Ao longo do século XIX, dois acontecimentos decisivos • 1839, C. B. Goodyear descobriu transformaram a que a vulcanização lhe conferia borracha natural em elasticidade e resistência e, em um material 1888, J. Dunlop inventou os pneus. estratégico para o crescimento da INTRODUÇÃO indústria automotora;
A diminuição da oferta de borracha natural, • Enquanto a Alemanha tentava proveniente do Brasil e sintetizar a borracha a partir de das plantações inglesas um derivado do petróleo na Malásia, com o correspondente (butadieno), a Inglaterra explorava aumento do preço, as possibilidades de síntese de desencadeou uma moléculas precursoras por corrida à borracha fermentação. sintética. • O químico de origem russa Chaim Weizmann desenvolveu, na Universidade de Manchester (1914), um processo fermentativo no qual a bactéria Clostridium acetobutilycum produz butanol (um PROCESSO precursor do butadieno) e acetona. WEIZMANN • Com o início da Primeira Guerra Mundial, a atenção da Inglaterra desviou-se da borracha para a produção de explosivos e, especialmente, de uma pólvora (cordite) à base de nitrocelulose em cuja preparação se usa acetona como solvente. • Como esta era sintetizada a partir de carbonato de cálcio, uma matéria-prima importada UM MARCO da Alemanha, a produção de acetona por via química se tornou inviável, e a Inglaterra HISTÓRICO NA começou a explorar a via biotecnológica.
• Recrutado pelo Comitê de Munições e tendo cedido a patente do processo ao governo britânico, BIOTECNOLOGIA Weizmann começou a produzir acetona por fermentação microbiana do amido de milho na INDUSTRIAL Nicholson Gin Distillery (Londres). • Contudo, devido à guerra e à falta de alimentos, o suplemento de carboidratos acabou se tornando o fator limitante da produção.
• Em 1916 os britânicos transferiram a produção para uma destilaria em Toronto (Canadá), ao
tempo que era construída outra fábrica na Índia. • Em 1917 começou a funcionar uma fábrica produtora de acetona por fermentação do milho em Indiana (Estados Unidos). Uma vez finalizada a guerra, a acetona e o butanol continuaram a ser utilizados como solventes.
• Em 1948, ao finalizar o mandato conferido pela Liga das Nações à Grã Bretanha e a partilha da Palestina, Weizmann foi escolhido primeiro presidente do Estado de Israel. A via biotecnológica está baseada na transformação da biomassa, um recurso barato e renovável.
Para substituir a via química, devem-se desenvolver processos que
possibilitem a obtenção de produtos, materiais e energia a um custo competitivo e com menor impacto ambiental. Todas estas condições se encontram satisfeitas na obtenção de numerosas moléculas de interesse industrial a partir de milho, de óleos vegetais ou de madeira
BIOTECNOLOGIA INDUSTRIAL • Se fundamenta na microbiologia, nas fermentações e na biocatálise • Melhoramento das linhagens microbianas e das variedades vegetais. • A produção da vitamina B2 (BASF) e do antibiótico BIOTECNOLOGIA cefalexina (DSM Life Sciences Products) são dois INDUSTRIAL exemplos bem sucedidos da substituição da síntese química pela ação microbiana. • Gera vários metabólitos intermediários entre o substrato inicial e o produto final, • um agente biológico será capaz de realizar diretamente a sequência completa de reações. As enzimas levam a determinadas reações químicas especificas.
INTER-RELAÇÕES As enzimas podem ser isoladas
ENTRE MICRORGANISMOS E ENZIMAS A biotecnologia enzimática pode ser manipulada em biorreatores apropriados.
Por outro lado as células microbianas quando encontram-se imobilizadas
em um suporte sólido, atuam como catalizadores que levam a reações químicas concretas, da mesma maneira que as enzimas isoladas. • Características gerais que microrganismos e meios de cultura devem apresentar, para utiliza-los em processos de larga escala, ou seja, em biorreatores de grande volume. MICRORGANISMOS E MEIOS DE • O sucesso de um processo biotecnológico depende da CULTURA PARA combinação de quatro elementos/operações importantes UTILIZAÇÃO • a) Microrganismo. INDUSTRIAL • b) Meio de cultura. • c) Condução do processo. • d) Recuperação do produto. 1) Ser capaz de produzir o produto desejável e com cinética rápida.
2) Converter altas concentrações de produto.
3) Produzir poucos subprodutos.
ESCOLHA DO 4) Ter a possibilidade de ser reutilizável e de uma forma barata. MELHOR 5) Poder ser estocado em condições não extremas. MICRORGANISMO 6) Trabalhar em condições de fácil condução. PARA O PROCESSO BIOTECNOLÓGICO 7) Suportar situações de estresse.
8) Não ser patogênico.
9) Não exigir meios de culturas dispendiosos.
1) Isolamento a partir de fontes naturais.
2) Compra em coleções de culturas.
OBTENÇÃO DO MICRORGANISMOS 3) Obtenção de mutantes naturais.
4) Obtenção de mutantes induzidos por métodos
convencionais.
5) Obtenção de microrganismos recombinantes
por técnicas de engenharia genética. CARACTERÍSTICAS • 1) Atender as necessidades nutricionais do DO MEIO DE microrganismo. CULTURA • 2) Ser o mais barato possível. • 3) Não provocar problemas de recuperação do produto. • 4) Auxiliar no controle do processo. • 5) Os componentes devem permitir algum tempo de armazenagem, a fim de estarem disponíveis todo o tempo. • 6) Ter composição razoavelmente fixa. • 7) Não causar dificuldades no tratamento do efluente. PROCESSO FERMENTATIVO EM BIORREATOR INDUSTRIAL
• Adaptação do microrganismos • Fermentação em larga escala DIVERSIDADE DE PRODUTOS CONSIDERAÇÕES
As características metabólicas das linhagens • sendo incapazes de sobreviver fora do laboratório ou, de industriais estão alteradas de modo a que elas cresçam em condições artificiais muito estritas competir com os microrganismos do ambiente.
A percepção pública nutre uma atitude neutra • Em parte porque os produtos são utilizados como insumos ou favorável em relação à biotecnologia industrial. para outras indústrias, o que lhes confere pouca visibilidade.
E também porque, ao utilizar matérias-primas
renováveis e desenvolver processos menos • Não é por acaso que a biotecnologia industrial é denominada poluentes com menor gasto de energia, as biotecnologias ajudam a atenuar a imagem “biotecnologia branca”. poluidora da indústria química. METABOLITOS PRIMÁRIOS E SECUNDÁRIOS ÁCIDOS ORGÂNICOS OS ÁCIDOS ORGÂNICOS SÃO SUBSTÂNCIAS NÃO NITROGENADAS QUE TEM PELO MENOS UM RADICAL CARBOXÍLICO. ELES PODEM TER ORIGEM EXÓGENA (DIETAS, BACTÉRIAS INTESTINAIS) OU SE FORMAR A PARTIR DE QUASE TODAS AS VIAS DO METABOLISMO INTERMEDIÁRIO ÁCIDO CÍTRICO
• A produção de ácido cítrico (4.0 x 105
toneladas/ano) depende quase exclusivamente do cultivo do fungo filamentoso Aspergillus niger • Ocorre em processos fermentativos de diversos tipos (meio sólido e cultura em superfície; meio líquido e cultura submersa). • O ácido cítrico é utilizado na indústria de alimentos como aditivo (acidulante e antioxidante), FERMENTAÇÃO CITRICA FERMENTAÇÃO CÍTRICA PROCESSO FERMENTATIVO PROCESSO KOJI
• Em bandeijas • Tempo: 5 a 8 dias PROCESSO EM SUPERFÍCIE PROCESSO SUBMERSO O ácido acético é um precursor de várias moléculas intermediárias como o anidrido acético e os acetatos éster, e de produtos como o acetato de celulose, o celofane, etc.
Se usa como solvente na produção de plásticos, borracha, gomas,
resinas e óleos voláteis.
ÁCIDO Importante insumo para as indústrias de alimentos e de fármacos ACÉTICO e a cosmética
Obtido por fermentação bacteriana (Lactobacillus) ou fúngica
(Rhizopus oryzae) . Também é utilizado como monômero na síntese de ácido poliláctico (PLA), um polímero biodegradável. A produção industrial de aminoácidos se destina à nutrição humana (66%) e ao enriquecimento de rações animais (33%) e, em grau bem menor, às indústrias AMINOÁCIDO farmacêuticas e cosméticas (1%).
O método produtivo mais antigo é a
extração por hidrólise de proteínas (soja, cabelos), que tem como limitação principal a disponibilidade da matéria- prima. Síntese química MÉTODOS DE OBTENÇÃO Fermentação
Biocatálise A síntese química apresenta o inconveniente de gerar misturas das duas formas isoméricas (acil- SÍNTESE D e acil-L), QUÍMICA
Representadas habitualmente como tipo “mão direita" e tipo "mão esquerda". Como os organismos vivos só assimilam L- aminoácidos, estes devem ser separados por biocatálise das misturas racêmicas
BIOCATÁLISE A imobilização de enzimas estéreo específicas nos biorreatores facilita a produção industrial, reduzindo os custos de maneira significativa.
A separação é desnecessária no caso da glicina,
que não apresenta ambas as formas, e da DL- metionina, já que os seres vivos convertem a forma D em L. • Conveniente para a produção de vários aminoácidos. • O agente biológico Corynebacterium glutamicum produz ácido glutâmico (1,1 milhão de toneladas/ano) • usado na cozinha oriental como flavorizante (glutamato monossódico), para realçar o sabor dos alimentos. • O ácido L-aspártico e a L-fenilalanina são obtidos por imobilização conjunta de Escherichia coli e Pseudomonas dacunhae em uma coluna de fermentação, ou por uma bactéria geneticamente modificada (Escherichia coli). FERMENTAÇÃO • Ambos são os componentes do adoçante não calórico Aspartame® (15.000 toneladas/ano). • Função de aditivo em alimentos • L-cisteína, 3.000 toneladas/ano • Complemento nutricional em rações animais • L-treonina, 50.000 toneladas/ano; L-lisina 550.000 toneladas/ano • A indústria farmacêutica absorve 1.000 toneladas/ano de L-arginina e 500 toneladas/ano de L-triptófano, de L-valina e de L-leucina. Os polissacarídeos de origem microbiana substituem parcialmente os espessantes e gelificantes extraídos das algas marinhas.
A goma xantana (20.000 toneladas/ano), um produto de fermentação da
bactéria Xanthomonas campestris, POLISSACARÍDEOS Composição de molhos prontos, pudins, geleias, sorvetes, dentifrícios etc. Suas propriedades espessantes são também utilizadas na recuperação do petróleo.
As dextranas (200 toneladas/ano) são obtidas por via fermentativa a
partir de diversos microrganismos.
As de alto peso molecular se empregam como espessantes na indústria
de alimentos, na preparação de filmes protetores de sementes (indústria agrícola) e na composição das emulsões fotográficas.
As de baixo peso molecular se usam como plasma sanguíneo artificial,
para melhorar o fluxo sanguíneo em casos de traumatismos e cirurgias. • Apesar da maior parte das vitaminas serem obtidas industrialmente por via sintética ou extrativa • A via fermentativa é vantajosa nos casos da riboflavina (vitamina B2) e do ácido ascórbico (vitamina C).
VITAMINAS • Ainda é a única possível para a cianocobalamina (vitamina
B12), uma molécula complexa que, naturalmente, não é sintetizada por animais ou por vegetais. • Um precursor da vitamina A, o β-caroteno, é sintetizado pela alga Dunaliella bardawil, que consegue se desenvolver na água salobra em grandes tanques ao ar livre, em uma região desértica perto da costa do Mar Vermelho (Israel) • Do ponto de vista econômico, não vale a pena elaborar ou redimensionar esses parâmetros para cada microrganismo que produza uma enzima interessante
• Mais proveitosa a transferência da sequência codificadora dessa enzima a um dos
microrganismos industriais já bem conhecidos • bactérias Escherichia coli, Streptomyces ou Bacillus subtilis; fungos Aspergillus
INDUSTRIA DE oryzae, Saccharomyces cerevisiae ou Kluyveromyces
• Mais de 60% da produção industrial atual de enzimas provém da biotecnologia
ENZIMAS moderna.
• O custo de uma enzima também depende das dificuldades técnicas encontradas nas etapas posteriores à fermentação (separação, purificação).
• Estima-se que o mercado global de enzimas poderá alcançar, em 2013, um valor
aproximado de US$ 7 bilhões/ano. • As enzimas mais baratas são as extracelulares • as que são secretadas para fora da célula como, por exemplo, as hidrolases (amilases, proteases e celulases).
• As mais caras são as enzimas intracelulares
• por serem utilizadas como fármacos ou reagentes em CUSTO testes de diagnóstico, requerem um grau de pureza ENZIMÁTICO maior.
• As enzimas são insumos para outras indústrias,
especialmente as de alimentos e bebidas, rações, detergentes, analíticas e farmacêuticas. Atualmente, o maior produtor é Novozyme, uma empresa pertencente ao grupo Novo (Dinamarca), que responde por 47% do mercado.
MERCADO DE A empresa mantém em funcionamento vários
fermentadores de 80.000 l, ENZIMAS
Contabiliza mais de 4.000 patentes e dedica a
quase totalidade de seu orçamento de pesquisa e desenvolvimento à otimização de microrganismos, produtos enzimáticos e tecnologia Algumas enzimas podem ser extraídas facilmente dos tecidos ou dos órgãos de seres vivos:
Vegetal:
• As amilases do malte da cevada
ENZIMAS • A papaína da papaia • A ficina do figo • A bromelina do látex do abacaxi
Animal
• Do estômago de suínos se separa a pepsina
• Do pâncreas dos mesmos se obtém a pancreatina, que é uma mistura de amilases, proteases e lipases. • Do quarto estômago de bezerros se separa a renina • Do fígado ou do sangue de bovinos se separa a catalase A extração de enzimas de origem vegetal ou animal está sujeita à disponibilidade de terra e às flutuações das colheitas ou do abate.
As de origem microbiana que, por serem obtidas mediante processos
fermentativos em grande escala, garantem uma produção regular de ENZIMAS DE qualidade constante.
ORIGEM Mesmo cumprindo uma função idêntica, duas enzimas produzidas por MICROBIANAS microrganismos diferentes podem apresentar propriedades dessemelhantes.
Por exemplo, a lactase (β-galactosidase), uma enzima que hidrolisa a
lactose, está presente em bactérias, leveduras e fungos. 400C, 370C e 55-600C (temperatura) 3-4, 7,2 e 6,6 (pH). Considerando que a biodiversidade microbiana ainda começa a ser desvendada, assim como a arte de alterar suas vias metabólicas, existem grandes chances de se encontrar enzimas com propriedades diferentes que possibilitem o FERMENTAÇÃO desenho de processos industriais inovadores. MICROBIANA A otimização de um processo industrial contempla o custo da matéria-prima, o tipo de fermentação (submersa ou em meio semissólido) e os controles necessários para o bom desenvolvimento do processo, como, por exemplo, o pH e a temperatura. • A denominação de biopolímeros abrange dois tipos de BIOPOLÍMEROS polímeros:
E • O primeiro inclui os que são sintetizados pelos seres
vivos, como a celulose, o amido e os óleos vegetais BIOPLÁSTICOS • O segundo, os que resultam da polimerização de uma molécula básica, como o ácido láctico, proveniente de uma fonte renovável Um dos bioplásticos mais versáteis é o polilactato (PLA), um poliéster obtido por polimerização do ácido láctico resultante da fermentação de milho.
BIOPLÁSTICOS Utiliza-se como recheio de almofadas e
edredons (NatureWorks), revestimento de filmes e de papel (BASF), e material de embalagens descartáveis (Ingeo) por diversas empresas (Coca-Cola, McDonald’s).
Também está sendo aproveitado na indústria
automotora (Hyundai) e eletrônica (Samsung). POLÍMEROS • Os poli-hidroxialcanoatos (PHAs) e o poli-hidroxibutirato (PHB) SINTETIZADOS • Mercado de embalagens da indústria de alimentos. POR • PHB por ser biocompatível, encontrou importantes aplicações na MICRORGANISMOS área médica (Biopol). • No interior de São Paulo, uma usina piloto relacionada com empresas do setor sucroalcooleiro (Biagi, Balbo) já está produzindo PHB por fermentação bacteriana do açúcar de cana (Biocycle). • A transferência dos genes codificadores de PHA (Ralstonia eutropha) e de PHB (Alcaligenes eutropus) a microrganismos e plantas (canola) representa um avanço das pesquisas. • Constituído por polímeros biodegradáveis sintetizados a partir de uma molécula de origem petroquímica, como alguns poliésteres sintéticos. BIOPLÁSTICOS • A origem “fonte renovável” como a propriedade “biodegradabilidade”, basta para definir um bioplástico.
• A indústria dispõe atualmente de aproximadamente trinta moléculas
essenciais para a construção de polímeros
• São ácidos carboxílicos, etanol, aminoácidos, triglicerídeos, furfural, sorbitol,
glicerol, etc.
• Essas moléculas, de origem biológica, possibilitam tanto a obtenção de
plásticos inovadores biodegradáveis como a de bioplásticos convencionais, não biodegradáveis e semelhantes aos de origem petroquímica.
• Entre estes: as resinas de poliuretano sintetizadas a partir de óleo de soja, o
poliéster de origem bacteriano Sorona 3GT (DuPont, Genencor) de amplo uso na indústria têxtil, do PVC ou “polietileno verde” (Braskem, Tetrapak), que é um polímero do etileno obtido a partir do etanol de cana. • A adição de algumas substâncias nos alimentos tem diversos ADITIVOS objetivos: • conservá-los por mais tempo (antibióticos, ácido acético, ácido láctico, etanol) • complementar seu valor nutritivo (vitaminas, aminoácidos) • mudar a consistência (gomas e enzimas). • melhorar a cor e o flavor, o aroma, o sabor e a textura. • Ácidos cítrico e láctico
PRINCIPAIS • Corantes naturais (β-caroteno, riboflavina)
ADITIVOS • Flavorizantes (monoglutamato de sódio, extrato de levedura,
UTILIZADOS aromas)
PELA • Gomas espessantes (xantana, gelana, dextrana)
INDÚSTRIA DE • Antioxidantes (β-caroteno) ALIMENTOS • Vitaminas (B2, B12, Biotina) • Enzimas e antibióticos. OBTENÇÃO DE ADITIVOS
Alguns desses aditivos são obtidos em culturas de células vegetais.
Outros têm uma origem microbiana, sendo utilizadas linhagens de microrganismos geneticamente modificados para sua produção industrial.
A pectinase que, junto com celulases e amilases, facilita a extração do suco de frutas retido na pectina, sendo também utilizada na clarificação do suco.
Antibióticos usados para conservar alimentos, citaremos a Nisina (INS234), que inibe o crescimento de bactérias Gram-positivas em queijos, salsichas e produtos cozidos de origem avícola
Natamicina ou Pimaricina (INS235), utilizada como conservante na superfície de produtos cárneos embutidos. ADOÇANTE XAROPE DE GLICOSE • A hidrólise ácida ou enzimática (α-amilase e glicoamilase) do amido do milho produz xaropes de maltose e de glicose.
• O xarope de glicose ou de frutose, substituem o
açúcar na indústria de alimentos.
• Uma vez refinados e concentrados, esses xaropes
podem ser usados como ingredientes na elaboração de produtos alimentícios (biscoitos, sorvetes etc.). XAROPE DE DEXTROSE
• Ação enzimática da lactase sobre o soro das
indústrias de laticínios origina um xarope de dextrose (glicose, galactose). XILITOL
O XILITOL PARA DIMINUIR A INCIDÊNCIA DE CÁRIES DENTÁRIAS
XAROPE DE FRUTOSE
• 1 Aumenta a produção de ácido úrico, o qual, em excesso,
pode causar gota, pedras nos rins e precipitar ou agravar a hipertensão.
2. Causa resistência à leptina. hormônio que controla o
apetite e o metabolismo para manter um peso normal..
3. Contribui para a hipertensão por inibição de uma enzima
chamada sintase endotelial de óxido nítrico, a qual está localizada na parede dos vasos sanguíneos e é essencial para a produção do vasodilatador, óxido nítrico.
4. O excesso de frutose danifica o fígado e leva à resistência à
insulina no fígado, bem como doença do fígado gorduroso. A PRODUÇÃO DO XAROPE DE FRUTOSE
• A hidrólise e a sacarificação do amido produzem glicose, esta é a transferência em frutose pela enzima glicose- isomerase, imobilizada em biorreator ASPARTAME
• O aspartame (ácido aspártico e fenilalanina) é consumido para limitar a ingestão de calorias INDUSTRIA DO ADOÇANTE GLICOSE
O poder adoçante da O resultado é um xarope Com o desenvolvimento
A indústria de refrigerantes O processo começou a ser glicose é menor que o da (42% de frutose, 52% de das técnicas de imobilização substitui a sacarose pelo estudado na década de frutose, mas a glicose) que pode ser enzimática, o processo xarope de frutose com uma 1960, sendo o custo da transformação enzimática concentrado por métodos tornou-se econômico, concentração de 55%, glicose-isomerase o (invertase ou glicose cromatográficos até possibilitando o uso do obtido mediante a mistura principal fator limitante da isomerase) transforma uma alcançar um teor de 90% de amido proveniente de dos dois tipos. tecnologia. em outra. frutose. cereais excedentes. OS ALIMENTOS BIOFORTIFICADOS
O homem tenta A estratégia tradicional escolher os alimentos consiste em em função da satisfação suplementar os sensorial, emocional e alimentos afetiva que espera industrializados com os obter, mas o peso das nutrientes considerações correspondentes. econômicas é decisivo.
A falta total de Segundo a Organização alimentos é hoje um Mundial da Saúde, o fenômeno menos ferro, o zinco e a frequente que a vitamina A são as desnutrição devida à principais deficiências carência de nutricionais dos países determinados em desenvolvimento. nutrientes na dieta. O melhoramento genético parece ser a estratégia mais promissora para aumentar as concentrações de nutrientes nas culturas de base (arroz, milho, trigo, feijão, mandioca e batata doce). MELHORAMENTO A engenharia genética pareceria, a priori, a via GENÉTICO X mais rápida para fortificar os alimentos. NUTRIENTES
Porém, os empecilhos legais encontrados pelo
arroz com pró-vitamina A (Golden Rice), que conta com mais de 10 anos pronto sem ter sido comercializado, desestimulam a escolha dessa tecnologia. BIOFORTIFICAÇÃO DOS CULTIVOS
Nos Bancos de Germoplasma do CGIAR já foram encontradas variedades de feijão com maior conteúdo de ferro, de arroz e trigo com altos níveis de zinco, de mandioca, milho e batata-doce ricos em vitamina A etc.
As novas técnicas de análise genética de traços quantitativos e, especialmente, a seleção assistida por marcadores moleculares facilitam o melhoramento genético das culturas de base.
A biofortificação de alimentos é um programa internacional desenvolvido por HarvestPlus (CGIAR), um
consórcio de instituições de pesquisa e agências de desenvolvimento que age especialmente na América Latina e na África. No Brasil, a Embrapa Agroindústria de alimentos participa do programa HarvestPlus, tendo já desenvolvido variedades biofortificadas de feijão e milho.
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