III.

- MATERIALES Y REACTIVOS
Materiales
 Probeta de 100 ml.
 4 Matraz de 500 ml.
 1 espátula.
 1 gradillas.
 48 Tubos de ensayo.
 1 pizeta de 250 ml.
 1 mechero.
 4 vasos de precipitado de 250 ml.
 1 encendedor.

Equipos
 1 Autoclave.
 1 Incubadora.
 1 Balanza analítica.
 1 Cabina de bioseguridad.
 1 Micropipeta / puntas (1-5 ml).
 1 Refrigeradora.
 1 Vortex.
 1 Espectrofotómetro.
 1 centrifugadora
 1 incubadora de agitación orbital
Reactivos
 Agua destilada 300 ml.
 12 gr. Azúcar.
 3 gr. Peptona.
Biomasa
 Levaduras purificadas tomadas de la placa concentración de
10−1 tomadas del ensayo que contenía agua y muestra madre.

IV.- PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

1. Se pesan 12 gr de azúcar rubia y 3 gr de peptona, luego se añade a
un matraz de 500 ml.
2. Se mide 300 ml de agua destilada en una probeta de 500 ml. y se
disuelve la mezcla.
3. Se preparan 4 tampones de manera que estos queden asegurados
tanto que al destaparse hagan un sonido parecido al destapar una
botella de vino.
4. Se tapa el matraz con la solución y se autoclava por 30 min a 109 °C.
5. Luego se toma una colonia de las levaduras de la placa purificada de
concentración de 10−1 con una aza de siembra y se coloca en el
matraz autoclavado.
6. La solución se divide en 3 matraces de la misma geometría y marca,
para evitar un diferencial de transferencia de oxigeno y se colocan
los tampones.
7. Inmediatamente se toma la primera muestra de 1 ml. De cada
matraz, se agita en el vortex y se mide su absorbancia en el
espectrofotómetro calibrado con el blanco que fue preparado con
agua destilada.
8. Luego de medir la absorbancia los tubos se centrifugan por 10 min y
se guardan en el refrigerador para luego determinar los azucares
totales de cada ensayo. El paso 9 y 10 se repetirán para las
muestras necesarias que se quieran tomar.
V.- RESULTADOS

TABLA N° 01: Absorbancias medidas de 3 muestras de crecimento de

levaduras

Absorbancia
Tiempo (horas)
muestra 1 muestra 2 muestra 3

0 0.025 0.027 0.027

2 0.026 0.028 0.032

4 0.028 0.029 0.032

6 0.053 0.055 0.05

8 0.13 0.14 0.131

10 0.294 0.297 0.271

12 0.378 0.379 0.364

14 0.418 0.417 0.418

16 0.464 0.437 0.445

18 0.476 0.46 0.458

20 0.485 0.481 0.467

22 0.484 0.465 0.468

24 0.493 0.462 0.474

26 0.456 0.453 0.465

28 0.472 0.445 0.454

30 0.47 0.44 0.427

 GRÁFICO °N 01: CURVAS DE
CRECIMIENTO DE LEVADURAS
0.6

0.5
ABSORBANCIA (600 nm)

0.4

0.3

0.2

0.1

0
0 5 10 15 20 25 30 35
TIEMPO (HORAS)

muestra 1 muestra 2 muestra 3

VI. CONCLUSIONES:

Se logró elaborar la curva de crecimiento de las levaduras extraídas de

las uvas, mostrándonos la fase de crecimiento en donde las levaduras
se reproducen en mayor cantidad, y más adelante la fase estacionaria,
donde se mantiene casi constante su reproducción.

VII. DISCUSIÓN DE RESULTADOS

Al observar las 3 curvas de crecimiento obtenidas, es notorio que la

mejor curva realizada fue el de la muestra 3, pero esto no ocurre con las
muestras 1 y 2, estos errores obtenidos son a causa de malas
extracciones de las muestras madres, ya que no se realizó la agitación
al momento de extraer las soluciones con la micropipeta, también por no
cambiar las puntas de la micropipeta, aquí pudo haber variaciones en la
cantidad de levaduras; y por último la caída de una de estas puntas a la
solución que contenía un matraz en la muestra 2.