Translate 1

35664
Terjemahan Inggris ke Bahasa Indonesia
Sebuah Antagonis Thyroid Hormone Itu Menghambat Hormon Tiroid

Aksi di Vivo *
Diterima untuk publikasi, 6 Juni 2002
Diterbitkan, Makalah JBC di Media Massa, 2 Juli 2002, DOI
10.1074/jbc.M205608200
‡ Wayland Lim, Ngoc-§ ¶ Nguyen Ha, Ha Yung ‡ Yang, Thomas S. ¶ Scanlan,
dan J. ‡ Furlow David?
Dari Bagian ‡ dari Neurobiologi, Fisiologi, dan Perilaku, Universitas California,
Davis, California 95616-8519 dan
§ Program di Departemen Kimia dan Biologi Kimia dan ¶ Kimia Farmasi dan
Seluler dan
Molekuler Farmakologi, Universitas California, San Francisco, California 94143-
0446
Kami telah ditandai yang baru dikembangkan tiroid
hormon antagonis NH-3 di kedua kultur sel dan in vivo
model sistem. NH-3 mengikat Xenopus laevis hormon tiroid
reseptor langsung in vitro dan menginduksi suatu konformasi
berbeda dari reseptor agonis-terikat. Transkripsi
aktivasi respon hormon tiroid
mengandung elemen-gen pelapor sangat terhambat
oleh NH-3 secara dosis-tergantung. Selain itu, NH-3
X. laevis mencegah reseptor hormon tiroid dari mengikat
untuk p160 keluarga co-aktivator GRIP-1 dan SRC-1
dalam alat tes dua-hibrida. Untuk menilai potensi senyawa
in vivo, kami menggunakan induksi dan spontan X. laevis
metamorfosis kecebong, suatu thyroid hormon yang tergantung
perkembangan proses. NH-3 menghambat tiroid
hormon-induced perubahan morfologi dalam dosis yang tergantung
cara dan menghambat peraturan-up endogen
thyroid hormon-responsif gen. Spontan
metamorfosa secara efisien dan reversibel ditangkap
oleh NH-3 dengan setidaknya efektifitas sama dengan tiroid
hormon sintesis methimazole inhibitor. Oleh karena itu,
NH-3 adalah antagonis hormon tiroid untuk pertama
menunjukkan penghambatan ampuh tindakan hormon tiroid
di kedua kultur sel dan tes hewani keseluruhan.
Hormon tiroid regulator kritis pengembangan vertebrata,
metabolisme, dan homeostasis (1-3). Pada manusia, berbagai
patologis negara dan hasil perkembangan kelainan
dari tingkat yang tidak memadai atau berlebihan beredar hormon tiroid.
Ini termasuk keterbelakangan mental, terhambat pertumbuhan,
gangguan pendengaran, dan perubahan dalam homeostasis thermogenik dan
denyut jantung. Oleh karena itu, pengembangan hormon tiroid
analog yang reseptor hormon thyroid (TR) 1 isotipe spesifik
agonis dan antagonis mungkin secara klinis bermanfaat. Selain itu,
senyawa tersebut akan berharga alat penelitian dasar
untuk mempelajari biologi jalur hormon tiroid sinyal. Untuk
tanggal, pengembangan antagonis poten telah terbukti bermasalah.
Obat jantung aritmia amiodarone dan primer
metabolit, desethylamiodarone, telah diusulkan untuk
fungsi dalam bagian sebagai antagonis reseptor hormon tiroid (4).
Namun, mengikat senyawa untuk TRs dengan relatif rendah
afinitas dan memiliki efek kompleks pada fungsi reseptor, menunjukkan
kedua aktivitas agonis dan antagonis tergantung pada metode analisis
(5). Baru-baru ini, tiga senyawa, HY-4 (6), GC-14 (7), dan DIBRT
(8), dilaporkan mengikat TRs langsung dan menghambat
3,5,3-triiodothyronine? (T3) transkripsi-induced dalam kultur
sel. Namun, senyawa ini memiliki relatif lemah mengikat
afinitas dan potensi rendah dan karena itu belum digunakan
sukses dalam model hewan.
Kami menggunakan Xenopus laevis sebagai metamorfosis sederhana dan
sangat direproduksi layar untuk hormon tiroid aktif biologis
agonis dan antagonis. Sistem Xenopus adalah berharga
model untuk tindakan hormon tiroid karena beberapa alasan
(1, 10). The Xenopus hormon tiroid, tiroksin (atau T4) dan
bentuk yang paling kuat, T3, adalah identik dalam struktur pada
hormon tiroid mamalia (lihat Gambar 1.) (11). inisiasi The
dan penyelesaian metamorfosis tergantung pada hormon tiroid
disekresikan dari kelenjar tiroid berkembang (11). Sekeliling
konsentrasi sel target T3 diatur melalui
spesifik jaringan ekspresi (D2) II yang sangat lestari tipe
dan tipe III (D3) deiodinase enzim (12, 13). Tiroid dua
hormon reseptor isotypes (TR dan TR??) (14), heterodimer mereka
mitra (RXR,??, dan?) (15, 16), dan receptorassociated
co-represor dan co-activators2 secara struktural dan
fungsional baik dilestarikan dengan mitra mamalia.
The TRs mengenali unsur-unsur respon hormon tiroid di asli
gen target yang mengandung mengulangi langsung kanonik serupa
untuk AGGTCA dipisahkan oleh 4 pasangan basa (17-19). Berudu
siap mengambil hormon tiroid dari pemeliharaan air
solusi dan merespon dalam dosis yang tergantung dan sangat stereotypic
cara. Setiap jaringan merespon secara langsung dan mandiri
ke hormon berdasarkan percobaan budaya organ, apakah
respon adalah pertumbuhan sel dewasa atau kematian sel-sel larva (11,
20, 21). Dengan demikian, metamorfosis amfibi menyajikan unik
kesempatan untuk menjawab pertanyaan penting tentang tiroid
tindakan hormon yang umum untuk semua vertebrata.
Kami melaporkan sini karakterisasi hormon tiroid baru
reseptor antagonis, NH-3 (9), menggunakan metamorfosis X. laevis
sebagai sistem model kita. NH-3 tampaknya telah membaik
sifat antagonistik atas senyawa sebelumnya yang mungkin
memungkinkan Karakterisasi aktivitas in vivo. Kami menyajikan bukti
bahwa NH-3 memang merupakan inhibitor poten tidak hanya tiroid
hormon tindakan in vitro tetapi metamorfosis diinduksi dan spontan
in vivo juga.
PROSEDUR PERCOBAAN
Kimia-Sintesis dan pemurnian NH-3 telah dijelaskan
secara rinci sebelumnya (9). Lyophilized NH-3 telah dilarutkan dalam
100% dimetil sulfoxide (Me2SO) pada konsentrasi 10 mM dan
disimpan dalam Aliquot pada? 20 ° C sampai digunakan. GC-1 disintesis seperti
yang dijelaskan
(22) dan disimpan sebagai stok mM 10 di Me2SO. Semua bahan kimia lainnya
dibeli dari Sigma kecuali dinyatakan lain. T3 adalah dis-
* Karya ini didukung sebagian oleh Institut Kesehatan Nasional
Hibah DK-55.511 (untuk JDF) dan DK-52.798 (untuk TSS). Biaya
publikasi artikel ini dibiayai sebagian oleh pembayaran halaman
biaya. Artikel ini karenanya harus ini ditandai "iklan"
sesuai dengan 18 U.S.C. Bagian 1734 semata-mata untuk menunjukkan fakta ini.
? Kepada siapa korespondensi harus ditangani. Tel: 530-754-8609;.
Fax: 530-753-4779; E-mail: jdfurlow@ucdavis.edu.
1 Singkatan yang digunakan adalah: TR, reseptor hormon tiroid; Xtr, X.
laevis TR; T3, 3,5,3-triiodothyronine;? T4, tiroksin; TRE, hormon tiroid
elemen respon; MMR, jari Marc dimodifikasi. 2 ES Neff, W. Lim, dan JD
Furlow, hasil tidak diterbitkan.
ATAS Jurusan Kimia BIOLOGIS Vol. 277, No 38, Issue 20 September hlm
35.664-35.670, 2002
© 2002 oleh American Society for Biokimia dan Biologi Molekuler, Inc Dicetak
di Amerika Serikat
35.664 Makalah ini tersedia on line di http://www.jbc.org
Download dari www.jbc.org oleh tamu, pada 2 Oktober 2010
diselesaikan dalam 4 mM NaOH pada konsentrasi 1 mM dan disimpan pada 80 °?
C.
Methimazole dilarutkan dalam air steril pada 1 M dan disimpan pada 20 °? C.
Transient Transfeksi tes-Manusia kanker serviks rahim (HeLa)
sel (Cell Budaya Fasilitas, UCSF) ditanam untuk? 80% confluency di
Dulbecco's dimodifikasi Eagle / H-21, 4,5 g / liter medium yang mengandung
glukosa
10% serum anak sapi baru lahir, 2 mM glutamin, 50 unit / ml penisilin, dan 50
g streptomisin? / ml. Sel (1,5?? 106) dikumpulkan dan resuspended
dalam 0,5 ml buffer elektroporasi (Dulbecco's garam fosfat-buffer
mengandung dextrose 0,1%, 10 mg / bioprene ml) dengan 5? g TH / bZIP
TRE-reporter luciferase? MTV plasmid (17), 0,5? G PRL-TK konstitutif
Renilla luciferase reporter plasmid (Promega), dan 1? G baik
yang Xtr miw? atau Xtr miw? ekspresi vektor per transfeksi.
Sel transfected oleh elektroporasi (Bio-Rad Gene pulser; 0,32
kV, 960 microfarad, cuvettes 0,4-cm) dan berlapis dalam 12-well pelat di
medium pertumbuhan (Dulbecco's modified Eagle / H-21 dengan 10%
hormonedepleted
anak sapi baru lahir serum). Setelah ligan, inkubasi 6-jam atau kendaraan
(EtOH) ditambahkan dalam rangkap tiga. Setelah inkubasi 24-jam tambahan,
Sel dipanen dan diuji untuk kegiatan luciferase menggunakan Promega
Luciferase Dual kit (Promega) dan luminescence Analitis
Laboratorium Monolight? 3010 luminometer. Data dinormalisasi ke
Renilla luciferase aktivitas dan dianalisis dengan komputer Grafik-Pad
Program (GraphPad Software, Inc) menggunakan model tunggal-situs persaingan
untuk menghasilkan nilai IC50.
Untuk tes dua-hibrida mamalia, X. laevis TR? dan TR? engsel dan
urutan domain pengikatan ligan diamplifikasi dengan PCR dan subcloned
hilir DNA gal4 ragi faktor transkripsi domain yang mengikat
dalam vektor ekspresi pSG5 (hadiah dari Dr Marty Privalsky, UC
Davis). 2,5? G dari hulu urutan aktivasi yang mengandung luciferase
wartawan, 2,5 g dari vektor ekspresi konstitutif-galaktosidase?, 1?? g
baik vektor LBD/gal4 fusi TR DBD, dan 1? g ekspresi
vektor untuk protein fusi GRIP-1/VP16 (hadiah dari Dr John Baxter,
UCSF) atau SRC-1/gal4 aktivasi domain protein fusi (hadiah dari Dr
Marty Privalsky) yang transfected oleh elektroporasi ke dalam sel HeLa
dan diproses seperti dijelaskan di atas.
Perlindungan protease assay-[35S] metionin-berlabel (Amersham
Biosciences) TR? dan TR? protein disintesis menggunakan TNT SP6
Ditambah benih gandum Ekstrak di transkripsi dan translasi in vitro
sistem (Promega). 2? L dari diterjemahkan 35S-label TR dicampur dengan
menunjukkan konsentrasi T3, GC-1, NH-3, atau kendaraan dan diinkubasi selama
30 menit pada suhu kamar. 2? G tipe IV elastase (Sigma) dicampur
dengan TR dan hormon dalam piring 96-baik (Costar 9017), membawa
total volume untuk 20? l. Setelah inkubasi kamar 20-menit temperatur,
sampel buffer SDS-PAGE ditambahkan diikuti oleh empat freezethaw 1-mnt
siklus. Sampel direbus selama 10 menit sebelum analisis SDS-PAGE.
Gel SDS-PAGE tetap dengan isopropanol 25% dan 10% asetat
asam dan kering selama 2 h. Gel terkena layar phosphorimager
semalam dan scan dengan Storm 860 (Molecular Dynamics). The
pita quantitated menggunakan software ImageQuant.
Percobaan Kecebong-X. laevis berudu spesifik perkembangan
tahap yang dibeli dari Nasco, Inc hewan erat restaged
setelah diterima sesuai dengan Tabel Normal X. laevis (23). Untuk
diinduksi percobaan metamorfosis, tiga stage-52/53 berudu adalah
tambah per piring Extra-Deep (Fisher) dengan total enam berudu per kelompok
dalam 75 ml 0,1? MMR (10 mM NaCl, 0.2 mM KCl, 0,1 mM MgCl2, 0,2 mM
CaCl2, 0,5 mM HEPES pH 7,5). T3 konsentrasi 5 nM, 15 nM, dan 50
nM digunakan dalam hubungannya dengan berbagai konsentrasi NH-3 atau
sama volume kendaraan saja (Me2SO atau 4 mM NaOH). Solusi
diganti setiap hari dengan total 5 hari.
Dua tahap-57 berudu ditambahkan per piring Extra-Deep untuk total
empat berudu per kelompok dalam 75 ml 0,1? MMR. Para berudu adalah
mandi di 0,25-3? M NH-3, 1 mM methimazole, atau yang sesuai
jumlah kendaraan saja (Me2SO). Solusi itu diganti setiap
hari lain, dan tahap perkembangan (23) dicatat sampai kontrol
pergi melalui metamorfosis sepenuhnya. Pada titik ini, NH-3 adalah
dihapus, dan sisanya kecebong diizinkan untuk terus melalui
metamorfosis di 0,1? MMR.
Tail Organ Budaya-Kecebong ekor dikultur in vitro seperti yang dijelaskan
sebelumnya (21), dengan beberapa modifikasi. berudu Bertahap adalah
pra-perawatan dalam 1? Steinberg Solusi (10 mM HEPES, 60 mM NaCl, 0,67
mM KCl, 0,34 mM Ca (NO3) 2, 0,83 MgSO4 mM, pH 7,4) yang mengandung
gentamisin
(70 g / ml?) Dan streptomisin (200? G / ml) 24 jam sebelum penghapusan
tips ekor untuk budaya. Para kecebong itu dibius sebentar dalam air
MS222 mengandung 0,01% (asam aminoesterbenzoic, Sigma), setelah
6 mm ekor dipotong dan ditempatkan dalam 1 ml 1? Steinberg Solusi
dengan antibiotik dan 5? g / ml insulin dalam 12-well kultur jaringan Falcon
piring (Becton Dickinson-). tips Tail dibiarkan dalam medium kultur untuk
24 jam sebelum terapi hormon pertama. Setelah itu, medium
diubah setiap 48 jam Panjang setiap ekor diukur setiap
24 jam, dan setiap titik percobaan terdiri dari panjang persen rata-rata
perubahan enam ekor.
Kuantitatif PCR Assay-Total RNA diekstraksi dari kecebong
jaringan menggunakan reagen Trizol (Invitrogen) menurut pabrikan
spesifikasi. Jaringan kemudian dihomogenkan dalam Trizol dengan Tekmar
Tissumizer dan dicukur dengan jarum 21-gauge tiga kali. Perpaduan
cDNA dilakukan dengan pd (N) 6 (Amersham Biosciences), anti-
RNase (Ambion, Inc), dan Superscript II (Invitrogen) sesuai dengan
spesifikasi pabrikan. PCR kuantitatif dilakukan dengan menggunakan
sebuah Terapan Biosystems GeneAmp 5700 urutan sistem deteksi,
reagen PCR SYBR inti hijau, dan primer dirancang menggunakan Primer
Express (Biosystems Terapan). Kolagenase-3 dideteksi menggunakan primer
5?-GAAGAAGCCAGGACCTTGGAT-3 dan 5??-
CAAATTGCAGAGCTCCGTTGA-
3?. Sampel normal menggunakan oligonukleotida spesifik
untuk pengkodean RNA X. laevis subunit ribosomal protein L8, 5?-
GCTGAGCTTTCTTGCCACAGT-
3? dan 5-GGTTGCATTCCGTGATCCTTA?-
3?. cDNA terdilusi 1:400 untuk rpL8 dan 1:20 untuk kolagenase-3
sebelum PCR kuantitatif. Kondisi untuk PCR adalah sebagai berikut: 94 ° C, 10
menit diikuti dengan 40 siklus 94 ° C, 20 s; 58 ° C, 30 detik, dan 72 ° C, 30 detik
HASIL
NH-3 Mengikat Langsung ke hormon TRs Xenopus-The tiroid
antagonis NH-3 merupakan turunan dari thyromimetic selektif
GC-1 dan berisi bagian asetilena nitrofenil terpasang
ke 5?-posisi inti thyronine (Gbr. 1). Kami
mempekerjakan perlindungan protease assay untuk menentukan apakah
NH-3 dapat mengikat langsung ke Xenopus TRs. uji ini memiliki
keuntungan dari memberikan perkiraan afinitas mengikat relatif
dan sarana untuk mendeteksi perbedaan konformasi saat TRs
terikat untuk berbagai ligan. Menggunakan IV elastase, meningkatkan
jumlah band dilindungi? 35 kDa diamati dengan
meningkatkan NH-3 konsentrasi (Gbr. 2A). Mengikat NH-3 oleh
Gambar. 1. Struktur T3, T4, GC-1,
dan NH-3. Struktur kimia dari tiga
agonis reseptor hormon thyroid (T3,
T4, dan GC-1) dibandingkan dengan struktur
dari antagonis NH-3.
Sebuah Antagonis Aksi Hormon Tiroid di Vivo 35665
kedua xTRs berkurang dari T3 agonists dan GC-1 oleh sedikitnya
satu orde magnitude.3-NH 3 tampaknya TR mengikat? dan TR?
dengan afinitas yang sama (Gambar 2B), menyiratkan bahwa modifikasi ini
selektivitas-1 berkurang isotipe GC. Baik relatif mengikat
afinitas dan selektivitas isotipe menurun konsisten dengan temuan
menggunakan TRs manusia (9).
Menjenuhkan T3, GC-1, dan konsentrasi NH-3 digunakan dalam
protease assay perlindungan mengungkapkan sebuah band yang dilindungi yang
berbeda
pola di kedua Xtr? dan? diinkubasi dengan NH-3 (Gambar 2C). The
band utama dalam TRs NH-3-dilindungi sesuai dengan anak di bawah umur
band di agonis reseptor yang terikat. Band ini merupakan
molekul 1,5 kDa lebih kecil dari? utama agonis yang dilindungi
band. Dengan demikian, perpanjangan 5-phenylethynyl? NH-3 tampaknya
merangsang konformasi Xtr yang berbeda dari agonistbound
xTRs.
NH-3 Menghambat T3-induced Transkripsi dalam Transien
Transfeksi Assay-Untuk menentukan efek dari NH-3 pada T3-
induksi transkripsi, Xtr? atau? plasmid ekspresi yang
co-transfected dengan TH a / bZIP gen TRE-luciferase reporter
ke dalam sel HeLa. NH-3 saja tidak mengaktifkan Xtr? atau? relatif
dengan kontrol yang tidak diobati (Gambar 3A). Dalam tes kompetisi,
NH-3 blok aktivasi oleh 1 T3 nM secara dosis-tergantung
(Gambar 3B). NH-3 ini? 3-4-lipat lebih kuat pada 1 berlawanan nM
T3 diaktifkan Xtr? relatif terhadap Xtr? (? IC50 100 nM versus 380
nM, masing-masing). Hal ini berkorelasi baik dengan kompetitif
mengikat assay data untuk TR manusia? dan?, yang menunjukkan? 3-kali lipat
selektif mengikat isotipe-? (9), meskipun selektivitas ini
kurang terbukti dengan Xenopus TRs menggunakan perlindungan protease
assay (Gbr. 2B).
3 Furlow JD, M. Hsu, W. Lim, Ermio DJ, HY Yang, G. Chiellini,
dan T. S. Scanlan, disampaikan untuk publikasi.
Gambar. 2. NH-3 mengikat langsung kepada kedua X. laevis hormon tiroid
reseptor isotypes. A, in vitro diterjemahkan, 35S-berlabel Xtr? (?) Atau Xtr?
(?) Yang diinkubasi dengan konsentrasi nM ditunjukkan NH-3 dan
kemudian dirawat dengan 4? g IV elastase. Band-band yang dihasilkan
diselesaikan
sebesar 12% SDS-PAGE. B, mengikat kurva untuk Xtr? (Kotak) dan Xtr?
(Lingkaran) yang dihasilkan oleh kuantisasi dari band dilindungi ditunjukkan
dalam
A dan dinyatakan sebagai persentase dari band maksimal dilindungi. C,
elastase perlindungan pola Xtr? dan Xtr? diinkubasi dengan menunjukkan
menjenuhkan konsentrasi T3, GC-1, atau NH-3, dilakukan seperti di A.
Posisi penanda massa molekul dalam kDa ditandai ke kiri.
Gambar. 3. NH-3 menghambat T3-transkripsi akibat di transien
transfeksi assay. A, sel HeLa yang electroporated dengan ekspresi
plasmid untuk Xenopus TR? atau Xenopus TR? bersama dengan TRE
mengandung
reporter gen (TH / bZIP Tres di vektor luciferase? MTV). Sel
diobati dengan kendaraan sendiri (bar terbuka), 1 nM T3 (diisi bar), atau 10
M NH-3 (bar bergaris-garis), dan aktivitas luciferase? Diuji. B, sel
adalah transfected dengan Xtr? (Kotak) atau Xtr? (Segitiga) ekspresi
konstruksi seperti di A dan diperlakukan dengan 1 T3 nM seiring dengan
bertambahnya
jumlah NH-3. The IC50 untuk Xtr? adalah 377 nM NH-3 dengan nilai R2
dari 0,94, sedangkan IC50 untuk Xtr? adalah 105 nM untuk NH-3 dengan nilai R2
sebesar 0,88.
35666 Sebuah Antagonis Aksi Hormon Tiroid di Vivo
Co-aktivator Rekrutmen oleh TRs Apakah Penghambatan oleh NH-3-
Dasar molekuler untuk antagonisme T3 oleh NH-3 adalah
diselidiki dengan alat tes dua-hibrida di sel Hela (Gambar 4A).
Xtr? domain pengikatan ligan yang tergabung ke transkripsi ragi
Faktor gal4 domain pengikatan DNA dan co-transfected
dengan manusia GRIP-1 fusi VP16 atau dengan manusia SRC-1 leburan
untuk domain aktivasi gal4. Seperti ditunjukkan dalam Gambar. 4B, 10? M NH-3
sepenuhnya menghapuskan T3-interaksi diinduksi dengan-GRIP 1
fusi protein dan SRC-1. The IC50 setengah maksimal untuk kompetisi
terhadap 20 nM T3 920 nM NH-3 untuk GRIP-1 dan 870
nM untuk SRC-1 (Gambar 4, C dan D). Xtr? menunjukkan pada dasarnya
hasil yang sama, kecuali bahwa kurva inhibisi telah bergeser
sedikit ke kanan seperti yang diharapkan berdasarkan kurva persaingan
ditunjukkan pada Gambar. 3B (data tidak ditampilkan).
NH-3 Menghambat T3-induced Metamorfosis-Karena NH-3
bertindak sebagai antagonis kuat dalam tes transfeksi sementara, kami
selanjutnya diuji kemampuan NH-3 untuk menghambat hormon tiroid
tindakan di dalam model hewan vivo. Metamorfosis katak di X.
laevis sangat tergantung pada T4 dan T3 yang dikeluarkan oleh
kelenjar tiroid. Yang penting, T4 dan T3 precociously dapat menimbulkan
metamorfosis dengan penambahan senyawa ini untuk pemeliharan
air (11). Untuk menguji apakah NH-3 dapat menghambat metamorfosis T3-
induced,
premetamorphic X. laevis berudu diperlakukan
dengan 5 atau 15 T3 nM versus meningkatnya konsentrasi NH-3 atau
dengan NH-3 saja. Seperti ditunjukkan dalam Gambar. 5, meningkatnya
konsentrasi NH-3
menghambat T3-arch branchial diinduksi (insang internal) resorpsi,
janggut resorpsi, perluasan otak, Meckel dan
pertumbuhan tulang rawan, dengan 2 menunjukkan NH? M-3 maksimal
inhibisi. Perubahan morfologi eksternal, kaki belakang
pertumbuhan adalah yang paling dihambat oleh NH-3, yang paling mudah dilihat
pandangan perut (Gambar 5B). 2 dan 3 M NH-3 itu? Kurang efektif
di 15 menghambat nM T3-akibat perubahan morfologi, menunjukkan
bahwa efek dari NH-3 adalah hasil dari kompetisi sederhana
dengan T3. 3 M NH-3 saja? Menunjukkan beberapa agonis parsial
kegiatan, terutama dalam pengurangan ukuran umum kepala.
Semua berudu selamat perawatan lima hari dari konsentrasi
T3 dan NH-3, dan menunjukkan perilaku khas seluruh
perjalanan percobaan. Konsentrasi NH-3 lebih besar
dari 5 M? beracun untuk binatang.
Kita selanjutnya memeriksa kemampuan NH-3 untuk menghambat T3-induced
ekor resorpsi. Ketika tips ekor yang dibudidayakan secara in vitro, T3 kuat
menyebabkan penyusutan ekor. Tingkat resorpsi Maksimal diinduksi
di atas 30 nM dalam assay.4 Seperti ditunjukkan dalam Gambar. 6, penambahan
dari 2 NH M?-3 sangat resorpsi ekor keterlambatan disebabkan oleh 50 nM
T3. resorpsi Beberapa diinduksi oleh 2? M NH-3 saja, menunjukkan
4 DJ dan JD Ermio Furlow, hasil tidak diterbitkan.
Gambar. 4. p160 keluarga co-aktivator perekrutan oleh Xtr? dihambat oleh NH-3.
A, skematik dari dua-hybrid assay. Xtr? ligan mengikat
domain/gal4 DNA fusi domain mengikat adalah co-dinyatakan dengan perpaduan
domain aktivasi GRIP-1/gal4 dan diuji untuk aktivasi dari
aktivasi hulu urutan (UAS)-luciferase reporter gen di hadapan T3, NH-3, atau
keduanya. B, NH-3 benar-benar menghambat T3-induced
interaksi dengan GRIP-1 (GRIP1-VP16) atau-1 SRC (SRC1-galad) protein fusi.
Buka bar, kendaraan saja; bar diisi, 20 nM T3; bar bergaris, 10 M?
NH-3; menetas bar, 20 nM T3? 10? M NH-3. C, dosis-respons kurva NH-3
penghambatan T3-induced-1 interaksi GRIP dengan Xtr?, Menggunakan
dua-hybrid assay yang diuraikan dalam A. Segitiga, 20 nM T3? meningkatkan
dosis NH-3; kuadrat, NH-3 saja. D, dosis-respons kurva untuk NH-3 inhibisi
T3-induced SRC-1 interaksi dengan Xtr, menggunakan uji dua-hibrida yang
diuraikan dalam A. Segitiga, 20 nM T3? meningkatkan dosis NH-3; kuadrat,
NH-3 saja. Kesalahan bar mewakili S.E.
Sebuah Antagonis Aksi Hormon Tiroid di Vivo 35667
bahwa pada konsentrasi NH-3 mungkin memiliki beberapa agonis parsial
Aktivitas tidak diamati dalam pengujian transfeksi transien.
Selain memblokir perubahan morfologi, NH-3 juga
menghambat T3-gen target diinduksi up-regulasi. Misalnya,
kolagenase-3 sangat diinduksi oleh T3 selama metamorfosis
Gambar. 5. T3-metamorfosis akibat dihambat oleh NH-3.
Premetamorphic stage-52/53 berudu diobati dengan yang ditunjukkan
konsentrasi T3 dan / atau NH-3 selama 5 hari. A, punggung pemandangan kepala
dan akhir anterior ekor yang akan ditampilkan. Bar, 2 mm; MC, Meckel
tulang rawan, Br, otak, BA, lengkungan branchial; HL, anggota belakang. B, perut
pemandangan hewan menunjukkan ditampilkan dalam A. BB, sungut, bar, 2 mm.

Gambar. 6. NH-3 menghambat resorpsi ekor T3-induced in vitro.
tips Premetamorphic ekor kecebong dikultur selama 7 hari di hadapan
kendaraan saja (lingkaran terbuka), 50 nM T3 (kotak terbuka), 2? M NH-3
(Lingkaran diisi), atau 50 nM T3? 2 M NH-3 (diisi kotak).? Ekor adalah
diukur setiap hari, dan menengah segar ditambahkan setiap hari. Enam
ekor digunakan per kelompok perlakuan, dan perubahan persen
dihitung relatif terhadap mulai panjang ekor. Kesalahan bar mewakili S.D.
Gambar. 7. NH-3 menghambat T3-induced up-regulasi kolagenase-
3. RNA diekstraksi dari berudu diperlakukan dengan konsentrasi yang berbeda
T3 dan NH-3. Kolagenase-3 mRNA tingkat diukur dengan
real-time PCR kuantitatif dan dinyatakan sebagai persentase maksimal
induksi untuk RNA diberikan. Setiap sampel dijalankan dalam rangkap tiga dan
dinormalisasi terhadap ekspresi gen protein ribosom rpL8. Kesalahan
bar mewakili S.D.
Gambar. 8. Metamorfosis spontan sangat dihambat oleh
NH-3. A, empat tahap akhir-57 X. laevis berudu dipertahankan dalam
menunjukkan konsentrasi NH-3, 1 mM methimazole, atau kendaraan sendiri
selama 10 hari. Dua binatang dari setiap kelompok perlakuan yang ditampilkan
menunjukkan
kisaran pembangunan pada akhir perlakuan. Hitam bar, 5
mm. Percobaan diulangi setidaknya dua kali tambahan. B,
hewan ditampilkan dalam A dipantau setiap hari dan diberi perkembangan
tahap berdasarkan tabel Nieuwkoop dan Faber (23). Empat hewan
digunakan per kelompok; error bar menunjukkan S.D. Konsentrasi NH-3
(Diamond diisi, kontrol (kendaraan saja); berlian terbuka, 0,25 M;? Diisi
segitiga, 0,5 M;? segitiga terbuka, 1 M;? lingkaran penuh, 2 M;? kotak terbuka,
3 M) atau 1 methimazole mM (Meth.;? Kotak diisi) ditunjukkan ke kanan
setiap baris yang sesuai. Tahap 66 adalah akhir dari metamorfosis.
35668 Sebuah Antagonis Aksi Hormon Tiroid di Vivo
di resorbing dan remodeling jaringan (24-26). NH-3 menghambat 5
nM T3-induced kolagenase-3 ekspresi di dalam tergantung dosis
cara yang erat mencerminkan efek dari NH-3 pada morfologi
perubahan (Gbr. 7). Dengan NH-3 konsentrasi di atas 2? M,
agonism sebagian kolagenase-3 ekspresi yang diamati. Hewan
diperlakukan dengan tingkat tinggi NH-3 saja (2-3? M) menunjukkan
rendahnya tingkat kolagenase-3 induksi yang kurang dari 10% dari
5 nM T3-induced tingkat mRNA.
NH-3 Menghambat spontan Metamorfosis-Kita selanjutnya diuji
kemampuan NH-3 untuk mencegah metamorfosis spontan
disebabkan oleh endogen hormon tiroid yang beredar. Premetamorphic,
tahap akhir-57 X. laevis berudu digunakan untuk ini
percobaan. Hewan ini sudah mulai metamorfosis spontan
dengan anggota belakang sepenuhnya terbentuk, tapi kaki depan mereka
belum muncul. NH-3 penundaan metamorfosis dalam sebuah dosedependent
cara (Gbr. 8, A dan B), dengan 2 M NH-3 benar-benar?
menangkap binatang pada tahap 57. 2? M NH-3 setidaknya
efektif pada terhambatnya metamorfosis sebagai 1 methimazole mM
(Suatu inhibitor sintesis hormon tiroid). Penghapusan NH-3
memungkinkan metamorfosis untuk melanjutkan normal setelah beberapa lag
hari, sehingga efek dari NH-3 sepenuhnya reversibel dan tidak
disebabkan oleh toksisitas umum (data tidak ditampilkan).
DISKUSI
NH-3 adalah antagonis reseptor hormon pertama tiroid yang
efektif menghambat tindakan hormon tiroid di dalam sistem vivo.
NH-3 dirancang berdasarkan hipotesis ekstensi untuk pengembangan
dari antagonis reseptor nuklir (7). Hipotesis
berpendapat bahwa seseorang dapat memprediksi di mana untuk memodifikasi
reseptor nuklir
ligan dalam rangka untuk menempatkan ekstensi molekul yang seharusnya
mengganggu
lipatan helix karboksi-terminal 12 dan oleh karena itu
mencegah perekrutan co-penggerak. Ketika terikat kepada kedua Xenopus
(Gambar 3 dan 4) atau TRs manusia (9), NH-3 kompetitif menghambat
induksi gen reporter TRE-mengandung serta p160
co-penggerak protein perekrutan secara dosis-tergantung.
Atas dasar tes perlindungan protease dilakukan di ini
studi, NH-3 juga jelas menginduksi perubahan konformasi yang berbeda
dari TRs agonis-terikat yang mungkin mencerminkan prediksi
misfolding dari helix 12 (Gambar 2C). Perbedaan antara
utama dilindungi band di agonis-antagonis-terikat versus
TRs (1,5 kDa) sesuai dengan baik untuk ukuran diprediksi helix 12.
Meskipun efektivitas NH-3 in vitro, penggunaannya dalam kedua
penelitian dasar dan di klinik tergantung pada potensinya sebagai
inhibitor efek hormon tiroid dalam organisme utuh. Sebagai
Langkah pertama, kita telah mengeksploitasi diinduksi dan metamorfosis spontan
dari X. laevis katak sebagai bioassay nyaman bagi
NH-3. Karena interaksi NH-3 dengan Xenopus manusia dan
TRs in vitro sangat mirip, metamorfosis menyajikan
suatu bioassay ideal untuk layar untuk senyawa dengan tiroid
hormon antagonis kegiatan. NH-3 ini sangat efektif dalam
penghambatan metamorfosis spontan serta metamorf
perubahan yang disebabkan oleh eksogen ditambahkan T3. Konsisten
dengan selektivitas yang lebih rendah dibandingkan dengan TR isotipe GC-1,
NH-3
menghambat respon metamorfik yang paling diamati, termasuk jaringan
pertumbuhan seperti yang terlihat di otak dan tulang rawan Meckel dan
kematian jaringan larva seperti insang internal dan ekor. Belakang
pertumbuhan anggota badan kurang efektif dihambat oleh NH-3, mungkin karena
TR sedikit nya? selektivitas. NH-3 tidak hanya menghambat
T3 serapan dari media pemeliharaan sebagai mode kerjanya
karena potently blok induksi dari metamorfosis spontan
dengan tingkat sirkulasi hormon tiroid endogen. Dalam
kasus ini, NH-3 merupakan inhibitor lebih ampuh daripada methimazole, sebuah
senyawa yang mencegah sintesis hormon tiroid. Selain itu,
efek dari NH-3 benar-benar reversibel, yang berarti
bahwa antagonis yang tidak beracun dan dapat ditambahkan dan dihapus
dari hewan di akan. Berbeda dengan NH,-3 sebelumnya
antagonis hormon tiroid dijelaskan HY-4 (6) dan
GC-14 (7) tidak menghambat metamorfosis diinduksi atau T3-induced
ekspresi gen pada konsentrasi di bawah 10 M;? konsentrasi yang lebih tinggi
senyawa tersebut ditemukan sangat beracun ke
binatang (data tidak ditampilkan). Dengan demikian, desain peningkatan NH-3
atas hasil senyawa sebelumnya dalam TR afinitas yang lebih tinggi dan
lebih besar potensi tersebut yang NH-3 dapat digunakan pada efektif tetapi
subletal konsentrasi in vivo.
NH-3 menunjukkan aktivitas agonis parsial yang lemah baik dalam ekspresi gen
dan morfologi pengujian pada konsentrasi 2?? M di
vivo. Kolagenase-3 adalah dibujuk untuk? 10% dari tingkat diinduksi oleh
T3 penuh agonis. Percobaan menggunakan TRs manusia menunjukkan bahwa
NH-3 menginduksi pelepasan NCoR corepressor di samping
untuk mencegah co-penggerak mengikat (9). Tidak adanya parsial
agonis kegiatan di transfeksi transient dapat terjadi dari
kurangnya perakitan kromatin yang benar pada plasmid transfected.
Selain rilis corepressor, agonism parsial yang lemah dapat menyebabkan
dari metabolisme NH-3 untuk suatu senyawa dengan agonis lemah
aktivitas pada hewan utuh.
Singkatnya, NH-3 akan menjadi alat yang berguna untuk mempelajari
efek reversibel memblokir aktivitas TR di sejumlah yang berbeda
hewan sistem. Sebelum ketersediaan farmakologi
probe, studi tersebut telah mengandalkan pada tikus TR-KO yang
memiliki kehilangan ireversibel hewan ekspresi dari satu atau
baik isotypes TR seluruh pembangunan (27). Tentu saja,
utilitas NH-3 pada mamalia akan tergantung pada berbagai farmakokinetik
seperti clearance metabolik, serapan selular parameter,
dan mengikat untuk serum protein, yang semuanya mungkin berbeda di
model amfibi. Beyond metamorfosis anuran, tiroid
hormon telah terlibat dalam berbagai penting
proses biologis pada organisme yang tidak memiliki tersedia genetik
pendekatan. Ini termasuk pengembangan langsung dan tidak langsung
amfibi dan ikan (28-31), kontrol Photoperiodism di
berbiak musiman burung (32), dan smoltification dari salmonids
(33, 34), yang semuanya dapat digali lebih mekanistik terinci
menggunakan NH-3. Akhirnya, hasil kami jelas menunjukkan derajat
keterkaitan struktural dan fungsional antara mamalia
dan TRs amfibi dan lebih menekankan kegunaan
model amfibi untuk mengidentifikasi biologis aktif nuklir
reseptor ligan.
21103
Sebuah Keluarga neuropeptida Yang Menghambat Hormon Juvenile

Biosintesis di Cricket, bimaculatus Gryllus *
(Diterima untuk publikasi, 15 Mei 1995, dan dalam bentuk revisi, 3 Juli 1995)
Matthias W. Lorenz ‡, Roland Kellner §, dan Klaus H. Hoffmann ‡ ¶
Dari ‡ Lehrstuhl Tiero ¨ kologie saya, Universita ¨ t Bayreuth, 95440 Bayreuth
dan Institut fu § ° R Physiologische Chemie und
Pathobiochemie, Gutenberg-Universita t °, 55099 Mainz, Republik Federal
Jerman
Empat nonapeptides yang menghambat sintesis hormon juvenil
telah diisolasi oleh empat cair kinerja tinggi
kromatografi langkah dari ekstrak otak
kriket lapangan, bimaculatus Gryllus. Utama
struktur peptida ini ditugaskan oleh Edman
degradasi dan spektrometri massa sebagai Gly-trp-Gln-Asp-
Leu-Asn-Gly-Gly-trp-NH 2 (GRB-AST B1), Gly-trp-Arg-
Asp-Leu-Asn-Gly-Gly-trp-NH 2 (GRB-AST B2), Ala-trp-
Arg-Leu-Asp-Ser-Gly-Gly-trp-NH 2 (GRB-AST B3), dan
Ala-trp-Glu-Arg-Phe-Nya-Gly-Ser-trp-NH 2 (GRB-AST B4).
Masing-masing dari peptida menunjukkan kesamaan urutan tinggi
peptida locustamyoinhibiting (Lom-MIP), tetapi
struktural yang berbeda dari semua allatostatins sejauh
diidentifikasi. The sintetis allatostatins GRB-AST B1-4 yang
kuat inhibitor (50% hambatan pada 1028-7 3 1028 M)
hormon juvenil III biosintesis oleh allata corpora
dari betina perawan 3 hari yang berusia G. bimaculatus menggunakan
dalam vitro bioassay. Pada 1027 M, GRB-AST B1 juga sangat
menghambat biosintesis hormon III juvenile oleh corpora
allata dari laki-laki dewasa 2-hari-tua dan 1-hari-tua (laki-laki
dan perempuan) dan 4-hari-tua (betina) larva instar terakhir
G. bimaculatus. Efek penghambatan GRB-AST B1 adalah
juga terlihat pada allata corpora dari spesies terkait,
Acheta domesticus. Penghambatan sintesis hormon juvenil
oleh GRB-AST B1-4 adalah reversibel.
Penghambatan hormon juvenil (JH) 1 biosintesis oleh corpora
allata (CA) in vitro telah memberikan dasar untuk isolasi dari
keluarga allatostatins (Tyr-Xaa-Phe-Gly-Leu-NH 2) dari otak
ekstrak berbagai spesies kecoa (Diploptera punctata,
Periplaneta americana, dan Blattella germanica) (1-6). Dalam D.
punctata dan P. americana, kloning molekuler telah menyebabkan
isolasi cDNA yang mengkode polipeptida yang mengandung prekursor
13 dan 14 allatostatic urutan potensial, masing-masing,
termasuk yang sebelumnya diidentifikasi melalui pemurnian konvensional
teknik (7, 8). Dalam punctata D., ekspresi dari
allatostatin gen dalam sel endokrin midgut juga ditunjukkan
(9). Dalam blowfly itu, Calliphora vomitoria, enam peptida
dengan kesamaan urutan untuk allatostatins kecoa telah
diidentifikasi; ini menghambat biosintesis JH III pada kecoa, namun
tidak menghambat sintesis bisepoxide III JH dalam lalat itu sendiri (10,
11). Sebuah allatostatin yang secara struktural tidak terkait dengan kecoa
allatostatins telah dimurnikan dan dikarakterisasi dari
kepala orang dewasa pharate dari Sexta Manduca ngengat (12).
Baru-baru ini, kami mengidentifikasi inhibitor peptida dua JH III
biosintesis dari ekstrak otak dari kriket lapangan,
Gryllus bimaculatus, yang ditunjuk GRB-AST A1 dan
GRB-AST A2, masing-masing (13). Masing-masing dari peptida menunjukkan
C-terminal kemiripan sekuens asam amino kecoa allatostatins
dan blowfly callatostatins. Dalam laporan ini, kami menjelaskan
struktur isolasi dan primer dari empat nonapeptides dari
otak bimaculatus G. yang inhibitor potensial JH III
sintesis in vitro oleh CA dari betina dewasa perawan, laki-laki, dan
instar terakhir larva dari spesies. Peptida ini secara struktural
berbeda dari semua allatostatins sejauh ini teridentifikasi, tetapi homolog
untuk peptida locustamyoinhibiting (Lom-MIP), sebuah peptida
yang menghambat kontraksi spontan hindgut dan
saluran telur dari Locusta migratoria (14). Kami mengusulkan bahwa keluarga ini
peptida merupakan jenis baru dari neurohormonnya yang
menghambat biosintesis JH di jangkrik.
BAHAN DAN METODE
Serangga dan Pemotongan Jaringan
Perawan dewasa wanita dan pria dari bimaculatus G. (de Geer)
(Ensifera, Gryllidae) dipelihara pada 27 ° C dan bertahap sesuai dengan
kronologis
usia (15) digunakan dalam percobaan. Otak (2700) 2-4-dayold
perempuan adalah membedah bebas dari lobus optik, korporasi cardiaca-CA
kompleks, dan lemak tubuh berpegang dan disimpan dalam medium ekstraksi
(Metanol / air / asam asetat (100:10:1, v / v / v)) pada 225 ° C sebelum pemurnian.
CA tunggal perempuan 3 hari lalu itu digunakan untuk menguji kromatografi

fraksi untuk kegiatan allatostatic dan untuk mengukur respon dosis
dan reversibilitas inhibisi peptida sintetis. CA ini menunjukkan
tingkat tertinggi dan paling konsisten biosintesis III JH dari hewan
untuk hewan (13). Penghambatan sintesis III JH juga diuji pada CA dari
2 hari yang berusia dewasa laki-laki dan 1-hari-tua (jantan dan betina) dan 4-hari-
tua
(Betina) larva instar terakhir bimaculatus G. dan dari dewasa 5-hari-tua
betina dari kriket rumah, Acheta domesticus. Dewasa A. domesticus
perempuan telah dihapus dari budaya saham pada hari kemunculan dan
dipertahankan pada 27 ° C sampai digunakan.
Radiokimia Assay untuk Kegiatan Allatostatic
Juvenile hormon III biosintesis in vitro ditentukan oleh
assay radiokimia dijelaskan sebelumnya (16-18), dengan beberapa modifikasi.
Prekursor radiolabeled untuk JH III metionin L-[metil-14C]
(Amersham buatan Buchler, Braunschweig, Jerman; aktivitas spesifik akhir
dari 1,11-1,30 3 109 Bqzmmol21; konsentrasi akhir
-Metionin dari 0,24-0,28 mM) L. Setelah preincubation 1,5-h dalam medium
tanpa metionin [14C], CA tunggal diinkubasi selama 2 jam dalam 20 ml
media TC199 (Sigma M7653 (Deisenhofen, Jerman); dengan Hanks '
garam dan sodium, tanpa L-glutamin; buffer dengan 25
mM HEPES; dilengkapi dengan CaCl2 dengan konsentrasi akhir 3 mM;
diperkaya dengan 1% Ficoll 400 (Pharmacia, Uppsala, Swedia); disterilisasi oleh
hisap melalui 0,2-mm filter, disesuaikan dengan pH 7,0; mengandung 12.500 -
18.000 Bq L-metionin [metil-14C]) untuk menetapkan tingkat JH sintesis
oleh kelenjar tidak diobati, kemudian, CA telah dipindahkan ke medium
dengan ekstrak / peptida sintetis yang akan diuji untuk jangka waktu 2-h detik.
Perubahan persentase dalam tingkat sintesis dihitung. Berikut
inkubasi, medium tersebut diolah untuk ekstraksi dan JH kuantifikasi III
seperti yang dijelaskan (18).
* Karya ini didukung oleh Landesforschungsschwerpunkt Baden-
¨ wu rttemberg "Molekulare Grundlagen zellula ¨ der ren Differenzierung,
Musterbildung und Morphogenese "Proyek C2 dan oleh Deutsche
Forschungsgemeinschaft
Grant 631/15-1 Ho. Biaya publikasi ini
artikel yang dibiayai sebagian oleh pembayaran biaya halaman. Ini
Artikel ini karenanya harus ditandai "iklan" sesuai
dengan 18 U.S.C. Bagian 1734 semata-mata untuk menunjukkan fakta ini.
¶ Untuk siapa korespondensi harus ditujukan: Lehrstuhl Tiero kologie ¨
Aku, Universita Bayreuth t °, aku NW, D-95440 Bayreuth, FRG. Tel: 49 -.
921-552650; Fax: 49-921-552784.
1 Singkatan yang digunakan adalah: JH, hormon remaja, CA, corpora
allata; HPLC, kromatografi cair kinerja tinggi; Fmoc, N-9 (-
fluorenyl) methoxycarbonyl; AKH, hormon adipokinetic.
ATAS Jurusan Kimia BIOLOGIS Vol. 270, No 36, Edisi September 8, hal
21.103-21.108, 1995
© 1995 oleh American Society for Biokimia dan Biologi Molekuler, Inc Dicetak
di Amerika Serikat
21103
Otak Ekstrak dan Prepurification oleh Ekstraksi Solid-fase
Sebanyak 54 batch, setiap kelompok yang mewakili 50 otak, diekstraksi
seperti yang dijelaskan sebelumnya (13). Ekstrak ini kemudian
prepurified pada kartrid Sep-Pak (13). materi Allatostatic terelusi di
fraksi 40% CH3CN. Sebanyak 13 dari pemisahan Sep-Pak
diminta untuk proses keseluruhan material.
Kromatografi
pemisahan HPLC dilakukan pada sistem HPLC Shimadzu
(13). Bahan dielusi terdeteksi pada 215 nm.
Pertama HPLC Run-Kondisi adalah sebagai berikut: kolom: LiChro-
CART 125-4 Superspher 100 RP-18 dengan LiChroCART 4-4 kolom penjaga
(Bahan yang sama; Merck, Darmstadt, Jerman); pelarut A: 0.115%
trifluoroacetic asam dalam air; B pelarut: asam trifluoroacetic 0,1% pada
CH3CN; gradien: 0-5 menit dari 0% B pelarut, 5-8 menit dari 0-20% pelarut
B (gradien linier), dan 8-51 menit dari 20-33% pelarut B (gradien linier,
0,3% / menit) diikuti dengan mencuci 10-menit pada 100% B pelarut; dan laju
alir:
1 ml / menit. Sampel (otak setara 500-600 dalam 1 ml 0,1% trifluoroacetic
asam) yang dimuat ke kolom dan dikumpulkan dalam 1-mnt
fraksi. Lima dari ini berjalan sangat direproduksi HPLC pertama diperlukan
untuk memproses semua bahan (2700 setara otak). Fraksi
13-60 yang diuji untuk kegiatan allatostatic (setara otak 20 / assay).
Fraksi eluting pada 19 dan 20 menit (sesuai dengan 25,7-
26,0% CH3CN) menunjukkan aktivitas allatostatic tertinggi dan menyebabkan
isolasi GRB-AST A1 dan A2 (13). Dalam tulisan ini, kami melaporkan
lebih lanjut pemurnian fraksi 23 dan 24 (sesuai dengan 26,9-27,2%
CH3CN), yang juga menunjukkan aktivitas allatostatic konsisten.
Kedua HPLC Run-Kondisi adalah sebagai berikut: Kolom: 250 3
4,6-mm Shiseido CAPCELL PAK C18 SG 300 10 3 4,6-mm penjaga
kolom (bahan yang sama; Grom, Herrenberg-Kayh, Jerman); A pelarut:
0,13% heptafluorobutyric asam dalam air; B pelarut: 0,13% heptafluorobutyric
asam di CH3CN; gradien: 0-2 menit dari 5% B pelarut dan 2-52 min
sebesar 5-60% pelarut B (gradien linier, 1,1% / menit) diikuti dengan min 7-
mencuci di 100% B pelarut; dan laju alir: 1 ml / menit. The mengumpulkan Fraksi
23 dan 24 dari berjalan HPLC pertama (2400 setara otak) dikeringkan

turun ke 500 ml, diencerkan dengan 500 ml asam heptafluorobutyric 0,13% di
10% CH3CN, dan dimuat ke kolom. Puncak dikumpulkan secara manual
ke dalam tabung reaksi dan diuji untuk kegiatan allatostatic (33,3 otak
Gambar. 1. Kromatografi langkah kriket
allatostatin isolasi. Horizontal bar di
kromatogram dari jangka HPLC kedua menunjukkan
fraksi dengan aktivitas allatostatic. Putih kolom
dalam kromatogram dari keempat HPLC
berjalan menunjukkan aktivitas allatostatic dari yang sesuai
pecahan (diuji pada 100 setara otak).
Lihat "Bahan dan Metode" untuk percobaan
rincian.
21104 Allatostatic neuropeptida di Jangkrik
setara / assay). Setiap tabung reaksi diisi dengan 5 ml dari 0,1%
bovine serum albumin solusi (Sigma A3294; dimurnikan dengan HPLC) sebagai
peptida pembawa untuk mengurangi kerugian material. Empat fraksi
menunjukkan allatostatic
aktivitas dan menjadi sasaran pemurnian lebih lanjut.
Ketiga HPLC Run-Kondisi adalah sebagai berikut: Kolom: 150 3
4,6-mm Shiseido CAPCELL PAK C8 SG 300 10 3 4,6-mm penjaga
kolom (bahan yang sama; Grom); A pelarut: 20 mM NH4Ac (pH 6.9);
pelarut B: 20 mM NH4Ac di 80% CH3CN; gradien: 0-40 menit dari 6,25-
62,5% pelarut B (sesuai dengan 50-50% CH3CN) (gradien linier,
1,4% pelarut B / min 5 CH3CN/min 1,125%) diikuti dengan mencuci 12-min
pada 100% B pelarut; dan laju alir: 1 ml / menit. Aktif fraksi (2.300
otak setara) dari jangka HPLC kedua kering ke; 50
ml, diencerkan dengan 50 ml 20 mM NH4Ac dalam 10% CH3CN, dan dimuat
secara terpisah ke kolom. Puncak dikumpulkan secara manual ke 1.5-ml
tabung reaksi, dimuat dengan 5 ml 0,1% albumin bovine serum
solusi, dan diuji untuk kegiatan allatostatic (50 setara otak /
assay).
Keempat HPLC Run-Kondisi adalah sebagai berikut: Kolom: 125 3
4-mm Kromasil 100 C4 5m (MZ Analysentechnik, Mainz, Jerman);
pelarut J: asam trifluoroacetic 0,115% dalam air; B pelarut: 0,1% trifluoroacetic
asam di CH3CN; gradien: 0-38 menit dari 10-52% B pelarut
(Gradien linier, 1,1% / menit) dan laju alir: 0,5 ml / menit. Aktif puncak
dari jangka HPLC ketiga (2150 setara otak) dikeringkan ke
; 50 ml, diencerkan dengan 50 ml 0,1% asam trifluoroacetic dalam 20% CH3CN,
dan dimuat secara terpisah ke kolom. puncak murni tunggal adalah
dikumpulkan secara manual dan diuji untuk kegiatan allatostatic (100 otak
setara / assay).
Analisis Sequence
Bahan aktif dari pemisahan KCKT akhir ini dimuat
ke segelas Polybrene-dilapisi-serat filter dan sequencing dengan otomatis
Degradasi Edman menggunakan sequenator Model 477A tersambung ke
120A model on-line phenylthiohydantoin penganalisis (Terapan Biosystems,
Weiterstadt, Jerman).
Massa Analisis
Spektrum Massa diperoleh menggunakan matriks desorpsi laser yang dibantu
ionisasi spektrometer (Bruker Reflex, Bruker Franzen, Bremen,
Jerman). Tegangan percepatan ditetapkan untuk 30 kV untuk linear
modus. Matriks adalah solusi jenuh dari-siano-4-hydroxycinnamic
asam dilarutkan dalam air / asetonitril (7:3, v / v) (19). Peptida solusi
(0,5 ml,; 1 pmol) dicampur pada sasaran dengan larutan matriks (1:1,
v / v) dan dibiarkan kering. Setiap spektrum adalah rata-rata; 50-200 tunggal
Spektrum ditembak diperoleh di set dari lima tembakan. Analisis Misa baik
dilakukan oleh G. Talbo (EMBL, Heidelberg, Jerman).
Sintesis Peptida
Peptida sintesis dilakukan pada synthesizer 9050 peptida Model
(Milligen, Eschborn, Jerman) menggunakan Fmoc / HOBt kimia. Peptida
disintesis dalam bentuk amida menggunakan amida Fmoc-peptida
linker polietilen glikol-polystyrene resin (Milligen). Peptida sintetik
telah dimurnikan setelah pembelahan dari resin dengan fase terbalik
HPLC. Konfirmasi urutan yang benar peptida sintetik
dicapai dengan analisis massa dan coelution dengan peptida asli.
Analisis Sequence Komputer
Komputer analisis urutan dilakukan melakukan sebuah blitz
E-mail pencarian di EMBL dan pencarian tblastn di NCBI Blast
server jaringan. SwissProt rilis 30 (Desember 1994), EMBL rilis
41 (Desember 1994), dan lepaskan GenBank 88 (April 1995) adalah
mencari kesamaan dengan peptida GRB-AST B1-4 menggunakan default program
parameter.
HASIL
HPLC Pemisahan neuropeptida Allatostatic-bioaktif
materi dari HPLC pertama berjalan (dikumpulkan pecahan 23 dan 24)
dielusi dari sistem HPLC kedua antara 30 dan 40 menit
(Gbr. 1). Empat fraksi, eluting di 32,90 menit (41,2% CH3CN;
fraksi B1), 34,75 min (43,2% CH3CN; B2 fraksi), 35.01 min
(43,5% CH3CN; B3 fraksi), dan 36,28 menit (44,9% CH3CN;
fraksi B4), menunjukkan aktivitas allatostatic. Dalam HPLC ketiga
sistem, setiap fraksi menghasilkan satu puncak utama dengan allatostatic
aktivitas (fraksi B1: 22,40 min (30,3% CH3CN); B2 fraksi:
21,62 menit (29,3% CH3CN); B3 fraksi: 22,35 menit (30,1%
CH3CN), dan fraksi B4: 23,08 menit (31,0% CH3CN)). Aktif
fraksi dari HPLC ketiga menjalankan dielusi di akhir HPLC
sistem sebagai puncak tunggal (Gbr. 1) di 25,07 min (37,7% CH3CN;
fraksi B1), 24,45 min (37,0% CH3CN; B2 fraksi), 24,43 min
(37,0% CH3CN; B3 fraksi), dan 23,98 menit (36,5% CH3CN;
fraksi B4).
Asam Amino Analisis Sequence-Aliquot dari KCKT fraksi
B1-4 yang mengalami degradasi Edman otomatis
(Fraksi B1: 210 pmol/286 setara otak; B2 fraksi: 103
pmol/551 otak setara; B3 fraksi: 125 pmol/740 otak
setara; dan fraksi B4: 86 pmol/604 setara otak).
Sequence analisis menunjukkan empat nonapeptides. Utama
struktur tersebut telah ditetapkan untuk fraksi B1 sebagai Gly-trp-Gln-Asp-
Leu-Asn-Gly-Gly-trp, untuk B2 fraksi sebagai Gly-trp-Arg-Asp-Leu-
Asn-Gly-Gly-trp, untuk B3 fraksi sebagai Ala-trp-Arg-Leu-Asp-Ser-
Gly-Gly-trp, dan untuk B4 fraksi sebagai Ala-trp-Glu-Arg-Phe-Nya-
Gly-Ser-trp (Tabel I). Massa analisa spektral menunjukkan bahwa
terminus C amidated di semua peptida. Nilai untuk massa
([M 1 H] 1) ditetapkan oleh spektrometri cocok persis
ukuran molekul dihitung (Tabel I). Peptida isi per otak
dihitung dari data analisis urutan (kehilangan
material selama langkah kromatografi tidak dipertimbangkan;
Tabel I).
Peptides Synthetic-Semua empat peptida yang disintesis dengan
amidated C Termini. peptida sintetik menunjukkan retensi yang sama
kali rekan-rekan asli mereka di keempat HPLC
sistem, dan coelution memberikan puncak tajam tunggal, yang menunjukkan
peptida amidated menjadi bentuk alami (data tidak
ditampilkan). Respon dosis untuk penghambatan sintesis III JH oleh
TABEL I
Sequence, ukuran molekul, kandungan per otak, dan nilai-nilai IC50 (konsentrasi
yang dibutuhkan untuk inhibisi 50% dari biosintesis III JH)
beberapa peptida
Data untuk GRB-AST A1 dan A2 diambil dari Ref. 13.
Peptida Sequence [M 1 H] 1 ditemukan oleh
spektrometer massa
Dihitung
[M 1 H] 1
untuk
amidated
peptida
Dihitung
peptida konten IC50
pmol / otak M
GRB-AST A1 AQHQYSFGL-NH 2 1049,80 1050,16 0,18 4 3 1029
GRB-AST A2 AGGRQYGFGL-NH 2 1025,20 1025,16 0,09 8 3 1029
GRB-AST B1 GWQDLNGGW-NH 2 1.031,39 1.032,10 0,73 7 3 1028
GRB-AST B2 GWRDLNGGW-NH 2 1059,28 1060,16 0,19 2 3 1028
GRB-AST B3 AWRDLSGGW-NH 2 1045,80 1047,16 0,17 7 3 1028
GRB-AST B4 AWERFHGSW-NH 2 1174,05 1175,30 0,14 1 3 1028
Lom-MIP-NH 2 AWQDLNAGW 1060,21; 1024
GRB-AKH pEVNFSTGW-NH 2 920,98 Tidak dihubungi di
1026 dan 1025
Allatostatic neuropeptida di Jangkrik 21105
GRB-AST B1-4 ditunjukkan pada Gambar. 2. Lima puluh persen penghambatan
JH III sintesis dicapai dengan 7 GRB 3 1028 M-, AST B1 2
3 1028 M GRB-AST B2, 7 3 1028 M GRB-AST B3, dan 1 3 1028
M GRB-AST B4 (Tabel I).
Sebuah pencarian komputer untuk peptida yang sama mengungkapkan urutan
kesamaan dengan peptida locustamyoinhibiting (Lom-MIP)
(I Tabel) (14). Sequence kesamaan antara GRB-AST B1 dan
Lom-MIP adalah; 78%. Synthetic Lom-MIP, bagaimanapun, menunjukkan
hambat maksimal aktivitas pada biosintesis III JH jangkrik
yang secara signifikan lebih rendah dari GRB-AST B1-4 (bandingkan
nilai untuk penghambatan 50%; Gambar. 2 dan Tabel I). Di sisi lain
inhibisi tangan, setengah maksimal (yang berbeda dari 50%
hambatan karena kelenjar tidak terhambat hingga 100%) adalah
dihubungi di; 5 3 1028 M. ini hanya sedikit lebih tinggi daripada
dosis masing-AST GRB B1-4 dibutuhkan untuk setengah maksimal
inhibisi. Ini berarti bahwa Lom-MIP dan GRB-AST B1-4 mungkin
mengikat sama efektif dengan reseptor allatostatin kriket, namun
Lom-MIP yang menyebabkan respon lebih lemah. The adipokinetic
peptida dari bimaculatus G. (GRB-AKH) (20), yang membagi
dua asam amino C-terminal dengan GRB-AST B1-3 (Tabel I),
menunjukkan; inhibisi 30% pada 1025 M, konsentrasi tertinggi
larut dalam media inkubasi (data tidak ditampilkan).
Reversibilitas dari Inhibisi-Setelah 1 jam inkubasi pada medium
tanpa [14C] metionin, CA tunggal dialihkan kepada
menengah radioaktif dan diinkubasi selama 2 jam untuk menetapkan tingkat
sintesis oleh kelenjar diobati, kemudian CA dialihkan kepada
medium yang mengandung peptida M allatostatic 1027 B1-4 dan diinkubasi
selama 2 h. Akhirnya, CA telah dipindahkan ke medium
tanpa penambahan peptida dan diinkubasi lagi selama 2 h.
Kelenjar pulih sepenuhnya dari menghambat tarif (Gbr. 3).
Seks dan Spesies Spesifisitas-GRB-AST B1 diuji pada single
CA dari laki-laki dewasa 2-hari-tua bimaculatus G. pada konsentrasi
mulai 1029-1026 M (Gbr. 4). Lima puluh persen
inhibisi dicapai dengan 4 3 GRB 1028 M-AST B1. GRB-AST
B1 juga diuji pada 1-hari-tua instar terakhir laki-laki dan perempuan
larva. Pada konsentrasi 1027 M, GRB-AST B1 menghambat JH
biosintesis III oleh CA dari larva dengan 55,1 6 7,7% (rata-rata
6 S.E.; II Tabel). Tidak ada perbedaan jenis kelamin dapat ditemukan. Ketika
diuji pada CA tunggal dari larva instar 4-hari-tua perempuan terakhir,
1027 M GRB-AST B1 dikurangi JH biosintesis III oleh 43,3 6
12,8% (Tabel II). GRB-AST B1 (1027 M) juga menghambat JH III
sintesis oleh CA dari rumah jangkrik dewasa 5-hari-tua perempuan, A.
domesticus, dengan 70,3 6 2,6% (Tabel II).
DISKUSI
Pencarian untuk neuropeptida dengan aktivitas allatostatic di G.
bimaculatus telah menyebabkan isolasi empat nonapeptides dengan
urutan kesamaan di terminal C (Gly-Xaa-trp-NH2; Xaa
5 Gly di B1-3 dan Ser di B4) dan asam amino yang umum di
posisi 2 (trp). Selain itu, tiga dari empat peptida (B1-3)
miliki dalam asam amino yang umum pada posisi 4 dan 5 (Asp-Leu).
Peptida ini telah ditunjuk G. bimaculatus allatostatic
neuropeptida B1-4 (GRB-AST B1-4) sesuai dengan
aktivitas biologis mereka dan dengan tata-nama diterima secara luas
untuk neuropeptida invertebrata (21). B penunjukan
Gambar. 2. Dosis respon penghambatan biosintesis III JH oleh
GRB-AST B1 (lingkaran tertutup), B2 (lingkaran terbuka), B3 (tertutup
bujur sangkar), B4 (kotak terbuka), dan Lom-MIP (segitiga tertutup) untuk
CA dari perawan dewasa 3-hari wanita berusia G. bimaculatus. Persentase
penghambatan dihitung sebagai (1 2 (2 inkubasi incubation/1st)) 3
100. Data nilai rata-rata 5-15 penentuan. Untuk kejelasan, standar
kesalahan tidak ditampilkan. JH III biosintesis oleh kelenjar yang tidak diobati
adalah
; 35-40 pmolzh21zCA21 dalam percobaan ini.
Gambar. 3. Reversibilitas dari penghambatan biosintesis III JH oleh
GRB-AST B1 (lingkaran tertutup), B2 (lingkaran terbuka), B3 (tertutup
kotak), dan B4 (kotak terbuka) untuk CA dari orang dewasa 3-hari-tua
perawan perempuan. Inkubasi kedua dilakukan dalam medium
mengandung 1027 allatostatins M. Kontrol (segitiga tertutup) diinkubasi
dalam medium normal selama setiap periode inkubasi. Lihat "Bahan
dan Metode "untuk rincian eksperimental. Tingkat III biosintesis JH
selama inkubasi pertama (antara 35 dan 45 pmolzh21zCA21 di
percobaan ini) yang ditetapkan untuk 100%. Data berarti 6 S.E. dari 10
penentuan.
Gambar. 4. Dosis respon penghambatan biosintesis III JH oleh
GRB-AST B1 untuk CA dari laki-laki dewasa 2-hari-tua (3) dan 3-hari-tua
perawan betina dewasa (l). Data berarti 6 S.E. dari 5-15 penentuan.
JH biosintesis III oleh CA laki-laki yang tidak diobati adalah; 30
pmolzh21zCA21. Data untuk perempuan diambil dari Gambar. 2.
21106 Allatostatic neuropeptida di Jangkrik
telah digunakan karena kelas lain dari neuropeptida allatostatic
baru-baru ini disajikan dalam bimaculatus G., GRB-AST
A1 dan A2 (13), yang merupakan anggota dari Tyr-Xaa-Phe-Gly-
keluarga allatostatin Leu-NH 2 pertama kali ditemukan di punctata D. (1).
Utama struktur dari empat neuropeptida allatostatic
menunjukkan homologi dengan peptida locustamyoinhibiting (Lom-
MIP), yang diisolasi dari cardiaca otak-korporasi-CAsubesophageal
ekstrak ganglion belalang L. migratoria
(14). Nonapeptides GRB-AST B1-3 menyerupai Lom-MIP dalam memiliki
Trp pada posisi 2 (juga di GRB-AST B4), Asp-Leu pada posisi
4 dan 5, dan Gly-trp-NH 2 di terminal C. Lom-MIP menekan
spontan kontraksi dari hindgut dan saluran telur
dari migratoria L. dan dari hindgut dari kecoa, Leucophaea
maderae (14). C terminus Gly-trp-NH 2 di Lom-MIP
dan di B1 GRB-AST-3 adalah sama dengan myoinhibiting
peptida Ala-Pro-Gly-trp-NH 2 terisolasi dari bekicot Lymnea
stagnalis (22). Selain itu, GRB-AST B1-3 menunjukkan beberapa
carboxylterminal
urutan kesamaan dengan GRB-AKH, yang berakhir pada Thr-
Gly-trp-NH 2 (20). Tak satupun dari GRB-AST B1-4 menunjukkan urutan
kesamaan dengan salah satu neuropeptida allatoactive dikenal.
Kemampuan GRB-AST B1-4 untuk menghambat biosintesis JH III
jangkrik hampir urutan besarnya lebih rendah dari
GRB-AST A1 dan A2 (Tabel I). Maksimal inhibisi (dihubungi di
konsentrasi allatostatin dari; 1026 M), bagaimanapun, rentang
60-80% untuk kedua kelas. Dalam uji pada CA dari
betina perawan 3-hari-tua, peptida menunjukkan inhibisi 50% dari
JH sintesis III pada 1 3 1028-7 3 1028 M. Hal ini menunjukkan bahwa
CA kriket sangat sensitif terhadap kedua jenis kriket allatostatic
neuropeptida ketika mereka berada di ketinggian kegiatan
selama vitellogenesis menengah-akhir (3 hari setelah rontok imaginal).
Dalam punctata D., hubungan terbalik antara aktivitas
CA dan kepekaan mereka untuk allatostatins diamati (3,
23). Juga pada jangkrik, CA dengan tingkat basal yang lebih rendah JH III
biosintesis (misalnya CA dari betina 5-hari-tua) mungkin akan lebih
sensitif terhadap allatostatins, tapi tingkat sintesis JH oleh
CA sering sangat tidak konsisten, yang membuat CA ini tidak cocok
untuk pengujian zat allatoinhibiting.
Pengujian sintetis peptida atau fraksi HPLC hanya 2 jam
diperlukan karena waktu inkubasi dinyatakan total akan
sudah terlalu lama dan sering mengakibatkan kecepatan penurunan JH III
biosintesis selama inkubasi terakhir period.2 Dibandingkan dengan
inkubasi 3-4-h digunakan oleh penulis lainnya (1, 5, 17),
inkubasi 2-h sedikit dapat mengurangi sensitivitas tes, tetapi
sudah cukup untuk menunjukkan respon yang cepat dan reversibilitas dari
allatostatic material.
Dari sudut pandang struktural, menarik untuk dicatat bahwa
perubahan pada posisi 7 (Ala bukan Gly seperti yang ditemukan dalam Lom-MIP)
mengurangi aktivitas penghambatan. Di sisi lain, perubahan pada

posisi 8 (Ser bukan Gly seperti dalam GRB-AST B4) tidak negatif
berpengaruh pada aktivitas allatostatic: GRB-AST B4 ternyata
yang paling aktif dari empat allatostatins B. GRB-AKH, yang
saham hanya dua asam amino C-terminal dengan GRB-AST
B1-3, memiliki aktivitas allatostatic hanya lemah. Terjadinya
Trp pada posisi 2, yang merupakan fitur umum dari semua allatostatins B
dan Lom-MIP, mungkin menunjukkan pentingnya ini
residu sehubungan dengan aktivitas biologis dari peptida.
Informasi tentang toksisitas yang mungkin karena dikodekan
tidak hanya di daerah C-terminal, seperti yang ditunjukkan untuk
Tyr-Xaa-keluarga Phe-Gly allatostatin-Leu-NH 2 (3, 24).
Orang mungkin bertanya apakah GRB-AST B1-4 dapat disebut "allatostatins"
sejak isolasi pertama dari anggota peptida ini
keluarga (Lom-MIP) menggunakan bioassay berdasarkan aktivitas myoinhibiting
fraksi KCKT (14). Pada jangkrik, yang allatostatic
kegiatan adalah efek hanya menunjukkan begitu jauh; oleh karena itu,
allatostatin istilah tampaknya dibenarkan.
GRB-AST B1-4 terbukti tidak sex/stage- atau speciesspecific.
Meski hanya diekstrak dari otak perempuan dewasa,
mereka menghambat biosintesis JH III oleh CA dari laki-laki dewasa dan
laki-laki terakhir instar larva dan perempuan juga. The allatostatic
aktivitas allatostatins B juga ditunjukkan dalam erat
terkait kriket spesies, kriket rumah, A. domesticus. Interspesifik
Kegiatan allatostatic juga ditunjukkan untuk Tyr-Xaa-
Phe-Gly-Leu-NH 2 allatostatin keluarga (25, 26).
Adanya dua jenis neuropeptida allatostatic di G.
bimaculatus membuatnya lebih sulit untuk memahami cara mereka
fungsi. Belum, tidak ada yang diketahui tentang perubahan di otak
dan hemolymph titer neuropeptida allatostatic, misalnya selama
masa reproduksi perempuan bimaculatus G.. Isolasi dan
kuantifikasi reseptor allatostatic akan diperlukan,
tingkatan yang mungkin sebagian besar disebabkan perubahan CA
sensitivitas untuk peptida allatoregulating (8). Terjadinya
allatostatin beberapa spesies mungkin menyarankan keberadaan
individu reseptor untuk setiap jenis molekul. Hal ini tetap
ditentukan, bagaimanapun, apakah masing-masing spesies allatostatin adalah
terkait dengan reseptor yang berbeda. Bahkan masih harus
ditentukan apakah allatostatins adalah regulator utama
biosintesis JH in vivo. Lokalisasi immunocytochemical
peptida allatostatin-seperti Tyr-Xaa-Phe-Gly-Leu-NH 2 di
sistem saraf pusat maupun di sel midgut banyak
invertebrata (8, 27) menunjukkan bahwa allatostatins yang multifungsi
neuropeptida, meskipun penghambatan biosintesis JH
oleh CA in vitro adalah bioassay hanya dipergunakan dalam isolasi mereka.
Urutan homologi, seperti yang ditemukan antara Lom-MIP dan keluarga
dari neuropeptida allatostatic disajikan dalam makalah ini, mungkin
menunjukkan peran myomodulatory peptida ini, seperti juga
dibahas pada allatostatin Tyr-Xaa-Phe-Gly-Leu-NH 2
keluarga (28, 29).
Ucapan Terima Kasih-Dr. Liliane Schoofs silakan disediakan Lom-MIP;
Dr Gerd Ga ¨ de baik hati disediakan GRB-AKH. Kami berterima kasih Ina
Heidemann
2001
StAR PROTEIN DAN PERATURAN

STEROID HORMONE biosintesis
Douglas M Stocco
Departemen Biologi Sel dan Biokimia, Ilmu Kesehatan Universitas Texas Tech
Center, Lubbock, Texas 79430, e-mail: doug.stocco @ ttmc.ttuhsc.edu
Kata Kunci steroidogenik sel, hormon steroid, transfer kolesterol,
mitokondria, StAR, MULAI domain
n Abstrak biosintesis steroid hormon akut diatur oleh hipofisis trofik
hormon dan rangsangan steroidogenik lainnya. Peraturan tersebut menetapkan
sintesis dari
protein yang berfungsi untuk memindahkan kolesterol dari luar ke dalam
mitokondria
membran dalam sel-sel steroidogenik, langkah tingkat-pembatas dalam hormon
steroid
formasi. Akut steroidogenik peraturan (StAR) protein merupakan komponen yang
sangat diperlukan
dalam proses ini dan merupakan kandidat terbaik untuk mengisi peran regulator
putatif.
StAR diekspresikan dalam jaringan steroidogenik dalam menanggapi agen yang
merangsang steroid
produksi, dan mutasi pada gen hasil StAR dalam penyakit bawaan lipoid
adrenal hiperplasia, di mana biosintesis hormon steroid terancam.
Mouse null StAR memiliki fenotip yang pada dasarnya identik dengan penyakit
manusia.
Ekspresi positif dan negatif dari StAR sensitif terhadap agen yang meningkatkan
dan
menghambat biosintesis steroid masing-masing. Mekanisme dengan mana StAR
menengahi
kolesterol transfer di mitokondria belum sepenuhnya dikarakterisasi. Namun,
struktur tersier dari domain START dari homolog StAR telah diselesaikan, dan
identifikasi sebuah terowongan hidrofobik mengikat kolesterol dalam domain ini
menimbulkan
kemungkinan bahwa StAR bertindak sebagai protein kolesterol-bolak.
Steroidogenesis
Steroidogenesis adalah proses di mana sel-sel khusus dalam jaringan tertentu
mensintesis
steroid hormon, sebuah kelas penting dari terpene berbasis, molekul lipid kecil.
Contoh glukokortikoid hormon steroid adrenal, yang mengatur karbohidrat
metabolisme dan mengelola stres, dan adrenal mineralocorticoids, yang
mengatur keseimbangan garam dan menjaga tekanan darah. contoh lebih lanjut
adalah ovarium
dan plasenta progestogen dan estrogen, yang mengatur fungsi reproduksi
dan karakteristik seks sekunder pada wanita, dan androgen testis, yang
sangat penting untuk kesuburan dan karakteristik seks sekunder pada pria.
Terakhir, sebuah
kelas steroid disebut sebagai neurosteroids dalam fungsi otak untuk kedua
merangsang
dan menghambat respon GABAergic (1), memodulasi respon sel Purkinje
0066-4278/01/0315-0193 $ 14.00 193
194 STOCCO
untuk asam amino rangsang (2), dan memori kontrol (3). Jadi steroid hormon
memiliki fungsi beragam tetapi disintesis oleh jalur biosintesis yang identik
dalam tahap awal (4). Dalam semua jaringan steroidogenik, terlepas dari hormon
disintesis, langkah awal dalam steroidogenesis adalah konversi kolesterol untuk
steroid pertama, pregnenolon. Konversi ini terjadi melalui tindakan sitokrom
P450 rantai samping belahan enzim (P450scc), yang hadir dalam batin
membran mitokondria di semua sel steroidogenik (5). Pregnenolon kemudian
keluar
mitokondria dan diubah menjadi progesteron oleh dehidrogenase 3-
hidroksisteroid
(3-HSD) di kompartemen mikrosoma. Dalam beberapa sel steroidogenik,
bentuk mitokondria dari 3-HSD dapat mengkonversi pregnenolon untuk
progesteron
sebelum keluar dari mitokondria (6, 7). Namun, di sebagian besar spesies dan di
sebagian besar
jaringan steroidogenik, pregnenolon diubah menjadi progesteron dalam
mikrosoma
kompartemen dan kemudian ke berbagai steroid lain, produk akhir yang
dihasilkan dari
komplemen dari enzim dalam jaringan mereka (8). Misalnya glomerulosa, adrenal
sel preferentially mensintesis dan mengeluarkan yang aldosteron mineralcorticoid,
dan
sel fasciculata adrenal mensintesis dan mensekresikan kortisol glukokortikoid atau
corticosterone.
Demikian pula, sel-sel teka ovarium mensintesis dan mensekresi androgen;
ovarium
sel granulosa mengkonversi androgen untuk estradiol, corpora lutea ovarium;
plasenta syncytiotrophoblasts
mensintesis dan mengeluarkan progesteron, dan sel-sel Leydig testis
mensintesis dan mensekresikan testosteron androgen. Neurosteroids disintesis
di daerah khusus dari otak, dengan pregnenolon yang paling lazim,
progesteron, 5-dihydroprogesterone?, allopregnanolone dan
dehydroepiandrosterone
(DHEA) (9). Para biosintetik jalur yang mengarah pada hormon steroid
dijelaskan di atas dan enzim steroidogenik dalam jalur yang diilustrasikan
pada Gambar 1. Memahami enzim yang terlibat dalam steroidogenesis dan, paling
penting, lokasi intraseluler mereka, adalah kunci untuk memahami bagaimana
sintesis
hormon steroid diatur.
PERATURAN steroidogenesis
Biosintesis hormon steroid diatur terutama oleh pituitari tropik
hormon seperti adrenocorticotropin (ACTH), luteinizing hormone (LH), dan
agen follicle stimulating hormone (FSH) tetapi lain juga kontrol steroidogenesis
(Lihat di bawah). Dalam semua jaringan pengaturan produksi steroid terjadi
dalam dua tahap.
Fase akut terjadi pada urutan menit dan bertanggung jawab untuk cepat
produksi steroid dalam menanggapi kebutuhan yang mendesak (10). Biosintesis
glukokortikoid untuk memerangi situasi stres dan sintesis cepat aldosteron
untuk mengatur tekanan darah dengan cepat adalah contoh dari jenis regulasi.
Lebih peraturan kronis juga terjadi dan mencakup sintesis mRNA
dan enzim untuk steroidogenesis untuk meningkatkan kapasitas sintetis dalam sel.
Kronis
Peraturan enzim jalur steroidogenik telah tertutup dengan sangat terinci
(4, 11-13) dan dengan demikian tidak dibahas lebih lanjut di sini. Kajian ini
berfokus pada peristiwa-peristiwa
yang menghasilkan biosintesis hormon steroid cepat dalam menanggapi
steroidogenik
StAR DAN steroidogenesis 195
stimuli, yaitu fase akut. Sebagaimana ditunjukkan di atas kunci untuk memahami
akut
Peraturan steroidogenesis adalah mengetahui dimana komponen steroidogenik
adalah
terletak di dalam sel dan bagaimana mereka diatur.
Seperti jalur biosintesis kebanyakan, steroidogenesis memiliki tingkat-langkah
membatasi. Untuk
waktu yang lama, langkah membatasi laju diyakini pengaktifan P450scc
enzim, enzim yang mengubah kolesterol untuk pregnenolon (14, 15). Namun,
segera menjadi jelas bahwa enzim P450scc aktif bahkan dalam sel unstimulated
(16, 17), dan pencarian langkah membatasi tingkat-benar memuncak dalam
mencari
bahwa langkah kritis adalah pengiriman kolesterol substrat dari luar mitokondria
membran ke membran mitokondria bagian mana P450scc
enzim terletak (5, 18). Langkah ini adalah tingkat-membatasi karena hidrofobik
kolesterol tidak dapat melintasi ruang antarmembran berair dari mitokondria
dan mencapai enzim P450scc cepat cukup dengan difusi sederhana untuk
mendukung
akut sintesis. deskripsi lebih rinci dari pengamatan dapat ditemukan
tempat lain (10, 19-24). Cukuplah untuk mengatakan bahwa ini langkah penting
membuat mungkin
cepat transfer kolesterol dari luar ke dalam membran mitokondria
sebagai respons terhadap sinyal steroidogenik.
Investigasi langkah akut diatur dimulai pada kelenjar adrenal mana
adrenokortikotropik hormon (ACTH) mengontrol biosintesis steroid (14).
Salah satu pengamatan yang paling penting tentang steroidogenesis adalah bahwa
akut
stimulasi produksi steroid membutuhkan sintesis protein baru. Awal
studi oleh Ferguson (25, 26) menunjukkan bahwa stimulasi akut glukokortikoid
sintesis dalam kelenjar adrenal oleh ACTH sensitif terhadap sintesis protein
inhibitor, puromycin. Garren dan rekan kerja menegaskan bahwa steroidogenesis
di
jaringan adrenal tergantung pada ACTH-merangsang sintesis protein baru
(27-29). Langkah ACTH dikontrol adalah distal hidrolisis kolesterol
ester (sumber intraseluler untuk kolesterol steroidogenik), tetapi proksimal kepada
para
rantai sisi pembelahan, yaitu pada saat penyerahan kolesterol dengan enzim
P450scc (30).
Simpson & Boyd (31) menentukan bahwa langkah sensitif terhadap
penghambatan sintesis protein
terletak di mitokondria melainkan kemudian dicatat bahwa protein
inhibitor sintesis tidak berpengaruh pada aktivitas P450scc itu sendiri (32). Ini
Hasil penelitian menunjukkan bahwa protein yang tidak diketahui (s) mungkin
berfungsi pada tingkat
pengiriman kolesterol dengan enzim P450scc. Studi tentang hubungan antara
baru disintesis protein transfer (s) dan kolesterol dengan enzim P450scc
memuncak
dalam demonstrasi yang penghambatan sintesis protein tidak berpengaruh
terhadap
pengiriman peningkatan kolesterol ke membran mitokondria luar tetapi
menghambat transfer substrat ini dari luar ke membran bagian dalam (, 33 34).
Jadi situs yang tepat dari laju reaksi-membatasi ditunjukkan untuk menjadi
transfer
kolesterol dengan enzim P450scc dalam membran mitokondria bagian dalam.
Upaya untuk mengidentifikasi dan mengkarakterisasi protein ini peraturan akut (s)
terus berlanjut.
Beberapa calon protein dan data pendukung peran mereka telah ditinjau
(10). Bukti untuk peran protein akut steroidogenik peraturan (StAR)
diringkas di sini. Sudah sekitar 17 tahun sejak phosphoprotein StAR
pertama kali dijelaskan dalam ACTH-korteks adrenal merangsang dan kira-kira
196 STOCCO
6 tahun sejak dimurnikan, clone, sequencing, dan mengungkapkan. Protein ini
memiliki
menjadi subyek dari sekitar 250, review naskah dan komentar,
dan dominan bukti yang menunjukkan bahwa itu adalah peraturan putative protein
keberadaan yang diperkirakan hampir empat dekade yang lalu.
PERATURAN YANG PROTEIN AKUT steroidogenik
Protein calon akhirnya ditandai sebagai StAR pertama kali digambarkan oleh
Orme-Johnson dan rekan-rekannya sebagai induced ACTH phosphoprotein-30-
kDa di
hormon-diperlakukan tikus dan sel-sel tikus adrenocortical dan sebagai LH-
protein induced
dalam sel-sel tikus korpus luteum dan sel-sel tikus Leydig (35-42). Seri studi
menunjukkan hubungan erat antara munculnya protein 30-kDa
dan biosintesis hormon steroid dalam jaringan dan bahwa sintesis mereka, sebagai
adalah steroidogenesis, sangat sensitif terhadap penghambatan sintesis protein.
Demikian pula, kami
laboratorium menggambarkan sebuah keluarga protein dalam merangsang
hormon-MA-10 tikus
tumor sel Leydig yang kita ketahui sekarang harus identik dengan protein yang
dijelaskan
oleh Orme-Johnson (43-49). Dalam kedua laboratorium protein tersebut terbukti
diterjemahkan ke mitokondria dan terdiri dari beberapa bentuk yang baru
disintesis
30-kDa protein. Protein mitokondria 30-kDa diproses dari
37-kDa prekursor N terminus formulir yang berisi urutan mitokondria-sinyal
(37, 45). Banyak penelitian selanjutnya telah menegaskan korelasi yang erat
antara sintesis steroid dan sintesis protein 30-kDa (35-42,
46-49). Namun, hubungan sebab-akibat langsung antara protein 30-kDa
berekspresi dan steroidogenesis yang kurang, dan itu perlu untuk clone 30 -
kDa untuk membuktikan secara tegas fungsinya dalam steroidogenesis.
Pemurnian
protein dan kloning dan sekuensing cDNA untuk protein 37-kDa
prekursor yang dicapai pada tahun 1994 (50). Kedua urutan asam nukleat dari
cDNA dan urutan asam amino dari protein 37-kDa menunjukkan bahwa itu adalah
sebuah novel
protein, dan sementara percobaan transfeksi menunjukkan bahwa ekspresi
cDNA protein yang diturunkan di MA-10 tikus Leydig sel-sel tumor meningkat
steroid
sintesis dalam ketiadaan ACTH. Selain itu, sementara transfeksi dari COS-1
sel dengan cDNA untuk protein 37-kDa meningkatkan konversi kolesterol
untuk pregnenolon (10, 51, 52). Hasil ini mengkonfirmasi peran langsung untuk
protein dalam
hormon-diatur steroid produksi.
Setelah kloning dari cDNA StAR, kolaborasi penelitian dengan laboratorium
dari Miller dan Strauss menunjukkan bahwa mutasi pada gen StAR disebabkan
penyakit hiperplasia adrenal kongenital lipoid (CAH lipoid), bahkan menyediakan
lebih menarik bukti peran protein ini pada steroidogenesis (51).
Lipoid CAH adalah suatu kondisi mematikan ditandai oleh ketidakmampuan
hampir lengkap
yang baru lahir untuk mensintesis steroid, oleh adrenal besar yang berisi tingkat
tinggi
dari ester kolesterol dan kolesterol, dan dengan sel-sel Leydig testis yang
mengandung
meningkatkan jumlah lipid. Akumulasi ester kolesterol dan kolesterol
dan ketidakmampuan jelas untuk mengkonversi ini substrat untuk pregnenolon
menyebabkan
keyakinan bahwa CAH lipoid mungkin hasil mutasi pada gen P450scc
(53, 54). Ketika hal ini terbukti tidak benar (55), perhatian dialihkan ke lain
target potensial dan berakhir pada saat mutasi pada cDNA StAR dan gen
ditemukan pada pasien ini (51). Mutasi pada gen StAR adalah penyebab hanya
dikenal
penyakit (22).
Dalam studi menguatkan, Caron dan rekan kerja yang digunakan ditargetkan
gangguan dari
StAR gen untuk menghasilkan tikus StAR KO (56). Semua StAR (-/-) tikus telah
betina
genitalia eksternal, gagal tumbuh secara normal, dan mati prematur, mungkin
sebagai akibat dari insufisiensi adrenocortical. Serum tingkat corticosterone dan
aldosteron
mengalami depresi, dan tingkat ACTH dan CRH juga tinggi, menunjukkan
bahwa penurunan produksi steroid adrenal mengganggu dengan peraturan
Komentar
dari hypothalamus / hipofisis. Medula adrenal adalah normal tetapi fasciculus
zona korteks adrenal terganggu dan berisi simpanan lemak tinggi.
Jadi knockout StAR fenotip mouse mirip dengan lipoid manusia
CAH.
Lokalisasi EKSPRESI StAR
Reagen sekarang tersedia untuk karakterisasi lebih lanjut dari distribusi jaringan
dari StAR. Metodologi analisis asWestern tersebut, analisis Utara, di situ
persilangan, imunositokimia, tes perlindungan RNase, dan RT PCR
semua menunjukkan bahwa ekspresi StAR terbatas pada jaringan steroidogenik.
StAR
diekspresikan dalam korteks adrenal (baik glomerulosa dan fasciculata-reticularis
sel) (57-66) teka, ovarium (59, 67-70), granulosa (67, 68, 70-75), dan ovarium
corpora lutea sel (59, 67, 76-82), janin tikus raksasa sel-sel trofoblas (83), janin
dan dewasa testis, ovarium, dan adrenal (84), tumor adrenal (57), dan testis
Sel-sel Leydig (59, 85-91). Menariknya, StAR juga dinyatakan dalam Sertoli
testis
sel (59, 92), yang umumnya tidak dianggap steroidogenik. Namun,
sel Sertoli dapat didorong untuk mengekspresikan enzim sitokrom P450scc dan
mensintesis
kecil jumlah pregnenolon, menunjukkan bahwa mereka memiliki beberapa
steroidogenik
kapasitas (93). StAR juga dinyatakan dalam otak, dimana perusahaan selular
distribusi tumpang tindih
dengan yang P450scc dan 3-HSD (94). Temuan ini melibatkan StAR dalam
biosintesis neurosteroids.
Meskipun StAR tampaknya tidak hadir dalam plasenta manusia (59, 95), itu ada
dalam plasenta sapi (76), babi (84), dan binatang pengerat (83). Tidak adanya
StAR dalam plasenta manusia menyiratkan bahwa jaringan ini memiliki
mekanisme alternatif
untuk memasok kolesterol dengan enzim P450scc, namun sampai saat ini
mekanisme ini belum
telah diidentifikasi (96). Dalam hal apapun, jika StAR yang diperlukan untuk
progesteron plasenta
biosintesis pada manusia itu, janin menderita dengan CAH lipoid akan
tidak berkembang ke panjang karena plasenta manusia adalah sumber progesteron
setelah trimester pertama (8). StAR juga hadir dalam jaringan ginjal manusia,
tetapi
perannya dalam jaringan ini tetap tidak diketahui (59, 95). Mungkin terlibat dalam
beberapa
aspek metabolisme vitamin D di ginjal. Juga, MLN64, protein dengan
homologi tinggi untuk sebuah daerah di terminal C protein StAR, adalah
198 STOCCO
dinyatakan dalam tingkat tinggi pada tumor payudara manusia, dan mungkin
bahwa protein ini
dapat berkontribusi pada tingkat tinggi steroidogenesis terlihat di beberapa tumor
seperti
(97).
PERATURAN EKSPRESI StAR
Peraturan positif Gene StAR
Kloning StAR memungkinkan untuk menyelidiki regulasi ekspresi
oleh hormon trofik dan oleh agen steroidogenik lainnya. Dalam hampir setiap
sistem
mempelajari, agen yang meningkatkan biosintesis steroid juga meningkatkan
ekspresi
protein StAR. Selain sinyal yang dihasilkan melalui reseptor membran,
beberapa stimulator dapat bertindak langsung pada gen StAR, menunjukkan
bahwa perusahaan promotor
mungkin mengandung unsur-unsur peraturan banyak. Jadi steroid ekspresi
produksi dan StAR
yang up-diatur oleh LH (, 88 89, 98, 99), LH C insulin (75), chorionic
gonadotropin
(CG) (70, 86,100-103), serum kuda betina hamil gonadotropin (PMSG)
(100), ACTH (58, 64, 65), FSH (71, 72, 74), angiotensin II (104),
corticotropinreleasing
hormon (CRH) (105), cAMPanalogs (71, 72, 99,104-106), intraseluler
cAMP-inducing agen (81), IGF-1 (72, 74, 79, 86), insulin (81), hormon
pertumbuhan
(90), pertumbuhan diferensiasi faktor 9 (107), hormon tiroid (108), estradiol (77),
asam retinoat (109), oxysterols (110), ion kalsium (7, 61, 103), angiotensin II dan
ion kalium (104), dan aspartate (111). Juga, ketika ditambahkan di hadapan
konsentrasi klorida rendah, analog cAMP lebih efektif dalam menstimulasi
biosintesis steroid dan ekspresi StAR protein dalam sel Leydig tikus,
menunjukkan
peran ini ion dalam kendali steroidogenesis (106).
Sekresi dari sel chromaffin meduler dari adrenal sapi mampu
merangsang baik biosintesis steroid dan StAR mRNA dan kadar protein pada
kultur
sel korteks adrenal dari hewan yang sama (112), dan epinefrin meniru
efek ini. Selain itu, aktivasi dari reseptor muscarinic di granulosa manusia
sel dengan meningkatkan carbachol biosintesis progesteron dan tingkat protein
StAR
(113).
Penelitian lain menunjukkan bahwa intraseluler pelepasan asam arakidonat
(AA) dari fosfolipid dan toko-toko lainnya dalam sel diperlukan dalam biosintesa
tersebut
hormon steroid (114-116). Mereka menunjukkan bahwa AA bertindak pada lokus
berikut
aktivasi protein kinase A (PKA) tetapi sebelum kegiatan P450scc, sehingga
kita meneliti hubungan antara rilis AA, biosintesis steroid, dan
StAR ekspresi. Penyumbatan AA rilis oleh A2 fosfolipase menghambat (PLA2)
menghasilkan inhibisi dose-dependent sintesis steroid dan secara bersamaan
penurunan protein StAR (99). Penghambatan ekspresi protein StAR terjadi
pada tingkat transkripsi, dan metabolit di jalur lipoxygenase dari
AA metabolisme terlibat dalam regulasi gen StAR (117). Ini
pengamatan menunjukkan bahwa selain peran jalur cAMP, AA,
atau satu lebih mungkin metabolit lipoxygenase nya jalur, juga diperlukan untuk
StAR ekspresi gen dan akhirnya untuk biosintesis steroid.
Singkatnya, rangsangan steroidogenik banyak yang meningkatkan biosintesis
hormon steroid
StAR meningkatkan produksi protein.
Peraturan negatif Gene StAR
Beberapa studi yang dirancang untuk menentukan mekanisme bertanggung jawab
atas negatif
peraturan steroidogenesis menemukan bahwa gangguan dari StAR expressionwas
yang
faktor penyebab. Beberapa deskripsi luas senyawa dan eksperimental
kondisi diketahui menghambat steroidogenesis oleh mekanisme ini termasuk
diethylumbelliferyl
fosfat (118), prostaglandin F2? (78, 82,119-121), endotoksemia
seperti yang disebabkan oleh lipopolisakarida (85), penghambatan transkripsi oleh
actinotherapi
D (122), kejutan panas (123), over-ekspresi dari protein-1 DAX (dosis sensitif
seks hipoplasia adrenal pembalikan-congenita-x-linked) (124, 125), interferon-
(126), mengubah faktor pertumbuhan 1 (63, 127), peptida natriuretik atrial (61),
GnRH agonis (128), tumor necrosis factor? (80, 87, 129), etana sulfonat
dimethane
(130), inhibitor dari phosphoprotein fosfatase PP1 dan PP2A (131),
induksi sepsis (132), penuaan (91), gangguan dari elektrokimia mitokondria
gradien (133), interleukin 1 (134), herbisida Roundup (135), yang
pestisida lindan (136), dan pestisida Dimetoat (137).
Tampaknya StAR menempati tempat sensitif di kedua peraturan positif
hormon steroid output dan penghambatan biosintesis steroid. Observasi ini
bisa mengambil makna ditambahkan dalam pandangan kemungkinan bahwa
lingkungan
endokrin pengganggu yang diketahui untuk mengurangi fungsi reproduksi satwa
liar
dan manusia mungkin memiliki StAR sebagai target utama (138).
Promotor StAR
Dengan ekspresi subjek StAR yang baik regulasi positif dan negatif oleh
agen yang berbeda, penelitian untuk menentukan unsur-unsur peraturan dalam
StAR
promotor dan cara di mana faktor transkripsi berinteraksi dengan elemen-elemen
ini
dilaksanakan. Hormon-merangsang produksi steroid di steroidogenik
sel ini disertai dengan peningkatan pesat dalam tingkat StAR mRNA (50, 139,
140).
Karena stimulasi hormon trofik biasanya menghasilkan peningkatan pesat dalam
intraselular
tingkat cAMP, peran cAMP dalam regulasi gen StAR adalah
diselidiki (52, 74,140-143). Kenyataan bahwa daerah promotor gen StAR
tidak memiliki elemen respon dikenali cAMP (CRE) menunjukkan bahwa respon
cAMP
elemen-binding protein (CREB) tidak bertindak langsung pada urutan yang
ditemukan
di promotor StAR. Namun, CREB dapat bertindak secara tidak langsung pada
promotor StAR.
Situs cAMP-responsif dipertahankan dalam 254 nukleotida pertama sebelum
awal transkripsi situs (140), dan daerah ini telah menjadi fokus studi untuk
mengidentifikasi unsur-unsur promotor dan protein mereka kognitif-mengikat
yang dapat menengahi
respon cAMP.
Faktor transkripsi yang mungkin penting dalam regulasi gen StAR
adalah faktor steroidogenik 1 (SF-1), dan SF-1 KO tikus tidak menyatakan StAR
mRNA (140). SF-1 Beberapa situs konsensus-mengikat telah diidentifikasi dalam
200 STOCCO
StAR promotor, termasuk lima-1 situs SF tikus (143) dan situs tambahan
pada manusia dan tikus (140, 142). Dua dari situs ini, terletak pada posisi -97
dan -42, sangat kekal dalam beberapa spesies, sedangkan situs -132 telah
diidentifikasi hanya di mouse dan tikus. Memanfaatkan protokol transfeksi
transient, SF-1
transactivates promotor StAR dalam beberapa tipe sel (140-143). SF-1 juga dapat
memainkan peran yang sama dalam regulasi perkembangan gen StAR karena
StAR
mRNA tidak terdeteksi dalam punggungan urogenital dari mouse-1 KO SF (140).
faktor tambahan yang terlibat dalam ekspresi jaringan-dan waktu-spesifik StAR,
dan mencari faktor-faktor trans-acting tambahan terlibat dalam Peraturan
StAR gen terus. The CCAAT / protein enhancer-binding (C / EBPs) adalah
keluarga daerah dasar / faktor transkripsi leucine zipper terlibat sebagai regulator
diferensiasi dan fungsi dari beberapa jenis sel (144). Dua anggota ini
keluarga, C / EBP? dan C / EBP, disajikan pada sel Leydig dan granulosa ovarium
sel-sel (145, 146), dan dua putative C / EBP situs mengikat dalam promotor StAR
memiliki
telah diidentifikasi (147-149). Selain itu, promotor StAR adalah transactivated
oleh
C / EBP selama tes transfeksi sementara, dan SF-1 transactivation dari StAR
promotor tergantung pada kehadiran fungsional / situs C EBP-mengikat,
menunjukkan
bahwa SF-1 dan C / form EBP sebuah kompleks ini promotor (147, 148).
TheGATA-
4 situs di promotor StAR mungkin sebagian bertanggung jawab atas aktivasi akut
gen StAR dalam sel granulosa tikus (148). The sterol peraturan elemen-mengikat
protein (SREBP) juga mungkin terlibat dalam regulasi gen StAR karena
SREBP-1? bisa transactivate promotor StAR (110). Tidak ada konsensus
mengikat situs
untuk SREBP-1? tersebut belum ditemukan di promotor StAR, tapi ini mungkin
terbukti
menjadi contoh dari konvergensi pengaturan metabolisme kolesterol dan
steroidogenesis.
Meskipun temuan bahwa beberapa faktor transkripsi diperlukan untuk
transactivation
gen StAR, mutasi dari situs ini menghasilkan efek yang sama pada kedua
basal dan merangsang aktivitas promotor. Dengan demikian stimulasi flip tidak
berubah.
Pengamatan ini menunjukkan bahwa semua elemen bertanggung jawab atas
aktivasi cepat
dari promotor StAR dan maka untuk ekspresi akut dari StAR tidak dikenal.
Sementara penelitian yang diuraikan di atas berfokus pada peraturan postive,
promotor StAR
mungkin juga pelabuhan elemen yang terlibat dalam represi transkripsi.
transkripsi ini
faktor DAX-1 adalah anggota biasa dari keluarga reseptor hormon nuklir,
dengan homologi ke domain ligand-binding dari reseptor hormon nuklir
(150). Situs DNA-binding tidak memiliki motif seng jari dan terdiri dari 3,5
mengulangi
dari urutan asam amino pada 65-67 terminus nya N (150). Over-ekspresi
dari DAX-1 menghambat sintesis steroid di Y-1 sel tumor tikus adrenalin oleh
mengikat untuk struktur jepit rambut di daerah promotor gen StAR (124).
Indeks DAX-1 protein berisi domain membungkam kuat transkripsi dalam Surat
C-terminal wilayah (151), dan DAX-1 menghambat P450scc dan ekspresi gen 3-
HSD
serta (125). Salah satu mekanisme yang mungkin untuk efek ini adalah bahwa
DAX-1 dapat
berinteraksi langsung dengan SF-1, mengakibatkan penghambatan transactivation
SF-1-mediated
(152). Gabungan, data ini melibatkan DAX-1 sebagai faktor kunci dalam
peraturan
ekspresi gen StAR.
MEKANISME TINDAKAN StAR
Model Aksi StAR
Bagaimana StAR memediasi pengalihan kolesterol dari luar mitokondria
membran ke membran mitokondria bagian dalam? Kami sebelumnya
mengusulkan model di
yang StAR disintesis dalam sitosol sebagai tanggapan terhadap stimulasi hormon
trofik,
dan selama impor ke dalam kontak batin mitokondria bentuk kompartemen
situs antara membran dalam dan luar yang berfungsi sebagai jembatan hidrofobik
untuk kolesterol membran luar mitokondria untuk mentransfer ke membran dalam
(10, 45). Bukti bahwa model ini tidak benar dan akan memerlukan modifikasi
diperoleh ketika itwas mengamati bahwa N-terminal truncations protein StAR
yang dihapus sebanyak 62 asam amino dan tidak diimpor ke mitokondria
tidak berpengaruh terhadap transfer kolesterol atau produksi steroid saat
transfected
ke MA-10 atau COS-1 sel (, 153 154). Selain itu, protein yang diproduksi
bacterially StAR
kurang dari 62 asam amino pertama N-terminal yang didukung penuh
steroidogenesis
ketika ditambahkan ke mitokondria terisolasi tetapi tidak diimpor ke
mitochondrian
(155). Namun, ketika mitokondria diinkubasi dengan protein StAR yang C
terminus dipotong oleh 28 asam amino, kemampuan untuk merangsang produksi
hilang (153, 154). Data ini semua menunjukkan bahwa sebuah daerah di terminal
C dari
protein StAR merupakan instrumen dalam transfer kolesterol.
Peran daerah C-terminal dari protein StAR di transferwas kolesterol
dikonfirmasi (156) oleh studi dari MLN64, protein dengan homologi ke terminal-
C
wilayah StAR. MLN64 berekspresi di transfected COS-1 sel meningkatkan
steroid
produksi. Selanjutnya Ponting & Aravind (157) menunjukkan bahwa urutan di C
terminus StAR yang homolog dengan sekuens protein lain, termasuk
MNL64, yang menampilkan fungsi beragam. Mereka bernama ini urutan START
domain, untuk domain lipid StAR-terkait tansfer. Domain ini mampu
mengikat lipid, dan mungkin StAR protein pembawa lemak-mengikat yang
dibahas
di bawah ini.
Kallen dan rekan menunjukkan bahwa StAR dapat bertindak sebagai protein
transfer sterol
untuk meningkatkan desorpsi sterol dari satu membran yang lain (158). Mereka
menunjukkan
StAR yang diarahkan ke mitokondria melalui terminal nya N dan, mungkin
menggunakan urutan C-terminal, menghasilkan perubahan di luar mitokondria
membran yang mengakibatkan pemindahan kolesterol dari luar ke dalam
membran. Ini transfer kolesterol adalah spesifik. Hipotesa ini penting
dengan situasi di mitokondria steroidogenik karena luar mitokondria
membran adalah kolesterol kaya, sedangkan membran dalam relatif tanpa
kolesterol (158, 159).
Meskipun mekanisme kerja protein StAR masih belum diketahui, maka
kemungkinan bahwa StAR berinteraksi dengan protein, lipid dan / atau faktor lain
di luar
membran mitokondria dari luar untuk mentransfer kolesterol. Identifikasi
faktor mitokondria bertanggung jawab untuk interaksi telah terbukti sulit (160).
Saran bahwa StAR mempromosikan transfer kolesterol oleh interaksi langsung
202 STOCCO
dengan permukaan luar mitokondria dan tidak melalui perantara berasal dari
studi di mana penambahan StAR protein rekombinan untuk mitokondria
dimurnikan
menyebabkan peningkatan produksi pregnenolon (158). Upaya untuk
mengidentifikasi
StAR-berinteraksi protein menggunakan sistem uji ragi dua-hibrida telah gagal
untuk mengidentifikasi mitra StAR-mengikat (160). Mungkin, StAR merangsang
kolesterol
transfer baik melalui interaksi yang stabil tinggi beberapa kesamaan dengan
mitokondria luar
membran, yang sulit untuk dideteksi karena jumlah mereka yang rendah, atau
melalui interaksi sementara, yang juga sulit untuk dideteksi (155).
Miller dan rekan juga mencoba untuk menentukan bagaimana mungkin
mempromosikan StAR
kolesterol transfer ke membran mitokondria bagian dalam, mereka dikenakan
StAR
proteolisis terbatas pada nilai pH yang berbeda dan menemukan bahwa molekul
berperilaku berbeda
sebagai penurunan pH (161). Yakni, di pHvalues di kisaran 3,5-4,0 StAR
dapat membentuk struktur globul cair. Mereka berspekulasi bahwa jika mikro pH
sekitarnya mitokondria bersifat asam, molekul StAR dapat menjalani
konformasi pergeseran, membentuk struktur diperpanjang dan meningkatkan
fleksibilitas
daerah linker terletak antara terminal N dan C aktif biologis
terminus sementara bekerja pada membran luar mitokondria. Mereka
menyarankan bahwa
transisi ke globul cair dapat menurunkan energi yang dibutuhkan untuk membuka
StAR tersebut
struktur lebih lanjut, mungkin memperlihatkan saluran kolesterol atau bahwa
mungkin memperpanjang
interval dengan yang StAR dapat berada pada membran luar sehingga
memungkinkan peningkatan
transfer kolesterol selama periode ini. Teori ini sangat bergantung
pada pH mikro di dekat mitokondria yang jauh lebih rendah
daripada bagian sitosol, kondisi yang belum tegas menunjukkan.
Struktur Domain START
Sedangkan pencarian untuk berinteraksi mitra untuk StAR di luar mitokondria
membran terus, mitra tersebut mungkin tidak diperlukan. Penjelasan dari kristal
struktur dari semua atau sebagian dari protein StAR telah terbukti sulit. Pertama,
tipe liar
StAR protein mudah untuk mengekspresikan tetapi sulit untuk memurnikan.
Namun, dimungkinkan untuk
memurnikan jumlah besar protein StAR yang tidak memiliki 62 N-terminal asam
amino.
Dipotong protein ini sulit untuk direalisasikan karena tidak larut apabila
diperlukan untuk membentuk kristal. Akibatnya, informasi mengenai struktur
tersier StAR
tidak tersedia sampai Tsujishita & Hurley (162) mengkristal dan dipecahkan
struktur
untuk domain START dari protein MNL64. START domain dari MLN64
menunjukkan tingkat tinggi homologi dengan domain StAR-START, dan StAR-
START
dan MLN64-START mengikat kolesterol dalam dasarnya dengan cara yang sama
pada rasio
1:1. Struktur kristal dari MLN64-START sebesar 2,2 · A memiliki C ® ¯ lipat
dibangun
sekitar barel lengkap berbentuk U-°. Yang terpenting, struktur tersier
dari MLN64-START memiliki terowongan hidrofobik yang 26 £ 12 £ 11 · A
dalam ukuran dan
cukup besar untuk mengikat satu molekul kolesterol. Penulis mengusulkan bahwa
StAR fungsi dalam mentransfer kolesterol pada membran dalam mitokondria
Ilustrasi
Jika tidak,
membran mitokondria.
433
Biologi aktivitas reseptor hormon tiroid

Mun Alberto ~ oz dan Juan Bernal
Instituto de Investigaciones Biome'dicas, jajan Consejo Superior de
Investigaciones Cientı'ficas, Duperier Arturo, 4, 28029 Madrid, Spanyol
(Korespondensi harus ditujukan kepada Alberto Mun ~ oz)
Pengantar
Dalam beberapa tahun terakhir sejumlah besar data telah
berkumpul di biologi reseptor hormon tiroid.
Protein reseptor telah dianalisis dari
fisiologis dan struktural sudut pandang. Sebagian besar
informasi telah diringkas dalam beberapa terakhir
sangat baik tinjauan (1-6). Reseptor hormon tiroid
(TR) merupakan faktor transkripsi ligan-termodulasi yang
adalah anggota dari sebuah superfamili besar yang mencakup
nuklir reseptor untuk lainnya kecil, molekul hidrofobik
seperti steroid, vitamin D3, asam retinoat,
prostaglandin, terpenoid, farnesoids dan asam lemak,
dan juga anak yatim reseptor yang disebut dengan tidak ada
dikenali ligan. Mereka mengikat triiodothyronine (T3)
dengan afinitas sekitar 10 kali lebih tinggi daripada tiroksin
(T4) dan mengaktifkan atau menekan ekspresi gen pada ligan
mengikat. Selain itu, sifat penting dari
reseptor hormon tiroid adalah kemampuan mereka untuk
mempengaruhi
ekspresi gen tanpa adanya hormon. Di sebagian besar
kasus ini tercermin dalam represi dari gen target
yang lega pada ligan yang mengikat, meskipun ada
juga contoh stimulasi ligan-independen
transkripsi. Sedikit yang diketahui konsekuensi biologis
ini properti intrinsik reseptor. The
represor aktivitas reseptor T3 bermutasi yang memiliki
kehilangan kemampuan untuk mengikat hormon dianggap memainkan
peran dalam patogenesis hormon tiroid
sindrom resistensi. Ekspresi reseptor selama
pembangunan mendahului onset fungsi tiroid janin
dan, dengan pemesanan dikenakan melalui transfer plasenta
hormon tiroid ibu, reseptor unliganded
mungkin mempengaruhi perkembangan janin melalui mekanisme
yang berada pada saat ini tidak diketahui. Untuk menjelaskan ini
masalah, kita dan lain-lain telah menganalisis pengaruh
ekspresi reseptor eksogen T3 pada fenotip
berbudaya sel yang mengekspresikan reseptor tidak ada atau sedikit
T3
kecuali direkayasa untuk melakukannya. Tujuan dari kajian ini adalah
untuk merangkum data yang tersedia di arah ini dan untuk
mencoba untuk merumuskan hipotesis mengenai reseptor
fungsi.
reseptor hormon Thyroid gen
reseptor Tiroid adalah produk dari dua gen,
Tra ditunjuk dan TRB, yang terletak di berbagai
kromosom (17 dan 3 masing-masing, pada manusia). The
kloning asli reseptor termasuk ayam
jenis dan tipe b manusia (7, 8). Kloning dari
reseptor dicapai berkat homologi untuk v-Erba,
onkogen yang hadir dalam genom dari burung
eritroblastosis virus yang terlibat dalam pembangkitan
dari erythroleukemias ayam dan sarkoma. TR
gen menyandi isoform beberapa reseptor. Jadi Tra yang
gen memberikan naik splicing alternatif untuk Tra-1, Tra-2
dan, dengan ekspresi untai alternatif, Rev-ErbAa.
TXa-2 berbeda dari Tra-1 di terminus karboksi dan adalah
juga dikenal sebagai c-ErbAa-2 atau varian sebuah TR-2 (TRva-2)
karena, seperti Rev-Erba, tidak mengikat dan hormon
karena itu tidak dapat dianggap sebagai reseptor. Dalam
transfected sel c-ErbAa-2 mampu menghambat transkripsi
aktivasi oleh Tra-1 dan TRB-1 (9, 10). The
Mekanisme efek ini tetap terdefinisi dan mungkin
melibatkan kompetisi untuk situs pengikatan DNA, untuk X retinoid
reseptor (RXR), atau untuk faktor nuklir lainnya (, 11 12).
Namun, data terakhir menunjukkan bahwa sel-sel mengekspresikan
tinggi
tingkat TRva-2 lakukan menanggapi induksi gen
kegiatan T3 (13). v-Erba merupakan bentuk mutasi dari
TRA subtipe yang berperilaku sebagai konstitutif
represor transkripsi gen diaktifkan oleh hormon-
diaktifkan TR (14, 15). Produk-produk dari TRB
gen TRB-1 dan TRB-2, yang timbul melalui menggunakan
dari promotor alternatif dan berbeda dalam aminoterminal mereka
urutan. Skema ini berlaku bagi manusia dan
tikus. Dalam baik ayam maupun amfibi memiliki
TRva-2 telah diidentifikasi. Produk dari gen Tra di
ayam adalah Tra mRNA tunggal yang diterjemahkan ke dalam
dua protein, Tra-Tra 46 dan dipotong-p40,
melalui penggunaan dua alternatif mulai translasi
situs (16, 17). Tidak-TRB 1 telah diidentifikasi dalam
ayam: bukan produk dari gen TRB ayam
dua protein, TRB-0 dan TRB-2, dengan TRB-0 memiliki
amino terminus yang sangat pendek (18). Dalam amphibia ada
dua Tra dan dua TRB gen reseptor ditunjuk Tra-
A, Tra-B, TRB-A dan TRB-B, yang merupakan asal dari enam
Tra dan tiga TRB isoform protein (19).
T3 reseptor, seperti dengan reseptor lain yang
faktor transkripsi, transkripsi memodulasi terutama oleh
mengikat ke situs akseptor DNA spesifik yang dikenal sebagai T3
respon elemen (T3RE). Ini terdiri dari mengulangi dari
konsensus dasar hexameric urutan AGGT / ACA di
beberapa pengaturan yang berbeda seperti mengulangi langsung
dipisahkan oleh spacer pb 4 (DR4) seperti di T3RE sekarang
dalam enzim malat tikus (20) dan myosin berat jantung
rantai alpha (21), mengulangi membalik keluar dipisahkan oleh 6 pb
Eropa Jurnal Endokrinologi (1997) 137 433-445 ISSN 0804-4643
q 1997 Masyarakat European Journal of Endocrinology
(ER6), seperti dalam lisozim ayam (22) dan tikus mielin dasar
protein (23), dan konfigurasi lainnya. Dalam kebanyakan
model umum tindakan T3 tindakan TRs sebagai heterodimers
dengan RXR, reseptor asam 9-cis retinoic. Baik
biokimia dan penelitian struktural menunjukkan bahwa
TR-RXR heterodimer mengikat ke T3RE dengan polaritas
sehingga TR duduk di situs setengah 30 (24). Dalam
tidak adanya reseptor T3 memiliki intrinsik transkripsi
represor fungsi. Hormon mengikat diikuti
oleh perubahan konformasi yang memiliki efek pada
interaksi dengan mesin transkripsi basal,
dengan stabilisasi dan / atau rekrutmen transkripsi basal
faktor dan stimulasi transkripsi. T3 bisa
juga menghambat transkripsi seperti yang ditunjukkan untuk a dan b
subunit dari thyrotropin (TSH) gen di hipofisis
kelenjar (25, 26), b-myosin rantai gen berat dalam hati
(27), molekul adhesi sel saraf (NCAM) gen di
otak (28) dan otot rangka (29) atau glutathione-
S-transferase di hati (30). (Informasi tentang tiroid
reseptor hormon dapat ditemukan di Internet pada
berikut URL: http://www.xanadu.mgh.harvard.edu/
reseptor / trrfront.html)
Reseptor-faktor yang terkait
Selain mitra RXR, molekul lainnya
telah terbukti secara langsung maupun tidak langsung terkait
fungsional kepada TR. Dalam kebanyakan kasus asosiasi ini
tidak hanya memberikan penjelasan mekanis tentang bagaimana
hormon tiroid akhirnya mempengaruhi transkripsi
aktivitas, tetapi mereka juga merupakan hubungan dengan lainnya
menandakan jalur yang memungkinkan integrasi beragam
sinyal fisiologis. Pada tingkat pertama adalah RXR-TR
heterodimer. Karena RXR adalah reseptor itu sendiri, dan juga
mitra bagi reseptor nuklir lainnya, keterlibatan dalam
jalur aktivasi lain mungkin memodifikasi selular
respon terhadap T3. Misalnya gangguan, saling
antara vitamin D3 dan T3 sinyal telah digambarkan
(31, 32). TRs bentuk heterodimers dengan anggota lain dari
superfamily reseptor seperti reseptor vitamin D3 atau
reseptor proliferator-diaktifkan Peroksisom (PPAR)
(33, 34), dan aktivitas mereka dapat dipengaruhi oleh
ayam ovalbumin transkripsi promotor hulu
Faktor (kudeta-TF) dan reseptor yatim mungkin lainnya
mengikat urutan DNA analog (, 35 36). Pada
kedua tingkat heterodimer RXR-TR bertindak melalui
molekul adaptor yang baru saja ditemukan
dikenal sebagai corepressors atau coactivators (untuk review
lihat 37, 38). Corepressors adalah protein yang menengahi
fungsi ligan-reseptor independen, dengan
membuat interaksi hambat dengan transkripsi
mesin. Dua molekul corepressor telah
dijelaskan, N-Kor (corepressor reseptor nuklir, p270)
dan SMRT (membungkam mediator untuk RARs dan TRs, atau
p165) (39, 40). Setelah ligan mengikat corepressors
meninggalkan kompleks, derepressing ekspresi gen. Selanjutnya,
coactivators direkrut menyebabkan aktivasi
transkripsi gen. Protein ini bertindak sebagai bridging
faktor antara reseptor dan transkripsi basal
faktor. Beberapa coactivators untuk steroid / tiroid
reseptor telah digambarkan seperti TR-berinteraksi
perantara protein1/transcriptional faktor 1 (Trip1 /
TIF1), reseptor-berinteraksi protein 140 (RIP140),
steroid reseptor co-activator-1/nuclear-coactivator-1
(SRC-1/N-CoA1) dan kompleks TRAP (untuk terbaru
review lihat 41). Coactivator penting lainnya adalah
mouse CREB mengikat protein (CBP) dan erat
terkait P300 manusia. Protein tersebut berinteraksi dengan
tiroid, steroid dan reseptor asam retinoic, serta
transkripsi banyak faktor lainnya, seperti terfosforilasi
CREB, c-Jun, c-Fos, c-MYB, Elk-1, dll Karena CBP
dan P300 berada di persimpangan sinyal beragam,
mereka telah dianggap sebagai molekul integrator (42,
43). Bahkan, telah diusulkan bahwa saling
antagonisme antara mengaktifkan protein-1 (AP-1): Jun-
Fos dan reseptor hormon diaktifkan karena persaingan
untuk membatasi jumlah CBP/p300 dalam inti
(43). Ini juga telah menyarankan bahwa beberapa coactivators,
CBP/p300 termasuk memiliki asetiltransferase histone
kegiatan dan bahwa peran mereka adalah untuk mengguncang
nukleosom
melalui peningkatan asetilasi histon, yang dapat
membuat DNA lebih mudah diakses faktor transkripsi (44).
Sebaliknya, corepressor N-COR telah ditemukan
membentuk kompleks dengan deacetylase histon (45).
Reseptor domain
Beberapa domain telah dijelaskan bahwa menengahi
biologi aktivitas reseptor hormon tiroid (Gbr. 1):
terminal-amino (A / B) domain, DNA mengikat
domain (C), engsel domain (D), dan ligan
mengikat / karboksi-terminal domain (E / F). Beberapa
domain baik dilestarikan di antara yang berbeda
isoform reseptor, dan bahkan di antara yang berbeda nuklir
reseptor. Dalam dua tahun terakhir struktur dari
DNA dan domain pengikatan ligan telah dipecahkan oleh
X-ray kristalografi (46, 47).
The domain amino-terminal terlibat dalam transkripsi
aktivasi. urutan adalah sangat berbeda
antara subtipe reseptor alfa dan beta dan
antara reseptor beta isoform menunjukkan perbedaan
dalam aktivitas transkripsi. The-TRB 1 dan TRB-2
isoform memiliki urutan yang sama di seluruh
molekul kecuali untuk bagian amino-terminal
protein. Perbedaan ini secara berurutan muncul melalui
penggunaan promotor alternatif, menghasilkan dua protein
yang memiliki ekspresi jaringan yang berbeda dan biologis
kegiatan meskipun memiliki DNA identik dan ligan
mengikat domain. The domain amino-terminal
dianggap terlibat dalam aktivasi transkripsi
independen dari ligan. tindakan Its tampaknya
dimediasi melalui interaksi dengan komponen dari
transkripsi basal mesin, khususnya dengan transkripsi
Faktor IIB (TFIIB) (48, 49). Penghapusan amino
asam 21 sampai 30 ayam Tra menurunkan mengaktifkan
kapasitas sebesar 10 - sampai 20 kali lipat (50). Meskipun daerah ini
tidak
434 Mun A ~ oz dan J JURNAL EROPA Bernal Endokrinologi (1997) 137
tidak mengandung suatu domain aktivasi intrinsik, adalah
penting untuk interaksi dengan TFIIB. Peran dari
amino-terminal domain juga telah dijelaskan untuk
modulasi interaksi fungsional dengan corepressors.
Sementara daerah ini tidak terlibat langsung dalam mengikat
nuklir corepressors, efek diferensial
corepressor pada represi ligan-independen atau
aktivasi telah digambarkan antara Tra-1 dan TRB-
1 di satu sisi dan TRB-2 di sisi lain (51). The
amino-terminal wilayah TRB-2 menghalangi pembentukan
interaksi fungsional dengan N-COR, baik
melalui perubahan konformasi dari reseptor atau
melalui hubungan dengan coactivators tertentu. The
amino-terminal domain juga mungkin memainkan peran dalam DNA
pengakuan (52).
Domain pengikatan DNA yang paling kekal
wilayah antara reseptor nuklir. Ini berisi dua
karakteristik DNA modul mengikat, diatur sebagai
disebut seng jari. Bagian C-terminal pertama
jari seng adalah alpha helix yang dikenal sebagai DNA
helix pengakuan karena berinteraksi dengan spesifik
Urutan DNA. helix ini berisi lisin dan arginin
residu bahwa kontak guanines di situs setengah T3RE.
Diskriminasi elemen respon juga tergantung pada
tiga asam amino (TELUR, di TRs) yang penting
untuk pengakuan T3REs alam dan merupakan socalled
P ('proksimal' untuk) kotak. Mutasi dari kotak P
asam amino mengubah sedikit pengakuan dari situs setengah
urutan AGGTCA, tetapi mempengaruhi pengikatan reseptor ke
urutan AGGACA, yang jauh lebih umum
ditemukan di antara T3REs alami. Hal ini sebagian alasannya
mengapa v-Erba di mana glisin digantikan dengan sebuah serin
di posisi ketiga dari kotak P tidak mampu mengikat
urutan AGGACA, tetapi mengikat baik untuk motif AGGTCA
(53). Hilir jari seng kedua ada
dua wilayah struktur heliks dikenal sebagai T dan A
kotak. Kotak T sebelumnya ditunjukkan dalam RXR
berperan dalam mengikat Koperasi RXR
homodimers untuk DR1 motif (situs setengah AGGTCA dipisahkan
dengan 1 dasar). Dalam TR, kotak T menyediakan kontak
dengan daerah N-terminal dari seng kedua jari
RXR. Kotak A pertama kali dijelaskan dalam transkripsi
faktor NGFI-B, juga anggota yatim piatu dari nuklir
reseptor keluarga, di mana ia memainkan peran dalam pengakuan
residu Sebuah tambahan yang terletak 50 ke situs mengikat,
memfasilitasi monomer mengikat. Seperti yang ditunjukkan oleh
Rastinejad et al. (46), helix-A TR menstabilkan
DNA mengikat domain pada DNAwith yang lebih luas
pengakuan interface selain untuk reseptor steroid, conferring
TR dengan kemampuan untuk mengikat sebagai monomer dan
untuk mengenali unsur-unsur respon octamer (54). Kotak A
menentukan pengakuan khusus dari dua nukleotida
T (A / G) pada akhir 50-of octamer tersebut.
Domain (D) engsel merupakan hamparan asam amino yang
link DNA dan domain mengikat ligan yang
dilestarikan antara Tra dan TRB. Fungsinya tidak
terkenal: sebelumnya, peran dalam nuklir penargetan dari
molekul reseptor diusulkan (55), dan baru-baru
telah ditemukan untuk berpartisipasi dalam pergaulan dengan
corepressor protein (39).
E / F domain (ligan domain mengikat, atau LBD) adalah
terutama a-heliks dalam struktur, dengan 12 yang heliks
dirakit dalam tiga lapisan meninggalkan internal hidrofobik
saku mana ligan dimakamkan (47). Dalam
Selain ligan mengikat juga memiliki peran penting dalam
dimerisasi reseptor, dan dalam interaksi dengan
kofaktor. Ada tiga subkawasan yang berbeda dalam
domain pengikatan ligan, yang dikenal sebagai taui
(Ti), yang heptad kesembilan, dan AF-2 (tau-c atau tau-4)
masing. Sub regional ti, dekat-N terminus
LBD, adalah juga kekal antara reseptor nuklir dan
mungkin terlibat dalam interaksi protein-protein.
The heptad kesembilan (asam amino 368-374 dari RTRA) adalah
terlibat dalam dimerisasi reseptor (12, 56, 57). Beberapa
JURNAL EROPA Endokrinologi (1997) 137 Aktivitas biologi dari reseptor
hormon tiroid 435
Gambar 1 Domain struktur molekul TR. Ditampilkan adalah lokasi dari
domain AF klasik reseptor nuklir. The
transactivation domain terletak di terminal amino (hormon-
independen, AF-1) dan di terminal karboksi (hormonedependent,
AF-2). Domain C DNA mengikat berisi dua seng (Zn) jari dan T dan A
kotak. Pengakuan DNA heliks P-kotak
terletak di bagian C-terminal dari seng jari pertama dan penting dalam
hubungan khusus dengan urutan heksamer. Kotak-D
terlibat dalam dimerisasi dan pengakuan spasi. T dan A kotak
berpartisipasi dalam heterodimerisasi RXR dan pengakuan dari dua
nukleotida terletak di ujung 50-urutan octamer mengikat masing-
masing. Domain D berisi situs pengikatan untuk corepressors. The
E domain terlibat dalam dimerisasi mengikat dan reseptor ligan. Ini
termasuk taui kekal (ti) daerah dan sembilan heptads (posisi
dari 9 heptad ditampilkan sebagai teduh stripe). H2 melalui H12
menunjukkan posisi perkiraan heliks alfa yang menentukan batas yang
triiodothyronine (T3) rongga mengikat. F domain bertanggung jawab
atas transactivation hormon-tergantung, berisi situs mengikat
coactivators.
residu asam amino di kawasan ini telah ditunjukkan
menjadi penting untuk fungsi reseptor. Misalnya,
mutasi leusin kritis dalam kodon 428 dari
hTRb-1 selektif dengan menghapuskan heterodimerisasi
RXR dan aktivitas negatif yang dominan. AF-2 sub
terdiri dari 17 asam amino yang terletak di
karboksi terminus TR (58, 59). Ini telah otonom
fungsi aktivasi dan terdiri dari yang sangat kekal
amphipathic heliks-diperlukan untuk ligand-dependent
aktivasi reseptor. Kenyataan bahwa hormon
terkubur di dalam rongga hidrofobik dalam ligan
domain mengikat menunjukkan bahwa konformasi
perubahan terkait dengan pengikatan ligan mempengaruhi
permukaan reseptor, memperlihatkan residu kritis terletak
dalam sub regional-2 AF terlibat dalam protein-protein
penting dalam interaksi aktivasi transkripsi
(47).
Hormon-independen kegiatan TR
Selain kapasitas mereka untuk mengaktifkan transkripsi gen
pada hormon mengikat, hal ini menjadi semakin
jelas dari beberapa studi yang unliganded TR
mengerahkan tindakan biologis. Yang paling jelas adalah
represi dari transkripsi basal mungkin sebagai
konsekuensi dari perekrutan corepressors. Pada
sisi lain, unliganded TR juga dapat upregulate yang
ekspresi dari beberapa gen putatively dihambat oleh T3. Untuk
Misalnya, ayam Tra dan juga v-Erba mengaktifkan
promotor beberapa daerah gen keratin manusia (60),
dan mouse TRB-1 mengaktifkan daerah promotor dari
mouse preprothyrotropin-releasing gen hormon dalam
transfected sel (61). heterodimerisasi RXR tampaknya
harus dibuang untuk kegiatan TR unliganded.
Ayam TRB-2 memiliki yang kuat ligan-independent
transactivation aktivitas pada subset elemen respon
(62). Tikus Tra-1 ini juga dapat mengaktifkan transkripsi dalam
T3-independen fashion di sel GH4C1 hipofisis tetapi tidak
dalam beberapa baris sel lainnya (63, 64). Selain itu,
peraturan daerah dari virus sarkoma Rous dan
immunodeficiency virus tipe manusia 1 diaktifkan dalam
transfected sel oleh Tra-1, tapi tidak TRB-1, secara independen
T3 (65, 66). Mekanisme dari T3-
efek independen mungkin adalah pembentukan langsung
protein-protein interaksi dengan transkripsi
inisiasi mesin atau dengan faktor-faktor nuklir lainnya,
yang juga dapat digunakan untuk memodulasi sinyal yang berbeda
jalur dikendalikan oleh faktor yang berbeda (AP-1, CREB) sebagai
disebutkan di atas.
Howcan ini kegiatan TR diatur? kemungkinan A,
spekulatif dan belum menunjukkan, adalah pengendalian
mereka fosforilasi status. Sangat awal, ayam baik
TR dan protein v-Erba yang terbukti substrat dari
kinase (protein kinase (PK) C, PKA, kasein kinase II)
vitro dan in vivo (67, 68). Fosforilasi spesifik
residu serin dalam domain amino-terminal v-Erba
sangat penting untuk potensi onkogenik, sedangkan di
TR homolog ayam / protein c-Erba mungkin
diperlukan untuk kegiatan represor transkripsi (69).
Hasil tidak langsung menggunakan inhibitor non-spesifik fosfatase
seperti asam okadaic menunjukkan bahwa T3-induced
aktivasi transkripsi tikus-Tra 1 dan TRB-1 adalah
dimodulasi oleh fosforilasi (70). Selanjutnya,
menggunakan inhibitor fosforilasi yang sama telah
menunjukkan menjadi penting untuk interaksi antara
manusia TRB-1 dan RXRb (71). Lebih penting lagi,
asam okadaic-induced fosforilasi TRB manusia
1 merangsang aktivitas transkripsi di transfected
sel-sel dan meningkatkan kemampuannya untuk mengikat DNA dan
lainnya
nuklir protein in vitro (72). Baru-baru ini, asam okadaic telah
telah ditunjukkan untuk selektif meningkatkan stabilitas TRB-1
protein pada sel COS tetapi tidak pada tipe sel lainnya (73).
Sebagaimana dibahas, dengan biologis kegiatan Rev-ErbAa
dan mungkin juga c-ErbAa-2 varian mungkin juga
berdasarkan interaksi protein-protein mungkin diatur
oleh fosforilasi. Dalam mendukung gagasan ini, DNA
mengikat aktivitas c-ErbAa-2 dimodulasi oleh fosforilasi
yang, pada gilirannya, dapat mempengaruhi negatif
Peraturan Tra-1 reseptor (74).
C-proto-onkogen Erba menengahi
gen regulasi aktivitas tiroid
hormon
Produk dari proto-onkogen c-Erba (ayam Tra
gen) awalnya ditandai sebagai protein nuklir
T3 mampu mengikat dengan afinitas tinggi dan kekhususan baik dalam
vitro dan pada sel transiently-transfected (, 7 8). Dalam
Selain itu, menunjukkan ukuran yang diusulkan dalam biokimia
studi yang ada dalam literatur untuk reseptor tiroid.
Identifikasi utama protein c-Erba sebagai
reseptor tiroid fungsional, bagaimanapun, membutuhkan
demonstrasi yang bisa menengahi fisiologis
tindakan hormon. Untuk mencapai hal ini, c-Erba
proto-onkogen diperkenalkan dan dinyatakan dalam
FAO tikus hepatoma cell line menggunakan retrovirus rekombinan.
Sel baris ini dipilih karena tanpa
endogen reseptor tiroid dan dengan demikian tidak sensitif terhadap
hormon tiroid. FAO sel mengekspresikan c-Erba, tetapi tidak
orangtua sel atau mereka mengekspresikan v mutan-Erba
protein menjadi hormon-tergantung dari segi induksi
dari beberapa gen hati seperti enzim malat,
Phosphoenolpyruvate carboxykinase, dan Na / K -
ATPase dikenal tiroid-responsif (75). Dengan
mengikuti pendekatan komplementasi genetik,
c-Erba-protein yang telah pasti diidentifikasi sebagai
reseptor fungsional mediasi gen regulasi
kegiatan T3.
baris sel Didirikan sering mengungkapkan jumlah yang sangat rendah
reseptor tiroid aktif dengan beberapa pengecualian. The
Alasan untuk hal ini mungkin, meskipun tidak menunjukkan, sebuah
membungkam proses mungkin karena metilasi TR
gen berikut kultur in vitro. Selain itu, ekspresi
tinggi tingkat varian-2 Tra akan, secara teori,
blok efek dari setiap reseptor sisa. Untuk menunjukkan
efek dari TR dan T3 di baris sel yang dikultur
436 Mun A ~ oz dan J JURNAL EROPA Bernal Endokrinologi (1997) 137
beragam asal-usul kita dan lain-lain telah menggunakan teknik
dari komplementasi genetik yang mirip dengan yang diterapkan
untuk menunjukkan bahwa protein c-Erba memang
mampu transduce tanggapan T3 dalam sel hepatoma, sebagai
dijelaskan di atas. Studi-studi ini telah terbukti sangat
berguna dalam memperoleh wawasan-T3 tergantung dan
-Efek independen TRs di beberapa jaringan. Dalam
bagian berikut kita akan merangkum paling relevan
data yang diperoleh.
Pengaruh TRs dalam sel saraf
Hormon tiroid memiliki efek mendalam pada perkembangan otak
pada manusia dan tikus. Pola
ekspresi dari set yang berbeda TR isoform dalam timeand
fashion-wilayah tertentu di otak yang kompleks (untuk
ulasan pada efek T3 di otak lihat 76, 77). Beberapa
populasi saraf otak hipotiroid adalah
ditangkap dalam diferensiasi terminal mereka. Selain itu,
ada penelitian menunjukkan kerjasama antara T3
dan faktor pertumbuhan saraf (NGF) dalam pengembangan
hippocampus, bohlam otak kecil dan penciuman, dan dalam
aktivitas enzim penanda saraf di basal
otak depan dalam otak tikus awal pasca melahirkan (78, 79). Ini
data dasar untuk analisis efek TR-a
dalam sel PC12. Kesimpulan utama dari studi ini
skematis diperlihatkan pada Gambar. 2.
PC12 sel adalah sel tikus yang pheochromocytoma
menunjukkan karakteristik medula adrenal neuroendokrin
nenek moyang. Mereka menampilkan diferensiasi ganda
kapasitas, baik ke dalam neuron simpatik pada induksi
dengan NGF, atau menjadi sel-sel sekretori pada chromaffin
pengobatan dengan hormon glukokortikoid. Kemampuan untuk
mengikuti program ekspresi gen lengkap yang mengarah
mereka untuk mengubah fenotip mereka terhadap bahwa
neuron simpatik membuat sel PC12 yang paling
populer sistem di mana untuk belajar diferensiasi neuronal
sebagai respons terhadap faktor Neurotropik.
PC12 sel mengekspresikan TR ayam-gen
(PC12 Tra-1) dari murine Moloney terpadu
retrovirus leukemia berbasis menunjukkan sangat menarik
fenotipe: mereka mampu merespon langkah awal
dari diferensiasi neuronal dipicu oleh NGF dengan
ekspresi dari serangkaian gen awal segera (c-Juni,
junB, Jund, c-FOS, fra-1, NGFI-A, NGFI-B) dan pembentukan
proses pendek (spike), namun, bagaimanapun, diblokir di
kemudian fase diferensiasi tanpa mulur
neurites dan penghambatan ekspresi dari NGFinduced
gen neuronal (transin, SCG10, neurofilamen-
68, NCAM, GAP43) (80). Jadi, dalam ketiadaan
TR ekspresi hormon menyebabkan penghambatan NGFinduced
diferensiasi neuronal jalur. Hebatnya,
co-pengobatan PC12-1 sel Tra dengan NGF dan T3
mengarah pada pelepasan penindasan ini dan akuisisi penuh
dari fenotipe saraf.
Juga menarik, penambahan T3 sendiri untuk sel-sel ini
menyebabkan kematian sel dengan apoptosis menunjukkan bahwa
peningkatan
di TR membuat sel-sel sangat tergantung pada neurotropins
untuk bertahan hidup. Tak satu pun dari fenomena ini berlangsung di
sel mengekspresikan gen v-Erba mutan: PC12 v-Erba
sel konstitutif terhambat untuk berdiferensiasi menjadi
neuron baik dalam ketiadaan atau di hadapan
hormon. Sejalan dengan ketidakmampuan protein v-Erba
untuk T3 mengikat, penambahan hormon tidak dapat melepaskan
represi dari NGF-induced diferensiasi neuron.
Selain itu, T3 tidak mempengaruhi kelangsungan hidup PC12 Verba
sel (80).
Hasil ini menunjukkan kemungkinan yang menarik
TR ekspresi in vivo dapat memodulasi respon
prekursor sel saraf neurotropins. Tergantung pada
jumlah reseptor tiroid menyatakan, nasib
mungkin neuroblasts diferensiasi (jika kedua T3 dan
JURNAL EROPA Endokrinologi (1997) 137 Aktivitas biologi dari reseptor
hormon tiroid 437
Gambar 2 Pengaruh TR / c-erbAa dan v-Erba di
kapasitas ganda diferensiasi sel PC12.
Ekspresi salah satu gen Erba
memodulasi perbedaan-mendorong tindakan
dari kedua NGF dan glukokortikoid (Dex). Dalam
Selain itu, TR / peka ekspresi c-Erba
PC12 sel untuk kematian sel apoptosis yang disebabkan oleh
triiodothyronine (T3). (Direproduksi dari referensi
80, dengan izin dari penerbit.)
neurotropins tersedia), kematian (jika tingkat T3 adalah
normal tapi ada kurangnya neurotropins) atau terbatas /
keterlambatan dalam pematangan (dalam kasus hipotiroidisme).
Jalur alternatif diferensiasi sel PC12
ke dalam sel chromaffin juga dipengaruhi oleh ekspresi TR.
Peningkatan tingkat TR menyebabkan blokade di basal dan
juga ekspresi-diinduksi glukokortikoid dari tirosin
hidroksilase, enzim kunci dalam sintesis katekolamin.
Sekali lagi, v-Erba mengarah ke situasi yang menyimpang dengan
ekspresi abnormal peningkatan chromaffin
spidol (hidroksilase tirosin, chromogranin B). Ini
tindakan TR tidak tergantung pada T3, dan setuju dengan peran
TR dalam mendorong komitmen dibedakan
progenitor cells mengikuti jalur saraf.
Untuk ini, dua sinyal tampaknya diperlukan yaitu
satu permisif disediakan oleh T3, dan membedakan
yang disediakan oleh neurotropins (NGF). Ini adalah jelas
bunga untuk menyelidiki apakah sama atau berbeda
mekanisme kerjasama antara T3 dan NGF atau
neurotropins lainnya fungsional dalam diferensiasi
neuron dalam sistem saraf pusat. Bahkan,
hasil awal dari laboratorium kami menunjukkan bahwa
ini dapat terjadi.
Mouse N2a sel neuroblastoma merupakan lain
Model sistem yang digunakan untuk studi biokimia saraf
fungsi. Sel-sel ini menunjukkan diferensiasi morfologi
dengan pembentukan neurites atas penghapusan serum, yang
dapat ditingkatkan dengan asam retinoic, cAMP, dan lainnya
faktor. Mereka mengekspresikan jumlah yang sangat rendah TR dan
akibatnya tidak sensitif terhadap T3. Eksogen ekspresi
TR gen dalam sel N2a telah dilakukan oleh
dua kelompok. Pastor et al. (81) menunjukkan bahwa stabil
ekspresi ayam TR-a mengarah ke T3-independen
peningkatan kadar trkB RNA yang bersesuaian
dengan penurunan jumlah trkA dan trkC RNA.
BDNF, ligan trkB, diinduksi autophosphorylation trkB,
tetapi tidak diferensiasi sel mungkin karena
sel tidak memiliki beberapa komponen dari rantai normal
peristiwa dipicu oleh neurotropins. Ekspresi Transien
tikus-Tra 1 dan TRB-1 pada sel-sel ini menyebabkan yang sama
efek, menunjukkan TR bahwa dirinya bisa terlibat
dalam peraturan dari himpunan tertentu neurotropin
reseptor dinyatakan oleh beberapa kelompok neuronal selama
embrio pembangunan. Kurangnya efek T3 pada trkB
mRNA setuju dengan data vivo yang menunjukkan tidak ada
perubahan
isi RNA trkB spesies yang berbeda dalam
otak neonatal atau hewan dewasa hipotiroid ketika
dianalisis oleh Northern blotting atau hibridisasi in situ
(82-84).
Puymirat dan Dussault telah menyatakan manusia
TRB-1 dan Tra tikus-1 gen dalam sel N2a. T3 pengobatan
sel mengekspresikan TRB-1, tetapi bukan dari mereka mengungkapkan
Tra-1 blok proliferasi dan menginduksi morfologi
diferensiasi. T3 meningkatkan mRNA acetylcholinesterase
tingkat dan aktivitas enzim dalam sel (85, 86). Hal ini
jelas apakah perbedaan yang ditemukan dalam studi ini
mencerminkan peran yang berbeda untuk subtipe TR atau perbedaan
di
tingkat ekspresi gen yang dicapai oleh masing-masing.
Pengaruh TRs dalam sel glial
Sebuah literatur yang luas ada menunjukkan bahwa kedua jenis
dari glial, oligodendrocytes sel dan astrosit, adalah
sasaran T3 in vivo dan mengekspresikan isoform beberapa TR.
Beberapa studi telah menunjukkan bahwa mielinasi oleh
oligodendrocytes dan parameter diferensiasi juga beberapa
dari astrosit dipengaruhi oleh kekurangan T3 dalam
tikus. Namun, data dari kelompok Oppenheimer
baru-baru ini menantang ide ini dengan menunjukkan bahwa
astrosit otak tikus di situ tidak menyatakan cukup besar
TR (87). Data ini setuju dengan temuan kami bahwa
ekspresi gen astrosit-spesifik seperti glial
berhubung dgn urat saraf asam protein (GFAP) dan glutamin
sintetase tidak diubah dalam hipotiroidisme neonatal
(88). hormon tiroid dapat menyebabkan tindakan tidak langsung
dimediasi oleh neuron atau oligodendrocytes, atau bahkan bertindak
melalui jalur extragenomic. Contoh
yang terakhir memang sudah dijelaskan: T4 mengatur
deiodinase aktivitas dengan mempengaruhi polimerisasi aktin
(89).
Untuk menganalisis kemungkinan peran TR dalam konteks sel glial
kita pertama kali digunakan C6 sel glioma untuk menyelidiki
peraturan gen mielin oleh TR dan T3. Anehnya,
T3 hanya disebabkan kenaikan kecil dalam protein proteolipid
(PLP) tingkat RNA dalam sel over-mengekspresikan ayam
TR-gen (90). Sebaliknya, asam retinoat (RA) memiliki
efek dramatis meningkatkan PLP tingkat RNA di orangtua
sel C6, dan juga pada mereka overexpressing TR-atau verba.
The MBP dan gen encoding MAG dua lainnya
utama protein mielin (Myelin Basic Protein, Myelin
Associated Glycoprotein) yang diam dalam C6 sel.
Gen lain T3-sasaran, reseptor b1-adrenergik
(B1-AR) tidak responsif terhadap T3 dalam sel C6, bahkan
setelah ekspresi reseptor T3 dalam jumlah yang
mampu menganugerahkan T3-ketergantungan terhadap enzim
hydroxymethylglutaryl koenzim A (HMG-CoA)
sintase (91). Gen b1-AR transcriptionally
diatur oleh T3 dalam sel jenis lain seperti jantung
miosit, dan peraturan-down dari jumlah b1-
dan b2-AR dalam otak hipotiroid telah dilaporkan
(92-94). Sejak retrovirally terinfeksi kami C6 sel menunjukkan
rasio TRa-1/c-erbAa-2 tinggi, unresponsiveness T3
tidak dapat dikaitkan dengan efek pemblokiran Tra-2 tetapi
mungkin karena faktor intrinsik sel tipe tertentu. Ini
Eksperimen ini menunjukan peran penting bagi kofaktor
(Mungkin coactivators atau corepressors) dalam menentukan
sel spesifisitas pada tindakan fisiologis T3.
Kami telah mempelajari efek TR di baris lain sel glial
asal disebut B3.1. Sel-sel ini dibentuk dari
10 hari embrional otak tikus dengan menginfeksi primer
otak total budaya dengan retrovirus v-myc-mengekspresikan
(95). B3.1 klonal sel mengekspresikan gen dibedakan
glial prekursor seperti A2B5, laminin dan vimentin
Sebaliknya,
Ini
Sebaliknya,
Mengingat
sel.
The
diselidiki.
Dalam
wilayah.
a.
Sebuah serupa
Dalam
induksi.
Selain itu,
Sebaliknya
Sel-sel ini
menengah.
perlawanan.
Bersama-sama, hasil ini
Kesimpulan
fisiologi.
235
Varian dalam Gen Biosintesis Estrogen, hormon seks steroid Tingkat, dan
Endometrial Cancer: Suatu Tinjauan BESAR
Sara H. Olson 1, Elisa V. Bandera 2, dan Orlow1 Irene
1 Departemen Epidemiologi dan biostatistik, Pusat Kanker Memorial Sloan-
Kettering, New York, NY.
2 Kanker Pencegahan dan Pengendalian Program, Institut Kanker New Jersey,
New Brunswick, NJ.
Diterima untuk publikasi 10 Maret 2006, diterima untuk publikasi, 5 Juli 2006.
Varian dalam gen yang terlibat dalam biosintesis estrogen yang mungkin penting
dalam penyebab endometrium
kanker. Tinjauan ini merangkum data pada varian di tujuh gen dalam jalur
biosintesis estrogen dan mereka
sehubungan dengan tingkat sirkulasi hormon steroid seks pada wanita dan risiko
kanker endometrium. Sedikit atau tidak ada
Perusahaan ini telah ditemukan antara genotipe dari-450 gen sitokrom P
CYP11A1 (-528 [TTTTA] n) atau CYP17A1
(-34T / C) atau dehidrogenase 17b-hidroksisteroid 1 gen HSD17B1 (Ser312Gly)
dan tingkat progesteron,
androgen, atau estrogen. Varian / posisi-34T C di CYP17A1 tampak terkait
dengan penurunan risiko
kanker endometrium, dengan orang-orang homozigot untuk alel varian memiliki
sekitar setengah risiko yang homozigot
untuk jenis liar. varian Link di CYP19A1 (4 n intron [TTTA], intron 4 [TCT]
penyisipan / penghapusan, ekson 10 C / T) adalah
terkait dengan beberapa kadar hormon dan, berdasarkan dua penelitian, untuk
risiko kanker endometrium. Untuk gen-gen lain
(HSD3B1, HSD3B2, HSD17B2), tidak ada informasi yang tersedia pada asosiasi
ini. Hasil menunjukkan kebutuhan untuk
studi varian lain dan haplotype dalam gen, khususnya CYP17A1 dan CYP19A1,
serta varian dalam
gen lain yang terlibat dalam jalur biosintesis hormon dan metabolisme. Lebih
besar studi atau studi gabungan yang
memungkinkan untuk penyelidikan gen-gen dan interaksi gen-lingkungan
dijamin.
androgen; CYP11A1, CYP17A1, CYP19A1, neoplasma endometrium,
epidemiologi, HSD3B; HSD17B
Singkatan: CYP11A1, sitokrom P-450 11A1 gen; CYP17A1, sitokrom P-450
17A1 gen; CYP19A1, sitokrom
P-450 19A1 gen; DHEA, dehydroepiandrosterone, DHEAS,
dehydroepiandrosterone sulfat; HSD3B1, 3b-hidroksisteroid
dehidrogenase 1 gen; HSD3B2, dehidrogenase 3b-hidroksisteroid 2 gen;
dehidrogenase HSD17B1, 17b-hidroksisteroid
1 gen; HSD17B2, dehidrogenase 17b-hidroksisteroid 2 gen; SNP, polimorfisme
nukleotida tunggal.
Editor's note: Tulisan ini juga tersedia di website
dari Human Genome Epidemiology Network (http://
www.cdc.gov/genomics/hugenet/).
Sebuah hipotesis pemersatu untuk etiologi kanker endometrium
kehadiran paparan berlebihan atau terlalu lama estrogen
terlindung oleh progesteron (1, 2). Salah satu pendekatan untuk memahami
karsinogenesis hormon adalah untuk mempelajari varian
dalam gen yang terlibat dalam biosintesis hormon dan metabolisme
dalam kaitannya dengan kedua tingkat hormon yang bersirkulasi dan risiko
hormon yang berhubungan dengan kanker. Tinjauan ini termasuk varian dari
gen dalam jalur biosintesis. Hipotesis yang mendasari
adalah bahwa varian yang meningkatkan tingkat sirkulasi dari estrogen,
dan mungkin androgen, cenderung meningkatkan risiko
kanker endometrium (3, 4), sedangkan orang-orang yang meningkatkan
progesteron
cenderung untuk mengurangi resiko (5).
GEN DAN VARIASI GEN
Gambar 1 menyajikan garis besar sederhana langkah-langkah dalam estrogen
biosintesis. Kami meneliti gen diilustrasikan karena
Korespondensi Dr H. Olson Sara, Departemen Epidemiologi dan biostatistik,
Pusat Kanker Memorial Sloan-Kettering, 307 63 Timur
Street, New York, NY 10021 (e-mail: olsons@mskcc.org).
235 Am J Epidemiol 2007; 165:235-245
American Journal of Epidemiology
ª Copyright 2006 oleh Johns Hopkins Bloomberg School Kesehatan Masyarakat
All rights reserved; dicetak dalam U.S.A.
Vol. 165, No 3
DOI: 10.1093/aje/kwk015
Advance Akses publikasi November 16, 2006
Download dari aje.oxfordjournals.org oleh tamu pada 2 Oktober 2010
mereka secara langsung dalam jalur biosintesis estrogen dan
Oleh karena itu mungkin terkait dengan tingkat hormon dan risiko
kanker endometrium, mengakui bahwa gen lainnya
terlibat dalam biosintesis hormon, metabolisme, dan transportasi
juga tentang kepentingan yang potensial. Web Tabel 1 menunjukkan
lokasi masing-masing gen, ukurannya, serta jumlah dan jenis
nukleotida polimorfisme tunggal (SNP). (Informasi ini
digambarkan dalam yang pertama dari delapan meja tambahan; masing-masing
disebut sebagai''''Web tabel dalam teks dan dipasang pada
website theHumanGenomeEpidemiologyNetwork (http://
www.cdc.gov / genomik / hugenet / reviews.htm) serta di
Journal's website (http://aje.oupjournals.org/).)
CYP11A1
Estrogen dan hormon steroid lainnya berasal dari
kolesterol, dengan pregnenolon terbentuk dari kolesterol
melalui kegiatan gen sitokrom P-450 11A1
(CYP11A1). Meskipun 58 SNP telah diidentifikasi dalam
CYP11A1 (Web tabel 1), dan beberapa mungkin penting untuk fungsi
berdasarkan analisis urutan homologi (6), hanya satu yang
telah sering dipelajari dalam kaitannya dengan kadar hormon atau penyakit:
yang pentanucleotide [TTTTA] n ulangi (D15S520) pada
-528 Posisi dalam promotor perbedaan region.Nofunctional
telah dilaporkan untuk mengulangi dari panjang yang berbeda, yang bervariasi
antara empat dan 10.
CYP17A1
langkah-langkah awal lainnya dalam biosintesa estrogen adalah konversi
dari pregnenolon untuk 17a-hydroxypregnenolone dan
dehydroepiandrosterone (DHEA) dan konversi progesteron
untuk 17a-hidroksiprogesteron dan androstenedione.
Yang pertama langkah, konversi pregnenolon dan progesteron,
dilakukan oleh 17a-hidroksilase dan yang kedua,
konversi 17a-17a-hydroxypregnenolone dan hidroksiprogesteron,
oleh C17, 20 lyase; kedua enzim adalah produk
dari sitokrom-450 17A1 P (CYP17A1) dan aktif dalam
ovarium dan adrenal korteks. Kegiatan tampaknya rendah pascamenopause
ovarium (7, 8) meskipun tinggi pada ovarium
wanita pascamenopause dengan kanker endometrium (8). The
hormon adrenal, DHEA dan bentuk dehydroepiandrosterone sulfat yang
sulfat (DHEAS), adalah kolam utama
substrat untuk hormon yang lebih aktif, terutama di pascamenopause
perempuan.
Sebagaimana ditunjukkan dalam tabel 1 Web, 54 SNP telah ditemukan di
CYP17A1, namun hanya satu telah biasa dipelajari:
T / perubahan C (sering disebut A1/A2) pada posisi -34 relatif
ke kodon start di wilayah promoter 5 #. Alel A2 dari
ini SNP (rs743572) pada awalnya dianggap terkait
dengan situs-1 Sp mengikat yang akan mengakibatkan ekspresi yang lebih tinggi
(9), tetapi studi kemudian tidak mendukung hipotesis ini (10), dan
dampak fungsional T / perubahan C tidak diketahui. Haplotype
struktur telah dijelaskan dalam dua studi (11, 12) di
yang urutan SNP jamak dalam CYP17A1 dilakukan.
Kedua studi ini mengidentifikasi tiga haplotype yang
dicatat sebagian besar variasi gen ini.
HSD3B1 dan HSD3B2
dehydrogenases 3b-hidroksisteroid mengkatalis beberapa reaksi
di jalur androgen, yang menyebabkan produksi
androstenedione dan testosteron. Mereka juga mengkatalisis
produksi progesteron dari pregnenolon. Kedua
GAMBAR 1. Langkah-langkah dalam biosintesis hormon steroid. DHEAS,
dehydroepiandrosterone sulfat; CYP11A1, sitokrom P-450 11A1 gen;
CYP17A1, sitokrom P-450 17A1 gen; HSD17B, gen dehidrogenase 17b-
hidroksisteroid; HSD3B, dehidrogenase 3b-hidroksisteroid
gen; CYP19A1, sitokrom P-450 19A1 gen.
236 Olson et al.
Am J Epidemiol 2007; 165:235-245
gen, dehidrogenase 3b-hidroksisteroid 1 dan 2 (HSD3B1
dan HSD3B2), yang terletak di sebelah satu sama lain pada kromosom
1p13 dan berbagi homologi 93 persen, tetapi mereka
aktif dalam jaringan yang berbeda. Enzim HSD3B1 diungkapkan
dalam plasenta, payudara, dan kulit dan dalam beberapa tumor (13),
sedangkan enzim HSD3B2 dinyatakan dalam kelenjar adrenal,
testis, dan ovarium. Uterine ekspresi telah dilaporkan untuk
kedua enzim (14, 15). Selain SNP dalam masing-masing
gen (Web tabel 1), ulangi dinukleotida kompleks di
intron 3 dari HSD3B2 telah dilaporkan (16, 17).
CYP19A1
Sitokrom P-450 19A1 (CYP19A1) kode untuk aromatase,
langkah tingkat-pembatas dalam produksi estrogen. Seperti yang ditunjukkan
Web dalam tabel 1, 498 SNP telah diidentifikasi dalam
besar gen. Selain mengkonversi testosteron ke estradiol
dalam sel-sel granulosa ovarium, aromatase mengkonversi androstenedione
untuk estrone dalam jaringan adiposa. Ekspresi tampaknya
tertinggi di jaringan dari pantat, antara dalam jaringan
dari paha, dan lebih rendah pada jaringan perut (18). The
Gen promotor jaringan-spesifik (19) dengan transkrip yang berbeda
ditemukan dalam jaringan yang berbeda. Walaupun tidak dinyatakan dalam
endometrium normal, CYP19A1 dinyatakan dalam ganas
endometrium tumor (20-23). II promotor jenis, juga
ditemukan dalam jaringan gonad, dan I.3 jenis, juga ditemukan pada adiposa
jaringan, telah diidentifikasi dalam jaringan kanker endometrium
(20).
Studi gen ini telah berfokus pada tiga varian yang
tampaknya dalam ketidakseimbangan hubungan (24-27): a [TTTA] n
ulangi dalam intron 4, bervariasi dari tujuh hingga 13 mengulangi, dengan
tujuh yang paling umum, sebuah 3 pasangan basa di dekatnya [TCT] penghapusan
(Rs11575899) ditemukan hanya dalam hubungannya dengan mengulangi tujuh

(28, 29), dan T / C perubahan di daerah tidak ditranslasi 3 #
(Ekson 10, rs10046). Genotipe TT tampaknya terkait dengan
delapan dan lagi mengulangi dalam urutan TTTA (10, 24).
Rincian studi SNP (30, 31) telah menunjukkan sejumlah besar
dari haplotype dalam gen besar.
HSD17B1 dan HSD17B2
17b-hidroksisteroid dehidrogenase 1 dan 17b-hidroksisteroid
dehidrogenase 2 bertanggung jawab untuk pengurangan dan
oksidasi estrogen dengan bentuk yang lebih dan kurang aktif, masing-masing.
Enzim ini berfungsi dalam mode intracrine, dengan
tindakan yang diproduksi dalam sel yang sama di mana hormon metabolit
diproduksi, tanpa tercermin dalam umum
sirkulasi (32). The dehidrogenase 17b-hidroksisteroid
1 gen (HSD17B1) bertanggung jawab untuk pengurangan (O / OH)
dari estrone untuk estradiol, estrogen lebih bioaktif; yang 17bhydroxysteroid
dehydrogenase 2 gen (HSD17B2) bertanggung jawab
untuk oksidasi estradiol untuk estrone.
Studi HSD17B1 telah berfokus pada nonsynonymous
SNP (yaitu, mengakibatkan perubahan asam amino) Ser312Gly
(A / G) (rs605059). Analisis homologi menunjukkan urutan
bahwa ini SNP tidak mungkin untuk mempengaruhi fungsi (6). Studi
haplotype telah mengidentifikasi tiga (33, 34) atau empat (35) umum
haplotype bahwa account untuk 97 persen atau lebih dari kromosom
di Kaukasia. Kami tidak menemukan studi hubungan
polimorfisme atau haplotype di HSD17B2.
PENYAKIT: kanker endometrium
Lebih dari 41.000 wanita di Amerika Serikat akan
didiagnosis dengan kanker corpus uterus pada tahun 2006 (36), membuat
ini yang paling umum kanker ginekologik; sekitar 90 persen
kanker tersebut adalah kanker epitel (37). Data dari
Surveillance, Epidemiologi, dan Hasil Akhir (SIER) Program
(Http://www.seer.cancer.gov/statistics) menunjukkan bahwa
sebagian besar merupakan penyakit wanita postmenopause, dengan median
usia saat diagnosis 63 tahun. Kejadian tahunan keseluruhan
tingkat di Amerika Serikat, berdasarkan data SIER, adalah
29,2 per 100.000; kejadian usia-spesifik paling tinggi diantara
perempuan berusia 70-79 tahun, melebihi 100 per 100.000 per
tahun. SIER data didasarkan pada semua wanita, termasuk yang tidak
berisiko karena mereka memiliki uteri mereka diangkat melalui
histerektomi; angka kejadian di kalangan perempuan pada risiko
lebih tinggi sebesar 67 persen, atau 48,7 per 100.000 (38).
Sebagian besar faktor risiko yang ditetapkan untuk kanker endometrium memiliki
dalam eksposur lama atau berlebihan umum endometrium
untuk estrogen dilawan. Terapi Estrogen-only
jelas faktor risiko, dibuktikan oleh banyak studi (39-42).
Faktor risiko lain untuk kanker endometrium (43, 44) seperti
nulliparity, menarche awal dan menopause terlambat, serta
efek perlindungan dari merokok (45) juga dapat beroperasi
melalui jalur estrogen-terkait.
Obesitas secara konsisten telah ditemukan untuk meningkatkan risiko
kanker endometrium, dengan rasio odds untuk kategori tertinggi
berat atau indeks massa tubuh biasanya antara 2 dan
3 dan kebanyakan studi menemukan kecenderungan yang signifikan dengan
peningkatan
berat badan (46). Pada wanita menopause, obesitas adalah penting
prediktor tingkat sirkulasi estrone dan estradiol
(47-50), mencerminkan konversi androgen dalam jaringan adiposa
(51). Selain itu, obesitas berhubungan dengan tingkat yang lebih rendah
hormon globulin serum mengikat (49), meninggalkan lebih estradiol
tersedia untuk target jaringan. Pada wanita premenopause,
tingkat estrogen yang tinggi tanpa berat (, 49 52), dan
risiko kanker endometrium pada wanita kelebihan berat badan disebabkan
untuk penurunan tingkat progesteron (2).
Kadar hormon telah diukur langsung di casecontrol
dan kohort kanker endometrium. Dibandingkan
dengan kontrol, postmenopause kasus kanker endometrium
telah ditemukan memiliki tingkat sirkulasi yang lebih tinggi estrone
dan androstenedione (4, 53), bahkan setelah pengendalian untuk tubuh
Indeks massa dan faktor lainnya. Calon studi di pascamenopause
wanita (3) menunjukkan asosiasi yang kuat antara
tingkat serum estradiol dan estrone dan selanjutnya
perkembangan kanker endometrium, setelah penyesuaian untuk
indeks massa tubuh dan faktor-faktor risiko potensial. Beredar
tingkat androgen juga positif terkait dengan risiko, tetapi
asosiasi yang kecil, dan, setelah mengendalikan estrogen,
hanya tingkat DHEAS tetap bermakna tinggi.
ASOSIASI DENGAN TINGKAT HORMON DAN
Endometrial KANKER
Studi diidentifikasi melalui pencarian di PubMed (http://
www.nlm.nih.gov / entrez) untuk periode 1966 melalui
November 2005 untuk nama gen dari bunga
CYP11A1, CYP17A1, HSD3B1, HSD3B2, CYP19A1,
HSD17B1, dan HSD17B2-dalam kombinasi dengan istilah
Varian Genetik, Hormon, dan Kanker Endometrial 237
Am J Epidemiol 2007; 165:235-245
TABEL 1. Hasil studi varian pada gen biosintesis estrogen dan risiko kanker
endometrium
Gene Tahun Pertama penulis
Referensi
no.
Studi Populasi desain
Jumlah
kasus
Jumlah
kontrol
Polimorfisme genotipe ATAU * 95 * CI%
CYP17A1 Haimany 2001 71 Tidak ditentukan Bersarang
kasus-kontrol
184 554 -34 T / C (A1/A2) A1/A1 1 (Ref *)
rs743572 A1/A2 0,96 0,64, 1,44
A2/A2 0,44 0,22, 0,87
Bersteinz 2004 78 Tidak dirinci kasus-kontrol 165 188 -34 T / C (A1/A2) A1/A1
1 (Ref)
rs743572 A1/A2 1,28 0,80, 2,06 §
A2/A2 0,48 0,25, 0,91 §
Szyllo (2006 80 Kasus kontrol-Polandia 100 106-34T / C TT 1 (Ref)
rs743572 TC 0,56 0,28, 1.13 §
CC 0,53 0,25, 1,11 §
Aban # 2006 79 Kasus kontrol-Turki 57 35-34T / C (A1/A2) A1/A1 1 (Ref)
rs743572 A1/A2 0,26 0,09, 0,74 §
A2/A2 0,50 0,10, 2,60 §
McKean-Cowdin ** 2001 81 African American,
Jepang, Latina,
non-Latina Putih
Bersarang
kasus-kontrol
51 391 -34 T / C (A1/A2) TC / CC vs TT 0,62 0,34, 1,12 §
rs743572
CYP19A1 Paynteryy 2005 27 Tidak ditentukan Bersarang
kasus-kontrol
220 666 Intron 4 [TTTA] n 7 / 7 1 (Ref)
7 /> 7 1,97 1,25, 3.12
> 7 /> 7 1.92 1.17, 3.14
Bersteinz 2004 78 Tidak dirinci kasus-kontrol 136 116 Intron 4 [TTTA] n 7 / 7 1
(Ref)
7 /> 7 2,74 1,34, 5,60 §
> 7 /> 7 3,26 1,53, 6,93 §
Paynteryy 2005 27 Tidak ditentukan Bersarang
kasus-kontrol
220 666 Intron 4 [TCT]
penyisipan / penghapusan
In * / Ins 1 (Ref)
Ins / Del * 0,80 0,56, 1,14
Del / Del 0,71 0,39, 1,27
kasus-kontrol
220 666 3 # UTR *
(Ekson 10) C / T
CC 1 (Ref)
rs10046 CT 1,79 1,13, 2,86
TT 1,82 1,11, 3,00
kasus-kontrol
220 666 5 # panggul (G / A) GG 1 (Ref)
GA rs4775936 1,72 1,11, 2,66
1,83 AA 1,12, 2,99
kasus-kontrol
220 666 haplotype C haplotype C
vs semua orang lain
1,26 0,96, 1,66
Szyllo (2006 80 Kasus kontrol-Polandia 100 106 Ekson 3 G / A GG 1 (Ref)
GA rs700518 0,82 0,41, 1,63 §
0,68 AA 0,33, 1,40 §
238 Olson et al.
Am J Epidemiol 2007; 165:235-245
Polimorfisme''''atau''istilah''haplotype dan untuk kombinasi
dari kanker endometrium''''dan''''polimorfisme atau
Haplotype''''Proses ini. Ini dilengkapi dengan manual
mencari artikel lain di kertas-kertas yang mencakup genotipe
dan hormon tindakan atau bahwa dibandingkan genotipe
kasus kanker endometrium dan controls.We termasuk asli
peer-review publikasi dalam bahasa Inggris yang dilaporkan pada genotipe
dan kadar hormon steroid dalam serum atau plasma
wanita normal dan studi yang membandingkan wanita dengan dan
tanpa kanker endometrium sehubungan dengan genotipe. Kami
dikecualikan studi yang disajikan dikombinasikan hasil untuk kasus-kasus
dan kontrol (54-57), perempuan terlibat dengan karakteristik yang tidak biasa
(58), atau yang kemudian diperbarui dengan sampel yang lebih besar
(59-61). Beberapa penelitian kecil: dari 25 studi
bahwa tingkat hormon dibandingkan menurut genotipe, tujuh
telah kurang dari 100 responden, dari tujuh penelitian
asosiasi genotipe dengan kanker endometrium, dua telah
kurang dari 100 kasus. Kami menyertakan data berikut
hormon: progesteron, 17-hidroksiprogesteron, DHEA,
DHEAS, androstenedione, testosteron, testosteron bebas,
estradiol estradiol, bebas, estrone, dan sulfat estrone. Rasio
dari estrone / androstenedion, estradiol / testosteron, dan
estradiol testosteron / gratis untuk CYP19A1 dan rasio
estradiol / estrone untuk HSD17B1 juga dilaporkan dalam tinjauan ini.
Penelitian bervariasi dalam hormon tertentu disertakan.
Untuk tiga gen ini,, HSD3B1 HSD3B2, andHSD17B2,
kami tidak menemukan varian studi terkait dengan baik
hormon level atau risiko kanker endometrium. Web tabel
2? 8 merangkum studi di masing-masing genotipe yang lain
gen dan kadar hormon, menunjukkan penulis pertama dan tahun,
negara, etnis, status menopause, jumlah wanita,
sumber mata pelajaran, genotipe, prevalensi, tingkat steroid
hormon yang terkait dengan setiap genotipe (dalam satuan seperti yang diberikan
di setiap kertas), dan signifikansi statistik perbedaan
hormon tingkat antara genotipe. Di setiap tabel, data
diatur oleh hormon, status menopause, dan tanggal publikasi.
Untuk studi genotipe dan risiko kanker endometrium,
Tabel 1 menunjukkan penulis pertama dan tahun, populasi, studi
desain, jumlah kasus dan kontrol, polimorfisme yang
belajar, dibandingkan genotipe, dan rasio odds dan 95
persen interval kepercayaan untuk perbandingan kasus dengan
kontrol. Kriteria Inklusi dan variabel yang disesuaikan dalam analisis
diberikan dalam catatan kaki ke meja masing-masing.
CYP11A1
Hormon tingkat. Seperti ditunjukkan dalam tabel, Web 2 lima studi
asosiasi dari mengulang pentanucleotide n [TTTTA]
(D15S520) pada posisi -528 pada CYP11A1 dengan hormon
tingkat normal pada wanita premenopause menunjukkan tidak ada asosiasi
dengan tingkat progesteron, androgen, dan estrogen
oleh genotipe (62-66). Hasil yang sama ditemukan di
tunggal studi wanita postmenopause (67), meskipun ini
Studi di Cina menemukan tingkat sedikit lebih tinggi estradiol dalam
perempuan tanpa ada delapan alel ulangi.
Endometrial kanker. Untuk pengetahuan kita, tidak diterbitkan
makalah telah membahas asosiasi genotipe di
-528 [TTTTA] n ulangi, atau polimorfisme lainnya di CYP11A1,
dengan kanker endometrium.
HSD17B1 Setiawanzz 2004 33 Tidak ditentukan Bersarang
kasus-kontrol
222 666 Ser312Gly (A G /) GG 1 (Ref)
rs605059 AG 1,09 0,71, 1,67
1,27 AA 0,80, 2,02
* OR, odds ratio; CI, confidence interval; Ref, rujukan, Ins, penyisipan, Del,
penghapusan, UTR, wilayah diterjemahkan.
y Kriteria inklusi: histerektomi, tidak ada sejarah kanker kecuali kanker
nonmelanoma kulit. Kontrol yang cocok untuk kasus pada tahun lahir, status
menopause pada menarik darah dan
diagnosis, terapi penggantian hormon pada mengambil darah dan diagnosis (saat
vs tidak saat ini), waktu hari, bulan, dan status puasa di menumpahkan darah.
Disesuaikan dengan pencocokan variabel dan tubuh
Indeks massa, berat badan sejak usia 18 tahun, usia saat menarche, paritas, usia
saat kelahiran pertama, durasi penggunaan hormon menopause, riwayat
penggunaan kontrasepsi oral, pak tahun merokok,
tingkat pertama sejarah keluarga kanker endometrium dan kolon. Termasuk
insiden dan kasus umum.
z Kriteria inklusi: tidak ada oncologic atau kronis serius lainnya atau penyakit
akut pada kontrol.
§ Dihitung dari data yang diberikan di koran.
(Kriteria inklusi tidak ditentukan. DNA dari parafin-jaringan yang tertanam untuk
kasus dan jaringan endometrium normal untuk kontrol.
# Kriteria inklusi: kontrol memiliki biopsi endometrium dalam 12 bulan
sebelumnya dengan kecurigaan patologi endometrium tetapi menghasilkan
histopatologi endometrium normal.
** Kriteria inklusi: usia 60 tahun atau lebih.
yy Kriteria inklusi: histerektomi, tidak ada sejarah kanker kecuali kanker
nonmelanoma kulit. Disesuaikan dengan tahun kelahiran, status menopause,
penggunaan terapi hormon pascamenopause, waktu
hari, bulan, status puasa di mengambil darah, indeks massa tubuh, berat badan
sejak usia 18 tahun, seumur hidup pak-tahun merokok, usia saat menarche, tingkat
pertama sejarah keluarga endometrium atau
kanker usus besar, usia saat menopause, paritas dan umur kelahiran pertama, usia
saat kelahiran terakhir.
zz Kriteria inklusi: histerektomi, tidak ada sejarah kanker kecuali kanker
nonmelanoma kulit. Disesuaikan dengan tahun kelahiran, status menopause,
penggunaan terapi hormon pascamenopause, waktu
hari, bulan, dan status puasa di mengambil darah, indeks massa tubuh di usia 18
tahun, berat badan.
Varian Genetik, Hormon, dan Kanker Endometrial 239
Am J Epidemiol 2007; 165:235-245
CYP17A1
Hormon tingkat. Untuk CYP17A1, kami mengidentifikasi 12 studi
yang melaporkan pada asosiasi dari kadar hormon dengan
posisi-34T / C varian. Web Tabel 3 menunjukkan hasil untuk progesteron
atau 17-hidroksiprogesteron, DHEA dan androstenedione
(Hormon yang paling mungkin terkait dengan
kegiatan CYP17A1 berdasarkan jalur yang digariskan dalam
gambar), dan DHEAS, testosteron, dan testosteron bebas.
Satu studi menemukan kecenderungan menuju tingkat yang lebih tinggi
progesteron
antara wanita premenopause dengan jumlah alel A2
(68), tapi temuan ini tidak didukung oleh penelitian lain
(65, 69, 70). Genotipe tidak tampak berhubungan dengan
DHEA atau androstenedione (65, 70-72). Demikian pula, studi
dari DHEAS, testosteron, dan testosteron bebas, secara tidak langsung
dipengaruhi oleh CYP17A1, tidak menunjukkan hubungan dengan
genotipe dalam premenopause atau perempuan pascamenopause (62,
65, 70-75). Pengecualian adalah salah satu studi (69) yang menemukan
A2 varian alel untuk dihubungkan dengan DHEAS yang lebih tinggi di
wanita premenopause, tetapi tidak pada wanita menopause.
Studi-studi ini bervariasi dalam pembaur potensi mereka mengendalikan
untuk: sekitar setengah dikendalikan untuk usia, sedangkan yang lain
dikendalikan untuk indeks massa tubuh dan ras atau etnis, dan
untuk variabel yang berhubungan dengan mengambil darah. Secara keseluruhan,
ada sedikit
atau tidak ada bukti hubungan antara varian ini di
CYP17A1 dan androgen tingkat.
Beberapa bukti telah ditemukan dari sebuah asosiasi ini
CYP17A1 polimorfisme dengan estrogen (Web tabel 4). Dalam
postmenopause wanita, hubungan antara A2/A2
genotipe dan tingkat lebih tinggi estrone dilaporkan awalnya
oleh Haiman et al. (59), dengan tingkat lebih tinggi untuk
perempuan dengan genotipe A2/A2 dibandingkan dengan A1/A1
genotipe (p <0,01, data tidak ditampilkan), namun, ekspansi
penelitian ini menunjukkan hasil yang lebih lemah dari batas
signifikansi (p ¼ 0,05) (71). Lain studi estrone (70,
72, 76) dan sulfat estrone (71) tidak menunjukkan adanya hubungan yang
konsisten.
Untuk estradiol, merupakan studi awal melaporkan jumlah
alel A2 dihubungkan dengan tingkat yang lebih tinggi estradiol dalam
premenopause perempuan (68), namun, studi selanjutnya dalam
wanita premenopause tidak meniru hasil ini (65,
69, 75-77). Pada wanita menopause, sementara satu studi (69)
melaporkan tingkat signifikan lebih tinggi tingkat estradiol dalam
wanita dengan genotipe A2/A2, yang lain tidak menemukan yang signifikan
perbedaan (70-72, 77). Sebagian besar dari studi ini disesuaikan dengan
usia dan indeks massa tubuh; penyesuaian untuk faktor-faktor lainnya
kurang konsisten.
Meskipun haplotype untuk gen ini telah diidentifikasi dalam
studi tentang kanker prostat (11) dan limfoma (12), asosiasi
dari haplotype dengan tingkat hormon tidak diketahui
telah dilaporkan. Dalam kedua studi yang dinilai haplotype,
tiga haplotype umum yang dilaporkan, dengan -34 A2
(C) alel ditemukan pada dua kurang umum ketiga
haplotype.
Endometrial kanker. Karena temuan awal bahwa
alel A2 dikaitkan dengan situs pengikatan lebih aktif (9)
dan dengan tingkat lebih tinggi estradiol (68) dan estrone (59), ini
varian mungkin telah diharapkan dapat meningkatkan risiko endometrium
kanker. Namun, lima penelitian yang diterbitkan telah melaporkan
risiko yang lebih rendah berkaitan dengan varian (tabel 1). Perbandingan
yang A2/A2 homozigot varian dengan homozigot
tipe liar A1/A1, empat studi menunjukkan bahwa risiko adalah tentang
setengah (71, 78-80). Dalam studi kelima, membandingkan setiap varian
(A2 ada) dengan tipe liar homozigot, rasio odds
0,62 (95 persen confidence interval: 0.34, 1.12) (81) adalah
dilaporkan. (Odds rasio dan interval kepercayaan untuk empat
penelitian ini (78-81) dihitung dari data yang diberikan) Meskipun.
hasil untuk varian genotipe homozigot yang
konsisten di seluruh studi, hasil untuk heterozigot adalah
tidak. Dua studi ini adalah studi kasus-kontrol bersarang
dalam kohort, the Nurses 'Health Study (71) dan multietnis
Cohort (81). Studi-studi lainnya casecontrol berbasis rumah sakit
studi (78-80). Hanya satu studi ini (71) disesuaikan
untuk pembaur potensial, termasuk desain baik
variabel dan faktor risiko potensial terkait dengan endometrium
kanker, namun, penyesuaian dibuat sedikit perbedaan dalam
rasio odds. Dua penelitian kecil, dengan hanya 57 (79) dan
51 (81) kasus. Untuk pengetahuan kita, asosiasi polimorfisme lainnya
di CYP17A1 dengan kanker endometrium, atau dari haplotype,
belum pernah dilaporkan.
CYP19A1
Hormon tingkat. Kami mengidentifikasi 13 penelitian yang diselidiki
asosiasi dari satu atau lebih varian dalam CYP19A1
dengan tingkat sirkulasi hormon. Karena aromatase mengkonversi
androstenedione untuk estrone dan testosteron untuk estradiol
(Gambar 1), aktivitas yang berbeda dari varian mungkin
diharapkan mempengaruhi tingkat salah satu hormon dan
rasio antara mereka. Studi tentang hubungan n [TTTA]
ulangi (Tabel Web 5) ke tingkat progesteron atau androgen
menunjukkan tidak ada perbedaan sesuai dengan jumlah mengulangi
(65, 72, 82). Untuk estrone, sulfat estrone, dan estradiol, beberapa
Perbedaan yang diamati sesuai dengan jumlah mengulangi,
tetapi tidak ada pola yang konsisten di seluruh studi.
Tiga penelitian tidak menemukan perbedaan (65, 77, 83); studi ini
berbeda mengenai status menopause perempuan
termasuk dan cara di mana genotipe diklasifikasikan.
Tiga studi wanita postmenopause dilaporkan perbedaan
kadar hormon, namun temuan itu tidak konsisten.
Haiman et al. (82) menemukan tingkat lebih rendah dari sulfat estrone (tapi
tidak estrone atau estradiol) di antara wanita dengan paling sedikit satu
7 ulangi alel, tetapi mereka tidak menemukan perbedaan untuk setiap
yang estrogen sesuai dengan jumlah delapan alel ulangi.
Tworoger et al. (72) menemukan tingkat yang lebih tinggi estrone,
estradiol, dan estradiol bebas antara perempuan dengan satu atau lebih
delapan ulangi alel. Membandingkan wanita dengan dan tanpa
tujuh mengulangi alel tapi tanpa pasangan 3 asosiasi-base
penghapusan, mereka tidak menemukan perbedaan. Dick et al. (84)
menemukan tingkat yang lebih tinggi estradiol bebas (tetapi tidak estradiol total)
antara womenwith setidaknya satu tujuh ulangi alel tetapi tanpa
3 terkait dasar-pasangan penghapusan. Rasio estrone untuk
androstenedionewas ditemukan inwomen lebih tinggi dengan sedikitnya
8 mengulang satu alel dalam satu studi (82), meskipun studi yang lebih kecil
orang Amerika Afrika tidak menemukan perbedaan (85). Secara keseluruhan,
sementara beberapa asosiasi melaporkan dengan estrogen telah
dilaporkan, hasilnya bertentangan dan tidak meyakinkan.
Sebagaimana ditunjukkan dalam tabel Web 6, ada lima studi tentang
3 base-pasangan TCT penyisipan / penghapusan polimorfisme. Satu penelitian
termasuk 17-hidroksiprogesteron, menemukan tidak ada perbedaan
(70). Tiga dari penelitian ini diselidiki androgen, dengan
240 Olson et al.
Am J Epidemiol 2007; 165:235-245
beberapa asosiasi yang signifikan, namun tidak konsisten:
satu penelitian menemukan tingkat yang lebih tinggi androgen (DHEAS,
androstenedione,
bebas testosteron) antara mereka dengan penghapusan apapun
(86); lain ditemukan androstenedione lebih tinggi dan testosteron
antara heterozigot tetapi tidak di antara homozigot untuk
penghapusan (72), dan yang ketiga tidak menemukan perbedaan (70). Dua
studi yang membandingkan tingkat estrone dan estradiol antara
perempuan menurut kehadiran polimorfisme ini
(70, 72) menemukan kecenderungan yang signifikan, dengan jumlah TCT
sisipan berkaitan dengan kadar hormon yang lebih tinggi. Lainnya
studi (77, 86, 87) tidak. Kedua studi yang dianalisis
rasio antara estrogen dan androgen (70, 86) ditemukan
rasio yang lebih tinggi pada wanita homozigot untuk dimasukkan tersebut.
Sebagaimana ditunjukkan dalam tabel Web 7, empat studi menyelidiki
C / T perubahan di wilayah 3 # tidak ditranslasi di pascamenopause
perempuan. Tidak ada perbedaan yang dicatat dalam tingkat progesteron dalam
satu penelitian (70). Haiman et al. (24) menemukan kecenderungan terhadap lebih
rendah
beberapa tingkat androgen (DHEA, DHEAS, androstenedione)
sesuai dengan jumlah alel T namun tidak ada perbedaan
untuk estrone atau estradiol. Sebaliknya, Dunning et al.
(70) menemukan tren ke tingkat yang lebih tinggi estrone dan estradiol
sesuai dengan jumlah alel T namun tidak ada perbedaan
untuk androgen, dua penelitian lain tidak menemukan hubungan
(27, 77). Tiga dari empat studi (, 24 27, 70) memandang
rasio estradiol dan testosteron dan / atau estrone untuk androstenedione,
menemukan baik rasio tertinggi pada genotipe TT
atau hubungan dosis-respon untuk jumlah alel T.
Selain mereka polimorfisme di CYP19A1 ditunjukkan dalam
Web tabel 5-7, satu studi (88) diselidiki testosteron dan
kadar estradiol dalam kaitannya dengan empat SNP (sebelumnya menunjukkan
akan berguna untuk haplotype tagging (30)) dalam studi dari 109
Inggris (terutama bule) wanita berusia 18-25 tahun direkrut
dari operasi praktek umum dan iklan.
Untuk salah satu SNP (rs2414096), G / A perubahan intron 2,
yang kurang umum alel A, dikaitkan dengan tingkat yang lebih tinggi
kedua hormon ini, tapi tidak ada perbedaan
untuk rasio estradiol testosteron. Untuk SNPs lain,
tidak ada perbedaan signifikan dalam kadar hormon (data
tidak ditampilkan).
Empat studi telah menyelidiki keterkaitan ketidakseimbangan
di CYP19A1, dengan hasil yang sama (27, 30,, 31 57). Menggunakan
berjarak dekat spidol, Haiman et al. (30) mengidentifikasi empat
blok, sedangkan polimorfisme yang dijelaskan di atas dikategorikan
menjadi satu blok. Paynter et al. (27) mengidentifikasi haplotype umum
terkait dengan rasio yang lebih tinggi estrone untuk androstenedion
estradiol dan testosteron.
Endometrial kanker. Dua penelitian telah melaporkan
asosiasi CYP19A1 genotipe dengan risiko endometrium
kanker (Tabel 1). Berstein et al. (78), di sebuah rumah sakit berbasis
studi kasus-kontrol di Rusia, ditemukan peningkatan risiko terkait
dengan mengulangi lagi (> 7) di polimorfisme 4 intron TTTA;
rasio odds (dihitung dari data yang diberikan) untuk
yang keduanya memiliki alel> 7 mengulang adalah 3,26 (95 persen
confidence interval: 1.53, 6,93). Paynter et al. (27), dalam
studi kasus-kontrol bersarang dalam Nurses 'Health Study, juga
ditemukan peningkatan risiko untuk wanita dengan alel lagi: odds
rasio bagi mereka yang memiliki keduanya alel> 7 mengulangi ¼ 1,92 (95
persen confidence interval: 1.17, 3.14), disesuaikan untuk beberapa
pembaur potensial. Odds rasio serupa besarnya
ditemukan bagi mereka dengan genotipe TT dalam 3 # belum diterjemahkan
daerah dan untuk SNP lain di kawasan yang sama;
Namun, tidak ada perbedaan signifikan yang ditemukan untuk 3 -
base-pasangan penghapusan. Untuk masing-masing polimorfisme, mirip
hasil yang ditemukan heterozigot dan homozigot
varian genotipe. Rasio odds disesuaikan dengan
haplotype termasuk perubahan ini adalah 1,26 (95 persen
interval kepercayaan: 0,96, 1,66).
HSD17B1
Tiga studi memeriksa Ser312Gly (A / G) (rs605059)
perubahan ekson 6 dari gen HSD17B1 (tabel Web 8) di
Sehubungan dengan estradiol estrone dan, semua tidak menemukan asosiasi
(33, 70, 77). Salah satu studi (33) juga melaporkan tidak ada
hubungan antara dua SNP intronic (TH1, 004 C / T dan
TH1, 322 C / A) dan sulfat estrone, estradiol, dan estrone (data
tidak ditampilkan).
Satu-satunya
DISKUSI
kanker.
Untuk
estrogen.
12.
ditinjau.
Karena
LABORATORIUM PENGUJIAN
Kontrol kualitas
negatif kontrol.
kondisi.
saat ini.
kanker.
35
Estrogen biosintesis pada endometriosis: dasar molekuler

dan relevansi klinis
SE Bulun1, KM Zeitoun2, K Takayama3 dan Sasano3 H
1Departments Obstetri dan Ginekologi dan Genetika Molekuler, University of
Illinois di Chicago,
820 S. Kayu St M / C 808, Illinois 60612, USA
2Department Obstetri dan Ginekologi, Columbia University College of Physicians
dan Bedah,
622 W. 168 St, New York, New York 10032-3702, USA
3Departments Patologi dan Obstetri dan Ginekologi, Tohoku University School of
Medicine,
Machi Seiryo 2-1, Sendai Jepang-Shi 980,
(Permintaan untuk offprints harus ditujukan kepada SE Bulun; Email:
sbulun@uic.edu)
ABSTRAK
Konversi steroid C19 untuk estrogen dikatalisis
oleh aromatase pada manusia, ovarium dan plasenta
extraglandular jaringan seperti jaringan adiposa, kulit
dan otak. Aktivitas aromatase tidak terdeteksi
pada endometrium normal. Sebaliknya, aromatase
dinyatakan aberrantly pada endometriosis dan
dirangsang oleh prostaglandin E2 (PGE2). Hasil ini
dalam produksi lokal estrogen, yang mendorong
pembentukan PGE2 dan menetapkan umpan balik positif
siklus. Lain kelainan pada endometriosis, yaitu
kekurangan hidroksisteroid dehydrogenase (17?-HSD)
tipe 2 ekspresi, merusak inaktivasi
estradiol untuk estrone. Molekul ini penyimpangan
kolektif mendukung peningkatan jumlah akumulasi
estradiol dan PGE2 pada endometriosis. The
relevansi klinis dari temuan ini adalah dicontohkan
oleh perawatan yang sukses dari luar biasa
agresif kasus endometriosis pascamenopause
menggunakan inhibitor aromatase.
Jurnal Endokrinologi Molekuler (2000) 25, 35-42
PENDAHULUAN
Endometriosis adalah penyakit kronis dimanifestasikan oleh
panggul rasa sakit dan kemandulan dan didefinisikan sebagai
adanya kelenjar endometrium dan stroma dalam
peritoneum panggul dan situs ekstra-rahim lainnya.
Diperkirakan untuk mempengaruhi 2-10% dari perempuan dalam
kelompok usia reproduksi (Vessey et al. 1993, Kjerulff
et al. 1996). Endometriosis dipandang menjadi
polygenically mewarisi penyakit multifaktorial kompleks
etiologi (Olive & Schwartz 1993).
Sampson teori transplantasi endometrium
jaringan pada panggul peritoneum melalui menstruasi surut
adalah penjelasan yang paling luas diterima untuk
perkembangan endometriosis panggul karena
meyakinkan mendalam dan eksperimental
bukti (Sampson 1927). Karena menstruasi retrograde
diamati di hampir semua wanita bersepeda,
endometriosis adalah dipostulatkan untuk mengembangkan sebagai hasilnya
dari koeksistensi cacat di clearance dari
menstruasi penghabisan dari permukaan peritoneum pelvis,
mungkin melibatkan sistem kekebalan tubuh (Halme et al.
1988). Atau, molekul penyimpangan intrinsik
di implan endometriosis panggul diusulkan untuk
kontribusi yang signifikan terhadap perkembangan endometriosis.
Menyimpang ekspresi aromatase, tertentu
sitokin dan metaloproteinase jaringan, kekurangan
17 dehidrogenase-hidroksisteroid? (17?-HSD)
tipe 2 dan perlawanan terhadap tindakan proteksi
progesteron adalah beberapa kelainan molekuler
(Khorram et al 1993,. Sharpe-Timms et al. 1995,
Noble et al. 1996, Osteen et al. 1996, Bruner et al.
1997, Zeitoun et al. 1998, 1999). Sejak endometriosis
adalah gangguan estrogen-tergantung, ekspresi aromatase
dan 17 tipe-HSD? 2 kekurangan adalah dari
penting penting dalam patofisiologi
endometriosis. Dalam artikel ini, mekanisme menyimpang
biosintesis estrogen dan metabolisme pada wanita
dengan endometriosis ditinjau, dengan penekanan pada
mengidentifikasi sasaran strategi pengobatan baru.
35
Jurnal Endokrinologi Molekuler (2000) 25, 35-42
0952-5041/00/025-035? 2000 Perkumpulan Endokrinologi Dicetak di Inggris
Versi online melalui http://www.endocrinology.org
DISKUSI
Estrogen biosintesis dan metabolisme dalam
manusia
Konversi androstenedion dan testosteron
untuk estrone dan estradiol dikatalisis oleh aromatase,
yang dinyatakan dalam sejumlah jaringan manusia
dan sel-sel seperti sel-sel granulosa ovarium, plasenta
sinsitiotrofoblas jaringan, adiposa dan kulit fibroblast,
dan otak. Pada usia reproduksi
wanita, ovarium adalah situs yang paling penting
biosintesis estrogen, dan ini terjadi dalam siklus
fashion. Setelah mengikat follicle-stimulating hormone
(FSH) ke-proteinnya reseptor G-digabungkan dalam
sel granulosa membran, cAMP intraseluler
naik tingkat dan meningkatkan pengikatan dua kritis
transkripsi faktor, yaitu faktor steroidogenik-1
(SF-1) dan cAMP respon elemen protein yang mengikat
(CREB), dengan promotor proksimal terletak klasik
II dari gen aromatase (Michael et al. 1995,
1997). Hal ini, pada gilirannya, mengaktifkan ekspresi aromatase
dan akibatnya sekresi estrogen dari
pra-ovulasi folikel (Simpson et al. 1994, Michael
et al. 1995).
Di sisi lain, pada wanita menopause,
pembentukan estrogen berlangsung di ekstra-ovarium
jaringan seperti jaringan lemak dan kulit
(MacDonald et al 1967,. 1978, Ackerman et al.
1981) (Gbr. 1). Berbeda dengan cAMP peraturan
ekspresi aromatase di ovarium, ini dikontrol
terutama oleh sitokin dan (IL-6, IL-11, TNF?)
glukokortikoid melalui penggunaan alternatif promotor
I.4 dalam jaringan adiposa dan fibroblast kulit (Simpson
et al. 1994). Substrat utama untuk aromatase dalam
jaringan lemak dan kulit androstenedione dari
adrenal asal. Pada wanita menopause, kira-kira
2% dari androstenedion beredar dikonversi
untuk estrone, yang kemudian dikonversi menjadi
estradiol dalam jaringan ekstra-ovarium. Hal ini mungkin
menimbulkan signifikan kadar serum estradiol
mampu menyebabkan hiperplasia endometrium atau bahkan
karsinoma (MacDonald et al 1967,. 1978).
Aromatase berekspresi di Müllerian yang diturunkan dari
jaringan
jaringan Müllerian dikenal target estrogen
tindakan. Sampai saat ini, aksi estrogen telah
klasik dilihat terjadi hanya melalui 'endokrin'
mekanisme: dengan kata lain, ia berpikir bahwa hanya
beredar estradiol, apakah disekresi oleh ovarium
atau dibentuk dalam jaringan adiposa, bisa mengerahkan
efek estrogenik setelah melahirkan untuk menargetkan jaringan melalui
aliran darah. Studi ekspresi aromatase
pada kanker payudara menunjukkan bahwa parakrin
mekanisme memainkan peran penting dalam estrogen
tindakan dalam jaringan (Bulun et al. 1993a). Estrogen
dihasilkan oleh aktivitas aromatase di payudara adiposa
fibroblast jaringan telah didemonstrasikan untuk mempromosikan
pertumbuhan sel ganas payudara yang berdekatan epitel
(Yue et al 1998.). Akhirnya, kami menunjukkan sebuah
'Intracrine' efek estrogen dalam uterus leiomyomas
dan endometriosis: estrogen yang diproduksi oleh aromatase
kegiatan di dalam sitoplasma leiomyoma halus
otot sel atau sel stroma endometriosis dapat mengerahkan
pengaruhnya dengan mudah mengikat reseptor nuklirnya
dalam sel yang sama (Bulun et al. 1994, Noble et al.
1996, 1997). Penyakit-bebas endometrium dan miometrium,
di sisi lain, aromatase kurangnya
Ekspresi (Bulun et al 1993b,. Noble et al. 1997).
Pentingnya ekspresi aromatase dalam
endometriosis
Di antara gangguan panggul estrogen-responsif, aromatase
ekspresi dipelajari secara rinci terbesar dalam
endometriosis (Bulun et al. 1993b, Noble et al. 1996,
1997, Zeitoun et al. 1999). Pertama, sangat tinggi
      1. Extra-ovarium pembentukan estrogen pada wanita.
Estradiol (E2) pada wanita adalah baik secara langsung disekresikan oleh
ovarium atau dihasilkan dalam situs ekstra-ovarium (adiposa
jaringan dan kulit). Substrat utama extraovarian
Aktivitas aromatase pada wanita adalah androstenedione
(A) asal adrenal dan ovarium. Androstenedione adalah
dikonversi oleh aromatase untuk estrone (E1) di jaringan adiposa
dan kulit fibroblast. Estrone selanjutnya dikonversi menjadi E2
oleh 17-HSD? tipe 1 kegiatan dalam jaringan perifer.
Dengan demikian, aromatisasi ekstra-ovarium adalah sumber utama
untuk beredar E2 dalam periode pascamenopause atau
selama penindasan ovarium.
36        dan Lainnya o Aromatase dan endometriosis
Jurnal Endokrinologi Molekuler (2000) 25, 35-42 www.endocrinology.org
tingkat mRNA aromatase ditemukan di extraovarian
endometriotik implan dan endometrioma.
Kedua, sel stroma endometriosis yang diturunkan di
kultur diinkubasi dengan analog cAMP ditampilkan
luar biasa tinggi tingkat aktivitas aromatase
sebanding dengan yang di sinsitiotrofoblas plasenta
(Noble et al 1997.). Temuan ini menarik membawa kami ke
tes baterai faktor pertumbuhan, sitokin dan lainnya
zat yang mungkin menimbulkan aktivitas aromatase melalui
jalur cAMP-tergantung pada endometriosis.
Prostaglandin E2 (PGE2) ditemukan yang paling
kuat dikenal induser aktivitas aromatase dalam
endometriotik sel stroma (Noble et al 1997.). Dalam
Bahkan, efek PGE2 ditemukan dimediasi melalui
subtipe cAMP-merangsang reseptor EP2. Selain itu,
estrogen dilaporkan untuk meningkatkan PGE2
formasi dengan merangsang tipe cyclo-oxygenase
2 (COX-2) enzim dalam sel stroma endometrium
dalam budaya (Huang et al 1996.). Jadi, positif
feedback loop untuk produksi lokal terus-menerus
estrogen dan PG didirikan, menguntungkan
proliferasi dan inflamasi karakteristik
endometriosis (Gbr. 2). Selain itu, aromatase
mRNA juga terdeteksi dalam endometrium eutopic
sampel wanita dengan endometriosis sedang sampai berat
(Tapi tidak dengan orang-orang perempuan bebas penyakit)
meskipun dalam jumlah yang jauh lebih kecil dibandingkan dengan
endometriotik implan (Noble et al 1996.). Ini
mungkin sugestif dari cacat genetik pada wanita dengan
endometriosis, yang diwujudkan oleh halus
temuan pada endometrium eutopic. Kami mengusulkan
bahwa ketika cacat endometrium dengan tingkat rendah
ekspresi aromatase menyimpang mencapai panggul
peritoneum oleh menstruasi retrograd, itu menyebabkan
inflamasi reaksi yang meningkat secara eksponensial
aromatase lokal kegiatan, yaitu pembentukan estrogen,
diinduksi langsung atau tidak langsung oleh PG dan sitokin
(Noble et al 1997.). Akan lebih naif
mengusulkan bahwa ekspresi aromatase menyimpang adalah
hanya mekanisme molekul penting dalam pembangunan
dan pertumbuhan endometriosis panggul. Ada
mungkin banyak mekanisme molekul lain yang
mendukung pengembangan endometriosis: abnormal
ekspresi dari tipe enzim proteinase merombak bahwa
jaringan atau inhibitor mereka (metaloproteinase matriks,
jaringan inhibitor metaloproteinase-1), tertentu
sitokin (IL-6, RANTES) dan faktor pertumbuhan
(EGF) merupakan beberapa mekanisme (Khorram
et al. 1993, Sharpe-al Timms et. 1995, Osteen et al.
1996, Bruner et al. 1997). Atau, sebuah cacat
kekebalan sistem yang gagal untuk membersihkan permukaan peritoneum
dari penghabisan menstruasi retrograd telah
diusulkan dalam pengembangan endometriosis
(Halme et al 1988,. Hill 1992). Pengembangan
endometriosis pada seorang wanita mungkin individu
memerlukan koeksistensi dari sejumlah ambang
penyimpangan ini. Meskipun demikian, menyimpang aromatase
ekspresi secara klinis relevan, karena aromatase
inhibitor menekan endometriosis pascamenopause
(Takayama et al 1998.).
Peraturan ekspresi aromatase dalam
endometriotik sel stroma
Seperti ditekankan sebelumnya, PGE2 ditemukan menjadi
yang paling kuat dikenal induser aktivitas aromatase
dengan meningkatkan kadar cAMP melalui EP2 permukaan sel
reseptor dalam sel-sel stroma endometriosis (Noble
      2. Asal estrogen dalam lesi endometriosis:
estradiol (E2) yang mempengaruhi lesi endometriosis timbul
dari beberapa situs tubuh. Pada seorang wanita ovulasi, E2 adalah
disekresi langsung dari ovarium dalam mode siklik. Dalam
fase folikuler awal dan setelah menopause, extraovarian
jaringan (adiposa dan kulit) adalah yang paling
sumber penting untuk menjelaskan E2 beredar.
Estradiol juga diproduksi secara lokal di endometriotik
implan sendiri di kedua ovulasi dan pascamenopause
perempuan. Pendahulu yang paling penting, androstenedione
(A) asal adrenal dan ovarium, menjadi dikonversi ke
estrone (E1) yang pada gilirannya dikurangi menjadi E2 dalam jaringan
dan endometriotik implan. Kami menunjukkan
tingkat signifikan 17 dehidrogenase-hidroksisteroid?
tipe 1 ekspresi pada endometriosis, yang mengkatalisis
konversi E1 ke E2 (Zeitoun et al. 1998). Estradiol
dan sitokin (IL-l?, TNF?), yang meningkat
endometriosis, menginduksi cyclo-oxygenase-2 (COX-2)
sehingga menimbulkan peningkatan konsentrasi PGE2 dalam
jaringan (Huang et al.). PGE2 pada gilirannya, adalah yang paling manjur
dikenal stimulator aromatase di stroma endometriotik
sel (Noble et al 1997.). Ini menetapkan positif
feedback loop dalam mendukung pembentukan estrogen terus menerus
pada endometriosis.
Aromatase dan endometriosis ·        dan lain-lain 37
www.endocrinology.org Jurnal Endokrinologi Molekuler (2000) 25, 35-42
et al. 1997). Di sisi lain, tidak cAMP
analog maupun PGE2 mampu merangsang apapun
aromatase terdeteksi aktivitas di endometrium eutopic
sel stroma dalam budaya. Pertanyaan jelas
menjadi: apa perbedaan molekuler yang memberikan
menimbulkan ekspresi aromatase pada endometriosis dan
nya hambatan endometrium eutopic? Untuk mengatasi
ini, pertama-tama kita menentukan bahwa cAMP-inducible
promotor II digunakan dalam aromatase vivo
ekspresi dalam jaringan endometriosis (Zeitoun et al.
1999). Kemudian, faktor transkripsi stimulasi,
SF-1, dan faktor inhibisi, ovalbumin ayam
promotor hulu faktor transkripsi (COUPTF),
ditemukan untuk bersaing untuk mengikat yang sama
situs di aromatase promotor II. Kudeta-TF adalah
ubiquitously disajikan dalam kedua endometrium eutopic
dan endometriosis, sedangkan SF-1
dinyatakan, khususnya dalam endometriosis tetapi tidak di
eutopic endometrium, dan mengikat untuk aromatase
promotor lebih rajin dari kudeta-TF (Zeitoun
et al. 1999). Dengan demikian, SF-1 dan transkripsi lainnya
faktor (mis. CREB) mengaktifkan transkripsi di
endometriosis, sedangkan kudeta-TF, yang menempati
situs yang sama DNA dalam endometrium eutopic,
menghambat proses ini (Zeitoun et al 1999.) (Gbr. 3).
Singkatnya, salah satu perubahan molekuler
menyebabkan ekspresi aromatase lokal pada endometriosis
tapi tidak di endometrium normal adalah
menyimpang produksi SF-1 pada endometriosis
sel stroma, yang mengatasi pelindung
hambatan biasanya dipelihara oleh kudeta-TF di
endometrium eutopic.
Interconversions dari estrone dan estradiol dalam
endometriosis
Substrat utama untuk aktivitas aromatase di
endometriosis androstenedione dari adrenal dan
asal ovarium pada wanita premenopause. The
produk utama aktivitas aromatase pada endometriosis,
yaitu estrone, hanya lemah estrogenik dan
harus dikonversi ke estradiol estrogen ampuh
mengerahkan efek estrogenik penuh. Kami menunjukkan
bahwa enzim-HSD 17? tipe 1, yang mengkatalisis
konversi estrone untuk estradiol, diungkapkan
pada endometriosis (Andersson & Moghrabi 1997,
Zeitoun et al. 1998). Sebaliknya, enzim
17?-HSD tipe 2 (dikode oleh gen terpisah)
      3. Usulan mekanisme peraturan aromatase (P450arom)
ekspresi oleh SF-1 dan CREB pada endometriosis. Setelah pengikatan PGE2
untuk
nya EP2 reseptor permukaan sel, meningkatkan kadar cAMP intraseluler. Ini
memberikan
menimbulkan mengikat unsur protein respon cAMP mengikat (CREB) dan SF-1
untuk motif tertentu hulu aromatase promotor II. Jenis stimulasi
faktor transkripsi SF-1 mengikat sebagai monomer ke reseptor setengah situs
nuklir
dengan afinitas yang lebih tinggi dibandingkan dengan faktor inhibisi kudeta-TF
(Tidak ditampilkan dalam gambar), yang mengikat ke situs yang sama yang relatif
longgar sebagai
dimer. SF-1 kemudian Sinergi dengan CREB (terikat untuk hulu CRE) dan
mungkin faktor lain untuk mengaktifkan transkripsi gen P450arom di
respon cAMP (et al Zeitoun 1999.).
Menonaktifkan estradiol oleh mengkatalisis konversi kepada
estrone di eutopic sel glandular endometrium
selama fase luteal (Andersson & Moghrabi
1997). Progesteron sebenarnya menginduksi aktivitas
enzim ini dalam sel-sel kelenjar endometrium di
budaya, inaktivasi pembuatan estradiol untuk estrone
salah satu sifat anti-estrogenik progesteron
(Satyaswaroop et al 1982.). Ekspresi
tipe 17?-HSD 2 tidak hadir dari endometriosis
kelenjar sel, seperti yang ditunjukkan dalam sampel pasangan
eutopic endometrium dan endometriosis panggul
diperoleh secara bersamaan selama fase luteal
(Zeitoun et al 1998.). Akibatnya, pelindung ini
mekanisme yang menurunkan kadar estradiol yang hilang dalam
endometriotik jaringan (Zeitoun et al 1998.). The
menyimpang ekspresi aromatase, kehadiran
17?-HSD tipe 1 dan tidak adanya 17 jenis HSD?
2 dari endometriosis kolektif menimbulkan
tingkat lokal peningkatan estradiol dibandingkan dengan
eutopic endometrium. Selain itu, 17-HSD? Jenis
2 kekurangan juga dapat dilihat sebagai tindakan cacat
dari progesteron, yang gagal untuk mendorong enzim ini
pada jaringan endometriosis (Gbr. 4).
Alasan untuk menggunakan inhibitor aromatase untuk
mengobati endometriosis
Endometriosis ini berhasil ditekan oleh estrogen
perampasan dengan analog GnRH atau
induksi menopause pembedahan. Kontrol panggul
sakit dengan agonis GnRH biasanya berhasil
selama dan segera setelah perawatan,
sedangkan rasa sakit yang terkait dengan pengembalian endometriosis
pada sampai dengan 75% dari wanita-wanita (Henzl et al. 1988,
Waller & Shaw 1993). Mungkin ada beberapa
alasan kegagalan pengobatan agonis GnRH
endometriosis. Satu penjelasan yang mungkin adalah
adanya produksi estradiol signifikan yang
terus di kulit, jaringan adiposa dan endometriosis
se per implan selama agonis GnRH
pengobatan. Oleh karena itu, penyumbatan aktivitas aromatase
di situs ini ekstra-ovarium dengan aromatase sebuah
inhibitor dapat menyimpan lebih banyak pasien dalam
remisi untuk jangka waktu yang lebih lama (Gbr. 5). The
yang paling mencolok bukti pentingnya
produksi estrogen ekstra-ovarium kambuh
endometriosis setelah berhasil menyelesaikan histerektomi
dan salpingo ooforektomi-bilateral dalam
      4. Cacat inaktivasi estradiol (E2) pada endometriosis: E2
mencapai lesi endometriotik melalui aliran darah. Selain itu, estrone
(E1) diproduksi dalam sel stroma melalui aktivitas aromatase menyimpang.
Estrone adalah
akan berkurang menjadi E2 oleh 17?-HSD tipe 1 pada jaringan endometriosis.
Estradiol biasanya tidak aktif oleh konversi untuk E1 dengan 17-HSD tipe 2 di?
sel epitel endometrium eutopic dalam menanggapi progesteron
selama fase sekretori. Dalam jaringan endometriosis, bagaimanapun, tidak E2
dimetabolisme karena kurangnya 17 jenis-HSD? 2, sehingga menimbulkan
peningkatan
lokal konsentrasi estrogen ini ampuh. Tidak adanya jenis-HSD 17? 2
ekspresi pada endometriosis meskipun tingkat tinggi progesteron selama
fase sekretori merupakan indikasi resistensi progesteron selektif dalam jaringan
ini.
Aromatase dan endometriosis ·        dan lain-lain 39
www.endocrinology.org Jurnal Endokrinologi Molekuler (2000) 25, 35-42
jumlah perempuan (Metzger et al. 1991, Takayama
et al. 1998). Endometriotik jaringan dalam satu seperti
agresif kasus ditemukan untuk mengekspresikan jauh lebih tinggi
tingkat mRNA aromatase dibandingkan dengan premenopause
endometriosis (Takayama et al 1998.).
Kami baru-baru ini melaporkan pengobatan 57 tahun
wanita gemuk yang kambuh parah
endometriosis setelah histerektomi dan bilateral
salpingo-ooforektomi. Dua tambahan laparotomies
dilakukan karena gigih parah
panggul nyeri dan obstruksi ureter bilateral terkemuka
untuk atrofi ginjal kiri dan kanan hidronefrosis.
Pengobatan dengan asetat megestrol tidak efektif. A
besar (3 cm) lesi endometriosis vagina yang terkandung
luar biasa tinggi tingkat mRNA aromatase. The
pasien diberi anastrozole (penghambat aromatase)
selama 9 bulan. Meskipun penambahan
kalsium dan alendronate (inhibitor non steroid
resorpsi tulang), kepadatan tulang di lumbar
tulang belakang mengalami penurunan sebesar 6,2%. Terjadinya
tulang signifikan rugi dalam kasus khusus ini harus
dipelajari lebih lanjut. Drama menghilangkan rasa sakit
dan regresi lesi endometriosis vagina
diamati dalam bulan pertama pengobatan.
Pada saat yang sama, tingkat sirkulasi estradiol adalah
berkurang menjadi 50% dari nilai dasar. Nyata
pretreatment tinggi tingkat mRNA aromatase di
jaringan endometriotik menjadi tidak terdeteksi di
pengulangan biopsi 6 bulan kemudian, dan lesi
hampir menghilang setelah 9 bulan terapi.
Dua mekanisme potensial mungkin telah dipertanggungjawabkan
untuk hasil mencolok sukses. Pertama, ada
merupakan bukti adanya penekanan ekstra-ovarium (yaitu
kulit dan jaringan adiposa) aktivitas aromatase, memberikan
menimbulkan penurunan yang signifikan dalam serum estradiol
tingkat (Gbr. 5). Kedua, luar biasa tinggi tingkat
ekspresi aromatase pada lesi endometriosis
menghilang setelah pengobatan dengan aromatase yang
inhibitor, anastrozole (Gbr. 5). Selain
diharapkan langsung menghambat aktivitas aromatase
pada endometriosis oleh anastrozole, hilangnya
ekspresi mRNA aromatase di lesi
mungkin akan dijelaskan oleh penolakan estrogen yang
dikenal untuk merangsang biosintesis lokal PGE2,
yang, pada gilirannya, merangsang ekspresi aromatase
(Gbr. 2).
Secara ringkas, baru-baru ini dikembangkan ampuh
aromatase inhibitor adalah obat calon dalam
pengobatan endometriosis yang tahan terhadap
rejimen standar. Bahkan, penggunaan aromatase
inhibitor mungkin pengobatan hanya tersedia
untuk endometriosis pascamenopause agresif. Ini
masih harus dilihat apakah inhibitor aromatase
sendiri atau bersama-sama dengan garis hadir terapi pada
wanita premenopause akan meningkatkan rasa sakit bebas
interval dan waktu untuk kambuh setelah penghentian
(Gbr. 5). Studi berada di bawah cara untuk mengatasi
pertanyaan.
      5. Situs aksi aromatase inhibitor untuk mengobati
endometriosis. Dalam
kasus resisten terhadap pengobatan dengan GnRH agonis atau pascamenopause
endometriosis, penggunaan inhibitor aromatase untuk memblokir pembentukan
estrogen di
kulit dan jaringan adiposa serta jaringan endometriosis mungkin penting
dalam menghambat pertumbuhan jaringan endometriosis. Berulang endometriosis,
terutama setelah operasi pengangkatan indung telur, dapat mewakili lesi yang
sensitif terhadap tingkat yang sangat rendah estradiol (E2). Dengan demikian,
penindasan E2
produksi di lokasi ekstra-ovarium (jaringan lemak / kulit) dan dalam
jaringan endometriotik mungkin wajib untuk pengobatan berhasil
endometriosis.
RINGKASAN
Perkembangan dan pertumbuhan endometriosis
Lesi estrogen-tergantung. Mekanisme
dan efektivitas pengobatan hormonal untuk
endometriosis harus dievaluasi kembali mengingat
baru uang muka yang meningkatkan pemahaman kita tentang
situs tubuh produksi estrogen pada wanita
dengan endometriosis. Selain sekresi ovarium,
estradiol juga diproduksi di lokasi perifer
seperti kulit, jaringan adiposa dan endometriosis
lesi per se. Kami menyarankan bahwa intracrine dan
efek parakrin estradiol diproduksi di target
memperkuat jaringan aksi estrogenik steroid
hormon disampaikan melalui sirkulasi. Selain itu,
cacat inaktivasi estradiol pada endometriosis
berbeda dengan endometrium eutopic mungkin
lebih meningkatkan efek lokal. Menyimpang aromatase
aktivitas dan metabolisme estradiol cacat dalam
endometriosis merupakan konsekuensi dari molekul spesifik
penyimpangan seperti ungkapan yang tidak tepat
faktor stimulasi transkripsi atau progesteron
perlawanan di jaringan ini. Relevansi klinis
Temuan ini baru-baru ini dicontohkan oleh
sukses pengobatan kasus yang parah berulang
pascamenopause endometriosis dengan aromatase sebuah
inhibitor. strategi pengobatan masa depan mungkin
dirancang untuk target transduksi sinyal untuk
ekspresi aromatase dalam endometriosis atau
meningkatkan tindakan progesteron dalam jaringan ini.

Translate 1

Загружено:

Сведения о документе

Авторское право

Доступные форматы

Поделиться этим документом

Поделиться или встроить документ

Параметры публикации

Этот документ был вам полезен?

Это неприемлемый материал?

Авторское право:

Доступные форматы

Translate 1

Загружено:

Авторское право:

Доступные форматы

35664

Terjemahan Inggris ke Bahasa Indonesia

Sebuah Antagonis Thyroid Hormone Itu Menghambat Hormon Tiroid

pemandangan hewan menunjukkan ditampilkan dalam A. BB, sungut, bar, 2 mm.

Terjemahan Inggris ke Bahasa Indonesia

Sebuah Keluarga neuropeptida Yang Menghambat Hormon Juvenile

CA tunggal perempuan 3 hari lalu itu digunakan untuk menguji kromatografi

23 dan 24 dari berjalan HPLC pertama (2400 setara otak) dikeringkan

mengurangi aktivitas penghambatan. Di sisi lain, perubahan pada

Terjemahan Inggris ke Bahasa Indonesia

StAR PROTEIN DAN PERATURAN

Biologi aktivitas reseptor hormon tiroid

Bersama-sama, hasil ini

Terjemahan Inggris ke Bahasa Indonesia

(Rs11575899) ditemukan hanya dalam hubungannya dengan mengulangi tujuh

Download dari aje.oxfordjournals.org oleh tamu pada 2 Oktober 2010

Download dari aje.oxfordjournals.org oleh tamu pada 2 Oktober 2010

Terjemahan Inggris ke Bahasa Indonesia

Estrogen biosintesis pada endometriosis: dasar molekuler

Вам также может понравиться