INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL

Escuela Nacional de Ciencias Biológicas

LABORATORIO DE ECOLOGÍA MICROBIANA

PRÁCTICA 3
Análisis de la calidad del agua II. Determinación
microbiológica
Grupo 4QV1 Sección 1. Equipo 4 y Equipo 1

Profesora: Nidia Telma Sánchez Sánchez

Alumnos:
 Flores García Brian Agripino
 García Blancas Omar Eleazar

Fecha de realización: 14-20 de agosto del 2018

Feche de Entrega: 30 de agosto del 2018
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OBJETIVOS:

Determinar el número más probable (NMP) de microorganismos coliformes totales, microorganismos

coliformes fecales termotolerantes y Escherichia coli presuntiva en una muestra obtenida de un cuerpo de
agua.

RESULTADOS:

Estación Numero característico NMP microorganismos

coliformes totales/ 100ml.
1 3-3-3 >/= 2400
2 3-3-3 >/= 2400
3 3-3-3 >/= 2400
4 3-3-3 >/= 2400
5 3-3-3 >/= 2400
6 3-3-3 >/= 2400
7 3-3-3 >/= 2400
8 3-3-3 >/= 2400

Tabla No.1 “resultados de la prueba confirmativa para la cuantificación

de microorganismos coliformes totales.”
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NMP DE MICROORGANISMOS COLIFORMES TOTALES

3000

2500

2000

1500

1000

500

0
Estacion 1 Estacion 2 Estacion 3 Estacion 4 Estacion 5 Estacion 6 Estacion 7 Estacion 8

NMP

Grafica No.1 “resultados de la prueba confirmativa para la cuantificación de microorganismos coliformes totales.”

Estación Numero característico NMP microorganismos

coliformes totales/ 100ml.
1 3-3-3 >/= 2400
2 3-3-3 >/= 2400
3 3-3-3 >/= 2400
4 3-3-3 >/= 2400
5 3-3-3 >/= 2400
6 3-3-3 >/= 2400
7 3-3-3 >/= 2400
8 3-3-3 >/= 2400

Tabla No.2 “resultados de la prueba confirmativa para la cuantificación

de microorganismos coliformes fecales.”
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NMP DE MICROORGANISMOS COLIFORMES FECALES

3000

2500

2000

1500

1000

500

0
Estacion 1 Estacion 2 Estacion 3 Estacion 4 Estacion 5 Estacion 6 Estacion 7 Estacion 8

NMP

Grafica No.2 “resultados de la prueba confirmativa para la cuantificación de microorganismos coliformes fecales.”

Estación Numero característico NMP microorganismos

coliformes totales/ 100ml.
1 3-3-3 >/= 2400
2 3-3-3 >/= 2400
3 3-3-3 >/= 2400
4 3-3-3 >/= 2400
5 3-3-3 >/= 2400
6 3-3-3 >/= 2400
7 3-3-3 >/= 2400
8 3-3-3 >/= 2400

Tabla No.3 “resultados de la prueba confirmativa para la cuantificación

de Escherichia coli presuntiva.”
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NMP DE Escherichia coli en prueba presuntiva

3000

2500

2000

1500

1000

500

0
Estacion 1 Estacion 2 Estacion 3 Estacion 4 Estacion 5 Estacion 6 Estacion 7 Estacion 8

NMP

Grafica No.3 “resultados de la prueba confirmativa para la cuantificación de Escherichia coli presuntiva.”

Estación Numero característico NMP microorganismos

coliformes totales/ 100ml.
1 0-1-3 12.0
2 0-2-2 Inaceptable
3 1-1-1 11
4 0-1-2 Inaceptable
5 3-1-2 12.0
6 0-2-1 Inaceptable
7 2-2-1 28
8 1-0-0 4

Tabla No.4 “resultados de la prueba completa para la cuantificación de

Escherichia coli presuntiva.”
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NMP DE PRUEBA COMPLETA DE Escherichia coli

30

25

20

15

10

0
Estacion 1 Estacion 2 Estacion3 Estacion 4 Estacion 5 Estacion 6 Estacion 7 Estacion 8

NMP

Grafica No.4 “resultados de la prueba completa para la cuantificación de Escherichia coli presuntiva.”

DISCUSIÓN:

Se realizó el análisis microbiológico de la calidad de agua con las siguientes pruebas:

Prueba presuntiva y confirmativa de microrganismos coliformes totales, coliformes fecales

termotolerantes y Escherichia coli las cuales se sembraron en caldo lactosado obteniendo pruebas
positivas que nos indican la presencia de estos microrganismos que son capaces de fermentar la lactosa
con producción de ácido y gas en 48 horas, la producción de gas se detectó por el desplazamiento de la
campana de Durham. En el caso de la prueba confirmativa de Escheririchia coli se inoculo en caldo triptona
y se añadió el reactivo de Kovacs para determinar la presencia de indol que se pone de manifiesto con el
desarrollo de un anillo rojo. Determinamos el NMP a los tubos positivos obteniendo resultados con un
NMP≥ 2400/100 ml en la prueba de cada microorganismo, este valor obtenido nos indica la contaminación
del lugar de donde proviene la muestra de materia fecal, ya que los microorganismos coliformes y
Escheririchia coli son indicadores de este tipo de contaminación debido a su relación con el grupo tifoide-
paratifoide . Los coliformes fecales son un subgrupo de los coliformes totales, capaz de fermentar la lactosa
a 44.5ºC. La capacidad de reproducción de los coliformes fecales fuera del intestino de los animales
homeotérmicos es favorecida por la existencia de condiciones adecuadas de materia orgánica, pH,
humedad, etc.
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Posteriormente al realizar la prueba completa de los tubos positivos de Caldo Lactosa Verde Brillante Bilis
incubados a 37ºC de la prueba confirmativa se sembro en placas de agar Eosina Azul de Metileno en donde
obtuvimos valores de Numero Mas Probables altos, en donde nos indican nuevamente la confirmación de
Escheririchia coli en la muestra de agua.

CONCLUSIÓN:

De acuerdo con los resultados obtenidos para la determinación de coliformes totales, coliformes fecales
termotolerantes y Escherichia coli presuntiva en las muestras de agua recolectadas podemos concluir que
la presencia excesiva de todos los microorganismos antes mencionados (NMP ≥ 2400/100 mL en la
cuantificación de los tres tipos de microorganismos) es un indicativo de contaminación con materia fecal
y, por lo tanto, representa un riesgo para la salud pues el consumir agua proveniente de dicha zona
implicaría el probable riesgo de entrar en contacto con bacterias pertenecientes a los géneros Salmonella,
Shigella, Vibrio, protozoarios como Entamoeba histolytica o virus como el de la polio o la hepatitis (además
de los coliformes ya antes mencionados).

CUESTIONARIO:

1-Mencionar que inhibidor selectivo contiene el medio BLVB

El caldo de bilis verde brillante al 2% se utiliza para la detección de bacterias coliformes en agua, alimentos
y productos lácteos en un entorno de laboratorio. En el medio de cultivo VBBL (verde brillante bilis lactosa),
la peptona aporta los nutrientes necesarios para el adecuado desarrollo bacteriano, la bilis y el verde
brillante son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas y Gram negativas
a excepción de coliformes, y la lactosa es el hidrato de carbono fermentable. Es una propiedad del grupo
coliforme, la fermentación de la lactosa con producción de ácido y gas.

2- ¿Qué entiende en general, por microorganismo indicador?

Éstos son organismos (o grupos) que advierten oportunamente de un manejo inadecuado o contaminación
que incrementan el riesgo de presencia de microorganismos patógenos en alimentos. Además de que su
detección en el laboratorio es más sencilla, rápida y/o económica, los microorganismos indicadores
permiten un enfoque de prevención de riesgos, puesto que advierten manejo inadecuado y/o
contaminación. Los principales microorganismos indicadores en alimentos son:

− Indicadores de condiciones de manejo o de eficiencia de proceso:

 Mesófilos aerobios (o cuenta total) cuenta de hongos y levaduras cuenta de coliformes totales
− Indicadores de contaminación fecal:
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 Coliformes fecales
 Escherichia coli
 Clostridium perfringens

3- ¿En qué casos se utiliza Clostridium perfringens como microorganismo indicador de contaminación
fecal?

Dada la extraordinaria resistencia de las esporas de Clostridium perfringens a los procesos de desinfección
y a otras condiciones ambientales desfavorables, se ha propuesto esta especie como índice de la presencia
de protozoos y virus entéricos en aguas de consumo tratadas. también puede utilizarse como índice de
contaminación fecal previa y, por lo tanto, indicar qué fuentes son susceptibles de contaminación
intermitente, las esporas son más pequeñas que los quistes u ooquistes de los protozoos, por lo que
pueden ser útiles como indicadores de la eficacia de los procesos de filtración.

REFERENCIAS:

1. ASANO, T. AND LEVINE, D. (1998). “Wastewater reclamation, recycling and reuse: an introduction.
In wastewater reclamation and reuse”. Takashi Asano (editor),. Technomic Publishing. Lancaster.
1528 pags.
2. AYRES, R. Y WESCOT, D. (1987). “La calidad del agua en la agricultura. Organización de las Naciones
Unidas para la Agricultura y la Alimentación”. Estudio FAO Riego y Drenaje, Nº 29. Roma. p 8-101.
BORREGO, J.; MORIÑO, M.; DE VICENTE, A.; CÓRNAX, R. AND ROMERO, P. (1987). “Coliphages as
an indicator of faecal pollution in water. Its relationship with indicator and pathogenic
microorganisms”. Water. Research. 21, 1473-1480