FACTORES QUE INFLUYEN EN LAS SEPARACIONES

CROMATOGRÁFICAS

RESUMEN: Se realizo el corrimiento de distintas placas cromatográficas para identificar y determinar los factores
que pueden afectar su corrimiento y por ende una correcta separación o en su caso una correcta determinación y
cuantificación de un analito presente en una muestra dada.

ROJAS MENDOZA CÉSAR 2015500595, SANDOVAL OLVERA CLAUDIA 2016500685 EQUIPO: 3 GRUPO 6FV1
se puden observar dos manchas la de la izquierda
OBJETIVOS: pertenece a sudan, las restantes de rojo de metilo
 analizar la influencia de algunos factores que
afectan las separaciones cromatográficas
INTRODUCCIÓN: 1.-3:7 AcOEt/hexano
La cromatografía en una técnica de separación, Rf: 0.3/3.5=0.0857
identificación y cuantificación de analitos de suma 2.- 1:1 AcOEt/hexano
Rf: 1.2/3.5=0.342 (rojo de metilo)
importancia en distintas áreas relacionadas al análisis de
Rf: 0.828 (sudan)
muestras, industria farmacéutica, industria alimentaria que 3.- AcOEt
ayuda a identificar los componentes de una mezcla Rf: 0.571
compleja.

El fundamento de la cromatografía es que los

componentes de una muestra se dispersan en dos fases
no miscibles entre sí, una conocida como fase estacionaria
y la otra como fase móvil, la elución y corrimiento a
diferentes velocidades de los componentes de la muestra
lleva a cabo la separación de esta.

Esta misma diferencia de velocidades se da

principalmente por dos características: Ilustración 2. De izquierda a derecha; experiencias 2, 3 y
4a; Efecto del volumen de muestra, efecto de la
concentración de muestra y efecto de la naturaleza del
1. polaridad
disolvente respectivamente con el analito rojo de metilo.
2. adsorción

a su vez otra variedad de factores como es la 4.-1:1 AcOEt/hexano; Volumen de muestra.

𝑅𝑓1𝜇𝐿 : 1.8/3.5=0.5142
concentracion de la muestra, la fase móvil, el volumen de
la muestra aplicada inclusive la misma composición de la 𝑅𝑓2𝜇𝐿 :1.8/3.5=0.5142
muestra puede llegar a afectar el correcto corrimiento del 𝑅𝑓4𝜇𝐿 :2.1/3.5=0.6
cromatograma. 5.-Concentración de muestra; AcOEt/hexano 1:1
𝑅𝑓1𝑚𝑔/𝑚𝐿 : 2.4/3.5=0.6857
RESULTADOS: 𝑅𝑓5𝑚𝑔/𝑚𝐿 :2.2/3.5=0.6285
EXPERIMENTO 1: EFECTO DE LA POLARIDAD DEL 𝑅𝑓10𝑚𝑔/𝑚𝐿 :2.3/3.5=0.6571
DISOLVENTE
6.-Disolvente de la muestra; AcOEt/hexano 1:1
𝑅𝑓𝑚𝑒𝑡𝑎𝑛𝑜𝑙 : 1.1/3.5=0.3142
𝑅𝑓𝑎𝑔𝑢𝑎 :1.2/3.5=0.3428

ANÁLISIS DE RESULTADOS:
EXPERIMENTO 1: EFECTO DE LA POLARIDAD DEL
DISOLVENTE
se observó que la afinidad de la muestra-disolvente fue
cambiando, evidencia de esto es el cambio considerable
en los valores de rf obtenidos experimentalmente del rojo
de metilo.
Ilustración 1 De izquierda a derecha, 1.-3:7 AcOEt:
hexano,2.- 1:1 AcOEt:Hexano,3.- AcOEt, en la placa dos

1
 Al ir cambiando la polaridad adicionando hexano la
mancha cambia
de lugar debido a
una disminución
de la polaridad de
la fase móvil.
La
Ilustración 3 estructura de rojo de metilo y sudan 1
estacionaria
utilizada (silica
gel) es polar por lo tanto la mancha del rojo de metilo solo
se desplaza unos milimetros de la línea de aplicación en el
cromatograma 3:7 al predominar en la fase móvil la
presencia de hexano por lo tanto puede deficnirse que a
mayor polaridad de los componentes de una muestra o de
un analito estos se quedaran más retenidos en el
cromatograma en cambio el rf del sudan es mayor por lo
tanto el colorante más polar utilizado en el proceso
experimental es el rojo de metilo, en el Rojo existe un
grupo carboxilo que tiene puentes de hidrogeno con el
acetato de etilo y en el Sudan solo hay un hidroxilo
(ilustración 2). Existen interacciones muestra-fase móvil y
muestra-fase estacionaria por lo tanto si la muestra tiene
mayor afinidad por la fase móvil esta avanzara más que si
se realiza con una fase móvil poco afín a la muestra.
EXPERIMENTO 2: EFECTO DEL VOLUMEN DE LA
MUESTRA.
El Rf de los volúmenes 1 y 2 µL tienen el mismo valor, no
hubo discrepancia con 1 µL de diferencia, en cambio al
incrementar más el volumen a 4 µL el Rf fue mayor, el
volumen influye en los resultados; a mayor volumen de
analito más área del gel de sílice ocupa (la mancha
observada es más grande) y entonces puede eluir con más
facilidad.
EXPERIMENTO 3: EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN
DE LA MUESTRA.
En la CCF ocurre una competencia por los sitios activos
de la fase estacionaria entre la muestra o analito y la fase
móvil. El Rf del rojo de metilo 5 mg/mL y 10 mg/mL tuvieron
un valor menor a la muestra de 1mg/mL, lo que se puede
traducir como; a menor concentración de analito mayor
frente de retención, los sitios activos del gel de sílice están
mayormente ocupados por el rojo de metilo, entonces hay
mayor retención de éste y la distancia recorrida es menor.
Si queremos identificar un analito con una muestra de
referencia, la concentración del analito influirá en los
resultados.
EXPERIENCIA 4: EFECTO DE LA NATURALEZA DEL
DISOLVENTE.
La polaridad es un concepto importante en la CCF y se
tiene que tomar en cuenta para no cometer errores. La
polaridad de la fase estacionaria es de naturaleza polar y
fase
la de la fase móvil es no polar, así podemos decir que
existirá una interacción entre el disolvente del analito y la
fase estacionaria si el disolvente es polar, entonces habrá
más retención; a pesar de eso, el Rf del rojo de metilo en
agua es mayor además de que se forma una asimetría de
banda, quiere decir que hubo parte del analito que tuvo
mayor retención por el disolvente usado. Que el analito en
metanol haya tenido menor Rf se puede deber a que en
realidad fue una mezcla metano-agua.
CONCLUSIONES:
 Dependiendo de las propiedades fisicoquímicas
del compuesto que queremos identificar se evitará
o usará el efecto con los diferentes factores que
alteran el resultado de una cromatografía.
 Los analitos mas polares quedaran mas retenido
en la fase estacionaria.
CUESTIONARIO
1.- Defina brevemente los siguientes términos:
Tipos de interacciones moleculares. Son las formas en
cómo pueden estar en contacto 2 o más moléculas entre
sí. Por ejemplo: interacción dipolo-dipolo, puente de
hidrógeno, dipolo inducido, fuerzas de van Deer Waals.
Resolución. Es la capacidad en una cromatografía de que
dos bandas cromatográficas estén separadas entre sí.
Coeficiente de partición. Razón entre las
concentraciones del analito en las dos fases de la mezcla
formada por dos disolventes inmiscibles en equilibrio.
Asimetría de pico. Cuando se registra la lectura del
detector se forma un pico simétrico si la muestra eluye de
forma individual, entonces se nuestra asimétrica cuando la
separación de la muestra es incompleta, es decir cuando
pasa en el detector con más componentes en ella.
Efecto de matriz. Es cuando los componentes de una
muestra irrumpen en la correcta elución y separación de
las bandas cromatográficas.
2.- Investiga dos aplicaciones de la cromatografía en
capa fina en el área farmacéutica.
Debido a su facilidad de elaboración y rapidez, es utilizada
como un método de análisis de medicamentos previa a su
distribución, así se sabrá si un lote es óptimo para su
distribución o si está contaminado.
3.- Investiga los mecanismos de separación
cromatográfica en capa fina.
Los mecanismos de separación de la CCF son adsorción,
partición, intercambio iónico y por exclusión.
2
REFERENCIAS:

 http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/6.-
CROMATOGRAFIA_26249.pdf
 http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/M.Cro
matogrficos_6700.pdf
 Riu J, Boqué R. “Técnicas de Laboratorio”, 284
(2003) 676-680.
 Dominique Pradeau. “Analisis químicos
farmacéuticos de medicamentos”, Primera
edición, Noriega Editores, Mexico, Pag. 413-435.