Papel de la autofagia en la diferenciación de megacariocitos y la formación de

plaquetas

Abstracto

La autofagia es un proceso biológico conservado para la digestión y el reciclado de

constituyentes citoplasmáticos en células eucarióticas. La autofagia puede
desencadenar la muerte celular o promover la supervivencia celular después de
varias formas de estrés. Los papeles emergentes de la autofagia en la
megacariopoyesis, la trombopoyesis y la función plaquetaria se han descubierto
utilizando no solo modelos genéticos in vitro e in vivo, sino también en
observaciones clínicas de la estructura autofágica en pacientes con trastornos
trombocitopénicos. La inhibición de la autofagia en etapas tempranas de
diferenciación de megacariocitos parece impedir la maduración de megacariocitos,
reducir la formación de plaquetas y afectar la función plaquetaria, mientras que la
deficiencia autofágica en megacariocitos maduros da lugar a una activación y
función plaquetaria anormal sin cambiar el tamaño y número de plaquetas. Por otra
parte, la inducción de autofagia por rapamicina en megacariocitos exhibió beneficios
terapéuticos sustanciales en pacientes con púrpura trombocitopénica inmune (PTI).
Esta mini-revisión es para resaltar los avances recientes en la comprensión de la
regulación de la autofagia en la megacariopoyesis, la trombopoyesis y la función
plaquetaria para cerrar la brecha entre la autofagia y la fisiopatología de los
megacariocitos / plaquetas.

Palabras clave: ​Autofagia, megacariopoyesis, trombopoyesis, plaquetas

Introducción

La autofagia es un proceso catabólico conservado en células eucariotas. Durante la

autofagia, los componentes citoplasmáticos dirigidos se secuestran mediante
vesículas de doble membrana llamadas autofagosomas, que luego entregan su
contenido a los lisosomas para su degradación o reciclaje [ ​1 ]. Desde su
descubrimiento en la década de 1960, la autofagia se ha investigado de manera
floreciente y se ha vinculado ampliamente a diversos procesos biológicos y
condiciones patológicas. De acuerdo con los diferentes medios de transporte y
sustratos, la autofagia puede dividirse en tres formas distintas denominadas
macroautofagia, microautophagia y autofagia mediada por chaperonas, de las
cuales la macroautopagia consiste en pexofagia, mitofagia y autofagia no selectiva [
2​ ].
El papel crucial de la autofagia se han visto implicados en la inanición de nutrientes,
la infección, la muerte celular y la reparación [ ​3 - ​5 ]. Se considera que la autofagia
juega un papel principalmente protector en la respuesta al estrés celular mediante la
eliminación de proteínas agregadas y el reciclaje de productos degradados [ ​6 ]. En
la otra cara de la moneda, la autofagia puede desencadenar la muerte celular
programada bajo ciertas condiciones [ ​7 ]. El proceso completo de autofagia, que
incluye activación, identificación de carga, formación de autofagosomas, fusión y
degradación de lisosomas, está mediado por una serie de genes relacionados con la
autofagia (ATG) [ ​8].​] En las últimas décadas, las funciones pleiotrópicas de la
autofagia en el desarrollo de los hemocitos se han caracterizado en la eritropoyesis,
así como en los cánceres de la sangre [ ​9 , ​10 ]. Recientemente, se ha demostrado
que la autofagia es indispensable para la megacariopoyesis y la función plaquetaria
normales utilizando modelos animales con deleción específica de linaje de ATG [ ​11
, ​12 ]. Además, la acumulación de evidencia de autofagia se ha observado hasta
ahora en ITP, síndromes mielodisplásicos y leucemia mielógena crónica desde el
descubrimiento inicial de vacuolas autofágicas putativas de megacariocitos en la
década de 1970 [ ​13 - ​15​] En la presente revisión, primero discutiremos brevemente
las bases moleculares de la maquinaria autofágica y luego pasaremos a una
regulación más específica de la megacariopoyesis y la trombopoyesis mediante
moduladores autofágicos, seguidos por la relevancia clínica de la regulación
autofágica y los trastornos trombocitopénicos.

Señalización Autofagia

El proceso de autofagia fue descubierto inicialmente por Porter et al en 1962 a partir

de células hepáticas tratadas con glucagón, en las que se observaron lisosomas
que contienen otros orgánulos [ ​16 ]. Otros descubrimientos en la respuesta a
lesiones y el reciclaje / degradación de los constituyentes celulares condujeron a la
invención del término "autofagia" por de Duve [ ​17 ]. Entre todos los tres tipos de
autofagia identificados, macroautophagy es la vía canónica que se ha estudiado
más ampliamente [ ​18 ]. Los orgánulos dañados se someten a secuestro por
autophagosomes de doble capa que posteriormente entregan su contenido para la
hidrólisis ácida y la degradación mediante la fusión con lisosomas [ ​2​]
Microautophagy, en cierta medida, se asemeja a macroautophagy a pesar de
engullir directo de constituyentes intracelulares por lysosomes [ ​19 ]. Por otro lado,
la autofagia mediada por chaperonas opera de una manera bastante diferente que
implica el complejo que contiene hsc70 con alta selectividad para los sustratos [ ​20
].

Los genes relacionados con la autofagia (ATG) son los reguladores clave de la
señalización autofágica. Originalmente clonado de la levadura Saccharomyces
cerevisiae, se han identificado los homólogos de ATG en células de mamíferos, y se
revelaron sus funciones [ ​21 , ​22 ]. En los mamíferos, la privación nutricional, los
factores de crecimiento y el estrés oxidativo pueden regular la autofagia a través de
la proteína quinasa activada por AMP (AMPK) y el objetivo mamífero de la
rapamicina (mTOR) [ ​23 , ​24 ]. En el contexto de la inanición, la mayor proporción de
AMP / ATP activa AMPK, que luego induce la autofagia de protección celular a
través de la inhibición de mTORC1 [ ​25].​] UNC-51 como quinasa 1 (ULK1), proteína
de interacción de la familia quinasa de adhesión focal de 200 kD (FIP200), ATG101
y ATG13 forman un complejo proteico con mTORC1 que es un inhibidor de la
autofagia [ ​26 ]. El aumento de la formación de este complejo después de la
desfosforilación de ATG13 inducida por el estrés metabólico o la rapamicina
promueve la autofagia [ ​27 ]. De forma similar, el UKL1 activado fosforila Beclin-1,
que forma un complejo con ATG14L, P150 y fosfatidilinositol 3-quinasa VPS34
(Vsp34), para iniciar la formación de autophagosomes [ ​28 ]. Una vez que se activa
Vsp34, la generación de fosfatidilinositol 3-fosfato (PtdInS (3) P) reclutará la proteína
2 interactiva con fosfoinosítido de WD (WIPI2) en la superficie de la fagophore
mediante unión con ATG16L [ ​29​] Al mismo tiempo, ATG12 y ATG5 se unen a
ATG16L formando así un complejo de tipo E3, que luego se une a ATG3 y
promueve la nucleación de autophagosome. Por otro lado, ATG3 activado se une
covalentemente a LC3, que está lipidada por ATG16L y conjuga con PE en la
membrana de los autophagosomes [ ​30 ]. Durante este paso, p62 identifica
organelos específicos como un receptor de atraque de carga, así como guía LC3 en
autophagosomes [ ​31 ]. Eventualmente, los autofagosomas se fusionan con los
lisosomas ácidos para formar autolisosomas, a partir de los cuales las moléculas
LC3 externas se convierten en ATG4 en la forma escindida, mientras que las LC3
internas y las cargas experimentan degradación [ ​32​ ].

Recientemente, se han reconocido los roles de la autofagia en la hematopoyesis.

Varios estudios demuestran que la autofagia está implicada tanto en la
megacariopoyesis como en la eritropoyesis, por ejemplo, en la diferenciación de
reticulocitos a glóbulos rojos, así como en la trombopoyesis [ ​11 , ​33 , ​34​]. La
inducción de la autofagia se asocia con la muerte celular y la diferenciación en la
línea celular de leucemia mieloide crónica, cuando la eficacia de la inducción de la
autofagia se ha probado en trastornos trombocitopénicos [ ​35​ , ​36​ ].

Megacariopoyesis y trombopoyesis

La megacariopoyesis es un proceso complicado mediado por diferentes células

hematopoyéticas y factores extracelulares. Las células madre hematopoyéticas
están comprometidas con el linaje de megacariocitos, incluida la colonia progenitora
mixta (CFU-Mix) o el progenitor mieloide común (CMP), unidad formadora de
colonias-granulocitos-eritrocitos-monocitos-megacariocitos (CFU-GEMM), progenitor
MK / eritroide mixto célula (MEP), megacariocitos unitarios formadores de colonias
(CFU-MK), megacariocitos unitarios formadores de estallidos (BFU-MK) y,
finalmente, megacariocitos maduros diferenciados [ ​37]​] La maduración de los MK
se caracteriza por la endomitosis, la maduración citoplásmica y el ensamblaje de
todos los componentes necesarios para la producción de plaquetas funcionales. Los
megacariocitos maduros se pueden identificar por marcadores de superficie celular
específicos, incluidos CD41, CD61 (integrina αIIbβ3), CD42 (glucoproteína Ib) y
glicoproteína V [ ​38 ]. El compromiso de los factores de transcripción, las citoquinas
y el estrés extracelular promueve sinergicamente la maduración de los
megacariocitos [ ​39 ]. Los factores de transcripción, como SCL, GATA1, GATA2,
NF-E2, permiten el desarrollo de células progenitoras megacariocíticas / eritroides [
40]​] FOG1 (ZFPM1) regula la actividad transcripcional de GATA-1 y contribuye a la
diferenciación temprana de megacariocitos, cuando NFE2 y SCL-1 regulan la
diferenciación posterior de megacariocitos y la producción de plaquetas [ ​41 , ​42 ].
Además, PU.1 y Fli-1 también guían la diferenciación de los megacariocitos de las
células progenitoras [ ​43 ]. Por el contrario, C-myb (MYB) se equilibra con GATA1
jugando un papel inhibidor en la megacariopoyesis [ ​44 ]. Además de los factores de
transcripción, la diferenciación de los megacariocitos también está ajustada por las
hormonas, especialmente la trombopoyetina. Por interacción con su receptor c-MPL,
la trombopoyetina actúa como potenciador canónico de la diferenciación de
megacariocitos y trombopoyesis [ ​45].​] La activación de señales aguas abajo
consistentes en MAPK, PI3K y STAT, trabaja en conjunto para promover la
megacariopoyesis [ ​46 ]. Los nichos de médula ósea proporcionan plataformas para
el desarrollo de megacariocitos y plaquetas mediante el suministro de gradientes de
oxígeno, quimiocinas e infraestructuras para la migración de megacariocitos [ ​47 ].
Además, la migración de megacariocitos está regulada por factor-1α (SDF-1)
derivado de células estromales, angiopoyetina 1 (Ang-1) y TPO, etc. SDF-1α navega
megacariocitos terminales hacia el endotelio vascular, cuando la activación de
VEGFR1 promueve SDF -1 migración mediada de megacariocitos a los nichos
vasculares y aumenta la producción de plaquetas [ ​48 ]. Recientemente, los
gradientes de especies reactivas de oxígeno también están implicados en la
maduración de megacariocitos [ ​49​]

Al madurar, los megacariocitos adquieren todos los componentes celulares

necesarios para la trombopoyesis, que se demarcan en partículas micro anucleadas
antes del desprendimiento [ ​50 ]. Mientras tanto, la membrana celular y el esqueleto
celular, que incluyen tubulina y actina, se someten a una reorganización extensa, lo
que permite la protrusión de proyecciones pseudopodiales masivas denominadas
proplaquetas [ ​51 , ​52 ]. Eventualmente, estos proplatletes se despachan de
megacariocitos con sus constituyentes, dando lugar a plaquetas circulantes. El
envío de plaquetas desde megacariocitos maduros se denomina trombopoyesis. Es
de destacar que se ha demostrado que la apoptosis está implicada en la etapa final
de la liberación de plaquetas [ ​53​ ].
Roles de la autofagia en la maduración de los megacariocitos y la función
plaquetaria

Existe evidencia sustancial que respalda los roles de la autofagia en la

megacariopoyesis. En la década de 1970, los estudios TEM (microscopio
electrónico de transmisión) de pacientes con síndrome carcinoide identificaron
estructuras parecidas al autofagosoma dentro de las plaquetas pero no a los
megacariocitos, lo que indica la posible implicación del aumento de la autofagia [ ​13
]. Un estudio posterior en perros con quemaduras reveló la presencia de
autofagocitosis en megacariocitos, que se consideró como un posible proceso de
reciclaje celular [ ​54 ]. La evidencia de autofagia activada también se nota en la PTI,
que exhibe amplias vacuolas citoplásmicas que representan la muerte celular
programada. Sin embargo, estas vacuolas observadas parecen ser de membrana
única en lugar de membranas dobles que se asemejan a autofagosomas [ ​15​ ].

Se ha informado que el inhibidor de la autofagia, mTORC1, regula tanto los pasos

iniciales como los tardíos del desarrollo de megacariocitos [ ​55 ]. Además, la
inhibición de mTORC1 con rapamicina induce la autofagia, disminuye el tamaño y la
ploidía de los megacariocitos e impide la maduración de los megacariocitos a través
de una vía dependiente de p21 y ciclina D3 [ ​56 ]. Estos hallazgos sugieren un papel
importante de la autofagia en la regulación del desarrollo de megacariocitos. Es de
destacar que tanto mTORC1 que contiene la proteína TOR asociada a la rapamicina
(Raptor) como mTORC2 que contienen un compañero insensible a la rapamicina de
Raptor (Rictor) están implicados en la regulación del ciclo celular [ ​57].​] Sin
embargo, puede ser difícil concluir que la autofagia regula directamente la
megacariopoyesis debido a la no especificidad del enfoque farmacológico, como la
rapamicina. En ese caso, se desarrollaron enfoques genéticos usando ratones
knock-out para enfatizar el papel de la autofagia. En consecuencia, un estudio
reciente demostró que la abrogación de la autofagia de la etapa de células madre
por knockout hematopoyético de ATG7 conduce a megacariopoyesis,
trombopoyesis y hemostasia deterioradas, produciendo plaquetas disfuncionales
más grandes pero menos [ ​11 ]. Sin embargo, la eliminación de ATG7 en
megacariocitos maduros y plaquetas utilizando el método de la tripulación impulsada
por PF4 solo da como resultado una hemostasia anormal, mientras que el número y
el tamaño de las plaquetas permanecen sin cambios. La investigación adicional
demostró la agregación anormal y el embalaje del gránulo de carga en estas
plaquetas [​12 ]. A la luz de estos hallazgos, es probable que la autofagia sea
indispensable para la etapa temprana del desarrollo de megacariocitos, y también
es necesaria para la función plaquetaria normal ( ​Figura 1​ ).
Figura 1 La inhibición de la autofagia en células madre hematopoyéticas afecta la megacariopoyesis y
la función plaquetaria. La inhibición de la autofagia mediante la deleción genética de ​Atg7 en ratones
en diferentes etapas del desarrollo del linaje afecta la diferenciación de megacariocitos, así como la
función plaquetaria. MK-PPF, megacariocito formador de plaquetas. ​Atg7​ KO, ​Atg7​ nocaut.

Siendo una línea celular de leucemia mielógena crónica (CML), K562 conserva la
capacidad de diferenciación megacariocítica, proporcionando así una herramienta
favorable para estudiar la megacariopoyesis. Un grupo informó que la inhibición de
la autofagia en las células K562 por la caída de los genes autofágicos impide
sustancialmente la megacariopoyesis [ ​58 ]. Consistentemente, el tratamiento con
lapatinib induce la muerte celular autofágica y la diferenciación megacariocítica en
las células K562, que pueden inhibirse mediante la caída de ATG7 o la aplicación de
3-MA [ ​35 ]. Por el contrario, otro grupo mostró que aunque la autofagia se observó
fácilmente durante la inducción de la diferenciación megacariocítica por
12-O-tetradecanoil-forbol-13-acetato (TPA), no parece ser necesaria para la
diferenciación celular [ ​59​] Estudios posteriores en células MO7e mostraron que la
progresión del ciclo y la división nuclear están reguladas por mTORC1, mientras que
el tamaño celular y la muerte celular estaban controlados por mTORC2 [ ​57 ]. La
relación entre la autofagia y la megacariopoyesis debe interpretarse con cautela, ya
que la rapamicina utilizada en este estudio también puede suprimir las vías P70S6K
y 4E-BP. Además de los megacariocitos, otros estudios en plaquetas confirmaron la
presencia de proteínas autofágicas y mostraron que se requería la autofagia
dependiente de la clase III PtdIns3K para la función plaquetaria normal [ ​60​ ].

Observaciones finales

La autofagia, como proceso biológico conservado, ha sido bien estudiada y se ha

asociado con cáncer, trastornos metabólicos, enfermedades autoinmunes y daño
por radiación. La autofagia alterada está implicada en células hematopoyéticas y
sanguíneas indicadas por estudios morfológicos. Dado que la mayoría de las
pruebas de autofagia hasta ahora provienen de células cancerígenas, la función
explícita de la autofagia en megacariocitos y plaquetas aún no se ha dilucidado.
Afortunadamente, estudios genéticos recientes descubrieron el papel indispensable
de la autofagia tanto en la megacariopoyesis como en la función plaquetaria.
Además, los resultados de un ensayo clínico sobre ITP sugieren que la rapamicina
es efectiva para tratar la trombocitopenia inmune inducida. Por lo tanto, la autofagia
dirigida puede producir un enfoque prometedor para la enfermedad
trombocitopénica, por ejemplo, en MDS o secundaria a quimioterapia / radioterapia.