PENICILINA

MICROBIOLOGIA INDUSTRIAL
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OBTENCION DE LA PENICILINA

INDICE

1. OBJETIVOS ……………………………………………………………… 2

2. INTRODUCCIÓN………………………………………………………… 2

3. MARCO TEÓRICO……………………………………………………… 3

4. PRODUCCIÓN DE LA PENICILINA…………………………………… 9

5. CONCLUSIONES…………………………………………………………13

6. BIBLIOGRAFIA……………………………………………………………13

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OBTENCION DE LA PENICILINA

1. OBJETIVOS

a. Objetivo general
 Conocer todos los procesos, etapas y condiciones que son necesarias en la
producción de la penicilina.
b. Objetivos específicos
 Analizar los parámetros intrínsecos y extrínsecos implicados en la
producción de penicilina.
 Investigar los tipos de hongos utilizados en la producción de la penicilina
 Estudiar las principales aplicaciones de la penicilina.

2. INTRODUCCIÓN

La penicilina fue el antibiótico que revolucionó el tratamiento de las infecciones

bacterianas como la neumonía, sífilis, tuberculosis y gangrena, y dio origen a la
industria farmacéutica. Su descubrimiento de debe a Alexander Fleming,
bacteriólogo del Hospital St. Mary de Londres, quien estaba interesado en el
desarrollo de métodos de profilaxis y asepsia. En 1920, descubrió la lisozima,
enzima presente en las secreciones corporales y que poseía efectos
antibacterianos, aunque no muy potentes.
Continuando su búsqueda, un día observó una vieja
placa de Petri que había quedado en el estante. En
la placa había cultivado estafilococos (bacterias), los
que inicialmente habían cubierto toda la placa de
cultivo. Pero al cabo de un tiempo la placa se había
contaminado con hongos. Sorprendentemente,
alrededor del hongo se observaba un enorme halo
sin bacterias. Era evidente que el hongo (Penicillum
notatum) producía “algo” capaz de matar a las
bacterias y Fleming llamó a este principio activo
“penicilina notatum”. El 1929 publicó sus
experimentos en el British Journal of Experimental
Pathology, aunque no despertó el interés de la
comunidad científica.

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3. MARCO TEÓRICO

a. ¿Qué es la penicilina?

La penicilina es un antibiótico que encuentra su

origen en un hongo denominado Penicillum
Notatum y el Penicillum chrysogenum. Como
antibiótico, la penicilina mata bacterias e impide
que éstas continúen con su crecimiento, sin
embargo, sólo tiene el poder de combatir a
aquellos microorganismos patógenos que se
encuentran en crecimiento y multiplicación, y no a
esos que aún se encuentran en estado latente.

b. Descubrimiento de la penicilina

En 1875, el naturalista irlandés John Tyndall descubrió el primer antibiótico,

producido por el hongo Penicillum. El descubrimiento pasó inadvertido, ya que en
esa época se ignoraba que las enfermedades infecciosas eran producidas por
bacterias.

La penicilina y sus benéficas propiedades fueron descubiertas accidentalmente

por el afamado bacteriólogo británico Alexander Fleming en el año 1928, el que se
dio cuenta que la presencia de ciertos hongos en sus cultivos de bacterias inhibían
su crecimiento.

Tras finalizar la Primera Guerra Mundial, un

capitán del cuerpo médico llamado Alexander
Fleming regresó a su puesto de doctor en el St.
Mary’s Medical School de la Universidad de
Londres. Fleming estaba interesado en la
búsqueda de sustancias antibacterianas que no
dañaran los tejidos animales. A finales de julio de
1928, antes de irse de vacaciones, Fleming dejó
unas 50 placas inoculadas para que creciera una
bacteria patógena, el estafilococo.

A su regreso, el 3 de septiembre, en el desordenado laboratorio encontró una de

esas placas contaminada con un moho. En lugar de tirar a la basura ese
experimento fallido, la curiosidad de Fleming le impulsó a analizarlo. Observó que,
alrededor del hongo, las colonias de estafilococos más cercanas a él estaban

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muertas, mientras que las más lejanas se

habían reproducido normalmente.
Inmediatamente se percató de que el
hongo, llamado Penicillum notatum,
había liberado alguna sustancia
bactericida, que Fleming bautizó como
penicilina.

Para comprobar lo que ocurrió, Fleming

recogió el moho y lo cultivó en un caldo. Este resultó tener la propiedad de destruir
un gran número de bacterias. Después, para comprobar si era inofensivo para los
animales, le dio de este caldo a unos ratones de laboratorio, que no sufrieron daño
alguno.

c. Inicios de la producción de penicilina

Recién a principios de julio de 1940 dos grandes bacteriólogos, Ernst Boris Chain
y Howard Walter Florey, luego de varios años intentando aislar y purificar la
penicilina y sobreviviendo a los grandes acontecimientos políticos, lograron
producir grandes volúmenes de penicilina que sirvieron para realizar pruebas
decisivas en ratones. Se encontraban, pues, ante un nuevo medicamento. En
1941, luego del suministro de pequeñas dosis del antibiótico, se verificó la enorme
mejoría de un hombre infectado por Staphylococcus Aureus, para quien las
sulfamidas no habían dado resultado (Las sulfamidas o sulfas son antibióticos,
antiparasitarios, es un agente bacteriostático, es decir impide la reproducción de
bacterias, las mata de forma indirecta). Sin embargo al agotarse las reservas de
penicilina y sin tiempo para producir más, el enfermo no logró sobrevivir.

El mundo comenzaba a reclamar por esta droga, las industrias por su parte
estaban tan ocupadas con productos para el
gobierno con fines militares, que la penicilina no
se produjo de forma masiva sino hasta unos 3
años más tarde.

El primer uso masivo de la penicilina se realizó el

6 de junio de 1944 lográndose salvar con ésta
miles de vidas.

d. Clasificación de las penicilinas

i. Naturales

Las penicilinas naturales son aquellas generadas sin intervención biotecnológica.

Las biosintéticas, en cambio, se producen mediante adición de determinados

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compuestos en el medio de cultivo del biorreactor empleado durante su

producción, es decir, sin que tenga lugar un aislamiento y una modificación
química.

 Penicilinas inyectables:
- Penicilina g sódica
- Penicilina g potásica
- Penicilina clemizol
- Penicilina procaina
- Penicilina benzatina
 Penicilinas orales
- Fenoximetilpenicilina
- Fenoxietilpenicilina
- Azidocilina
ii. Semi-sintéticas

Las penicilinas semisintéticas son aquellas generadas mediante el aislamiento de

un intermediario estable durante una producción microbiológica
industrial(fermentación en biorreactores) continuada por la modificación química o
enzimática del compuesto aislado.

 Resistentes a beta-lactamasas

Su uso es principalmente en infecciones por estafilococos productores de β-

lactamasas, como el Staphylococcus aureus.

- Oxacilina
- Cloxacilina
- Dicloxacilina
- Nafcilina
- Metilcilina
- Flucloxacilina
 Amino penicilinas(penicilinas de amplio espectro)

Se administran en casos de infecciones respiratorias de las vías altas por

estreptococos y por cepas de Haemophilus influenzae, infecciones urinarias por
ciertas enterobacterias como Escherichia coli y diversas infecciones generadas
por Streptococcus faecalis, Salmonella spp.

- Amoxicilina
- Ampicilina benzatina
- Metampicilina
- Pivampicilina

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- Bacampicilina
 Antipseudomonas(penicilinas de amplio espectro)
- Carbenicilina
- Ticarcilina
- Mezlocilina
- Piperacilina
e. Aplicaciones de la penicilina

El primer fármaco basado en la penicilina que distribuyó la industria farmacéutica

era muy eficaz para el tratamiento y e incluso la prevención de la sífilis, la
meningitis, el tétanos, la gonorrea, la sepsis infantil, la neumonía y la gangrena,
además de la mayoría de las infecciones que provocan las heridas, y de hecho, en
el año 1944 se producía tanta penicilina como para tratar a todos los heridos
occidentales en las batallas de la Segunda Guerra Mundial. Y hay que decir que
esta sustancia también es de aplicación veterinaria: perros, gatos, conejos, aves,
erizos, hurones, tortugas o serpientes, por ejemplo, pueden ser tratados con ella.
Algunas que podemos mencionar son:

 Penicilina G Sódica. Este medicamento es usado en el tratamiento de

infecciones causadas por bacterias como: coccus aeróbicas Gram
positivas (Streptococcus pneumoniae), algunas bacterias coccus
aeróbicas Gram negativas (Neisseria meningitidis), bacillus aerobios
Gram positivos (Bacillus anthracis), bacterias anaeróbicas Gram
positivas(Peptostreptococcus) y espiroquetas
 Ampicilina. La ampicilina es un antibiótico de amplio espectro similar a
la penicilina usado para tratar ciertas infecciones provocadas por las
bacterias como: (Escherichia coli), (Salmonella typhi) las cuales
tienen características de bacilos Gram negativos.

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A continuación se muestra un cuadro con la aplicación de algunos tipos de

penicilina de acuerdo al tipo de microorganismo.

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f. Hongos que producen la penicilina

i. Penicillium Notatum

Reino: Fungi

Filo: Ascomycota

Familia: Trichocomaceae

Clase: Euascomycetes

Orden: Eurotiales

Género: Penicillium

Especie: Penicillium Notatum

Color: inicialmente blancas pasan a verde azuladas

Tipo de reproducción: sexual y asexual

Descripción micológica:

ii. Penicillium chrysogenum

Reino: Fungi

Filo: Ascomycota

Familia: Trichocomaceae

Clase: Euascomycetes

Orden: Eurotiales

Género: Penicillium

Especie: Penicillium Chrysogenum

Descripción micológica: Hongo filamentoso que presenta conidióforos tabicados

de pared lisa (200-300 µm), ramificado al final, con métulas (de 8-12 µm) y fiálides
en forma de botella (de 7-12 µm), donde nacen conidios lisos, elipsoidales (de 2,5-
4 µm) azules o verde-azulados en cadenas, sin ramificar, con un penacho o pincel
característico. Colonias de crecimiento rápido, vellosas, aterciopeladas, verdosas
con una corona radial ancha y blanca, a 25 °C (no crecen o crecen pobremente a
37 °C) Puede haber gotas de exudado sobre la superficie de la colonia. Reverso
habitualmente amarillento o cremoso. Esporulación abundante. Olor aromático,
especiado o afrutado (a manzana o a piña).

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4.-PRODUCCIÓN DE LA PENICILINA

iii. Método de superficie

Donde el hongo crecía sobre la superficie de una capa de medio de cultivo hecha
en bandejas o botellas.

iv. Método de fermentación sumergida

La penicilina G y la penicilina V son producidas utilizando procesos sumergidos en

fermentadores de 40.000-200.000 litros. Debido a las dificultades en el suministro
de oxígeno no pueden ser empleados tanques mayores. La fermentación de
penicilina es un proceso aeróbico con una velocidad de absorción volumétrica de
oxígeno de 0,4-0,8 mM/l min. La velocidad de aireación requerida está entre 0,5-
1,0 volúmenes de aire (volumen de líquido)-1 min-1 dependiendo de la cepa, del
biorreactor y del tipo de impulsor. Para el mezclado se suelen utilizar varios
impulsores de tipo turbina (120-150 rpm). El rango de temperatura óptima es de
25-27°C.

En un esquema típico de producción de penicilina el inóculo se inicia utilizando

esporas liofilizadas. Debido a la gran variabilidad de las cepas de alta producción,
es necesario el mantenimiento cuidadoso de las cepas. La concentración de
esporas (óptima 5x103/ ml) y la formación de agregados son cruciales para el
rendimiento subsecuente. Si se quiere conseguir una velocidad óptima de
formación de penicilina, los agregados (pellets) no deben crecer como bolas
compactas sino de una forma suelta.

Después de varias etapas de crecimiento está preparado el cultivo de producción.

En la fermentación típica de penicilina existe una fase de crecimiento de unas 40h
con un tiempo de duplicación de 6h, durante la cual se forma la mayor parte de la
masa celular. El suministro de oxígeno es crítico en el cultivo en crecimiento ya
que el aumento de la viscosidad dificulta la transferencia de oxígeno. Después de
la fase de crecimiento, el cultivo llega a la fase real de producción de penicilina.

Debido al aporte de distintos componentes al medio, la fase de producción puede

extenderse hasta 120 -160 h.

 Condiciones de crecimiento.
- Temperatura óptima de crecimiento: 23°C, pero crecen entre 5 y 37°C
- Medios de crecimiento: Además de glucosa y lactosa, Penicillium
chrysogenum puede utilizar una gran variedad de fuentes de carbono y
energía. Alternativamente se han usado sacarosa, almidón, dextrinas,
melaza, aceites vegetales y animales, etanol y glicerol.

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 Etapas preliminares al tanque fermentador

- Lo primero que hacemos es un cultivo patrón del hongo utilizando esporas
liofilizadas.
- Cultivo por estría de P.chrysogenum.
- Cultivo en semillas de cereales.
- Tanque de propagación.

El medio de un cultivo típico alimentado puede variar dependiendo de la cepa, y

generalmente consiste en:

- Líquido de maceración de maíz (4-5% peso seco).

- Una fuente de Nitrógeno adicional, harina de soja, extracto de levadura o
suero.
- Una fuente de carbono, lactosa.
- Varios tampones
- El pH se mantiene constante a 6,5.
- El ácido fenilacético o el fenoxiacético se alimentan continuamente como
precursores (0,5-0,8% del total).

Los procesos con alimentación de glucosa o melazas también tienen éxito. En

estos casos las velocidades de alimentación son de 1.0-2.5 kg*m-3*h-1, con una
concentración de glucosa de 500 kg*m-3.

Aproximadamente el 65% de la fuente de carbono metabolizada se utiliza para el

mantenimiento energético, el 25 % para el crecimiento y solo el 10 % para la
producción de penicilina.

 Etapa microbiológica del proceso

- Caldo de cultivo para la fermentación: se obtiene por infusión acuosa de
maíz, añadiendo de un 2 a un 3% de lactosa, y también se adicionan
compuestos inorgánicos (H,O,N,P,S,K,Mg,N,Fe,Cu,Zn), después de ajustar
el pH entre valores de 4-5, el medio de cultivo se pasa al fermentador.
- El fermentador está equipado con un agitador vertical, con un sistema de
introducción de aire esterilizado por filtración, y con serpentines para
mantener la temperatura deseada.
- El hongo se introduce por medio de condiciones estériles con ayuda de aire
a presión.
- Durante el crecimiento, el medio se esteriliza con vapor a presión y la
temperatura se mantiene entre 23-25°C. El aire estéril permite el
crecimiento del hongo aerobio.

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- Al cabo de unas 50-90 horas, el crecimiento se va haciendo más lento, lo

que indica que el hongo se ha desarrollado por completo
 Etapas posteriores al tanque fermentador

Una vez que ha pasado el tiempo suficiente para que el hongo se haya
desarrollado por completo, se vacía el fermentador de inmediato, y el caldo pasa a
través de un filtro de tambor rotatorio donde se separa el líquido del micelio y de
otras partículas sólidas.

La segunda etapa de la producción industrial de penicilinas es la del proceso de

recuperación. Éste se realiza mediante una serie de filtros en la que se va a
separar la parte líquida del medio de reacción de la sólida, que está constituida por
el micelio del hongo. Para evitar tener pérdidas de penicilina, se lava la parte
sólida que se ha separado para poder arrastrar las pequeñas (pero valiosas)
cantidades de penicilina que haya podido quedarse atrapada en el micelio y así
juntarlo con las aguas del filtrado. Posteriormente la masa se enfría a 5°C porque
la penicilina no es estable a la temperatura ambiente. El caldo filtrado y enfriado se
pasa a un tanque de pera. La separación de la penicilina del caldo se basa en un
sistema de extracción líquido-líquido por medio de solventes adecuados no
miscibles con el agua. Posteriormente, por recirculación se separa el solvente
utilizado.

Al final se tiene una solución acuosa concentrada y neutra de la sal sódica de la

penicilina que se esteriliza por filtración y se evapora al vacío en presencia de
butanol, a medida que el agua se evapora, cristaliza el antibiótico, el butanol que
se queda en el evaporador, contiene una suspensión de cristales de sal sódica,
esto se separa por filtración o por centrifugación. Los cristales se lavan con un
solvente adecuado para eliminar impurezas.

La cristalización se puede realizar desde la fase acuosa si se desea, siendo los

valores críticos las concentraciones de sodio o potasio, la temperatura, la
concentración de penicilina y el pH. En caso de hacerse la cristalización a partir de
un solvente se requiere también un exceso de Na+ o K+, siendo los cristales
recuperados en un filtro rotatorio a vacío. Estos cristales son lavados y presecados
con un solvente volátil que también separa impurezas coloreadas. El secado
definitivo se puede realizar con aire caliente, vacío o calor radiante.

La penicilina cristalina G o V así obtenida puede ser empleada como tal o como
intermediario que es convertido a 6-APA para obtener nuevas penicilinas
semisintéticas, cuidando en todos los casos que los productos deberán tener un
grado farmacéutico.

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Finalmente se secan en cámaras de alto vacío, posteriormente pasa al

departamento de fraccionamiento y envasado.

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Inicio

2-3% Lactosa
Macerado de maiz
Caldo de cultivo
Compuestos inorgánicos:Fe,S,P,etc
pH=4,5 - 5
1ºInocular fermento

T= 23-25ºC
Incubación y crecimiento
t=40 hrs

Alimentación

T= 23-25ºC
Fermentación
t= 120-160hrs

Filtrar al vacío T= 0 - 5ºC

Agua

Micelio Caldo

pH= 2,5 - 3
Extracción continua
T= 0 - 3ºC
Acetato de amilo o butilo

Concentrar(formación
de sales)

NaHCO3

Filtración(esterilizar)

Cristalización

Potasio o Sodio

Lavado

Secado Disolventes volatiles: nitrito de amilo

Embasado

Almacenamiento

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Preparación del inoculo para la fermentación

Inicio

Esporas Liofilizadas
(Penicillium chrysogenum)
Sustrato Agar nutritivo

Caldo de cultivo

Agitar Shaker

Incubar T=28ºC
t=5 dias

5.-CONCLUSIONES

- Los procesos y etapas necesarias para la producción de penicilina son

divididas por etapas las cuales deben ser cuidadosamente controladas para
evitar la contaminación y el desarrollo de productos no deseados, como es
el caso del desarrollo de la penicilina V y G ambos precisan del tipo de
alimentación, ya sea que se la suministre o no.
- Los parámetros intrínsecos y extrínsecos son de gran importancia, como es
el caso del pH que debe der controlado cuando se realiza el medio de
cultivo, un parámetro extrínseco como la temperatura es de vital
importancia en el momento de iniciar la fermentación.
- Los Penicillium del reino Fungi tienen varias especies de los cuales 2
producen penicilina como son: Notatum y Chrysogenum, el primero fue
descubierto por Alexander Fleming y el segundo fue la trascendencia del
primero puesto que se lo mutó para que la producción de penicilina sea
mucho mayor al producido por el Penicillium notatum.
- La penicilina desde su descubrimiento fue muy útil para el tratamiento de
enfermedades como: neumonía, tuberculosis y la diarrea o la

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gastroenteritis, las cuales eran la principal causa de muerte o fallecimiento

antes de su descubrimiento, por lo cual se considera unos de los
descubrimientos más importantes del siglo pasado

6.-BIBLIOGRAFÍA

- https://betalactaminas.wordpress.com/2010/09/04/mecanismo-de-accion-
penicilina/
- http://med.unne.edu.ar/sitio/multimedia/imagenes/ckfinder/files/files/cap30_
betalact.pdf
- http://www.textoscientificos.com/antibioticos/penicilina
- http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0864-
21251998000400008
- https://es.wikipedia.org/wiki/Bacteria_grampositiva
- http://es.slideshare.net/Altajimenez/tabla-de-
bacteriasgrampositivasynegativas
- http://hongos-alergenicos.reviberoammicol.com/files/036.PDF
- https://es.wikipedia.org/wiki/Antibi%C3%B3tico_betalact%C3%A1mico

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FACULTAD DE INGENIERIA

INGENIERIA QUIMICA, AMBIENTAL, ALIMENTOS Y PETROQUIMICA

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INTEGRANTES:

 CONDORI CORDEL CRISTIAN RODRIGO

 CONDORI NINACHOQUE HENRY BRUNO
 MAMANI BLANCO JOSE LUIS
 NINA HUACANI NAIRA
 QUISPE CHUQUIMIA JESUIT ICARO

GRUPO: 8

DOCENTE: ING.LUIS CHAVEZ

FECHA: 5 DE JUNIO DE 2018

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