Introducción.

La espectroscopia es un conjunto de técnicas que utilizan la luz para medir concentraciones

químicas. El espectrofotómetro es un instrumento que permite comparar la radiación
absorbida o transmitida por una que contiene una muestra de concentración desconocida y
una cantidad conocida de la misma sustancia.

La radiación ultravioleta (UV) y visible comprende sólo una pequeña parte del espectro
electromagnético. La energía asociada con la radiación electromagnética se define por la
siguiente ecuación:
𝐸 = ℎ𝑣
Donde E es la energía (en julios), h es la constante de Planck (6.62 × 10-34 Js) y ν es la
frecuencia (en segundos). (Technologie, 2000)

En algunas moléculas y átomos, los fotones de luz UV y visible tienen suficiente energía
para causar transiciones entre los diferentes niveles. La longitud de onda de la luz
absorbida es aquella que tiene la energía requerida para mover un electrón desde un nivel
de energía inferior a uno superior.

Generalmente, los espectros UV-visible muestran algunas bandas anchas. La

espectroscopia UV-visible proporciona información cualitativa limitada. La mayor parte de la
absorción de los compuestos orgánicos resulta de la presencia de enlaces π (es decir,
insaturados). Un cromóforo es un grupo molecular que, normalmente, contiene un enlace π.

La presencia de una banda de absorbancia a una determinada longitud de onda es una

buena indicación de la presencia de un cromóforo. Sin embargo, la posición del máximo no
es fija sino que depende, en parte, del entorno molecular del cromóforo y del disolvente en
el que pueda disolverse la muestra. Otros parámetros, como pH y temperatura, también
pueden causar cambios tanto en la intensidad como en la longitud de onda de los máximos
de absorbancia. (Technologie, 2000)

Aunque los espectros UV-visible no permiten una identificación absoluta, se usan

frecuentemente para confirmar la identidad de una sustancia mediante la comparación del
espectro medido con uno de referencia. Cuando los espectros son muy similares, pueden
utilizarse espectros derivados.

El color es una propiedad importante de una sustancia. El color de la materia está

relacionado con su absortividad o reflexividad.

La ley de Beer es idéntica a la ley de Bouguer, excepto porque está expresada en términos
de la concentración. La cantidad de luz absorbida es proporcional al número de moléculas
absorbentes por las que pasa la luz.

Donde c es la concentración de las especies absorbentes (normalmente expresada en

gramos por litro o miligramos por litro). Esta ecuación puede transformarse en una
expresión lineal tomando el logaritmo y, normalmente, se expresa a continuación:
El coeficiente de extinción (ε) es característico de una sustancia en condiciones definidas de
longitud de onda, disolvente y temperatura. En la práctica, el coeficiente de extinción
medido también depende de las características del instrumento utilizado. Por esta razón,
normalmente no se utilizan valores predeterminados del coeficiente de extinción para
análisis cuantitativo. En su lugar, se construye una curva de calibración o curva de trabajo
para la sustancia a analizar, utilizando una o dos disoluciones patrón con concentraciones
conocidas del analito.
(Technologie, 2000)

Para resultados exactos, la muestra a analizar debe contener sólo el componente

absorbente para el que se ha realizado la calibración. Si la muestra es una disolución, debe
utilizarse como blanco el disolvente puro.

La espectroscopia UV-Vis está basada en el proceso de absorción de la radiación

ultravioleta-visible (radiación con longitud de onda comprendida entre los 160 y 780 nm) por
una molécula. La absorción de esta radiación causa la promoción de un electrón a un
estado excitado. Los electrones que se excitan al absorber radiación de esta frecuencia son
los electrones de enlace de las moléculas, por lo que los picos de absorción se pueden
correlacionar con los distintos tipos de enlace presentes en el compuesto. Debido a ello, la
espectroscopia UV-Vis se utiliza para la identificación de los grupos funcionales presentes
en una molécula. Las bandas que aparecen en un espectro UV-Vis son anchas debido a la
superposición de transiciones vibracionales y electrónicas.

Resultados:
1
2
3

4
5
6

7
8

9
10
MUESTRA PROBLEMA

Calculos
A)Obtención del espectro de absorción

Se pide determinar a partir del espectro de absorción del colorante vegetal 0.02% P/V la
longitud de onda máxima (λmax) y determinar el valor de la absortividad molar (ε), a partir de
éste determinar el tipo de transición electrónica.

De acuerdo al espectro obtenido la longitud de onda máxima es λ max=498 nm, con una
absorbancia de 0.345. Teniendo en cuenta que la Ley de Beer es:
𝐴 = 𝜀𝑏𝑐
Considerando el ancho de la celda (b) como 1 cm y la concentración (c) como 0.10405 M,
hacemos el despeje pertinente para obtener ε:
𝜀 = 𝐴/𝑏𝑐
𝜀 = (0.345)/(1𝑐𝑚)(0.10405𝑀)
𝜀 = 3.3157
Transición de n→π

B)Obtención de Curva de Calibración

C)Determinación de la concentración de una muestra problema

Dada una muestra problema se requiere conocer la concentración de la misma empleando

la curva de calibración y el valor de ε, así como absorbancia y transmitancia.

longitud de onda máxima es 498nm Commented [1]: Los cálculos de esta parte ya los
tiene Lupita, pero no tiene Internet y no las puede subir
a Drive

Discusión

Cuando se registra un espectro de absorbancia, primero se registra el espectro de la línea

base con las disoluciones de referencia (disolvente puro o blanco) en las dos cubetas. La
línea base normalmente presenta pequeñas absorbancias positivas y negativas. Para
obtener la verdadera absorbancia a cada longitud de onda, a la absorbancia de la muestra
se le resta la absorbancia de la línea base (Harris, 2001).

Las desviaciones de la ley de Beer, son una frecuente introducción de un error sistemático,
en las determinaciones debido a la variabilidad de la absorción de fondo. El método práctico
para resolver esta dificultad es el llamado de la línea base, según el cual se traza una línea
recta por la base de la banda, tangencialmente a los dos bordes inferiores de la misma,
tomándose como intensidad de la radiación incidente, P 0 a la indicada por esta línea a la
frecuencia correspondiente al pico de absorción (Pickering, 1980).

La necesidad de trazar la línea base obliga, para cada medida, a barrer por lo menos una
región pequeña del espectro. Donde UV-VIS, para realizar las lecturas, basta un solo ajuste
de la longitud de onda.

De acuerdo a los espectros obtenidos en cada una de las diez disoluciones se obtuvo su
longitud de onda máxima así como su absortividad, mostradas en la siguiente tabla.

DISOLUCIÓN λ máx Absorbancia

1 498 0.345

2 498 0.324

3 498 0.346
 4 498 0.317

5 498 0.323

6 498 0.254

7 498 0.25

8 498 0.244

9 498 0.23

10 498 0.222

Obtención de la curva de calibración

Una curva de calibración es la representación gráfica de una señal que se mide en función
de la concentración de un analito. En el procedimiento se compara una propiedad del
analito con la de estándares de concentración conocida del mismo analito (o de algún otro
con propiedades muy similares a éste).
En la construcción de la curva se emplean un mínimo de tres puntos representando las
concentraciones frente a sus absorbancias gráficamente. Este gráfico presenta
ondulaciones con maximos y minimos. (Colom V. M. F., Garcia B. M. J. & Jaramillo S. J. A.,
2003)

En la práctica para construir la curva de calibración se utilizan disoluciones que contienen

concentraciones conocidas de analito, llamadas disoluciones patrón o estándar, que en este
caso fue nitrato de cobalto

Cabe mencionar que es muy importante efectuar la medida del “ blanco”, que es una
disolución que contiene todos los reactivos y disolventes sin el analito, en nuestro caso
utilizamos una muestra de agua destilada. Los blancos miden la respuesta del
procedimiento analítico a las impurezas o especies interferentes que existan en los
reactivos o, simplemente, a las especiales características del instrumento de medida.
La gráfica se construye para verificar el cumplimiento de la ley de Beer. Si es válida la ley
de Beer, para esa sustancia a esas concentraciones, la relación debe ser una recta, que
pase por el origen de los ejes cartesianos; a menudo se observan desviaciones debidas a
diversos factores.(Brunatti C. & Martin A.M., S.F).

De acuerdo a los resultados obtenidos, podemos decir que la ley de Beer se cumplió, ya
que se puede observar cómo la absorbancia y la concentración tienen una relación lineal,
donde al aumentar la concentración, la absorbancia también aumenta.

Conclusiones
Estefania: Los métodos espectrométricos son de gran importancia y ampliamente utilizados
debido a la gran variedad de especies orgánicas, inorgánicas y bioquímicas que son
capaces de absorber radiación ultravioleta visible e infrarroja, además de ser bastante
exactos.
Se observó la importancia de elegir el disolvente para que de ésta manera no influya con el
espectro de la muestra al tener su propio espectro. Gracias a la espectrofotometría
ultravioleta visible es posible obtener concentraciones y pesos moleculares, mientras que la
espectrometría infrarroja ha
ce posible la identificación de diferentes grupos funcionales en una muestra.

Joscelyne Virginia Picón Muñoz

Para obtención de la curva de concentración se logró exitosamente puesto que los
parámetros para su composición fueron la concentración y la absorbancia en la
espectrofotometría UV- VIS, también se logró identificar la transiciones y la determinación
del cálculo de concentración de la muestra problema.
La capacidad de la absorbancia en algunos compuestos para la absorción de la radiación
electromagnética depende de la concentración y longitud a la cual se le aplica un ray, el
cual puede alcanzar su punto máximo de absorción a diferentes valores.

Martha Jeanet Rodríguez Chávez

Se obtuvo satisfactoriamente la concentración de una curva de calibración, relacionando
concentración y absorbancia, para así determinar parámetros involucrados en la
espectrofotometría UV-VIS, como es la absortividad molar, para así identificar las
transiciones. De igual manera se aplicó la técnica para el cálculo de la concentración de una
muestra problema, ya que es una de las aplicaciones de la espectroscopia UV-VIS.

Lupita Roque Salinas

Bibliografía

● Harris, D. C. (2001). Análisis Químico Cuantitativo (2da ed). España: Reverté.

● Miller James N., Miller Jane C. “Estadística y Quimiometria para Química Analítica”,
4ª edición, Editorial Prentice Hall, España 2002.
● Danzer Klaus, Currie Lloyd A. “Guidelines for calibration in analytical chemistry Part
Fundamentals and single component calibration”, IUPAC Pure & Appl. Chem, Vol.70,
No.4, pp.993-1014, 1998.
● Brunatti C. & Martin A.M., (S.F) Introducción a la espectroscopia de absorción
molecular Ultravioleta, Visible e Infrarrojo Cercano. Recuperado el 22 de mayo del
2016 de: http://materias.fi.uba.ar/6305/download/Espectrofotometria.pdf
● Colom V. M. F., Garcia B. M. J. & Jaramillo S. J. A., (2003) Temario General. Manual
del Auxiliar del Laboratorio.España: MAD S.L.
● Pickering, W. F. (1980). Química Analítica Moderna. España: Reverté.
● Technologie, A. (2000). Fundamentos de la espectroscopia UV- visible moderna.
Alemania: Copyright Agilent Technologies.