Taninos Grado Etanolico

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
A
IC
M
UI
Q
O
BI
“DETERMINACIÓN DEL GRADO ETANÓLICO ÓPTIMO PARA LA
EXTRACIÓN DE TANINOS EN EL FRUTO DE Caesalpinea spinosa “tara”
Y
I A
AC
RM
TESIS II
FA
DE
PARA OPTAR EL GRADO ACADEMICO

DE
CA
BACHILLER EN FARMACIA Y BIOQUIMICA

TE
IO
AUTORES: BRICEÑO RODRIGUEZ, YANNINA JACKELIN

BL
RIOS GAVIDIA, JHAN CARLO

BI
ASESOR: Dr. SEGUNDO G. RUIZ REYES
Trujillo - Perú
2012
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú.
Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
PRESENTACION
SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO
Dando cumplimiento a lo establecido por el reglamento para trabajos de
A
investigación de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de
IC
M
Trujillo, sometemos a vuestra consideración y elevado criterio profesional el presente
UI
Q
trabajo de investigación titulado “DETERMINACIÓN DEL GRADO ETANÓLICO
O
ÓPTIMO PARA LA EXTRACIÓN DE TANINOS EN EL FRUTO DE Caesalpinea BI
Y
IA
spinosa “tara.
AC
Es propicia esta oportunidad para manifestar el más sincero reconocimiento a

R M
nuestra Alma Mater y a su plana docente, que con su capacidad y buena voluntad
FA
DE
contribuyen con nuestra formación profesional.

CA
TE
Dejamos a criterio, señores miembros del jurado la calificación del presente

IO
BL
trabajo de investigación científica.

BI
Trujillo, Abril del 2012
DEDICATORIAS
Gracias a Nuestro Señor
Dios Todo poderoso, por toda su
misericordia y bendición
brindada, por ser la luz y guía
en mí camino, ayudándome a
transitar hacia el logro de mis
A
metas, por ser el amigo
IC
M
incondicional y que nunca falla.
UI
Q
O
BI
Jhan Carlo
Y
IA
AC
R M
FA
A mis padres Oscar y Diana, por

DE
haberme apoyado en todo

CA
momento, por sus consejos,

TE
valores, por los ejemplos de

IO
perseverancia y constancia que

BL
BI
los caracterizan y por la
motivación constante que me ha
permitido ser una persona de
bien, pero más que nada, por su
amor.
Jhan Carlo
Gracias a Nuestro Señor
Dios Todo poderoso, por toda su
misericordia y bendición
brindada, por ser la luz y guía
en mí camino, ayudándome a
transitar hacia el logro de mis
metas, por ser el amigo
incondicional y que nunca falla.
A
IC
Yannina
M
UI
Q
O
BI
Y
IA
AC
R M
FA
DE
A mis padres Fernando y Beny,

CA
por haberme apoyado en todo

TE
momento, por sus consejos,

IO
BL
valores, por los ejemplos de

BI
perseverancia y constancia que
los caracterizan y por la
motivación constante que me ha
permitido ser una persona de
bien, pero más que nada,
por su amor.
Yannina
4
AGRADECIMIENTOS
A la Facultad de Farmacia
yBioquímica de la Universidad
Nacional de Trujillo y sus
docentes por la exigencia y
elevado nivel académico
brindado a lo largo de la
A
IC
carrera, responsable de nuestra
M
UI
formación Académico
Q
O
Profesional. BI
Y
IA
AC
R M
FA
DE
A nuestro asesor de
CA
proyecto de investigación, el
TE
Profesor SEGUNDO G. RUIZ

IO
REYES, por su apoyo

BL
BI
desinteresado y sobre todo su
comprensión en la ejecución de
este trabajo, por ser amigo y
compañero.
Los Autores
ÍNDICE
Página
PRESENTACION 02
DEDICATORIAS 03
AGRADECIMIENTOS 05
A
IC
M
INDICE 06
UI
Q
O
RESUMEN BI 07
Y
IA
AC
ABSTRACT 08
R M
I.- INTRODUCCIÓN 09
FA
DE
II.- MATERIALY MÉTODO 15

CA
TE
III.-RESULTADOS 22
IO
BL
BI
IV.-DISCUSIÓN 25
V.- CONCLUSIONES 32
VI.- RECOMEDACIONES 33
VII.-REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 34
VIII.-ANEXOS 40
RESUMEN
La presente investigación sobre el aprovechamiento integral y racional de la
Tara es producto de una extensa revisión bibliográfica relativa a este producto, con la
finalidad de determinar el grado etanólico óptimo para la extracción de taninos en el
fruto de caesalpinea spinosa “tara’’ procedente procedente de Coina, distrito de
Usquil, en la Provincia de Otuzco. Para lo cual se utilizarón los frutos secos exentos
A
IC
de semillas, luego se realizó una molienda para la obtención del polvo, el cual
M
UI
posteriormente se llevó a extracción con etanol 500 , 700 y 960 G.L, obteniendo así el
Q
O
extracto hidro - alcohólico del fruto, el cual se filtró y finalmente en diluciones
BI
Y
sucesivas se prepararon las muestras para posteriormente determinar su absorbancia a
IA
AC
700nm. De acuerdo a las lecturas obtenidas, el mayor porcentaje de taninos totales

M
expresados como ácido tánico, corresponde al grado etanólico 500 G.L con 53.9 %.
R
FA
DE
CA
TE
Palabras claves: Taninos, Caesalpinea spinosa, espectrofotometría.

IO
BL
BI
ABSTRACT
The present research about a rational utility of Tara is the result of a
bibliographical review on this product; with the purpose of determines the degree
etanólico ideally for the extraction of tannins in the fruit of caesalpinea spinosa
proceeding "tare" proceeding Coina's, Usquil's district, in Otuzco's Province. For
which the dried fruits exempt from seeds were in use, then a grinding was realized for
A
IC
the obtaining of the powder, which later removed to extraction with ethanol 500, 700
M
UI
and 960 G.L, obtaining this way the hidro-alcoholic extract of the fruit, which filtered
Q
O
and finally in successive dilutions the samples were prepared later to determine his
BI
Y
absorbancia to 700 nm. In agreement to the obtained readings, the major percentage of
IA
AC
total tannins expressed as tannic acid, it corresponds to the degree etanolico 500 G.L
M
with 53.9 %.
R
FA
DE
CA
TE
Keywords: Tannins, Caesalpinea spinosa, spectrophotometry.

IO
BL
BI
I. INTRODUCCION
En los últimos años muchos países han desarrollado estudios sobre plantas medicinales
que han logrado tener gran importancia médica. El Perú, considerado un país muy
diverso en su flora silvestre, considerado entre los 12 países de mayor diversidad
biológica sobre la tierra, conocidos como países mega diversos tanto por el número de
especies y de recursos genéticos como por la variedad de ecosistemas. Nuestro país ha
A
efectuado importantes aportes de especies y variedades para el mundo gracias a los
IC
M
diversos pisos ecológicos y microclimas que presenta, contando con 84 zonas de vida de
UI
Q
las 103 conocidas donde habría 50 mil especies vegetales (20% de las existentes en la
O
Tierra) de las que 2,000 han sido utilizadas con fines curativos.1 BI
Y
IA
AC
Cada una de estas especie medicinales presenta uno o varios compuestos a los cuales se
M
le atribuye la actividad terapéutica, pero se ha visto que la actividad resultante de la

R
FA
administración de la planta o droga (parte de la planta con actividad terapéutica)

DE
completa es distinta que si se aplican los componentes o principios activos por

CA
separado, el cual cuyas propiedades terapéuticas aun no son establecidas

TE
IO
experimentalmente.2, 3
BL
BI
La planta Caesalpinea spinosa o comúnmente llamada “tara” o “taya”, pertenece a la
familia Fabaceae, al género Caesalpinaceae. El Perú es el principal productor y
exportador mundial de tara con aproximadamente el 90%. Esta especie se ubica tanto
en la vertiente occidental del pacifico siendo cultivada en terrenos situados entre los
1000 y 2900 msnm. Y en los valles interandinos entre los 1600 – 2800 msnm.5
En el Perú, la Caesalpinea spinosa está distribuida a lo largo de toda la costa, desde
Piura hasta Tacna, y en la sierra en los departamentos de Ancash, Apurímac, Ayacucho,
Cajamarca, Cusco, Huánuco, Huancavelica, Junín y Pasco. Climáticamente, el área de
distribución se extiende desde templado cálido seco hasta tropical muy seco y bosque
tropical húmedo. La Caesalpinea spinosa es cultivada sobre todo en los departamentos
de Cajamarca, La Libertad, Ayacucho, Huancavelica, Apurímac, Ancash y Huánuco,
desde 1.000 a 2.900 msnm. 6.7
A
IC
La planta Caesalpinea spinosa o ‘tara’, es una especie de planta nativa de Perú. El
M
UI
nombre local en Europa es ‘spinyholdback’. Consecuentemente, la clasificación
Q
O
taxonómica de las plantas cambia algunas veces. En el documento, ‘La cadena de valor
BI
Y
de la tara en la región Cajamarca’, elaborado por GTZ, se incluye la actual clasificación
IA
AC
taxonómica de Caesalpinea spinosa. 3

R M
FA
Clasificación taxonómica según el Departamento de Agricultura de los Estados

DE
Unidos (USDA)
CA
Reino: Plantae
TE
IO
Subreino: Tracheobionta
BL
Superdivisión: Spermatophyta
BI
División: Magnoliophyta
Clase: Magnoliopsida
Subclase: Rosidae
Orden: Fabales
Familia: Fabaceae
Género: Caesalpinaceae
Especie: Caesalpinea spinosa.2
10
La tara es un árbol pequeño de dos a tres metros de altura y su tronco está provisto de
una corteza gris espinosa, con ramillas densamente poblada y es originaria del Perú
siendo empleada desde la época prehispánica en la medicina tradicional como
astringente y desinflamatorio, en infecciones de la cavidad orofaríngea (garganta,
caries); sinusitis; inflamación de los ojos; infecciones vaginales y micóticas; heridas
crónicas; dolor de estómago y diarreas. 4, 8
La vaina representa el 62% del peso de los frutos y el restante es de las semillas, donde
A
IC
también existe la mayor concentración de taninos que oscila entre 40 y 60%, de esta
M
UI
última se utiliza el endospermo para la producción de hidrocoloides o gomas de uso
Q
O
alimenticio. Mientras que la vaina contiene ácido gálico que es utilizado como
BI
Y
antioxidante en la industria del aceite y en la industria cervecera como un elemento
IA
AC
decolorante, en fotografía, tintes como agente curtiembre. 4, 9,10

R M
De la vaina de la Tara se obtiene el polvo de tara que contiene un gran porcentaje de

FA
DE
taninos. El polvo de Tara se consigue mediante un proceso mecánico simple de

CA
trituración de vaina, previamente despepitada, obteniendo como producto un aserrín

TE
fino de coloración amarilla clara. Posteriormente, se obtiene extracto de Tara o extracto

IO
BL
tánico, mediante un proceso de concentración. Del extracto de tara se puede obtener:

BI
ácido tánico y ácido galotánico. 9
11
Estos taninos ocupan una parte de la línea fronteriza en ciencias entre la botánica y la
química. Aunque la importancia de los taninos vegetales en diversas disciplinas
científicas ha sido reconocida. Probablemente la definición más simple, concisa y
aceptable sigue siendo la de Bate-Smith y Swain (1962). “compuestos fenólicos
solubles en agua, con pesos moleculares entre 500 y 3000, que además de dar las
reacciones fenólicas usuales, tienen propiedades especiales tales como la habilidad de
precipitar alcaloides, gelatina y otras proteínas”. Muchos aun prefieren el término
A
taninos vegetales, simplemente debido a su falta de precisión. Sin embargo
IC
M
terminológicamente y científicamente se recomienda el término “polifenoles vegetales”
UI
Q
como descriptor para estos metabolitos secundarios de plantas superiores. Estos
O
BI
metabolitos secundarios son ampliamente distribuidos en varios sectores de plantas
Y
IA
superiores, especialmente en las familias Leguminosae, entre otras. 8.11

AC
R M
Se distinguen por las siguientes cinco características generales: solubilidad en agua,

FA
DE
masa molecular entre 500 y 3000, estructura y carácter polifenólico y características

CA
estructurales (taninos condensados, hidrolizables y un grupo minoritario, los

TE
florotaninos). 8,11
IO
BL
BI
Los tres grupos estructurales se producen por tres vías biosintéticas diferentes. Los
taninos hidrolizables se producen por una derivación de la vía del ácido shikímico que
conduce a la producción de ácido glicólico. Los florotaninos que derivan de la vía de la
malonil CoA que produce el bloque de construcción floroglucinol. Mientras que los
taninos condensados derivan por biosíntesis mixta de las dos rutas anteriores que
producen flavan-3-4 dioles que luego polimerizan por condensación. 11
12
De los taninos se reconoce en numerosas investigaciones sus propiedades como:
antioxidantes, antiinflamatorios, antiulcerosos, actividad antibiótica, protección y
fortalecimiento de la pared vascular, reforzamiento del sistema inmune. Dichos
polifenoles se han extraído generalmente con mezclas de alcoholes con agua en
diversas proporciones. 11,12
Los taninos se utilizan en la industria en el curtido de cueros, transformando la piel en
A
cuero y dar, en conjunción con sales de fierro, coloraciones azul oscura, negra o verde,
IC
M
además los taninos se utilizan en fabricación de plásticos y adhesivos, galvanizados y
UI
Q
galvanoplásticos, conservación de aparejos de pesca de condición bactericida y
O
BI
funguicida, como clarificador de vinos, como sustituto de la malta para dar cuerpo a la
Y
IA
cerveza, para la protección de metales, cosmetología, perforación petrolífera, industria

AC
del caucho, mantenimiento de pozos de petróleo y como parte de las pinturas dándole
R M
una acción anticorrosiva, en la industria farmacéutica por tener un amplio uso

FA
DE
4,10
terapéutico.
CA
Las aplicaciones en las cuales se utilizaría seria beneficiosos para toda la población en
TE
IO
general puesto de si los resultados esperados son altos se podría realizar estudios para
BL
BI
determinar las concentraciones antibacterianas efectivas que serían procesados en
diversas formas farmacéuticas.13
13
Por lo tanto nos planteamos el siguiente problema
¿Cuál es el grado etanólico que extrae mayor cantidad de taninos en el fruto de
Caesalpinea spinosa “tara”?
El objetivo general es:
Determinar el grado etanólico que extrae mayor cantidad de taninos presente en el fruto
maduro de Caesalpinea spinosa “tara”
A
IC
M
Objetivos específicos
UI
Q
O
1. Extraer los taninos con diferentes grados etanólicos en el fruto
BI
Y
maduro de Caesalpinea spinosa “tara”.
IA
AC
2. Determinar el porcentaje de taninos con diferentes grados etanólicos

M
en el fruto maduro de Caesalpinea spinosa “tara”.

R
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI
14
II. MATERIAL Y METODO
1.- MATERIAL
1.1.-Material vegetal:
1 Kg de fruto maduro de Caesalpinea spinosa “tara” procedente de Coina, distrito de
Usquil, en la Provincia de Otuzco del departamento La Libertad.
A
1.2.- Material de laboratorio:
IC
M
 Vasos de precipitación de 50mL
UI
Q
 Termómetro de mercurio
O
 Embudo cónico de vidrio
BI
Y
IA
 Papel filtro whatman N0 1

AC

M
Matraz Erlenmeyer de 50 mL
R
FA
 Tubos de ensayo de 10 mL
DE
 Pipetas de 1ml, 5 mL y 10 mL
CA
 Fiolas de 50 mL
TE

IO
Balón fondo plano de 500 mL

BL
 Crisoles de porcelana
BI
 Mortero y pilón
 Campana de disecación
15
1.2.1 Equipos
 Espectrofotómetro Génesis 10UV de Barrido
 Balanza analítica Mettler Toledo AB-204-S
 Cocina eléctrica Fomelsa
 Agitador magnético con temperatura Ruhromag
 Molino manual
A
Estufa de Secado Binder Modelo ED 23
IC
M
UI
Q
1.3 Reactivos
O
BI
Y
IA
 Ácido tánico p.a.

AC
M
 Tungstato de sodio dihidratado

R
FA
 Ácido fosfomolíbdico
DE
 Ácido fosfórico al 85 %
CA

TE
Etanol 50° G. L.
IO
 Etanol 70° G. L.
BL

BI
Etanol 96° G. L.
 Agua destilada
 Solución de carbonato de sodio al 20 %
16
2.- MÉTODO
2.1. Recolección de la muestra
Los frutos de Caesalpinea spinosa se obtienen mediante la recolección del fruto
maduro sin dañar la planta, en la ciudad de Coina, Distrito de Usquil - Provincia de
Otuzco.
A
2.1.1 Selección de la muestra
IC
M
Colectados los frutos maduros de Caesalpinea spinosa “tara” se procedió a la
UI
Q
separación de la vaina y semilla. Se seleccionaron aquellas vainas que no tienen
O
BI
daño alguno en su cubierta, se procedió a estabilizarlas en estufa a 40º C, por 24
Y
IA
horas para luego triturarlas y pulverizarlas en un molino manual, luego se utilizó

AC
el tamiz < 0.75, para obtener el polvo fino de color marrón claro, olor
R M
característico y sabor amargo.8

FA
DE
CA
2.2 Determinación de la humedad:

TE
IO
BL
Para la determinación de la humedad de la muestra se utilizó crisoles limpios, pre-

BI
acondicionado inicialmente en una estufa a una temperatura de 105º C durante 1 hora y
luego se dejó enfriar en un desecador por 30 minutos, transcurrido ese tiempo se pesó
1g de muestra en el crisol previamente pesado y se colocó en la estufa a una temperatura
de 105º C durante 1h, se dejó enfriar en un desecador por 30 minutos, transcurrido ese
tiempo, se registró el peso, se continuó el mismo procedimiento hasta peso constante.
Se trabajó cada muestra por triplicado. 8
17
La expresión matemática para el cálculo de la determinación del porcentaje de humedad
presente en la muestra es la siguiente:
% HUMEDAD = Peso de la Muestra Húmeda – Peso de la Muestra Seca x 100
Peso de la Muestra Húmeda
2.3 Obtención del extracto etanólico 50º G. L.
 Se pesó 2.5 g de droga para cada muestra, en un balón de 500 mL. de capacidad.
A

IC
Se agregó125 mL de etanol 50º G. L.
M

UI
Se colocó sobre un agitador magnético a temperatura constante de 60 0 C por 2h.
Q
O
 Se filtró al vacío en papel filtro whatman Nº 1.
BI

Y
Se midió el volumen del extracto obtenido y se aforó a 125 mL. Se protegió el
IA
AC
extracto con papel aluminio hasta la cuantificación.

M
 Realizamos el mismo procedimiento por triplicado.10

R
FA
DE

CA
TE
IO
BL
BI
 Se agregó125 mL de etanol 70º G. L.
 Se colocó sobre un agitador magnético a temperatura constante de 60 0 C por 2h.
 Se filtró al vacío en papel filtro whatman Nº1.
 Se midió el volumen del extracto obtenido y se aforó a 125 mL.
 Se protegió el extracto con papel aluminio hasta la cuantificación.
18
 Se agregó125 mL de etanol 96º G. L.
 Se colocó sobre un agitador magnético a temperatura constante de 60 0 C por 2h.
 Se filtró al vacío en papel filtro whatman Nº1.
 Se midió el volumen del extracto obtenido y se aforó a 125 mL.
A
 Se protegió el extracto con papel aluminio hasta la cuantificación.
IC
M
UI
Q
O
BI
1.6 Cuantificación de taninos:
Y
IA
AC
M
1.6.1 Preparación de los reactivos

R
FA
Solución de referencia de ácido tánico: Se disolvió 25 mg de ácido tánico en

DE
una fiola de 100 mL y se aforo con agua destilada. 10, 14

CA
TE
IO
Reactivo para taninos: Se disolvió 10 g de tungstato de sodio dihidratado, 0,2

BL
g de ácido fosfomolíbdico y 5 mL de ácido fosfórico al 85 % en 75 mL de agua

BI
destilada en una fiola de 100 mL. Luego se refluja 2 h y después se aforó con
agua destilada. 9, 10, 14
19
1.7 Preparación de la curva de calibración:
Se preparó los estándares luego se realizó las lecturas a 700 nm
Estándar 1: Se cogió 5 mL de solución de referencia de Ac. Tánico y se completó
volumen hasta 100 mL.
A
IC
M
UI
Q
O
volumen hasta100 mL. BI
Y
IA

AC

R M

FA
DE

CA

TE

IO
BL
BI
1.8 Preparación de la muestra
Se transfieren 3 mL del filtrado a un matraz aforado de 50 mL y se diluyó con agua
destilada hasta enrase (Sm). 10
20
1.9 Preparación de la solución para la cuantificación de taninos
Finalmente se preparó un sistema de fiolas de 50 mL, de la siguiente manera:
Reactivos Blanco Estándar Muestra
Sm - - 1,0 mL
Solución de referencia de ácido - 3,0 mL -
tánico
A
Agua destilada 5,0 mL 2,0 mL 4,0 mL
IC
M
Reactivo para taninos 2,0 mL 2,0 mL 2,0 mL
UI
Q
Se agita y se deja en reposo 5 min
O
BI
Solución de carbonato de sodio al 20 1,0 mL 1,0 mL 1,0 mL
Y
IA
%
AC
R M
FA
Se aforo con agua destilada, se agito y se llevó a leer en el espectrofotómetro a

DE
700 nm.10, 14, 15

CA
TE
IO
1.10 Análisis estadístico

BL
Se reportaron los resultados mediante parámetros estadísticos descriptivos: coeficiente

BI
de variación (C.V.); siendo el criterio de aceptación estadístico de los promedios
obtenidos. Y el análisis de variación para determinar la diferencia estadística
significativa.
21
III. RESULTADOS
CUADRO Nº 1: Porcentaje de Humedad encontrado en el fruto de
Caesalpinea spinosa
MUESTRA % HUMEDAD
COINA 9.63
A
IC
M
UI
Q
O
BI
CUADRO Nº 2: Absorbancias del fruto maduro de Caesalpinea spinosa
Y
IA
utilizando extractos a diferente grado etanólico

AC
R M
FA
MUESTRAS DE COINA LECTURAS PROMEDIO

DE
EXTRACTO ETANOLICO 0.4842

CA
50º G.L.
TE

IO
70º G.L.
BL

BI
96º G.L.
22
CUADRO Nº 3: Porcentaje de taninos expresado como acido tánico en el
fruto maduro de Caesalpinea spinosa
PORCENTAJE DE TANINOS
MUESTRAS DE COINA TOTALES
(%)
EXTRACTO ETANOLICO
50º G.L. 53.9
EXTRACTO ETANOLICO
70º G.L. 45.0
EXTRACTO ETANOLICO
A
IC
96º G.L. 44.1
M
UI
Q
O
BI
CUADRO Nº 4: Parámetros estadísticos obtenidos para cada extracto a
Y
IA
diferente grado etanólico

AC
R M
FA
Coeficiente de variación
MUESTRAS DE COINA (%)
DE
CA
EXTRACTO ETANOLICO 0.7%

TE
50º G.L.
IO
EXTRACTO ETANOLICO 1%
BL
70º G.L.
EXTRACTO ETANOLICO
BI
96º G.L. 1%
23
CUADRO Nº 5: Resultados del Análisis de variación (ANOVA) de los datos
obtenidos para cada extracto a diferente grado etanólico
Suma de gl Media F Sig.

cuadrados cuadrática
Inter-grupos .036 2 .018 1647.526 .000
Intra- .000 24 .000

grupos
Total .036 26
A
IC
M
UI
Q
O
BI
Y
CUADRO Nº 6: Resultados Post Anova para cada extracto a diferente
IA
AC
grado etanólico
R M
FA
DE
VAR00002 N Subconjunto para alfa = .05

CA
2 3 1
TE
96º G.L. 9 .40367

IO
70º G.L. 9 .41089

BL
BI
50º G.L. 9 .48422
Sig. 1.000 1.000 1.000
24
IV. DISCUSION
En las plantas hay muchos principios activos que son utilizados para las
diversas enfermedades, un ejemplo es el uso del fruto de Caesalpinea spinosa, en
relación a su concentración de taninos. Los taninos son metabolitos secundarios
ampliamente distribuidos en el reino vegetal. Se localizan en todas las partes de las
plantas y su concentración es variable a lo largo del ciclo vegetativo. Estos
compuestos participan de diversas funciones, tales como la asimilación de nutrientes,
A
la síntesis proteica, la actividad enzimática, la fotosíntesis, la formación de
IC
M
componentes estructurales, y la defensa ante los factores adversos del ambiente.
UI
Q
(Robbins, 2003; Kähkönen et al, 2001).16
O
BI
Y
En algunos trabajos bibliográficos acerca de Caesalpinea spinosa, se encontró
IA
AC
estudios realizados que demuestran que dicha planta contiene un gran porcentaje de
R M
Taninos, según Brutenon los taninos son conocidos por ser inhibidores de la
FA
actividad enzimática, precipitando proteínas por eso tienen un rol bien enmarcado en
DE
la industria de la piel, y también se utilizan para la fabricación de tintas, gracias a

CA
TE
dicha capacidad.17, 18
IO
BL
El cuadro N° 1, presenta el porcentaje de humedad encontrado en el fruto de

BI
Caesalpinea spinosa, procedente de Coina, Distritos de Usquil, Provincia de Otuzco, el
cual es 9.63 %. Se determinó la humedad mediante la pérdida de peso de la muestra el
cual se dio bajo condiciones específicas. El exceso de agua en drogas vegetales es
responsable del crecimiento de bacterias y hongos, además de la hidrólisis de sus
constituyentes. Debido a ello una forma de conservación se obtiene mediante la pérdida
de humedad, sin embargo para una buena conservación de la droga, se recomienda el
secado en la estufa a 40º C, lo que permite un mejor control del proceso.19
25
El contenido de humedad de equilibrio es una importante propiedad de los
materiales que tiene un impacto significativo en el manipuleo, procesamiento y
almacenamiento. Se define contenido de humedad de equilibrio como el contenido de
humedad del material después de haber sido expuesto a un determinado ambiente por un
período muy largo de tiempo. La actividad del agua es un parámetro clave que afecta al
crecimiento microbiológico, responsable de la descomposición de la droga. Por tanto, es
A
recomendable que después de la desecación de la droga la humedad sea inferior o igual
IC
M
al 10% para conservar la droga por tiempo prolongado. 19, 20
UI
Q
O
En el cuadro N° 2, encontramos los valores de las absorbancias del fruto de
BI
Y
Caesalpinea spinosa de los diferentes extractos etanólicos procedente Coina, distrito de
IA
AC
Usquil, provincia de Otuzco, dichas absorbancias del extracto etanólico 500 G. L. en

M
promedio es 0.4842, para el extracto etanólico 700 G. L., el promedio de las

R
FA
absorbancias es 0.4116 y para el extracto etanólico 960 G. L. dicho promedio es 0.4034,

DE
los cuales al ser comparados mediante un análisis de varianza encontramos que existe
CA
TE
diferencia estadística significativa de las absorbancias del extracto de un grado etanólico

IO
con otro. Utilizando la espectrofotometría para ser medida a 700 nm, determinando así
BL
BI
el contenido total de Taninos reportados como ácido tánico, la utilización de la
espectrofotometría para determinar la concentración de un analito en solución ha sido
muy utilizada por ser un método con un costo relativamente accesible a cualquier
personal investigador, pero se producen variaciones en cuanto a volúmenes de muestra,
concentración de reactivos, tiempos y temperaturas de extracción, en el modo de
expresar los resultados, lo cual dificulta la comparación de resultados. 21, 22
26
La reacción de los taninos presentes en la solución con el reactivo para Taninos
(Tungstato de sodio dihidratado, ácido fosfomolíbdico y ácido fosfórico) dió una
coloración azul oscuro, en primer lugar se genera el anión fenóxido, ya que el tanino al
contener en su estructura fenoles, se comporta como un ácido, cediendo la molécula de
Hidrógeno, en presencia del medio alcalino, este anión reacciona con el reactivo para
Taninos y a partir de ahí se producen reacciones de tipo redox, produciéndose la
oxidación de los compuestos fenólicos convirtiéndolos en fenolatos , la transferencia de
A
electrones se dio en medio alcalino el cual lo proporciona el carbonato de sodio al 20%,
IC
M
formándose un complejo de Molibdeno – Tungsteno, en el que Molibdeno está en
UI
Q
estado de oxidación VI, el cual se reducen a óxidos, pasando a un estado de oxidación
O
BI
V. Dando el color azul intenso, siendo proporcional este color al número de grupos
Y
IA
hidroxilo de la molécula. 14, 23

AC
R M
En el cuadro Nº 3, se presenta el porcentaje de taninos en el fruto maduro de

FA
DE
Caesalpinea spinosa, calculado de la ecuación de la recta obtenida a partir de la

CA
regresión lineal de la curva de calibración, para el extracto etanólico 500 G. L. el

TE
porcentaje de taninos es 53.9 %, para el extracto etanólico 70 G. L. es 45 %, en cuanto

IO
BL
al extracto etanólico 96 G. L. es 44.1 %. En cuanto al porcentaje de taninos presente

BI
en el fruto maduro de la planta debe ser de 40 al 60% esto varía según la localidad,
temperatura, suelos y altitud.9
Además Moreira y Nakagawa establece que el lugar donde se produce la planta
de Caesalpinea spinosa puede provocar grandes modificaciones en la composición
química cuantitativa de la misma, considerando que el contenido proteico de las
semillas tiene influencia sobre la germinación.24
27
La extracción de compuestos de una planta depende de la naturaleza química y
del grado de polimerización de los propios compuestos, del método de extracción
(polaridad de los solventes), del tamaño de partícula de la muestra y de las sustancias
que pueden ejercer un efecto de interferencia (Robins, 2003). En general cualquier
proceso está basado en la mezcla de algunos disolventes (metanol, etanol, propanol,
acetona, agua) obteniéndose en el extracto una mezcla de diferentes compuestos
polifenólicos (Antolovich, y col., 2000). Además de los disolventes, también el tiempo
A
de extracción es determinante a la hora de obtener un mayor rendimiento. Se han
IC
M
reportado tiempos de extracción desde 1 minuto a 24 horas (Price y col., 2008),
UI
Q
teniendo en cuenta que largos periodos de extracción pueden producir oxidaciones, que
O
se minimizan añadiendo agentes reductores (Khanna y col., 1968).25 BI
Y
IA
AC
Las condiciones de extracción y la selección de los disolventes dependerán del

R M
tipo de muestra y de la naturaleza de los compuestos que queramos extraer. Así,

FA
DE
Shahidi, ycol., (1991) and Naczk y col., (1992) encontraron que la extracción en dos
CA
pasos secuenciales con acetona al 70% era suficiente para la extracción de taninos.
TE
Desphande y Cheryan, (1985) publicó que el tiempo óptimo de extracción de

IO
BL
polifenoles era de 50-60 minutos (Krygier y col., 1982).25

BI
Para la extracción de taninos hidrolizables generalmente se utilizan como
disolventes agua (temperatura ambiente o hasta 90ºC), 50% metanol, 50-70% acetona o
etanol/agua en diferentes proporciones (Beecher, 2003; Mueller-Harvey, 2001; Clifford
y Scalbert, 2000). Su extracción depende del grado de polimerización de este tipo de
compuestos y del tipo de matriz.25
28
Según los resultados obtenidos en los extractos a diferentes grados etanólicos, la
mayor cantidad de taninos presentó el extracto etanólico 500 G.L. Los resultados
obtenidos se ven afectados por la polaridad de los solventes empleados, pues el agua es
una molécula muy polar, mientras que la mezcla de etanol- agua que fue utilizado en
este caso es moderadamente polar (J.M Coulson 2003), esto permite que la energía
electromagnética se convierta en energía cinética que posteriormente se pierde en calor
A
por fricción de las moléculas. Lo anterior permite una mayor liberación de los
IC
M
compuestos fenólicos. 26
UI
Q
O
BI
Además el etanol, como solvente de polaridad intermedia, extrae los
Y
IA
fitoconstituyentes afines; su labor se ve facilitada por la secuencia del procedimiento: el

AC
cual rompe las interacciones que mantienen atraídos (no unidos) a los principios activos,
R M
hacia los sistemas hidrofílicos. Finalmente, el agua extrae los principios activos más
FA
DE
hidrosolubles, debido a su elevada polaridad; esta es capaz de extraerlos en sus formas

CA
ionizadas.19
TE
IO
BL
En el caso de la diferencia observada en el extracto etanólico 70º y 96º G. L. el

BI
cual presentan menor porcentaje de taninos se debe a que solubiliza en menor
proporción los compuestos fenólicos. Además Velásquez (2004) Infiere que la
extracción de Taninos con la solución 1:1 alcohol- agua es muy eficaz.15, 26
29
Los taninos están localizados en las vacuolas celulares o superficies serosas de
las plantas, en estos sitios no interfieren con el metabolismo de las plantas solo después
de que la célula se rompe y muere, ellos pueden tener sus efectos metabólicos. En la
semilla se localizan principalmente en la capa del integumento externo y la aleurona
estos están asociados con el efecto de dormancia de la semilla, tiene efectos bactericidas
y alelopáticos.27
A
Por su carácter polar, los taninos se han extraído generalmente con mezclas de
IC
M
alcoholes con agua en diversas proporciones ya que el etanol promueve la disgregación
UI
Q
de las membranas vacuolares y de las paredes de las células de los frutos. Generalmente
O
BI
es considerado que la extracción de taninos y compuestos aromáticos es mejor cuando
Y
IA
la concentración en etanol es baja.28, 29

AC
R M
Campos en su investigación “Obtención y caracterización de taninos

FA
DE
hidrolizados de tara (Caesalpinia spinosa) y evaluación de su eficacia antioxidante en

CA
carnes y aceites vegetales”. Se estudió los factores que afectan el proceso de extracción
TE
de los taninos a partir de las vainas de tara en polvo. Encontrándose que el pH y la

IO
BL
relación materia prima/solvente no influyen de forma significativa (p < 0.05); mientras

BI
que el solvente presenta una influencia significativa, obteniéndose mejores resultados
con etanol 50%, luego etanol 80% y finalmente el metanol 80%. 30
La temperatura para la cuantificación de taninos es un factor que influencia la
extracción. Un incremento de la temperatura tiene el efecto de degradar las paredes
celulares incrementando la difusión (Ramet et al,. 1986; Merida et al., 1991). 31
30
En el cuadro Nº 4 se muestra el análisis estadístico descriptivo, coeficiente de
variación, el cual nos ha permitido determinar el grado de dispersión entre absorbancias
para cada extracto de los diferentes grados etanólicos, demostrando que los valores
obtenidos son inferiores al 30 %; por lo tanto estos son homogéneos.32
En el cuadro Nº 5 se muestra el análisis de variación (ANOVA), el cual se
utilizó para verificar si hay diferencias estadísticamente significativas entre medias, ya
que tenemos tres grupos de datos en el mismo estudio. Encontrando que el valor de P=
A
IC
0.000 < 0.05, por lo tanto existe diferencia significativa entre los datos obtenidos de los
M
UI
extractos a diferentes grados etanólicos.32
Q
O
BI
Y
En el cuadro Nº 6 se muestran las medias para los tres grupos en los subconjuntos
IA
AC
homogéneos. Este parámetro estadístico Post Anova, usa el tamaño muestral de la

M
media armónica 9, para cada extracto con diferentes grados etanólicos. Determinando
R
FA
que para las muestras que se trabajó con un extracto etanólico 50º G. L. tiene la mayor
DE
diferencia significativa con respecto a los valores que se obtuvo para los demás
CA
extractos etanólicos de 70º y 96º G. L.32

TE
IO
BL
BI
31
V. CONCLUSIONES
1. El fruto maduro de Caesalpinea spinosa “Tara” procedente de Coina, distrito de
Usquil, provincia de Otuzco - La Libertad, utilizando extractos etanólicos de
500 G.L, 700 G.L y 960 G.L contienen respectivamente 53.9%, 45% y 44.1% de
taninos totales expresados como Acido Tánico.
A
2. El grado etanólico óptimo para la extracción de taninos del fruto maduro de
IC
M
Caesalpinea spinosa “Tara” procedente de Coina, distrito de Usquil, provincia
UI
Q
de Otuzco - La Libertad, es el de 500 G.L. en comparación con los demás
O
grados etanólicos analizados. BI
Y
IA
AC
R M
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI
32
VI. RECOMENDACIONES
Los frutos maduros de Caesalpinea spinosa contienen una considerable cantidad
de taninos, a partir de lo cual consideramos que sería de mucha importancia
continuar con la identificación del tipo de taninos mediante cromatografía de
gases y espectrofotometría de masas que existen, para posteriormente realizar
estudios farmacológicos, clínicos para poder hacer un uso adecuado del producto
A
natural.
IC
M
UI
Q
O
BI
Y
IA
AC
R M
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI
33
VII. REFERENCIA BIBLIOGRAFICAS
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UI
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20Vila.pdf BI
Y
IA
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AC

R M
http://www.upcomillas.es/personal/peter/analisisdevarianza/ANOVAIntroduc
FA
DE
cion.pdf
CA
TE
IO
BL
BI
39
VIII. ANEXOS
ANEXO Nº 1
DETERMINACION DEL PORCENTAJE DE HUMEDAD
CUADRO N° 1: Cálculos para determinar el porcentaje de humedad del fruto
maduro de Caesalpinea spinosa
A
MUESTRA Wc + M Wc % HUMEDAD
IC
M
2.342 1.891 9.8
UI
Q
COINA 2.414 1.962 9.6
O
2.408
BI
1.956 9.6
Y
IA
Promedio: X= 9.67
AC
R M
FA
Dónde: Wc: Peso del crisol

DE
M: Peso de la muestra
Reemplazamos la fórmula:
CA
TE
% HUMEDAD = Peso de la Muestra Húmeda – Peso de la Muestra Seca x 100

IO
Peso de la Muestra Húmeda

BL
BI
CUADRO N° 2: Porcentaje de humedad del fruto maduro de Caesalpinea spinosa
MUESTRA % HUMEDAD
COINA 9.67
40
ANEXO Nº 2
REACCION GENERAL DE LOS COMPUESTOS FENOLICOS CON EL
REACTIVO DE CUANTIFICACION
A
IC
M
UI
Q
Fenol Ion fenóxido
O
BI
Y
IA
Los compuestos fenólicos bajo condiciones alcalinas

AC
R M
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI
H3(PMo12O40)
H3PO4(MoO3)12 H3(PW12O40)
Fenol
Quinona Complejo Azul
41
La reacción de compuestos fenólicos con el reactivo para taninos
ANEXO Nº 3
COMPONENTES DE LOS TANINOS HIDROLIZABLES
A
IC
M
UI
Q
O
BI
Y
IA
AC
R M
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI
42
ANEXO Nº 4
ESTRUCTURA QUIMICA DE LOS TANINOS DEL FRUTO DE Caesalpinea
spinosa “Tara”
A
IC
M
UI
Q
O
BI
Y
IA
AC
R M
FA
DE
CA
TE
Estructura general del Tanino de Tara

IO
BL
BI
43
ANEXO Nº 5
CALCULOS PARA DETERMINAR LA CURVA DE CALIBRACION DE
ACIDO TÁNICO
Solución estándar de Ácido Tánico
Peso de Ac. Tánico: 25 mg
Concentración: 0.25 mg/mL
A
Determinación de las concentraciones de los estándar:
IC
M
5 3
Estándar 1: 0.25 mg/mL x 100 x 50 = 0.00075
UI
Q
10 3
O
Estándar 2: 0.25 mg/mL x 100 x 50 = 0.0015
BI
Y
15 3
Estándar 3: 0.25 mg/mL x 100 x 50 = 0.00225
IA
AC
20 3
Estándar 4: 0.25 mg/mL x 100 x 50 = 0.003
R M
25 3
FA
Estándar 5: 0.25 mg/mL x 100 x 50 = 0.00375

DE
30 3
Estándar 6: 0.25 mg/mL x 100 x 50 = 0.0045
CA
35 3
TE
Estándar 7: 0.25 mg/mL x 100 x 50 = 0.00525

IO
CUADRO Nº 3: Valores obtenidos de la curva de Calibración de Ácido Tánico

BL
BI
Estándar CC Absorbancias Absorbancia

(mg/ml) Promedio
Est1 0,0008 0,062 0,064 0,066 0.064
Est2 0,0015 0,084 0,088 0,093 0.088
Est3 0,0023 0,113 0,117 0,119 0.116
Est4 0,0030 0,140 0,141 0,146 0.142
Est5 0,0038 0,164 0,169 0,172 0.168
Est6 0,0045 0,189 0,192 0,196 0.192
Est7 0,0053 0,212 0,217 0,226 0.218
44
GRAFICO Nº 1: Curva de Calibración de Ácido Tánico a 700 nm
CURVA DE CALIBRACIÓN ACIDO TÁNICO A 700 nm

0.250
y = 34.429x + 0.0381
R² = 0.9997
0.200
A
IC
M
0.150
ABSORBANCIA
UI
Q
Series1
O
0.100 BI Lineal (Series1)
Y
IA
0.050
AC
R M
0.000
FA
0.0000 0.0010 0.0020 0.0030 0.0040 0.0050 0.0060

DE
CONCENTRACIÓN (mg/ml)
CA
TE
IO
Luego de hacer la regresión lineal a la curva de calibración de obtuvo la siguiente

BL
ecuación:
BI
Y=34.429X + 0.0381
Dónde:
Y: Absorbancia
X: Concentración de taninos (mg/mL)
45
ANEXO Nº 6
ABSORBANCIAS OBTENIDAS DE LA CUANTIFICACION DEL FRUTO DE
Caesalpinea spinosa
CUADRO Nº 4: Absorbancias del extracto etanólico 500 G. L.
MUESTRA ABSORBANCIAS PROMEDIOS DE

500 G.L <700nm> LAS
ABSORBANCIAS
A
0.486
IC
COINA 1 0.482 0.4830
M
0.481
UI
0.484
Q
O
COINA 2 0.482 0.4847
0.488 BI
Y
0.489
IA
COINA 3 0.480
0.4850
AC
0.486
R M
PROMEDIO FINAL X = 0.4842

FA
DE
CA

TE
IO

BL
700 G.L <700nm> LAS

BI
ABSORBANCIAS
0.411
COINA 1 0.412 0.4126
0.413
0.411
COINA 2 0.415 0.4142
0.416
0.405
COINA 3 0.408 0.4080
0.407
46

960 G.L <700nm> LAS
ABSORBANCIAS
0.399
COINA 1 0.408 0.4041
0.407
0.406
A
COINA 2 0.402 0.4033
IC
0.403
M
0.402
UI
COINA 3 0.401 0.4027
Q
0.405
O
BI
Y
IA
AC
R M
Determinación de la concentración de Taninos en las muestras:

FA
DE
CA
Reemplazamos el valor de la absorbancia en la ecuación:

TE
Y = 34.429X + 0.0381
IO
BL
BI
Luego según dilución de las muestras:
Peso
muestra
10 g
500
3 50
1 50
47
Ecuación: Y=34.429X + 0.0381
Y- 0.0381 = X
34.429
Absorbancia: 0.4116
Para el extracto etanólico de 70º G. L.
A
IC
0.4116 – 0.0381 = X
M
34.429
UI
Q
O
X= 0.0108 mg/mL
BI
Y
IA
AC
0.0108 mg 1 mL
a 50 mL
R M
FA
a = 0. 54 mg 1 mL
DE
b 50 mL
CA
b=27 mg 3 mL
TE
c 500 mL
IO
BL
BI
c = 4. 5 g 10 g
% 100
% Taninos = 45 %
Por lo tanto en el fruto maduro de Caesalpinea spinosa, utilizando un extracto etanólico
de 70° G. L. contiene 45% de taninos expresado como acido tánico.
48
ANEXO Nº 7
PROCEDIMIENTOS REALIZADOS PARA LA EXTRACCION DE TANINOS
Fig. 1: Fruto maduro de Caesalpinea spinosa Fig. 2: Selección de frutos
A
IC
M
UI
Q
O
BI
Y
IA
Fig. 3: Peso de los frutos Fig. 4: Secado de las Muestras

AC
R M
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI
Fig. 5: Molienda de las Muestras Fig 6: Tamizaje de las Muestras
49
ANEXO Nº 8
PROCEDIMIENTOS REALIZADOS PARA LA EXTRACCION DE TANINOS
Extracción de Taninos
Fig 7: Peso de muestra Fig 8: Extracción
A
IC
M
UI
Q
O
BI
Y
IA
AC
R M
FA
DE
CA
TE
IO
BL
Fig 9: Filtrado al vacío

BI
50
Fig 10: Rotulación de los extractos etanólicos
50 70 70 70 96
A
IC
M
UI
Q
O
BI
Y
IA
AC
M
Fig 11: Preparación para la cuantificación de Taninos

R
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI
51
Fig 12: Preparación para la cuantificación de Taninos
50 50 70 70 96 96
A
IC
M
UI
Q
O
BI
Y
IA
AC
R M
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI
52

Taninos Grado Etanolico

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Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

PARA OPTAR EL GRADO ACADEMICO

BACHILLER EN FARMACIA Y BIOQUIMICA

AUTORES: BRICEÑO RODRIGUEZ, YANNINA JACKELIN

RIOS GAVIDIA, JHAN CARLO

ASESOR: Dr. SEGUNDO G. RUIZ REYES

SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO

Dando cumplimiento a lo establecido por el reglamento para trabajos de

Es propicia esta oportunidad para manifestar el más sincero reconocimiento a

contribuyen con nuestra formación profesional.

Dejamos a criterio, señores miembros del jurado la calificación del presente

trabajo de investigación científica.

Trujillo, Abril del 2012

Gracias a Nuestro Señor

Dios Todo poderoso, por toda su

brindada, por ser la luz y guía

transitar hacia el logro de mis

A mis padres Oscar y Diana, por

haberme apoyado en todo

momento, por sus consejos,

valores, por los ejemplos de

perseverancia y constancia que

los caracterizan y por la

motivación constante que me ha

permitido ser una persona de

bien, pero más que nada, por su

Gracias a Nuestro Señor

Dios Todo poderoso, por toda su

brindada, por ser la luz y guía

transitar hacia el logro de mis

metas, por ser el amigo

incondicional y que nunca falla.

A mis padres Fernando y Beny,

por haberme apoyado en todo

momento, por sus consejos,

valores, por los ejemplos de

perseverancia y constancia que

los caracterizan y por la

motivación constante que me ha

permitido ser una persona de

bien, pero más que nada,

Nacional de Trujillo y sus

docentes por la exigencia y

elevado nivel académico

Profesor SEGUNDO G. RUIZ

REYES, por su apoyo

desinteresado y sobre todo su

este trabajo, por ser amigo y

II.- MATERIALY MÉTODO 15

La presente investigación sobre el aprovechamiento integral y racional de la

finalidad de determinar el grado etanólico óptimo para la extracción de taninos en el

fruto de caesalpinea spinosa “tara’’ procedente procedente de Coina, distrito de

700nm. De acuerdo a las lecturas obtenidas, el mayor porcentaje de taninos totales

Palabras claves: Taninos, Caesalpinea spinosa, espectrofotometría.

The present research about a rational utility of Tara is the result of a

proceeding "tare" proceeding Coina's, Usquil's district, in Otuzco's Province. For

Keywords: Tannins, Caesalpinea spinosa, spectrophotometry.

diverso en su flora silvestre, considerado entre los 12 países de mayor diversidad

especies y de recursos genéticos como por la variedad de ecosistemas. Nuestro país ha

le atribuye la actividad terapéutica, pero se ha visto que la actividad resultante de la

administración de la planta o droga (parte de la planta con actividad terapéutica)

completa es distinta que si se aplican los componentes o principios activos por

separado, el cual cuyas propiedades terapéuticas aun no son establecidas