Escuela Profesional de Farmacia y Bioquímica

UNIVERSIDAD PRIVADA AUTONOMA DEL SUR

Curso de Análisis Clínicos
PRÁCTICA 10

Determinación de Urea en Suero

INTRODUCCIÓN

La urea es el producto final más importante del metabolismo proteico, siendo el riñón el respons-
able de la regulación sistémica de los niveles de urea. Constituye la mayor fracción del componente
de nitrógeno no proteico de la sangre. La urea se produce en el hígado y se excreta a través de
los riñones en la orina. Las elevaciones de los niveles séricos de urea pueden interpretarse como
disfunción renal, teniendo siempre en cuenta que dichos niveles se encuentran también relaciona-
dos con la dieta y el metabolismo proteico. Como consecuencia, los niveles circulatorios de urea
dependen de la absorción proteica, del catabolismo de las proteínas y de la función renal. Pueden
aparecer niveles de urea elevados debidos a cambios en la dieta, a enfermedades que empeoren la
función renal, a enfermedades hepáticas, a un fallo cardiaco congestivo, a diabetes y a infecciones.

FUNDAMENTO DEL MÉTODO

La enzima Ureasa desdobla específicamente a la urea de la muestra, produciendo dióxido de car-

bono y amonio. En una segunda reacción los iones de amonio formados reaccionan con el salicilato
y el hipoclorito de sodio en medio alcalino formando un compuesto de color verde (reacción de
Berthelot modificada). El Indofenol formado se puede cuantificar espectrofotométricamente de
580-600 nm. La intensidad del color verde producida es directamente proporcional a la concen-
tración Urea en la muestra cuando es leida a 580 nm.

MUESTRA

Se usa suero o plasma (heparina), que estén libres de hemólisis. La Urea es estable 7 días a una
temperatura entre 2° y 8°C.
PROCEDIMIENTO

1. Colocar en los tubos donde se realizará el ensayo 20ul de la solución de ureasa.

2. Agregar en los tubos 10ul del estándar o muestra, según corresponda.
3. Incubar los tubos a 37°C durante 3 minutos.
4. Agregar a cada tubo 1ml del reactivo salicilato y 1ml de soda/hipoclorito.
5. Homogenizar las mezclas e incubar por 5 minutos a 37°C.
6. Leer las absorvancias en el espectrofotómetro a 580nm.

* Usar como blanco el reactivo de trabajo (todos los reactivos, sin estándar o muestra).

Blanco Estándar Muestra

Muestra ... ... 10 ul
Estándar ... 10 ul ...
Sol. Ureasa 20 ul 20 ul 20 ul
Incubar a 37°C por 3min.
Rvo. Salicicato 1ml 1ml 1ml
Soda/hipoclorito 1ml 1ml 1ml

CÁLCULOS

La concetración del estándar (C p ), del kit provisto, es de 60mg/dl.

1. Medir la absorvancia del tubo que contiene el estándar ( A p ).

2. Obtener con dicha absorvancia, el factor de calibración:

Cp
F= (1)
Ap

3. Medir la absorvancia del tubo que contiene la muestra ( A x ).

4. Calcular la concetración de la muestra:

Cx = F · Ax (2)

VALORES REFERENCIALES

De 7mg/dl a 20mg/dl

RESULTADOS

Absorbancia del estándar: ...............

Absorbancias de la muestra: ...............
Factor de calibración: ...............
Concetración de Urea en suero: ...............

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COMENTARIO

Haga los comentatios acerca de los valores obtenidos:

INVESTIGACIÓN

Esquematice lo mejor posible, desde la producción de amoniaco en las reacciones de desaminación,

hasta la excreción de la Urea.