PRÁCTICA Nº 4

MEDIOS DE CULTIVO
MÉTODOS DE SIEMBRA Y AISLAMIENTO BACTERIANO

1. ¿Qué precauciones se deben tener antes de sembrar en medios para anaerobios?

 Practicar la siembra en medios de cultivo previamente esterilizado y adecuados
para la bacteria que se desea aislar.
 Emplear instrumentos estériles.
 No contaminar ni destruir los microorganismos.
 Depositar asépticamente microorganismos en un medio de cultivo.
 Esterilizar los instrumentos implicados inmediatamente después de cada
operación.
 Los cultivos de bacterias anaerobias son de desarrollo lento, por lo tanto deben
incubarse 48 hrs antes de la primera observación

 Realizar la observación microscópica previa coloración de Gram

2. ¿Qué medios de cultivo se utilizan cuando se sospecha de: ?

- Vibrio cholerae: Se recomienda el agua peptonada alcalina (APW) como
caldo de enriquecimiento, y el agar con tiosulfato, citrato, sales biliares y
sacarosa (TCBS) como el medio de agar selectivo.
- Clostridium botulinum: Medio carne cocida (CMM) y Caldo tripticasa
peptona glucosa extracto de levadura (TPGY) Medio selectivo. Agar para
esporulación de Eklund.
- Brucella spp: Agar sangre, Agar Brucella, Agar chocolate, Agar Brucella.
- Campylobacter jejuni: BD Campylobacter Agar (Butzler), BD
Campylobacter Agar (Skirrow)
1. ¿Por qué el agar Nutritivo es un medio de uso general para el cultivo
bacteriano? ¿Qué sustancia se le puede agregar para hacerlo enriquecido para
bacterias Gram positivas?

Por las características de sus componentes es un medio usado para el cultivo de

microorganismos poco exigentes en sus requerimientos nutricionales. No contiene
inhibidores del desarrollo bacteriano. La pluripeptona es la fuente de carbono y
nitrógeno para el desarrollo bacteriano. El agregado de cloruro de sodio permite el
enriquecimiento con sangre de carnero u otras sustancias para facilitar el cultivo de
microorganismos exigentes.

Para un crecimiento de bacterias gram positivas además de las sustancias nutritivas

normales se incorporan una serie de factores indispensables para el crecimiento de
estos microorganismos, por ejemplo, se hace por adición de sangre u otros
productos biológicos (suero, leche, huevo, entre otros.).

Con la excepción de sales biliares y cristal violeta, que inhiben el crecimiento de las
bacterias gram positivas.

2. ¿Cuál es la importancia de un cultivo puro?

- Un cultivo puro es aquel en el que todos los microorganismos provienen de una

sola célula por lo cual nos va a permitir estudiarlos, caracterizarlos e
identificarlos detalladamente.
- Facilitar el crecimiento y el aislamiento de las bacterias presentes en una
muestra clínica.
- Determinar qué bacterias entre las que se desarrollan tienen más probabilidades
de ser las causantes de la infección y cuáles son sus posibles contaminantes o
colonizadores.
- Se utiliza para identificar y trabajar con organismos que son causantes de
infecciones, fermentaciones, fijación de nitrógeno y otros.
 - Hace uso de La técnica de aislamiento que consiste en sembrar en un medio de
cultivo sólido en placa de tal manera que los microorganismos generen colonias
separadas visualizando su forma, tamaño y color característico.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
 Murray, Patrick R., Ken S. Rosenthal, and Michael A. Pfaller, Microbiología
médica (Elsevier España, 2006)
 Villanueva, Julio R., Microbiología (Reverte, 1996)
 Prats, Guillem, Microbiología Clínica (Ed. Médica Panamericana, 2006)
 http://www.educa2.madrid.org/web/educamadrid/principal/files/0e8a6919-
7eeb-423f-9fa8-b9c866aab3ff/Medios%20de%20cultivo.pdf
 http://www.higiene.edu.uy/cefa/2008/BacteriasAnaerobias.pdf
 http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/PracticaAislamientoDeMicroorga
nismos_21549.pdf

1. Pruebas bioquímicas (dos) que permitan diferenciar:

• Streptococcuspneumoniae:

- AGAR BILIS ESCULINA

Es un medio selectivo y diferencial que se usa para aislar e identificar un gran
número de miembros del género Enterococcus y también Streptococcus del
grupo D., agar selectivo para el aislamiento de salmonella, especialmente thypi.

La Agar Bilis Esculina se usa preferentemente para diferenciar

entre Enterococcus y Streptococcus. Los miembros del género Enterococcus son
capaces de crecer en presencia de un 4% de bilis (oxgall) e hidrolizar la esculina
para formar glucosa y esculetina. La Esculetina se combina con iones de hierro
formando finalmente un complejo de color negro.

En algunos casos, ciertas bacterias son capaces de hidrolizar la esculina. Una

placa que contenga esculina aparecerá fluorescente bajo luz ultravioleta.
Algunas bacterias pueden hidrolizarlo, produciendo colonias oscuras bajo luz
ultravioleta, al contrario que las claras.
 - DISCOS OPTOQUINA
Se utiliza para la diferenciación de Streptococcus pneumoniae de otras especies
de estreptococos alfa hemolíticos (por ejemplo Streptococcus grupo viridans).

Streptococcus pneumoniae y Streptococcus grupo viridans son cocos Gram

positivos que presentan colonias alfa hemolíticas cuando crecen en medios
sólidos suplementados con 5-10 % de sangre de carnero. Se pueden diferenciar
mediante la realización de pruebas bioquímicas como ser la prueba de
sensibilidad a la optoquina y la prueba de solubilidad en bilis. La optoquina inhibe
el desarrollo de Streptococcus pneumoniae mientras que otros estreptococos no
son inhibidos o presentan una zona pequeña de inhibición alrededor del disco.

• Streptococcuspyogenes:

- PYR (+)

- DISCOS DE BACITRACINA
Para la diferenciación de estreptococos beta hemolítico del grupo A de otros
estreptococos beta hemolítico.
La bacitracina es un antibiótico que inhibe la síntesis de pared celular bacteriana,
y a la concentración que se encuentra en los discos (0,04 U) inhibe el crecimiento
de los estreptococos beta hemolíticos del grupo A de Lancefield pero no inhibe
el desarrollo de otros estreptococos beta hemolíticos.

REFERENCIAS:
http://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/196_hoja_tecnica_es.pdf
https://es.slideshare.net/LosGram10/streptococcus-27515173
http://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/198_inserto_es.pdf
http://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/194_hoja_tecnica_es.pdf
https://eprints.ucm.es/4337/1/T25506.pdf