"Año del Diálogo y la Reconciliación Nacional"

Alumna:

KATHERINE ALVAREZ MENDOZA

CURSO:

BIOQUIMICA

TEMA :

EFECTO DE LA CONCENTRACION DEL SUSTRATO. CALCULO

DEL KM
 EFECTO DE LA CONCENTRACION DEL SUSTRATO
CALCULO DEL KM

OBJETIVO: la presente práctica tiene como objetivo estudiar la influencia de la concentración

del sustrato sobre la velocidad de una reacción enzimática, para lo cual se utilizara la glucosa
oxidasa.

INTRODUCCION

Como bien sabemos la velocidad de reacción es proporcional a la concentración de cada uno

de los reactantes, se puede decir que a mayor concentración mayor velocidad de reacción
pero ¿qué pasa cuando la velocidad llega a su punto máximo? La enzima se hace
independiente del sustrato, este estudio se conoce como la constante de Michaelis Menten
(km). El cual comprobaremos en la siguiente práctica.

El conocimiento de la constante de Michaelis es útil para determinar cuánto sustrato habrá

que agregarse cuando se desea medir una enzima y lo que es más importante, es una guía para
demostrar cuan efectivamente una enzima particular esté funcionando en los tejidos de un
organismo vivo. Ya que es Uno de los parámetros frecuentemente usados en determinación de
enzimas.
1-MATERIALES

 AGUA DESTILADA
 REACTIVO DE TRABAJO
 GLUCOSA OXIDASA

2-PROCEDIMIENTO:

I II III IV
Reactivo de 10 ML 10 ML 10 ML 10ML
trabajo
Glucosa (µl) 10µL 20µL 30µL 40µL
Mezclar ---- ----- ------ -------
Incubar a 37°c x --- ------ ------ ------
10´

*se incuba a 37°c por un tiempo determinado de 10 minutos al fotocolorímetro con una
longitud de onda de 505nm. Dando las siguientes absorbancias como resultado.
 ABS 1 0,29
ABS 2 0,50
ABS 3 0,56
ABS 4 0,59

3- CALCULOS

Concentración de glucosa : F x absbancia del tubo problema

F = (glucosa)/Absorbancia del estándar
REF. F= 200µI

4. RESULTADOS.
KM= ½ VMáx.
KM=0.5 * 0,59
Km=0,295
5-DISCUSIÓN DE RESULTADOS
Como podemos observar el cambio en la coloración del reactivo de
trabajo al ser añadida la glucosa se debe a la reacción de la enzima puesto
a que se encuentra en temperatura óptima, y también medir la afinidad
de la enzima respecto al km.

6-ANEXOS
REACTIVO DE TRABAJO ANTES DE SER AÑADIDA LA GLUCOSA

REACTIVO DE TRABAJO + GLUCOSA OXIDASA