2 0.0630
Macerado sin 3 0.0610
agitación 4 0.0620
A
IC
5 0.0620
M
6 0.0610
UI
1 0.112
Q
2 0.112
O
3 0.114
BI
Macerado con
4 0.114
Y
agitación
5 0.113
I A
6 0.114
AC
1 0.125
RM
2 0.126
FA
Sonicación 3 0.128
4 0.125
DE
5 0.127
6 0.124
CA
1 0.167
TE
2 0.169
IO
3 0.168
Lixiviación
BL
4 0.167
BI
5 0.169
6 0.167
1 0.197
2 0.196
Extracción por 3 0.197
reflujo 4 0.196
5 0.197
6 0.197
MÉTODO DE NÚMERO DE
xxxvii
EXTRACCION LECTURAS LECTURA DE ABSORBANCIA (nm)
1 0.221
2 0.222
3 0.220
Extracción por
soxhlet 4 0.222
5 0.220
6 0.221
A
IC
M
UI
Q
O
BI
Y
I A
AC
RM
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI
xxxviii

López Cenizario, Carlos Wilfredo

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Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

Sambucus peruviana H.B.K.

INFORME DE PRÁCTICAS PRE

PARA OPTAR EL TÍTULO PROFESIONAL

AUTOR : Br. LÓPEZ CENIZARIO CARLOS WILFREDO

ASESOR : Dr. Q.F. RUÍZ REYES SEGUNDO GUILLERMO

Señores miembros del Jurado Dictaminador:

De conformidad con las disposiciones legales vigentes del Reglamento de

agradecimiento a nuestra Alma Mater y a toda su plana docente, por su meritoria

De manera muy especial agradezco la valiosa colaboración de los señores

miembros del jurado.

Dejo a vuestra consideración señores miembros del jurado la respectiva

calificación del presente trabajo.

Trujillo, 07 de Mayo del 2012

López Cenizario Carlos Wilfredo

Mg. Marilú Soto Vásquez

Dr. Q.F. Segundo Guillermo Ruiz reyes

Por darme la vida, por poner en mi

han tenido para enseñarme. Por haber

estado al pendiente de mí durante toda esta etapa.

Que con su amor me han enseñado a salir adelante,

por compartir sus vidas y experiencias conmigo,

pero sobre todo por estar en otro

momento tan importante en mi vida .

Dr. Q.F. Segundo Guillermo Ruiz Reyes

Por su apoyo constante y desinteresado, por

su amistad, por sus enseñanzas y disposición

en la conducción del desarrollo de este

A los miembros del jurado

El presente estudio consistió en determinar la mejor técnica de extracción de

se realiza la cuantificación de flavonoides totales siguiendo el método espectrofotométrico

partir de las hojas de Sambucus peruviana H.B.K.. obteniéndose un rendimiento de 1.01 %

Palabras claves: Sambucus peruviana H.B.K., flavonoides totales.

from dried leaves of Sambucus peruviana KBK. collected in Huamachuco City.

expressed as quercetin, described by Kostennikova Z.

Sambucus peruviana HBK. obtained a yield of 1.01%

Keywords: Sambucus peruviana HBK, total flavonoids, extraction methods.

PRESENTACION .............................. ¡ERROR! MARCADOR NO DEFINIDO.

JURADO CALIFICADOR ................ ¡ERROR! MARCADOR NO DEFINIDO.

I. INTRODUCCIÓN................................... ¡ERROR! MARCADOR NO DEFINIDO.

II. MATERIAL Y METODO ..............................................................................XII

2.1. MATERIAL ................................................................................. xii

2.3. ETAPAS DE LA METODOLOGIA EXPERIMENTAL¡Error! Marcador

2.4. ANÁLISIS ESTADÍSTICO DE DATOS¡Error! Marcador no definido.

III. RESULTADOS ....................................... ¡ERROR! MARCADOR NO DEFINIDO.

IV. DISCUSIÓN ............................................ ¡ERROR! MARCADOR NO DEFINIDO.

V. CONCLUSIONES................................... ¡ERROR! MARCADOR NO DEFINIDO.

METABOLITOS PRIMARIOS, dado que se encuentran en prácticamente todas las formas

diferentes del amarillo como son el rojo, el violeta y el azul1,2,3,4,5.

Los flavonoides pertenecen a un grupo de compuestos naturales arreglados bajo un

llamado anillo C. Se conoce más de 10 clases de flavonoides (Chalconas, flavonas,

flavonoles, flavanonas, flavanonoles, antocianidinas, catequinas, epicatequinas, auronas,

isoflavonoides, pterocarpanos, rotenoides, etc) los cuales pueden encontrarse como

xilosa y arabinosa 1,3,4.

funcionamiento de las plantas al protegerlas contra agentes agresores externos, como la

alimentación, oviposición o simplemente guiándolos y facilitando así la polinización5,6.

tejidos; causando su degeneración, envejecimiento, pérdida de su función y otras formas

prevención de varios procesos fisiopatológicos asociados con el estrés oxidativo y a la

presencia de radicales libres, tales como el cáncer y diversas enfermedades

neurodegenerativas y cardiovasculares 4,5,6,7,8,9.

Otra de las propiedades de los flavonoides es su capacidad para contribuir a las

propiedades de los alimentos, como el sabor o la dulzura. Además son utilizados en la

industria de los cosméticos por su actividad desodorante y reductora de la