UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA

DE MÉXICO

Facultad de Odontología

Alumno(a): Vega Noguez Carla Mariana

Prof. Victor Manuel Mira Morales

Grupo: 2014

Materia: Microbiología

Tema: Medios y Técnicas de Cultivo

MÉTODOS DE CULTIVO
Se consideran dos problemas: la elección de un mediado adecuado y el
aislamiento de microorganismo bacteriano en cultivo puro.

EL MEDIO
La técnica usada y el tipo de medio seleccionado depende de la naturaleza de
la investigación. En general, pueden presentarse tres situaciones:
1) puede ser necesario obtener un cultivo de células de una especie
particular que se tiene a la mano.
2) Puede requerirse determinar las cantidades y los tipos de
microorganismos presentes en un material dado
3) Aislar un tipo particular de microorganismo de un material natural
4)
CRECIMIENTO CELULAR DE UNA ESPECIE DADA
Puede ser muy difícil de lograr que los microorganismos observados al
microscopio, cuando crecen en un ambiente natural, se desarrollen en un
cultivo puro en un medio artificial, por ejemplo: ciertas formas parasitas nunca
se han podido cultivar fuera del huésped. Sin embargo, por lo general se puede
desarrollar cuidadosamente un medio donde se reproducen las condiciones
que el microorganismo encuentra en su ambiente natural. Es fácil reproducir el
pH, la temperatura y la aireación; el mayor problema lo representan los
nutrimentos. La contribución del ambiente natural de vida es importante y difícil
de analizar, un parasito puede requerir un extracto de los tejidos del huésped,
mientras que una forma de vida libre puede necesitar una sustancia excretada
de un microorganismo con el qe se ve vinculado en la naturaleza. Pueden ser
necesarios muchos experimentos para determinar los requerimientos de un
microorganismo y el éxito depende de suministrar una fuente adecuada de
cada categoría de los nutrimentos.

EXAMEN MICROBIOLOGICO DE MATERIALES NATURALES

Un material natural determinado puede contener muchos microambiente
diferentes y proporcionar cada uno un nicho para diversas especies. la siembra
en placa de una muestra del material, bajo una serie de condiciones, permite
producir colonias a un grupo seleccionado de microorganismo, pero hace pasar
inadvertidos muchos otros tipos. Por esta razón, se acostumbra a sembrar
muestras del material en placas con el uso de tantos medios y condiciones de
incubación diferentes como sea posible

AISLAMIENTO DE UN TIPO PARTICULAR DE MICROORGANISMO

Si se manipula de manera correcta una pequeña muestra de suelo
proporcionará un tipo diferente de microorganismos por cada microambiente
presente. Para un suelo fértil (húmedo, aireado, rico en minerales y material
orgánico) esto significa que pueden aislarse cientos y aun miles de
microorganismos , esto se hace mediante la selección del tipo deseado.
El medio líquido se emplea para permitir la competencia y, por tanto, la
selección optima, aun cuando el tipo deseado solo este representado en el
suelo por unas cuantas células en una población de millones. Se puede sacar
ventaja del “enriquecimiento natural”, por ejemplo para buscar bacterias
oxidantes del queroseno se elige un suelo cargado con aceite, ya que este es,
un medio de enriquecimiento para tales bacterias.
Por lo tanto el cultivo por enriquecimiento es un procedimiento mediante el cual
se prepara el medio de cultivo para reproducir el ambiente natural(nicho) del
microorganismo deseado y seleccionado de esta manera. Un principio
importante relacionado con dicha selección es: el microorganismo seleccionado
será aquel cuyos requerimientos nutricionales sean apenas satisfechos , como
por ejemplo: las Azotobacterias se desarrolla mejor en un medio que contenga
nitrógeno orgánico, pero su enriquecimiento mínimo es la presencia de N2; por
lo tanto se selecciona un medio que contenga N2 como la única fuente de
nitrógeno. Si se añade nitrógeno orgánico al medio las condiciones ya no son
selectivas para el Azotebacteria, sino mas bien para bacterias que el
requerimiento mínimo sea el nitrógeno orgánico.
Cuando se busca un tipo particular de microorganismos en un material natural,
es una ventaja sembrar los microorganismos obtenidos en un medio diferencial
si se dispone de él. Un medio diferencial es aquel que causa que colonias de
un tipo particular de microorganismos tengan un aspecto distintivo. Por
ejemplo, las colonias de E. Coli tienen un brillo iridiscente característico en el
agar que contiene los colorantes eosina y azul de metileno(agar EMB). El agar
EMB que tiene además una gran concentración de un azúcar, también da lugar
a que los microorganismos fermentadores de dicho azúcar formen colonias
rojizas. Los medios diferenciales se utilizan para identificar colonias enterizas
en el agua o en la leche, así como ciertos microorganismos patógenos en las
muestras clínicas

AISLAMIENTO DE MICROORGANISNOS EN CULTIVO PURO

Para estudiar las propiedades de un microorganismo dado es necesario
manejarlo en cultivo puro, libre de otros microorganismos. Para hacer esto,
debe aislarse una sola célula de todas las demás y cultivarse de tal manera
que su progenie también permanezca aislada. Para esto se dispone de varios
métodos.
A) SEMBRADO EN PLACA: a diferencia de las células que crecen en un
medio liquido, las células que crecen sobre o dentro de medios sólidos se
encuentran inmóviles; por consiguiente, si algunas células se colocan en o
sobre un medio gelificado, cada una crece y da una colonia aislada. El gel
ideal para la mayor parte de los medios microbiológicos es el agar, un
polisacárido acido extraído de ciertas algas rojas. Una suspensión acuosa
del 1.5 al 2% se disuelve a 100ºC para formar una solución clara que
solidificará a 45ºC. Así, una solución estéril de agar puede enfriarse a
50ºC, se añaden bacterias u otras células microbianas, y la solución se
enfría rápidamente a temperaturas inferiores a 45ºC para formar un gel
(aunque la mayor parte de las células microbianas mueren a 50ºC el curso
cronológico exterminante es lo suficientemente lento a esta temperatura
como para permitir este procedimiento). Una vez gelificado, el agar no se
licua de nuevo sino hasta que se caliente a temperaturas mayores de
80ºC , de manera que para incubación de un cultivo microbiano puede
usarse, posteriormente, cualquier temperatura adecuada. En el método de
vaciado en placa se mezcla una suspensión de células con agar fundido a
 50ºC y se vacía en una caja Petri; cuando el agar solidifica, las células se
inmovilizan en este y crecen en colonias. Si la suspensión de células
estaba lo suficientemente diluida, las colonias estarán bien separadas, de
tal suerte que cada una tiene una gran probabilidad de haber derivado de
una célula única. Sin embargo, para estar seguros, se toma una colonia de
tipo deseado, se suspende en agua y se vuelve a sembrar en placa. La
repetición de este procedimiento varias veces asegura la obtención de un
cultivo puro. Alternativamente la suspensión original puede sembrarse en
estrías con unas asa de alambre en una placa de agar, al avanzar la estría
van quedando menos células en el asa y, por ultimo, esta puede depositar
células aisladas sobre el agar. Se incuba la placa y se toma cualquier
colonia bien aislada, se resuspenderá en agua y se volverá a sembrar en
estría sobre agar. Este método es tan confiable como el vaciado en placa y
mucho más rápido si una suspensión se siembra en estría
B) DILUCIÓN: Un método menos seguro es el de dilución por extinción. De la
suspensión se hacen diluciones seriadas y se siembra cada una en placa.
Si solo algunos inóculos de una dilución particular tienen desarrollo, se
presume que alguno de las colonias partieron de células únicas. Este
método no se usa a menos que por alguna razón sea imposible la siembra
en placa. Una desventaja de este método es que solo se puede aislar un
tipo de microorganismo predominante en una población mixta

BIBLIOGRAFÍA

JAWETS, Melnick y Adelberg, “Microbiología Médica” 18ª edición

Editorial Manual Moderno pp. 66, 67 y 68.