ENTEROBACTERIAS, TOMA DE MUESTRA, SIEMBRA E IDENTIFICACIÓN

1. INTRODUCCIÓN

En la definición clásica de una Enterobacteriaceae se usan siete criterios básicos, adicional

a la aparición de nuevos métodos taxonómicos para incluir a ciertos géneros que no
cumplen con todos los siguientes criterios, pero que forman parte de esta familia:

- Son bacterias gram negativas, la mayoría bacilos, otros cocobacilos y otros

pleomórficos.
- No son exigentes, son de fácil cultivo.
- Son oxidasa negativo (excepto Plesiomonas, que es oxidasa positivo), es decir, carecen
de la enzima citocromo oxidasa.
- Son capaces de reducir nitrato en nitrito.
- Son anaeróbicos facultativos.
- Son fermentadores de carbohidratos en condiciones anaeróbicas con o sin la
producción de gas (en especial glucosa y lactosa), y oxidadores de una amplia gama de
substratos en condiciones aeróbicas.
- Muchos géneros tienen un flagelo que sirve para desplazarse, aunque algunos géneros
no son móviles.
2. OBJETIVOS
1era parte
- Hacer el estudio macroscópico de la muestra según corresponda.
- Hacer el estudio microscópico de las mismas.
- Fijas muestras y hacer la coloración de Gram.
- Según el resultado del examen microscópico y la coloración de Gram proponer en que
medios de cultivo se puede sembrar.
- Hacer la siembra en los medios elegidos.
2da parte
- Reconocimiento de las colonias en los medios sembrados.
- Resiembra en medios para el reconocimiento de la bacteria (TSI, LIA, UREA CITRATO,
SIM)
- Conocer los medios adecuados para el cultivo del Mycobacterium.
- Observar medios de cultivo de LOWESTEIN JENSEN cultivados positivo, negativo y
contaminado.
- Hacer una coloración ZN de una colonia de Mycobacterium y hacer su lectura.
3. MATERIALES

Muestra de orina / Dipstick (cinta de orina) / Tubos de ensayo / Centrifugadora /

Portaobjetos / Tinción Gram: Safranina, Cristal Violeta, Lugol, Colorante Gram / Asa de
siembra / Agar MacConkey / Agar XLD / Agar SS / Agar TSI / Agar LIA / Agar Citrato / Medio
SIM
 4. PROCEDIMIENTO

EXAMEN MACROSCOPICO DE LA ORINA

EDAD 17 AÑOS
- Color: amarillo
- Consistencia: Turbia

EXAMEN QUÍMICO DE LA ORINA

- Colocar un poco de la orina en un tubo de ensayo.

- Luego, sumergimos por completo una cinta de orina, llamada dipstick. Esta cinta posee
varios cuadraditos de colores compuestos por sustancias químicas que reaccionan con
determinados elementos de la orina, en este caso nos interesa solamente los
LEUCOCITOS Y NITRITO.
- Después de un minuto, se comparan los colores de los cuadraditos con una tabla de
referencia.

Leucocitos: 3 cruces

Nitrito: Negativo
EXAMEN MICROSCÓPICO DE LA ORINA

Primero se tiene que centrifugar la orina, y quedarse solamente con el sedimento.

1. EXAMEN EN FRESCO
- Tomamos una gota del sedimento de orina y lo colocamos en un portaobjetos.
2. TINCIÓN GRAM
- Colocamos un poco de sedimento de orina en un portaobjetos y procedemos a realizar
la tinción Gram.

CULTIVO EN MEDIOS PRIMARIOS

- Sumergimos nuestra asa de siembra sobre la muestra de orina, y estriamos sobre los 3
Agares: MacConkey, XLD y SS.

- Esperamos 24 horas para ver el crecimiento de las enterobacterias.

LUEGO DE 24 HORAS
 1 XLD

2 MC

3 SS

CARACTERÍSTICAS DE LA COLONIA

XLD

- Color amarillo mate y con brillo

- Borde liso regular
- Redondas
- Convexas

MC

- Color rosada
- Borde liso regular y precipitado
- Redondas
- Convexas

SS –> no hubo crecimiento de colonias

CULTIVO EN BATERIA DE IDENTIFICACIÓN (TSI, LIA, CITRATO, SIM)

- Cogemos un poco de la colonia que se formó en el Agar MacConkey con el asa de

siembra y procedemos a inocular sobre los 4 agares para su respectiva identificación:
TSI, LIA, CITRATO y MEDIO SIM.

AGAR TSI LIA CITRATO MEDIO SIM

5. RESULTADOS

Luego de 24 horas, los 4 agares que fueron inoculados el día de ayer, quedaron de la
siguiente manera:

AGAR TSI LIA CITRATO MEDIO SIM

- Agar TSI: K/A Glucosa + H2S(hidrogeno sulfurado): - Gas: +

 - Agar LIA: Lisina + (Descarboxilación)
- Agar Citrato: Citrato +
- Medio SIM: Sulfuro – Indol – Movilidad –

IDENTIFICACIÓN DE BACTERIA
GLUCOSA K/A DESCARBOXILACION LISINA (+) (K/K) H2S G L L I M C

LACTOSA SACAROSA A/A DESAMINACION LISINA (-) R/A A A I N O I

LISINA (-) K/A A/A S C S D V T

T I O I R

O N L L A

S A I T

A D O

K/A K/K - + - + - - +

6. CONCLUSIONES
- Cuando el Agar Lisina nos queda de color amarillo, significa que hubo una
DESAMINACIÓN de la Lisina y es Lisina (-).
- Si el Agar Citrato torna a un color verde, significa que la bacteria no utilizó al citrato,
osea es Citrato (-).
- Si el Agar TSI nos queda todo de color amarillo, significa que la bacteria fermentó los
carbohidratos [Glucosa, Lactosa y Sacarosa (+)].
- Si al agregar Indol al Medio SIM la superficie se torna a un color rojo, significa que es
Indol (+).
- Si el Agar TSI muestra algun signo de color negro en su interior significa que es
Hidrógeno Sulfurado (+).