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GUÍA DE PRÁCTICAS
2018-I
LIMA – PERU
NORMAS PARA EL USO Y TRABAJO EN EL LABORATORIO
1. Realizar las prácticas de laboratorio con el debido interés y responsabilidad.
2. Presentarse vestido correctamente con su correspondiente guardapolvo y
distintivo de la Universidad.
3. Poner maletines y mochilas en el estante, llevar a las mesas solo lapiceros
y cuadernos.
4. Está terminantemente prohibido beber o comer dentro del laboratorio.
5. Leer cuidadosamente la guía de práctica y tener en cuenta las indicaciones
de los profesores de práctica sobre el uso del material y equipos de
laboratorio, así como el orden, limpieza y seguridad que debe mantenerse.
6. Por cada práctica de laboratorio cada mesa de trabajo presentará un único
informe, el cual consta de las siguientes partes:
- Carátula.
- Objetivos.
- Marco Teórico.
- Desarrollo Experimental.
- Discusión de los resultados.
- Conclusiones.
- Cuestionario.
- Bibliografía
Dicho informe se presentará en la siguiente práctica en el horario y grupo
Respectivo.
7. El inicio de la pràctica es en la hora exacta programada. Se tendrà una
tolerancia de 10 minutos, luego de ese lapso de tiempo no se podrà
ingresar al laboratorio, por lo tanto se le considerarà como una inasistencia
y no tendrà derecho a nota de informe de pràcticas.
8. Las inasistencias en las prácticas no son recuperables en ninguno de los
grupos, calificándose al alumno con nota cinco (05). Aquel alumno que
acumule 30% de inasistencias no tiene derecho a nota práctica.
9. Cada alumno será integrante de una mesa de trabajo, a la cual pertenecerá
a lo largo del semestre académico.
10. Por mesa de trabajo, será nombrado un responsable que se hará cargo del
material y equipos recibidos así como de la presentación de los informes.
11. En caso de daño, deterioro o pérdida del material y/o equipos, el
responsable de mesa informará del hecho al profesor de prácticas, TODO
GRUPO ES RESPONSABLE DEL DAÑO CAUSADO, y deberá repararlo a la
brevedad posible, no más de una (01) semana después del incidente.
12. Al final de la práctica, se procederá a limpiar el material usado, con el fin
de entregarlo en las mismas condiciones en las que fueron recibidos, caso
contrario se le descontará un punto en la nota de informe a todo el grupo.
13. Una vez limpio el material, el responsable de mesa lo devolverá a la
persona encargada del laboratorio.
14. El laboratorio deberá quedar completamente limpio, las mesas secas y
limpias, debiendo arrojar todos los desechos al tacho de basura.
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FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
PRÁCTICA No 1
ESPECTROFOTOMETRIA
GENERALIDADES:
Cuando una haz de luz (luz incidente, Io) atraviesa una solución, una parte de la
radiación queda absorbida por las moléculas del soluto coloreado, sufriendo una
reducción de su intensidad (Luz transmitida, I), proporcional a la capacidad de
absorción de dichas moléculas.
Io I
Donde:
Io = Intensidad de la luz incidente.
I = Intensidad de la luz transmitida.
E = Coeficiente de extinción molar, valor constante dependiendo de la
naturaleza de la
Sustancia y de la longitud de onda
I = Espesor del recipiente en cm.
C = Concentración de la solución.
A = D.O. = Absorbancia (A) aumenta conforme disminuye la Transmitancia (T)
y la relación entre ambas es logarítmica.
Fc = [ Standard ] / A
Donde:
Fc = factor de calibración.
A = absorbancia del tubo standard.
[Standard] = concentración del standard.
[ MP ] = A. Fc
Donde:
Vol = Volumen de la muestra problema tomada para hacer la dilución.
Vol o = Volumen total.
Para este segundo caso cuando se quiere saber la concentración de una muestra
problema se procederá usando la siguiente fórmula:
[ MP ] = A. Fc. dil
Donde:
A = Absorbancia de la muestra problema.
Fc = Factor de calibración.
Dil = Factor de dilución.
[MP] = Concentración de la muestra.
EXPERIMENTO
3.- Grafique el espectro de luz, tanto en el rango visible como no visible con sus
respectivas longitudes de ondas.
Muestra A........................0.015
Muestra B........................0.125
Muestra C........................0.350
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FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
PRÁCTICA No 2
FUNDAMENTO BIOQUIMICO:
Una propiedad importante de los aminoácidos, consecuencia del hecho de que
todos ellos tienen grupos carboxilo (-COOH) y grupos amino (-NH2) es su conducto
como electrolitos. Es costumbre considerar los grupos COOH como de naturaleza
acídica y los grupos NH2 como de carácter básico.
Hemos estudiado en las clases teóricas el comportamiento de los aminoácidos
como iones dipolares y la conducta de ellos durante su titulación con ácido y álcalis
de modo que se comportan como verdaderas sustancias tampones,
amortiguadores ò buffers, para el sostenimiento del pH del medio interno dentro
de estrechos límites (7.35 a 7.45). Explicamos también el comportamiento
amortiguador del ion dipolar glicina al añadirle iones H+ o al añadirle OH-
impidiendo las variaciones bruscas del pH sanguíneo. La representación de un
aminoácido tal como la glicina por la fórmula NH2CH2COOH sugiere que se trata de
una sustancia en la que el grupo amino actúa como una base conjugada y el grupo
COOH como un ácido. Se ha observado, sin embargo, que esta formulación no es
la correcta del estado iónico de un aminoácido en solución acuosa. La verdadera
representación es aquella que dimos del ion dipolar (A) y que es la siguiente:
(Estructura A)
H H
R C COO- R C COOH
Estructura (A) NH3 Estructura (B) NH2
Cesión de protones
AH A- + H+
pH
ml NaOH añadido
CUESTIONARIO:
1.- Graficar la curva de valoración del ácido acético 0.1N vs. NaOH 0.1N.
2.- Identificar el punto de semi-valoraciòn y máxima capacidad tampón.
3.- Explique que es un par tampón, como funciona y porqué las proteínas
sanguíneas son amortiguadores.
4.- Describa las principales sustancias amortiguadoras del organismo
humano.
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FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
PRÁCTICA No 3
C C'
EXPERIMENTO A
EXPERIMENTO B
2) Mezclar bien los tubos. Hacer un control con la solución yodada con todos
los cinco tubos de la misma manera que se hizo en el experimento anterior
y leer las absorbancia de dichos controles a 650 nm. Dichas absorbancia se
tomarán como lecturas iniciales.
3) Luego añadir 1 ml de solución de enzima a cada tubo y colocarlos en el
baño de agua a 37°C por 20 minutos.
4) Sacar los tubos y hacer un control con solución yodada de cada uno. Las
lecturas de absorbancia se tomarán ahora como lecturas finales.
5) Hacer la diferencia:
Actividad enzimática = Lectura inicial – Lectura final
EXPERIMENTO C
CUESTIONARIO:
PRÁCTICA No 4
1. Evaluación antropométrica:
Emplearemos los Índices PESO/TALLA; Circunferencia del Brazo(CB);
Circunferencia Muscular del Brazo (CMB); Espesor del Pliegue Cutáneo del Tríceps
(EPCT); Índice de Masa Corporal (IMC); entre otros.
2. Evaluación bioquímica:
Utilizaremos la Proteína Total y la Albumina Séricas como índices de masa
proteica visceral.
El Balance Nitrogenado lo utilizaremos para evaluar los ingesta en relación
con la excreción de Nitrógeno.
Como Evaluador Bioquimico-Antropomedico (Mixto) utilizaremos el índice
Creatinina Urinaria/Talla para la evaluación de la masa muscular esquelética.
3.Evaluacion Inmunológica:
Empleando los TEST de Hipersensibilidad Cutánea Retardada: Tuberculina,
Candidina, etc.
3. Evaluación Clínica:
Diferenciaremos el Marasmo del Kwashiorkor en sus mas importantes
diferencias Bioquímicas y Clínicas.
EXPERIMENTO “A”
Los enlaces peptídico de las proteínas reaccionan en un medio alcalino con el ion
cúprico del reactivo de Biuret, estabilizado por tartrato, para formar un complejo
de color violeta cuya máxima absorción se da a 540 nm.
NaOH
Cobre + proteína Complejo cupro-proteico
El dosaje de proteínas totales tiene poco valor como prueba aislada porque la
alteración en una de las fracciones puede ser balanceada por una alteración
opuesta de otra fracción. Por lo tanto, es importante que adicionalmente se
determine la concentración de albúmina.
La albúmina tambièn va a ser dosada por el método de Biuret, pero previamente al
suero se le hace un tratamiento con sulfato de sodio y eter etílico para lograr la
separación de las globulinas y permitir solo el dosaje de albúminas.
REACTIVOS PROVISTOS:
Reactivo EDTA/Cu: Complejo EDTA/Cu 13 mmol/l en NaOH 875 mmol/l y alquil
aril poli éter (AAP).
Reactivo BCF: Solución de 3,3´,5,5’-tetrabromo Cresolsulfon ftaleínas (en
polioxietilén lauril éter).
Suero Patrón: Solución de Albumina y Globulinas en estado nativo con titulo
conocido de proteínas (Biuret o Kjeldhal) y Albumina (unión BCF).
P.T.(g/dl)
PROTEINAS TOTALES (g/dl) =--------------------------
S
Alb. (g/dl)
ALBUMINA (g/dl) =------------------------------
S
Albumina (g/dl)
RELACION A/G =---------------------------------------
P.T. (G/DL) – Alb. (g/dl)
VALORES NORMALES:
Proteínas Totales= 6.1 – 7.9 g/dl.
Albúmina = 3.5 – 4.8 g/dl.
Relación A/G = 1,2 a 2,2
CUESTIONARIO. -
PRÁCTICA No 5
FUNDAMENTO TEÓRICO
MATERIALES Y REACTIVOS
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL:
Incubar los tres tubos en Baño María de 37ºC por 10 minutos. Mezclar bien la
solución. Leer las absorbancias en el espectrofotómetro a 505 nm.
CALCULOS
VALORES NORMALES
FUNDAMENTO TEORICO
MATERIALES Y REACTIVOS
Tubos: I II
Orina normal (gotas) 10 gotas ---
Orina DM (gotas) --- 10 gotas
Reactivo de Benedict (ml) 2 ml 2 ml
CUESTIONARIO:
1.- ¿Qué es la diabetes Mellitus y como se diagnostica desde el punto de vista del
laboratorio?
2.- Explique en que consiste el umbral renal y la tasa de reabsorción de la
glucosa.
3.- Describa los métodos que existen para el dosaje de la glicemia.
4.- Explique el mecanismo de acción de los reactivos de Benedict y de Fehling.
5.- Que son la hemoglobina glicosilada y la fructosamina y cuál es su importancia
en la diabetes?
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PRÁCTICA No 6
Definición de DM
Clasificación de DM
Diagnóstico
FUNDAMENTO TEÓRICO
Las pruebas de tolerancia a la glucosa oral fueron utilizadas por mucho tiempo
para diagnóstico de Diabetes Mellitus o intolerancia disminuida, pero ya no se
utilizan de rutina, pero si pueden servir tanto para la Diabetes como para la
intolerancia. Importante es recalcar que los niveles importantes en ambos casos
son los obtenidos a las dos horas, y que la cantidad de glucosa a ingerir debe ser
de 75 gramos. El disolver 75 gramos en por lo menos 300 ml de agua hace la
solución más agradable al paladar y por lo tanto tendrán más aceptación por parte
del paciente.
MATERIALES Y REACTIVOS
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL:
Incubar los tubos en Baño María de 37ºC por 10 minutos. Leer las absorbancias
para cada una de los tubos en el espectrofotómetro a 505 nm.
CALCULOS
CUESTIONARIO:
1.- Con los datos de glicemia obtenidos en el experimento construir en un papel milimetrado una
gráfica de tiempo vs. Glicemia y apreciar la curva de tolerancia a la glucosa.
2.- Como sería esta curva en el caso de una persona normal, un diabético y un intolerante a la
glucosa.
4.- Qué son y en que casos se hace un dosaje de péptido C y de insulina en un paciente diabético.
PRÁCTICA No 7
PANCREATITIS AGUDA:
PANCREATITIS CRÓNICA:
Causas:
- Pancreatitis Alcohólica
- Pancreatitis Idiopática
- Pancreatitis Crónica Tropical
- Pancreatitis Hereditaria
- Pancreatitis por Hipoparatiroidismo
- Pancreatitis por Lesiones Traumáticas del Conducto Ductal
Experimento A: DETERMINACIÓN DE AMILASA EN SUERO
MATERIALES Y REACTIVOS:
- Espectrofotómetro.
- Micro pipetas y pipetas capaces de medir los volúmenes indicados.
- Tubos de ensayo y cubetas de lectura.
- Baño María a 37ºC.
- Reloj o timer.
- Sustrato: solución de almidón 500 mg/l, tamponada a pH 7 con buffer
fosfato 0.1 mol/l en NaCl 0.15 mol/l.
- Reactivo de yodo: solución 0.01 eq/l de yodo en HCl 0.02 mol/l.
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL:
Control Muestra
Sustrato 1 ml 1 ml
Dejar unos minutos en baño de agua a 37ºC y agregar:
Muestra --- 20 uL
Incubar a 37ºC. A los 7’30” exactos, agregar:
Reactivo de yodo 1 ml 1 ml
Mezclar por agitación suave. Retirar los tubos del baño y agregar:
Agua destilada 8 ml 8 ml
Mezclar por inversión.
Leer en espectrofotómetro a 640 nm, llevando a cero el aparato con agua
destilada.
Experimento B: DETERMINACIÓN DE AMILASA EN ORINA
Suero Orina
(UA/dl) (UA/hora)
Normal <120 <260
Pancreatitis aguda 300 a 12000 Más de 900
Pancreatitis crónica Hasta 200 Más de 300
Parotiditis 200 a 350 350 a 750
Parotiditis con complicación pancreática Más de 350 Más de 750
Procesos abdominales agudos (sin Normal Normal
pancreatitis)
CUESTIONARIO:
PRÁCTICA N°08
CETOACIDOSIS DIABÉTICA
BASE BIOQUÍMICA.
CET0ACIDOSIS DIABETICA:
CETOGENESIS:
OBJETIVO DE LA PRÁCTICA.-
Aprender a interpretar los niveles de bicarbonato sérico, pH sanguíneo y presencia
de cuerpos cetónicos en la orina en presencia de Cetoacidosis Diabética.
EXPERIMENTO A:
DOSAJE DE BICARBONATO SÉRICO
Reactivos y materiales:
HCl 0.01 N
NaOH 0.01 N
Fenolftaleína 20 mg% soluciòn alcohólica
Alcohol Etílico (corriente)
Muestras problemas de bicarbonato para titularlas..
Pipetas de 5 ml graduadas al décimo
Pipetas de 1 ml graduadas al centésimo
Beakers de vidrio de 100 ó 50 ml
Baguetas de vidrio
Baño María de 37°C
Reloj de intervalos
Método:
En un Beakers de vidrio colocar:
5 ml de HCl 0.01 N
1 ml de suero
2 gotas de alcohol
Agitar y luego reposo 2 min.
Añadir 3 gotas del indicador fenolftaleína.
Colocar a 37° C en Baño María por 10 minutos.
Titular con NaOH 0.01N, hasta obtener un color rosado pálido.
Anotar la cantidad de NaOH gastado.
Cálculos:
(5 - X ml gastados de NaOH en la titulación) x 10 = mMol/ Litro de HCO3-
Considerar que:
a) 1ml de NaOH 0.01 N equivale 0.01 mEq HCO3 –
EXPERIMENTO B:
Reactivos:
Procedimiento:
PRÁCTICA Nº 9
Sin embargo, actualmente se sabe que es necesario conocer además la distribución de las
lipoproteínas encargadas del transporte: HDL (lipoproteínas de alta densidad),
considerada como el “factor protector” y LDL (lipoproteínas de baja densidad),
consideradas como el verdadero “factor de riesgo”. Las funciones biológicas inherentes a
los distintos grupos de lipoproteínas, las variaciones en su composición y los resultados
de los diversos estudios epidemiológicos, indican que los valores aislados de colesterol
HDL y colesterol LDL no pueden tomarse como índices predicativos de riesgo, sino que es
necesario conformar un perfil Lipidico con los valores de colesterol total, colesterol LDL y
colesterol HDL.
Experimento A: DETERMINACIÓN DE COLESTEROL EN SUERO
Lipasa
Esteres de colesterol colesterol + ácidos grasos
CHOD
Colesterol + O2 colesten-3-ona + H2O2
POD
H2O2 + 4-AF 4-(p-benzoquinona monoimino)-fenazona + 4 H2O
REACTIVOS:
PROCEDIMIENTO:
En tres tubos colocar:
VALORES DE REFERENCIA:
Los valores de colesterol en sangre fluctúan según edad, sexo y hábitos de dieta y de
ejercicio. Sin embargo, es preferible no hacer referencia a valores “normales”, pues la
norma promedio de una población no necesariamente refleja ausencia de riesgo
patológico en el caso de colesterol.
REACTIVOS:
REACTIVO PRECIPITANTE.- Contiene una solución de Sulfato de Dextrán y de
Cl2Mg.H2O
PROCEDIMIENTO:
En un tubo medir 0.5 ml de muestra y agregar 0.05 ml (50 ul) de Reactivo Precipitante.
Homogenizar agitando (sin invertir) durante 20 segundos.
Dejar 30-40 minutos en refrigeración (4-10°C). No colocar en el congelador.
Centrifugar a 3000 rpm. X 03 minutos
Usar el sobrenadante como muestra.
En tres tubos colocar:
Tubos Blanco Standard Muestra
Standard --- 20 ul ---
Muestra “Sobrenadante” --- --- 100 ul
Reactivo de trabajo 2 ml 2 ml 2 ml
CALCULOS:
VALORES NORMALES:
40 – 65 mg%
REACTIVOS:
REACTIVO PRECIPITANTE.- Solución de sulfato de polivinilo disuelto en
polietilenglicol (PM 600).
PROCEDIMIENTO:
En un tubo, colocar 0.2 ml (200 ul) de suero problema y añadir 0.1 ml (100 ul) de
Reactivo Precipitante.
Homogenizar agitando (sin invertir) durante 20 segundos.
Dejar 15 minutos en un baño de agua a 20-25°C.
Centrifugar a 3000 rpm. X 03 minutos
Usar el sobrenadante como muestra.
En tres tubos colocar:
Tubos Blanco Standard Muestra
Standard --- 20 uL ---
Muestra “Sobrenadante” --- --- 100 uL
Reactivo de trabajo 2 ml 2 ml 2 ml
CALCULOS:
VALORES NORMALES:
CUESTIONARIO:
PRÁCTICA Nº10
Los triglicéridos forman la mayor parte del peso seco del tejido adiposo, constituyendo
por lo tanto una potente forma de almacenamiento de energía.
El movimiento de ácidos grasos entre los distintos compartimientos del organismo, se
produce con gran rapidez en respuesta a diversos estímulos (dieta, actividad física,
stress, edad, etc.). Por este motivo es de esperar que los triglicéridos (uno de los más
importantes vehículos para el transporte de ácidos grasos) varíen también su
concentración en respuesta a estos factores fisiológicos.
Sin embargo, el equilibrio de estos mecanismos puede verse alterado, conduciendo a
niveles anormales de triglicéridos circulantes. La persistencia de esta condición, se
asocia con numerosas patologías, tales como enfermedad hepática, renal,
Hiperlipidemias esenciales, etc.
Un caso que resulta de particular interés es el aumento de triglicéridos en individuos
obesos, en los cuales tiene importancia pronostica, respecto a la probabilidad de
desarrollar enfermedad cardíaca coronaria. Alrededor del 50% de los lípidos de las
lesiones ateromatosas que ocurren en las arterias coronarias son triglicéridos, por lo
que es posible relacionar a los triglicéridos con la patogénesis de la arteriosclerosis
coronaria. Este punto de vista está sustentado por el hecho de que un gran porcentaje
de pacientes con infarto de miocardio también exhiben Hipertrigliceridemia.
Lipoproteína lipasa
Triglicéridos Glicerol + 3 ácidos grasos
Glycerol kinasa
Glycerol + ATP Glicerol-1-P + ADP
En una tercera etapa el derivado fosforilado se oxida mediante la glicerol fosfato oxidasa
(GPO), con producción de agua oxigenada.
GPO
Glicerol-1-fosfato + O2 H2O2 + dihidroxiacetonafosfato
Finalmente el agua oxigenada así formada produce la unión oxidativa del fenol y la 4-
aminofenazona, en reacción catalizada por la peroxidasa (POD), con formación de una
quinonaimina roja.
POD
2 H2O2 + 4-AF + clorofenol 4-(p-benzoquinona monoimino) fenazona + 4 H2O
REACTIVOS PROVISTOS:
MATERIAL REQUERIDO:
- Espectrofotómetro.
- Probeta, micro pipetas y pipetas capaces de medir los volúmenes indicados.
- Frasco de vidrio color ámbar.
- Cubetas espectrofotométricas.
- Baño de agua a 37ºC.
- Reloj ò timer.
PROCEDIMIENTO:
Mezclar.
Incubar 5 minutos en Baño María a 37ºC.
Enfriar y leer en espectrofotómetro a 505 nm llevando el aparato a cero con agua
destilada.
Corregir las lecturas con el blanco y usar las lecturas corregidas para los cálculos.
Para hallar la concentración de triglicéridos en el suero problema, se debe utilizar el
método del factor de calibración.
Triglicéridos (mg%) = M x Fc
VALORES DE REFERENCIA:
El panel de expertos del National Cholesterol Education Program (NCEP) provee los
siguientes valores de triglicéridos:
CUESTIONARIO:
PRACTICA Nº 11
REACTIVOS:
Reactivo EDTA/Cu: complejo EDTA/Cu 13 mmol/l en NaOH 875 mmol/l y alquil aril poli
éter (AAP).
Reactivo BCF: solución de Bromo Cresolsulfon Ftaleínas (en polioxietilèn lauril éter).
Suero Patrón: solución de albúmina y globulinas en estado nativo con título conocido de
proteínas (Biuret ò Kjeldhal) y albúmina (unión BCF).
MATERIAL REQUERIDO:
Espectrofotómetro.
Micro pipetas y pipetas capaces de medir los volúmenes indicados.
Tubos de ensayo.
Baño María a 37ºC.
Reloj ò timer.
Albúmina (g/dl)
Relación A/G = ---------------------------------------
Prot. Tot. (g/dl) - Alb. (g/dl)
VALORES DE REFERENCIA:
REACTIVOS:
Reactivo 1: ácido pícrico 41,4 mmol/l.
Reactivo 2: buffer glicina/NaOH 1 mol/l, pH final 12,4.
Standard: soluciòn de Creatinina 2 mg%
MATERIAL REQUERIDO:
Espectrofotómetro.
Tubos de ensayo.
Micro pipetas y pipetas capaces de medir los volúmenes indicados.
Reloj ò timer.
PROCEDIMIENTO:
Recolectar orina de 24 horas.
Medir la diuresis, tomar una alícuota y efectuar una dilución 1:50 de la misma.
Luego en tres tubos de ensayo preparar lo siguiente:
M
Creatinina en orina (mg/24 horas) = ------ x 20 mg/l x 50 x V
S
Siendo:
V = volumen de la diuresis expresado en litros/24 horas.
M = Absorbancia neta del tubo muestra.
S = Absorbancia neta del tubo standard.
VALORES DE REFERENCIA:
900 a 1,500 mg/24 horas.
PROMEDIO DESNUTRICIÓN
POBLACIONAL
Relación Cr U 24h / Talla Hombres: 830 Hombres: < 660
(mg 24h/m) Mujeres: 680 Mujeres: < 430
Relación Peso / Talla Hombres: 37 Hombres: < 30
(Kg/m) Mujeres: 34 Mujeres: < 29
Proteínas totales (g/dl) 7 <6
Albúmina (g/dl) 4 < 3,5
CUESTIONARIO:
1.- Con los datos obtenidos en los experimentos, realizar la valoración nutricional de
dicha persona sabiendo que es varón, pesa 60 Kg, su talla es 1,56 m y su volumen
urinario en 24 horas fue de 1000 ml.
2.- Como hubiera sido la valoración nutricional en el caso que la persona hubiera sido
mujer?
3.- Mencione las características generales de las proteínas y su clasificación.
4.- Qué son las globulinas y cuáles son sus clases?
5.- Describa los métodos de dosaje tanto químicos como enzimáticos para proteínas
totales, albúmina, globulina y Creatinina.
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FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
PRACTICA N° 12
METABOLISMO DE LA BILIRRUBINA
Base Bioquímica.-
FUNDAMENTO:
El suero sanguíneo es tratado con el reactivo diazoico (Acido Sulfanílico + Nitrito
de sodio) y se produce un complejo coloreado de color rojo violáceo debido a la
presencia de bilirrubina conjugada al acido glucurónico (Directa) color que
desarrolla directamente.. La Bilirrubina no conjugada (Indirecta) requiere además
la presencia de cafeína ó alcohol metílico para que se desarrolle el color. Entonces
para obtener la producción de color debido a ambas bilirrubinas debemos añadir
cafeína ó metanol y tendremos la producción de un color debido a la suma de
ambas bilirrubinas que llamamos Bilirrubina Total. Estos colores son comparados
espectrofotométricamente con el color producido por una solución standard de
bilirrubina de concentración conocida.
REACTIVOS NECESARIOS:
- Desarrollador: Solución acuosa de Benzoato de Cafeína 0,13 mol/l
tamponada y estabilizada.
- Nitrito de Sodio: Solución de Nitrito de Sodio 0,07 mol/l.
- Reactivo Sulfanílico: Solución de acido Sulfanílico 29 mmol/l y acido
clorhídrico o,17 mol/l
- Bilirrubina Estándar: Para la calibración periódica del equipo.
- Agua Destilada.
INSTRUCCIONES DE USO.-
METODOLOGÍA.-
CALCULOS:
Bilirrubina Total mg% = (T - B) x Factor
Bilirrubina Conjugada (Directa) mg % = (D – B) x Factor
Bilirrubina No Conjugada (Indirecta ó Libre) = (Bilirrubina Total – Bilirrubina
Directa)
VALORES DE REFERENCIA:
- Recién nacidos =
Nacidos a término Prematuros
Sangre de cordón 2.5 mg%
Hasta las 24 horas 6.0 mg% 8.0 mg%
Hasta las 48 horas 7.5 mg% 12.0 mg%
Del 3º al 5º día 12.0 mg% 24.0 mg%
Loa valores comienzan luego a disminuir para alcanzar el nivel promedio del
adulto al mes del nacimiento.
En los prematuros, los niveles de Bilirrubina tardan màs en alcanzar la
normalidad, dependiendo del grado de inmadurez hepàtica
CUESTIONARIO:
PRÁCTICA Nº13
TRANSAMINACION
IMPORTANCIA CLÍNICA:
Las transaminasas son enzimas ampliamente difundidas en el organismo, que
catalizan la transferencia de un grupo amino de un aminoácido a un cetoácido, en
una de las más importantes reacciones del metabolismo proteico. El interés clínico
está centrado especialmente en dos de ellas: TGO (transaminasa glutámico
oxalacética) y TGP (transaminasa glutámico pirúvica).
Estas enzimas tienen acción eminentemente intracelular, por lo que la actividad
sérica en condiciones normales es baja o nula. Un aumento de la actividad será
evidencia de un deterioro de los tejidos en que se encuentran, de los cuales
resultan particularmente importantes corazón e hígado.
Se ha observado que luego de un infarto de miocardio se produce en suero un
marcado aumento de la actividad de la TGO, debido a la liberación al torrente
sanguíneo de esta enzima, tan abundante en músculo cardíaco.
En este caso no existirá aumento en la actividad sérica de TGP ò será mínimo.
En hepatitis virales y otras formas de enfermedad hepática que involucren necrosis
de tejido, habrá un incremento considerable de la actividad sérica de
transaminasas, incluso antes de la aparición de síntomas clínicos como ictericia.
En este caso, la TGP será la enzima predominante debida a su gran concentración
en el tejido hepático.
Una elevada actividad de transaminasas puede detectarse también en traumas
accidentales o quirúrgicos y en distrofias musculares y miosis.
TGP
L-alanina + -cetoglutarato Piruvato + glutamato
REACTIVOS:
Blanco Muestra
Sustrato (TGO ò TGP) 0.5 ml 0.5 ml
Antes de utilizar por primera vez el juego de reactivos, preparar una curva de
calibración para TGO y otra para TGP, de acuerdo a las siguientes indicaciones:
Pipetear en dos series de tubos:
Nota: Utilizar sustrato TGO para la curva de calibración de TGO y sustrato TGP
para la curva de calibración de TGP, respectivamente.
CUESTIONARIO:
2.- Que relación existe entre las transaminasas y las enfermedades hepáticas?
3.- Como se encuentran las transaminasas en el infarto agudo de miocardio?
4.- Señale cuáles son los métodos de análisis conocidos para dosaje de
transaminasas?
5.- Existe variación de transaminasas con la edad?
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PRÁCTICA Nº14
BALANCE NITROGENADO
N Ingerido: gr de proteínas/6.25
REACTIVOS:
Reactivo 1.- Solución de ácido pícrico 0.05M
Reactivo 2.- Solución de hidróxido de sodio 0.75N
PROCEDIMIENTO:
Recolectar orina de 24 horas.
Diluir la orina completando a 2000 ml con agua destilada.
Nota: Si el volumen de la orina recolectada durante las 24 horas supera los 2000
ml la prueba debe realizarse sin diluirla, pero en el momento de realizar los
cálculos en vez de multiplicar el resultado por 2000, debe multiplicarse por el
volumen total (ml).
Preparar los siguientes tubos:
Mezclar bien.
Después de transcurridos 20 minutos leer la absorbancia a una longitud de onda
de 530 nm contra el blanco.
CALCULOS:
Abs muestra
Creatinina en orina (mg/24 h) = ------------------ x 2000
Abs standard
Ureasa
Urea + H2O CO2 + 2 NH3
REACTIVOS:
Reactivo 1.- Solución de fenol y nitro prusiato de sodio.
Reactivo 2.- Solución de hipoclorito de sodio en NaOH 0.625N
Enzima.- Solución de ureasa.
PROCEDIMIENTO:
Se diluye la orina a 1:50 con agua destilada.
Preparar los siguientes tubos:
CALCULOS:
Abs muestra
Urea (mg/dl) = --------------------- x 60 x Factor de dilución
Abs standard
VALORES NORMALES:
Nitrógeno ureico.- 7 a 14 gr/24 hrs.
Urea.- 15 a 30 gr/24 hrs.
CUESTIONARIO:
1.- Con los datos obtenidos en la práctica, calcular el balance nitrogenado del
paciente sabiendo que ingirió 8 gr de proteínas en 24 horas.
2.- De donde proviene la Creatinina?
3.- A que se denomina uremia y que consecuencias trae?
4.- A que se llama BUN y que representa?
5.- Para que sirve la depuración de Creatinina en orina de 24 horas?