ESTUDIO DEL EFECTO DE UN INHIBIDOR IRREVERSIBLE EN LA ACCIÓN DE LA UREASA

Introducción
Los inhibidores enzimáticos son moléculas que se unen a enzimas y disminuyen su actividad. Las
enzimas tienen como hemos visto una importancia fundamental en el funcionamiento celular.
Prácticamente todas las funciones de la célula requieren directa o indirectamente la presencia de
enzimas para que ocurran a una velocidad adecuada las reacciones químicas que en definitiva son las
responsables de esas funciones.
Pueden clasificarse en reversibles e irreversibles. Las irreversibles se unen covalentemente a la
enzima sin posibilidad de revertir la modificación, siendo útiles en farmacología. Las reversibles se
unen de forma reversible a la enzima, pudiendo clasificarse a su vez, según la forma en que intervienen
en la reacción, en competitivas, acompetitivas y mixtas.

La actividad enzimática no siempre es biológicamente útil. Una actividad incontrolada, por ejemplo de
las proteasas de la coagulación, tendría fatales consecuencias. Por este motivo, la naturaleza ha
desarrollado un gran número de inhibidores enzimáticos que frenan la actividad enzimática o llegan a
anularla por completo. Estos inhibidores enzimáticos naturales están implicados en la regulación del
metabolismo de la célula. Por ejemplo, las enzimas en una ruta metabólica pueden ser inhibidas por
los productos resultantes de sus respectivas rutas (retroalimentación negativa). La inhibición detiene
la ruta bioquímica cuando los productos comienzan a acumularse y es una manera importante de
mantener la homeostasis1 en una célula. Otros inhibidores enzimáticos celulares son proteínas que
se unen específicamente e inhiben una diana enzimática. Esto puede ayudar a controlar enzimas que
pueden ser dañinas para la célula, como las proteasas o nucleasas.
El hecho de que las enzimas catalicen prácticamente todas las reacciones biológicas relevantes otorga
a los inhibidores naturales o sintéticos un destacado valor terapéutico. De acuerdo con estos principios,
es razonable esperar que si se inhibe más allá de ciertos límites la actividad de alguna o algunas
enzimas, las células no puedan sobrevivir. De acuerdo con esto, los inhibidores de enzimas pueden
usarse como agentes farmacodinámicos o quimioterápicos.
El Hg inhibe o estimula algunas enzimas y se acumula, conjuntamente con otros cationes esenciales
para el organismo en los lisosomas (Loumbourdis y Danscher 2008). Debido a su alta afinidad por los
grupos sulfhidrilos (SH) este metal inhibe los puentes disulfuros y causa un cambio en la estructura y
función de las proteínas (Bridges y Zalups 2005, Loumbourdis y Danscher 2008).
Objetivo general:
Determinar cómo varía la acción de la ureasa en urea cuando está presente el inhibidor bicloruro de
mercurio.

Objetivos particulares:
 Estudiar la cinética de la hidrólisis de urea con y sin inhibidor a diferentes concentraciones a
través de mediciones de conductividad.
 Realizar un gráfico de Lineweaver-Burk comparando la acción de la ureasa y del inhibidor.

Materiales, equipo y reactivos

MATERIAL EQUIPO REACTIVOS
1 mortero 1 centrífuga Etanol
10 tubos de ensaye 1 puente de conductividad Frijol de soya
2 vasos de precipitados de 25 digital con celda. Sol. de urea 0.02, 0.016, 0.012,
mL 1 parrilla con agitación 0.008 y 0.004 M
1 vaso de precipitados de 100 magnética
mL
1 vaso de precipitados de 500
mL
2 pipetas graduadas de 0.5 mL
1 pipeta volumétrica de 5 mL
1 soporte universal con pinza

Metodología experimental
a) Homogenización
1.- Triturar 3 g de frijol de soya en un mortero y agregar 50 mL de etanol.
2.- Centrifugar a 2500 rpm por 15 minutos. Mezclar todos los sobrenadantes en un vaso de
precipitados.
b) Conductimetría
3.- Etiquetar 10 tubos de ensaye de 1A – 5A y 1B – 5B.
4.- Agregar en cada tubo solución de urea de diferente concentración como se muestra a continuación:
Tubos 0.02 M (mL) 0.016 M (mL) 0.012 M (mL) 0.008 M (mL) 0.004 M (mL)
1 5 --- --- --- ---
2 --- 5 --- --- ---
3 --- --- 5 --- ---
4 --- --- --- 5 ---
5 --- --- --- --- 5

5.- Preparar un baño de agua a T= 50 °C.

6.- Introducir el tubo 1A al baño de agua con un agitador magnético en el interior y adicionar 0.5 mL
de la solución de ureasa y medir la conductividad cada 15 s por 3 minutos. Repetir este paso para
todos los tubos A.
7.- Introducir el tubo 1B en el baño de agua con un agitador magnético en el interior y adicionar 2 gotas
de HgCl2. 5 segundos después agregar 0.5 mL de solución de ureasa y medir la conductividad cada
15 s por 3 minutos. Repetir este paso para todos los tubos B.