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Subproceso clave: Enseñanza-Aprendizaje

Estancias y Estadías
Formato: Guía de Elaboración del Proyecto
de Estancia y Estadía
Fecha de aprobación: Enero 2018

UNIVERSIDAD POLITÉCNICA DE
TLAXCALA

INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA

“AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS
EN SUELOS CONTAMINADOS CON
HIDROCARBUROS”

Pasante de Estadía
DR. FAVIAN SALVADOR SANDOVAL SOSA
drfsss@gmail.com

Asesor interno
DR. JORGE CRUZ HUERTA
Jorge.cruz@uptlax.edu.mx

Asesor externo
DR. JORGE GARCÍA DAVILA
Jorge.garcia@uptlax.edu.mx

20 / AGOSTO / 2018

Para uso de la Universidad Politécnica de Tlaxcala mediante su Sistema de Gestión de la Calidad


Subproceso clave: Enseñanza-Aprendizaje
Estancias y Estadías
Formato: Guía de Elaboración del Proyecto
de Estancia y Estadía
Fecha de aprobación: Enero 2018

Resumen
La contaminación por hidrocarburos a los suelos de cultivo podría chocar de manera
importante en la salud humana a mediano plazo, se realiza muestreo de suelo
aleatoriamente mediante la NOM 138 SEMARNAT/SS1-2012 y sometiéndolas a pruebas
atmosféricas, cromatográficas, de temperatura y tiempo para el desarrollo de
colonias fúngicas y bacterianas obteniendo los microorganismos resistentes al
elemento agresor. Al termino de esta investigación se determinaron las distintas
concentraciones que derivan en el cambio de la arquitectura genética y física de la
flora de la región afectada.

Planteamiento del problema


El derrame en la región denominada “La Soledad” en Calpulalpan Tlaxcala debido a
la ordeña clandestina de diésel sin refinar se filtra al subsuelo de la región productora
de maíz, papa y alfalfa, si no se frena en un futuro próximo podría dejar de ser útil y
además nociva para la salud. Si la producción agrícola se llegase a adaptar al medio
de presión agresor(hidrocarburos) y fuese consumido como alimento humano o
animal podría causar enfermedades probablemente desconocidas afectando a la
genética humana además estarían provocando que estas tierras no sean útiles,
probablemente se han creado depósitos subterráneos de hidrocarburos debido a la
formación rocosa y arcillosa creando un lecho contenedor de lenta filtración de la
zona, se observa que el fenómeno es abundante entre un punto y otro por lo cual una
excavación para determinarla seria económicamente excesiva, la biorremediación
no solo consiste en frenar los siniestros si no en inocular las zonas afectadas con semillas
genéticamente modificadas resistentes al medio de presión (hidrocarburos) para
eventualmente liberar del contaminante a la zona.

Justificación
La acumulación de hidrocarburo subterránea ha despertado la duda sobre la
afectación sobre las mismas propiedades de la tierra de cultivo agrícola y de
transformación somática y probablemente germinal, podrían deformar la estructura
química y morfológica sobre la misma flora y como repercutiría en la salud humana si

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Formato: Guía de Elaboración del Proyecto
de Estancia y Estadía
Fecha de aprobación: Enero 2018

se consumiera ignorando las concentraciones de los derrames, esta investigación


intenta conocer las condiciones y características de la zona así como sus
concentraciones y que elementos son resistentes y los que degradan la calidad del
suelo para cultivo y si hay una solución noble o cuanto tiempo de vida útil tiene el
mismo antes de ser foco importante de cultivos contaminados. Cabe mencionar que
este estudio realizado cuenta con antecedentes de concentraciones conocidas
antes de los derrames por la empresa FERTILAB DE MEXICO y que en el documento de
estancia II fue mostrado y que avala esta segunda parte de la investigación.

Objetivo general
Desarrollar y describir las fases en las que el estudio detalla a microorganismos
presentes en las tierras contaminadas por los hidrocarburos y una posible solución
mediante biorremediación, tomando en cuenta un caso real de suelo contaminado.

Objetivos específicos
 Detectar e identificar microorganismos capaces de soportar la presencia de
hidrocarburos en los suelos contaminados con hidrocarburos de la zona “La
Soledad” en el municipio de Calpulalpan Tlaxcala.
 Definir la estrategia de biorremediacion aplicable acorde a las condiciones
actuales de concentraciones de hidrocarburo, esto provocado por los
derrames en la zona.
 Aplicar propuesta de posible bioremediación a base de flora genéticamente
modificada para la reducción de agentes contaminantes.

Análisis del contexto


En la Universidad Politécnica de Tlaxcala se realizo la investigación en los laboratorios
certificados de Ingeniería en Biotecnología los cuales cuentan con laboratorios en el
área de biología, microbiología, ambiente, alimentos y genética así como
biorreactores, cromatógrafo de gases y equipo de punta para desarrollar cualquier
tipo de investigación del orden que en esta ocasión nos ocupa, se cuenta con un
equipo humano de mas de 100 investigadores de tiempo completo en el cual se

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provee servicios a empresas paraestatales en materia de estudio de aguas residuales


y trasnacionales en determinación de contaminantes y resistencia de materiales
derivados del petróleo, cuenta con certificaciones que hacen que AUDI,
VOLKSWAGEN, JOHNSON&CONTROLS, PEMEX por nombrar algunas, cuentan con
certificación en calidad ISO-9001- 2015 y continúan con un crecimiento que innova
cada día su campo de investigación.

Desarrollo
La primera parte de esta investigación “Aislamiento de microorganismos en suelos
contaminados con hidrocarburos” se celebro en el C.I.G. y A. (Centro de Investigación
Genética y Ambiente de la Universidad Autónoma de Tlaxcala), esta segunda parte
de la investigación se realiza en la Universidad Politécnica de Tlaxcala. A
continuación, se detalla el desarrollo que corresponde a el aislamiento y conservación
de las muestras tomadas.
Se recolecta muestras de los mismos puntos georeferenciados. (Figura 1)

Figura 1Muestreo supervisado y vigilado por la SEDENA

Suspensión con DH20. Retirar sobrenadante……..Dilución 1:5 - 1:10


Figura 2. Preparación de muestras

Figura 3. Preparación de medios.

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En medio PDA y Bacteriológico se inoculó los sobrenadantes obtenidos de las muestras


aleatorias y se obtuvieron mejores resultados de crecimiento de las 5 muestras en
medio PDA (Figura 4)

Muestra 0. Muestra I. Muestra II. Muestra III. Muestra IV

Figura 4. Resultado de 8 días en incubadora a 30º C

Se resembraron los microorganismos de hallazgo de las muestras I, II y III, las muestras


0 y IV se despreciaron debido a que la formación en ellas fue mas contaminada entre
las colonias diversas y era posible contaminar en una separación y resiembra.
El medio usado fue PDA. (Figura 5)

Muestra I. Muestra II. Muestra III


Figura 5. Resultado de resiembra

Se realiza tinción de Gram para identificar crecimiento y población mediante


microscopio, los hallazgos de las muestras II y III, esto debido a que en la muestra I no
hubo crecimiento suficiente de colonias de hongos y levaduras. (Figura 6)

Muestra II. Muestra III


figura 6. Imágenes de microscopio

Muestra I: Esporas de hongos abundantes


Muestra II: Levaduras abundantes y gemación abundante

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Los géneros fúngicos mas abundantes hallados fueron: Aspergillus (principalmente),


Acremonium, Beauveria, Fusarium, Mucor y Penicillium.

Figura 7. Probable teoría de los diferentes hallazgos de hidrocarburo presente en las


muestras en los distintos puntos (distancia contra concentración).

La zona de derrame mostró solo una mancha superficial pero como es una zona de
transito vehicular hubo menor filtración debido a la dureza de la corteza expuesta sin
embargo a medida que el muestreo se aleja del punto 0 la concentración de
hidrocarburo descendió entre los puntos II y III. En los puntos I y IV hubo mayor
presencia de éste lo cual nos lleva a la teoría de la Figura 7 donde la probabilidad es
que el subsuelo esta constituido por formaciones rocosas naturales de la montaña con
distintas profundidades bajo los terrenos de cultivo lo cual a menor profundidad de el
terreno de cultivo existe mayor concentración de hidrocarburo a lo cual en los
hallazgos de microorganismos fueron mas pobres como son los puntos 0, y IV, sin
embargo a mayor profundidad de la capa rocosa o lecho cabe la probabilidad de
que el hidrocarburo tenga una filtración mas subterránea y comprometa en menor
medida la tierra de labor y existe aumento en los microorganismos los cuales en la
tabla 1 se describen.

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Resultados y conclusión
RESULTADOS
Tabla 1. Aumento de microorganismos ene l suelo
MUESTRA HALLAZGO IMPORTANCIA
cocos gram (+) ++
diplococos gram (+) +
PUNTO I bacilos gram (-) +
diplococos gram (-) Escasos
cocos y diplococos Rara unión
PUNTO II Probables esporas de hongos Abundantes
PUNTO III Levaduras unicelulares con gemación Abundantes

Conclusión

La contaminación de los suelos por productos, en este caso los hidrocarburos pueden
ser tratados y recuperados por medio de la biorremediacion basada en la
modificación genética de la flora.
En los hallazgos se encontraron microorganismos capaces de crecer en
medios contaminados con hidrocarburos y en la segunda etapa se harán
pruebas de tolerancia a hidrocarburos para fijar limites permisibles

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