UNIVERSIDAD AUTÓNOMA METROPOLITANA

UNIDAD XOCHIMILCO
TRONCO COMÚN DIVISIONAL DE C.B.S
PROFESOR: JOSÉ LUIS SÁNCHEZ RÍOS
TITULO
EVALUACION DEL EFECTO DE TRICHODERMA
EN BOTRYTIS CINEREA DE LA HOJA DE FLOR DE
NOCHE BUENA
EQUIPO 4

ESTRADA LOPEZ ARMANDO JAVIER

FUENTES CERDA BRENDA EMILIA
SÁNCHEZ FLORES ANA MARGARITA
VALENCIA TRUJILLO ALDO ROBERTO
GRUPO: BB04B
5 DE DICIEMBRE DE 2017
Objetivos:
Evaluar el efecto de la trichoderma: harzianum, viride y comercial en botrytis
cinerea de hojas de flor de nochebuena, para saber si alguno deellos presenta
alguna ventaja en su desempeño como medio de control biologico.
Justificación:
Es de gran utilidad para la economía de los productores de Noche buena el poder
contar con un producto de control biológico que además de económico sea
efectivo y evite la utilización de pesticidas químicos que pueden ser dañinos para
el medio ambiente e incluso para los seres humanos.
Plan de análisis estadístico:
Estudio transversal de casos y controles en población de Arbustos de noche buena del sol
que presentan Botrytis cinérea tratados con trichoderma Viride y/o trichoderma Harzianum
y los que no son tratados.
Para medir la competencia por sustrato utilizaremos la escala de Bell
ESCALA DE CLASES PARA MEDIR EL GRADO DE ANTAGONISMO

Clases Descripción

1 Trichoderma sobrecrece completamente al patógeno y cubre totalmente la

superficie del medio

2 Trichoderma sobrecrece al menos las dos terceras partes de la superficie del medio

3 Trichoderma y el patógeno colonizan cada uno aproximadamente la mitad de la

superficie del medio (más de un tercio y menos de dos tercios)

4 El patógeno coloniza al menos las dos terceras partes de la superficie del medio y
parece resistir a la invasión por Trichoderma

5 El patógeno sobrecrece completamente al Trichoderma y ocupa la superficie total

del medio

ESCALA DE BELL:
BELL D, WELLS H, MARKHAM C. In vitro antagonism of Trichoderma species against
six fungal plant pathogens. Phytopathol. 1982;72:379-382.
 Resumen
La flor de nochebuena (Euphorbia pulcherrima) es originaria de México, su
demanda en épocas decembrinas y las fuentes de empleo que genera, la
convierten en una especie ornamental de gran importancia económica. En
Xochimilco, Ciudad de México, constituye la fuente de ingresos más importantes
del lugar. Botrytis cinérea es un hongo fitopatógeno capaz de infectar a 235
especies de plantas entre ellas la nochebuena. Trichoderma es un hongo natural
del suelo, saprófito con cualidades hiperparasitarias y antibióticas, utilizados como
control biológico. El propósito de este estudio fue evaluar el tratamiento de Botrytis
cinérea de hojas de flor de nochebuena tratadas con Trichoderma: harzianum,
viride y comercial. En medio de cultivo Aagar Papa Dextrosa se realizaron
siembras duales para enfrentar las cepas correspondientes de Trichoderma contra
Botrytis cinérea, y un grupo control con Botrytis cinérea sin antagonista. Usando
Escala de Bell para medir grado de antagonismo y fórmula de porcentaje de
inibición del crecimiento radial para evaluar efecto antibiótico. Se encuentra que el
63% de las mediciones presentan valor positivo, el 28.8% negativas mientras el
8% cero, lo cual nos indica que el efecto antibiótico del Trichoderma está presente.
La escala de Bell para el 80% de las muestras procedentes de Trichoderma de
vida libre presentan nivel 2, mientras que el 20% correspondientes al Trichoderma
comercial presentan nivel 3. En conclusión, el Trichoderma de vida libre es una
mejor opción como medio de control biológico para el tratamiento de Botrytis en
hojas de flor de noche buena y así evitar el uso de productos químicos dañinos
para el medio ambiente.

Palabras clave: Flor de noche buena (Euphoria pulcherrima), Botrytis cinerea,

Trichoderma, Control biológico, antagonismo, efecto antibiótico.

Marco teórico
La planta de nochebuena pertenece a la Familia Euphorbiaceae y al género
Euphorbia (Shanks, 1980), es originaria de América Central y de México,
específicamente de las regiones montañosas y zonas subtropicales (Conzatti,
1988; Grounds, 1965; Vidalie, 1992). En México, la nochebuena se encuentra en
forma silvestre en la vertiente Oeste de la Sierra Madre Occidental en los estados
de Sinaloa, Nayarit, Jalisco, Colima, Michoacán, Guerrero, Oaxaca y Chiapas
(Martínez, 1995; Mayfield, 1997).
Se caracteriza por su forma de arbusto, presenta grandes hojas alternas o
verticiladas de forma dentada, las cuales son de color verde oscuro (Rodríguez,
1985). Las brácteas son de color rojo, amarillo y de otros colores dependiendo de
la variedad (Grounds, 1965). El tallo es leñoso con ramas vigorosas y cilíndricas.
El ciato es la inflorescencia y está compuesto por flores masculinas, una femenina
y una glándula (Rodríguez, 1985). El fruto es una cápsula trilocular. La semilla
consta de un endospermo grasoso y carnoso (Larson, 1996). Las raíces son
adventicias en plantas comerciales reproducidas a partir de esquejes (Rodríguez,
1985).
IMPORTANCIA ECONÓMICA DE LA NOCHEBUENA
Joel Robert Poinsett, primer embajador de Estados Unidos de América (E.U.A.) en
México, propagó la nochebuena y la introdujo a Carolina del Sur, de donde se
dispersó a diferentes lugares, incluyendo jardines botánicos (Ecke et al., 1990;
Grounds, 1965; Shanks, 1980). A principios del siglo XX, la empresa Ecke empezó
la producción y mejoramiento genético de la nochebuena a partir de las plantas
propagadas en Carolina del Sur, vendió la nochebuena como flor de corte en
California, E.U.A., y en 1923 la producción de la planta se obtuvo a partir de
plántulas previamente seleccionadas con características más atractivas para el
consumidor, las cuales eran de menor tamaño y con mayor ramificación (Ecke et
al., 1990).
A nivel mundial, la nochebuena en maceta presenta una alta demanda en la época
decembrina (Camacho et al., 1989). La planta se ha propagado ampliamente y con
rapidez en los E.U.A., Dinamarca, Finlandia, Islandia, Noruega, Suecia, Gran
Bretaña, Alemania, Francia, Costa Rica, Holanda y México (Vidalie, 1992).
La demanda de nochebuenas y las fuentes de empleo que genera, la convierten
en una de las especies ornamentales de gran importancia económica, a nivel
nacional, los principales estados productores de nochebuena en maceta son
Morelos, Puebla, Michoacán, el Distrito Federal, Jalisco y Oaxaca, con una
producción nacional en promedio de 14.5 millones de plantas, siendo el estado de
Morelos el mayor productor con 5.1 millones de plantas anuales promedio,
representando el 35% de dicha producción nacional, colocándolo como el estado
de mayor producción de nochebuena en el país, (SIACON, 2012).
La producción de planta terminada se vende directamente en los viveros o en las
comercializadoras en la entidad, su mayor comercialización se da entre los meses
de noviembre a diciembre, tiempo en el que florece.
El 90% de la producción y consumo de la nochebuena corresponde a variedades
con brácteas de color rojo, el 5% son de color blanco o amarillo y el resto son de
color rosa, moradas o marmoleadas; todas en diferentes presentaciones
(SAGARPA, 2011).

GENERALIDADES DE BOTRYTIS CINEREA

El género Botrytis constituye un grupo de hongos fitopatógenos ampliamente
distribuido a nivel mundial, en el que se pueden encontrar especies que parasitan
a una sola especie vegetal y una especie, denominada Botrytis cinerea, capaz de
infectar al menos 235 especies de plantas distintas. Es por esta razón que durante
mucho tiempo se pensó que B. cinerea era un hongo no especializado, a
diferencia de las otras especies del género. A modo de ejemplo se menciona que
B. tulipae afecta sólo a los tulipanes, B. squamosa se encuentra solo en los
cultivos de cebolla, B. allii en Allium spp y B. fabae en leguminosas (Elad et al.,
2004).
El gran número de huéspedes, la gran distribución y la importancia de los daños
que ocasiona B. cinerea, justifican el enorme interés que despierta este patógeno,
siendo, desde hace más de 175 años, objeto de numerosos estudios relacionados
con su fisiología, bioquímica, patogenicidad y el control de la enfermedad
(Espinosa de los Monteros, 2006).
Clasificación taxonómica
B. cinerea es el anamorfo de Botryotinia fuckeliana, un hongo ubicuo que causa el
moho gris en muchos cultivos de importancia económica. Su estado sexual ha
sido hallado en muy pocas oportunidades en el mundo (Agrios, 2008)
Cuadro 1. Clasificación taxonómica de Botrytis cinerea y Botryotinia fuckeliana
Fuente: Ten Have, citado por Rivera (2007) 3
Figura X. Vista microscópica de B. cinerea. Bajo el microscopio electrónico (A) y el microscopio electrónico
de barrido (B).
Fuente: Adaptado de: https://www.researchgate.net/figure/200527783_fig2_Figure-2-Microscopic-view-of-B-cinerea-AB-and-S-botryosum-CD-under-

Morfología y ciclo biológico

Botrytis cinerea es un hongo imperfecto con una morfología sencilla (Alexopoulos,
1966) que bajo condiciones ambientales adecuadas para su desarrollo produce
abundante micelio gris formado por numerosas hifas o conidióforos largos y
ramificados, con los conidios en los extremos de las ramas finales de éstos. Los
conidióforos junto con los conidios se asemejan a un racimo de uvas, dándole
origen al nombre de patógeno (Agrios, 2008).
Las hifas que componen el micelio de B. cinerea se encuentran generalmente
tabicados y en forma cilíndrica, multiplicándose por lo general vegetativamente
mediante una división citoplasmática. Sin embargo, es común que tenga lugar una
división nuclear de esos filamentos sin que se haya producido división
citoplasmática, lo que da lugar a hifas cenocíticas con un elevado y variable
número de núcleos (Alexopoulos, 1966).
Los conidióforos son hifas especializadas que tienen la capacidad de producir
esporas o conidios en sus extremos superiores de manera erguida, encontrándose
simples o ramificados (Alexopoulos, 1966). En B. cinerea éstas estructuras
presentan 2 mm de longitud aproximadamente y entre 16 – 30 micras de espesor.
Generalmente los conidióforos se encuentran ramificados, presentando un tallo y
una especie de cabeza constituida por un elevado número de pequeñas ramas
abiertas. Poseen una tonalidad suave y clara, la parte inferior o tallo es de color
marrón claro, tornándose más pálido hacía la zona del ápice con los extremos de
las ramas a menudo bastante incoloro (Commonwealth Mycological Institute,
1976).
Por su parte, los conidios de B. cinerea presentan un tamaño relativamente
grande, pueden encontrarse de forma esférica, oval o limoniforme, con una
tonalidad incolora a marrón pálido o suave. Los mismos una vez formados sobre
los conidióforos se desprenden o liberan y son transportados a diferentes
distancias. Una vez en contacto con un posible huésped las esporas germinan
produciendo hifas, que formaran el nuevo micelio. De esta forma, sobre los
conidióforos se producen nuevamente esporas, repitiéndose el ciclo (Alexopoulos,
1966).
B. cinerea es un hongo pleomórfico que presenta una fase sexual o perfecta y una
fase asexual o imperfecta. En la naturaleza se ha observado en muy pocas
ocasiones esporas sexuales o ascosporas por lo que se supone que esta forma de
reproducción tienen poca importancia en la supervivencia del hongo y en su
capacidad de causar enfermedad en las plantas.
La etapa sexual de Botrytis se forma en órganos infectados solo al final de la
estación de crecimiento de las plantas o bien cuando ha disminuido el suministro
alimenticio de la misma. En esta fase tiene lugar la fecundación de la célula sexual
femenina denominada ascogonio por una pequeña espora sexual masculina
denominada espermacio (Agrios, 2008).
El ascogonio una vez fecundado produce numerosas hifas cuyas células
terminales se desarrollan en un asca. Las ascas son estructuras en forma de saco
que contienen en su interior un determinado número de ascosporas, las cuales
han sido formadas por la fusión de dos núcleos dando origen a un cigoto que sufre
meiosis y forma cuatro núcleos haploides. Posteriormente, la célula en la que esos
núcleos se encuentran, se alarga y los cuatro núcleos se dividen por mitosis
produciendo ocho núcleos haploides, cada núcleo queda rodeado por una porción
de citoplasma y se recubre de una pared formando así una espora dentro de un
asca, o sea, una ascospora. Las ascas se forman en un ascocarpo abierto con
forma de plato o copa denominado apotecio (Agrios, 2008).
En cambio, el estado asexual o imperfecto del hongo se caracteriza por la
proliferación de hifas sobre el sustrato que coloniza, dando lugar a la formación de
micelio, desde donde surgen las estructuras básicas de hongo. Por un lado, los
conidióforos o macroconidióforos en cuyos extremos se desarrollan los conidios,
los cuales puestos en contacto con el sustrato y en condiciones adecuadas
germinan dando lugar a un nuevo micelio. También, a partir de las hifas del
micelio, se pueden originar los microconidióforos que forman los microconidios y
los esclerocios (Espinosa de los Monteros, 2006). Estos últimos son las principales
estructuras de resistencia frente a las condiciones ambientales desfavorables que
presenta B. cinerea, son estructuras resistentes de consistencia dura, que tienen
la capacidad de permanecer latente por largos períodos de tiempo y germinar
cuando se presentan las condiciones favorables (Alexopoulos, 1966).
Los ataques de B. cinerea generalmente se originan por la acción del micelio
desarrollado en tejidos parasitados, los cuales sirven como base alimenticia. Al
existir condiciones ambientales favorables y dependiendo del tejido parasitado, la
incubación de B. cinerea ocurre en pocas horas y rápidamente se producen re-
infecciones debido a que el inoculo secundario (conidios) aparece casi
conjuntamente con el desarrollo de los primeros síntomas. Se trata de una
enfermedad excepcionalmente agresiva con muy breve tiempo de incubación y
una alta tasa de desarrollo (Latorre, 1986).

Cepa Trichoderma viride

Clasificación taxonómica:

Reino: Fungi

Filium: Ascomicetes Orden: Eurotiales

Familia: Hipocreacea

Género: Trichoderma

Especie: Trichoderma viride

Hongo filamento que se distribuye en el suelo, plantas, vegetación muerta y

madera, anaerobio facultativo. Su desarrollo se ve favorecido por la presencia de
altas densidades de raíces, las cuales, son colonizadas rápidamente por estos
microorganismos.

Características Macroscópicas

Las colonias crecen rápidamente y esporulan en 5 días a 30ºC en Agar glucosado

de Sabouraud, Agar papa-dextrosa y Agar malta. Las colonias son algodonosas al
inicio y luego se compactan y esporulan tomando color verde de textura granular
formando parches concéntricos.

Características Microscópicas

Presenta hifas hialinas septadas, conidioforos, fiálides y conidios. Los conidioforos

son hialinos, ramificados y pueden ocasionalmente disponerse en forma piramidal.
Las fiálides son en forma de botella unidas a los conidioforos en ángulo recto. Las
fiálides pueden encontrarse solitarias o en dispuestas en grupo. Las conidias
miden 3 µm de diámetro aproximadamente de forma redonda u ovalada.

Forma de Acción

Es un hongo usado como fungicida biológico, de igual forma es estimulador de

crecimiento en plantas y utilizado como agente de bioremediación ya que degrada
algunos grupos de pesticidas de alta persistencia en el ambiente.

Puede desarrollarse en una amplia gama de sustratos, lo cual facilita su

producción masiva para uso en la agricultura. Su gran tolerancia a condiciones
ambientales extremas y a hábitats donde los hongos causan enfermedad le
permiten ser eficiente agente de control, de igual forma puede sobrevivir en
medios con contenidos significativos de pesticidas y otros químicos. Antagonista
natural de los fitopatógenos Rhizoctonia solani, Fusarium oxysporum, Fusarium
rosseum, Botrytis cinerea, Sclerotium rolfsii, Sclerotinia spp, Phythium spp,
Alternaria spp, Armillaria mellea, Rosellinia sp.
En el micoparasitismo son varias las enzimas producidas por el microorganismo,
las cuales son capaces de hidrolizar las paredes celulares de numerosos hongos.
Estas enzimas incluyen endoquitinasas, proteasas, exoglucan-β-1,3 glucosidasas,
endoglucan-β-1,6 glucosidasas. Estas enzimas son inducidas por los diferentes
polímeros componentes de la pared de distintas estructuras de los hongos diana u
objetivo.

Uso: Se utiliza como biocontrolador y estimulador de crecimiento en el producto

TRIFESOL. El preparado a base de este hongo se presenta en formulación líquida
o sólida conteniendo un mínimo de 1 x 107 conidias por mililitro o por gramo de
producto.

Trichoderma harzianum

Trichoderma” es un hongo microscópico que posee unos metabolitos benéficos

aptos para combatir las enfermedades de las plantas sin dañarlas, sin perjudicar el
medio ambiente y que puede incrementar la producción hasta un 13 por ciento

“Trihoderma” es hongo microscópico que se adapta a cualquier tipo de ambiente,

suelo y cultivo, posee una calidad de proteínas muy amplia, y es capaz de destruir
todos los hongos que atacan a la planta sin dañarla. Es un producto biológico que
funciona como hongo favorecedor de fermentación de microorganismos. Contiene
metabolitos benéficos que estimulan el crecimiento de la planta

La formulación líquida del “Trichoderma” que presentamos puede sustituir a los

actuales pesticidas. “Se puede aplicar mezclada con el agua en el riego de las
plantas, no sólo en su siembra”. Las ventajas de este control biológico de
enfermedades de las platas son múltiples: Mejora la germinación de las semillas,
actúa como protector contra los hongos que atacan las raíces de estas plantas,
estimula la resistencia de la planta, incrementa su crecimiento y la consecuente
producción, y respeta el ambiente con microorganismos benéficos. A diferencia de
los pesticidas, el “Trichoderma” no deja residuos en la tierra y actúa como un
habitante natural del suelo (respetando el sabor más natural de cultivos
comestibles).

El género Trichoderma posee buenas cualidades para el control de enfermedades

en plantas causadas por patógenos fúngicos del suelo, principalmente de los
géneros Phytophthora, Rhizoctonia, Sclerotium, Pythium y Fusarium entre otros.

Las especies de Trichoderma actúan como hiperparásitos competitivos que

producen metabolitos antifúngicos y enzimas hidrolíticas a los que se les atribuyen
los cambios

estructurales a nivel celular, tales como vacuolización, granulación, desintegración

del citoplasma y lisis celular, encontrados en los organismos con los que
interactúa.
Las especies del género Trichoderma son los antagonistas más utilizados para el
control de enfermedades de plantas producidos por hongos, debido a su
ubicuidad, a su facilidad para ser aisladas y cultivadas, a su crecimiento rápido en
un gran número de

sustratos y a que no atacan a plantas superiores (Papavizas et al. 1982).

Los mecanismos por los que las cepas del género Trichoderma desplazan al
fitopatógeno son fundamentalmente de tres tipos. Competición directa por el
espacio o por los nutrientes (Elad & Baker 1985, Elad & Chet 1987, Chet & Ibar
1994, Belanger et al. 1995), producción de metabolitos antibióticos, ya sean de
naturaleza volátil o no volátil (Chet et al. 1997, Sid Ahmed et al. 2000, Sid Ahmed
et al. 2003) y parasitismo directo de determinadas especies de Trichoderma sobre
los hongos fitopatógenos (Yedidia et al. 1999, Ezziyyani et al. 2003).

La presentación que comercializamos es en viales de 50cc, aptos hasta

inocularlos hasta 300 plantas. Para viveros se pueden preparar presentaciones
para 1000 plantones.

MECANISMOS DE ACCION DE TRICHODERMA


Los mecanismos por los que las cepas del género Trichoderma desplazan al
fitopatógeno son fundamentalmente de tres tipos. Competición directa por el
espacio o por los nutrientes (Elad & Baker 1985, Elad & Chet 1978, Chet & Ibar
1994, Belanger et al. 1995), producciónion de metabolitos antibioticos, ya sean de
naturaleza volátil o no volátil (Chet et al. 1997, Sid Ahmed et al. 2003) y
parasitismo directo de determinadas especies de trichoderma sobre los hongos
fitopatógenos (Yedidia et al. 1999, Ezziyyani et al. 2003).

La competencia constituye un mecanismo de antagonismo muy importante. Se

refiere al comportamiento diferente de dos o mas organismos ante el requerimento
de sustrato o nutrientes, siempre y cuando la utilización de estos por uno de los
organismos reduzca la cantidad o espacio disponibles para los demas. Este tipo
de antagonismo se fomenta por las caracteristicas del agente control biologico
como plasticidad ecologica, velocidad de crecimiento y desarrollo, y por otro lado
por factores externos como tipo de suelo, pH, temperatura, humedad, entre otros.

El microparasitismo se considera como el mecanismo de acción mas importante,

debido a que en este proceso esta invomucrada la produccion de enzimas liticas.
En el microparasitismo la hifa de Trichoderma entra en contacto con la hifa del
hongo patogeno y comienza un crecimiento alrededor de la hifa, y por accion
enzimatica comienza la degradación de la hifa del patógeno; después sucede la
penetracion por parte del hongo antagonista, causando degradación celular,
rompimiento hifal y destrucción total de la hifa del patógeno.

Antibiosis. Trichoderma tiene la capacidad de producir compuestos organicos

volatiles como 2-propanona, 2-metil-1-butanol, heptanal, octanal, nonanal y
decanal. La actividad antibiotica como tal se refiere a los compuesto no volatiles,
en los cuales esta un gran numero de compuestos de importancia en la actividad
biorraguladora de patógenos, algunos de ellos son harzianolida, alameticina,
tricolina, viridina, gliovirina, gliotoxina, pirona, isonitrina, trichodermina, suzucalina
y trichorzianina. Todos estos compuestos cumplen un papel importante inhibiendo
el crecimiento y desarrollo de microorganismos patogenos. La combinacion de
enzimas liticas y antibioticos resulta tener un alto nivel de antagonismo frente a
organismos patogenos.

Danay, I. (2008) Trichoderma Mechanisms of action against phytopatogen dungi,

Dpto. Fitopatologia, Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria (CENSA). Apartado
10, San jose de las Laja, La Habana, Cuba.

Asociaciones ecológicas

· Simbiótica:los organismos viven en relaciones nutricionales cercanas; requerida

por uno de ambos miembros.

· Mutualismo: obligatorio, dependiente; ambos miembros se benefician.

· Comensalismo: se beneficia el miembro comensal, aunque el otro miembro no se

daña.

· Parasitismo: el parásito es dependiente y se beneficia; el huésped no se daña.

· No simbiótica: los organismos viven libres; no se requieren relaciones para la

supervivencia.

· Sinergismo: los miembros cooperan y comparten nutrientes.

· Antagonismo: algunos miembros inhiben o destruyen a otros.

Interacciones antagónicas

Cualquier efecto inhibitorio de un organismo, creado por cualquier vía a otro

organismo.
· Se usa en el control biológico de patógenos de plantas

· Los agentes antagónicos no son patógenos específicos

· Relación parásita verdadera con el huésped microbiano

· Los mecanismos no son mutuamente exclusivos

Mecanismos de antagonismo

· Amensalismo: inhibición o destrucción de un organismo por un metabolito

producido por otro organismo (por ejemplo antibióticos, compuestos volátiles,
enzimas, etc.)

Competencia

· Dos o más organismos tratando de utilizar los mismos nutrientes, o bien de

ocupar el mismo nicho o sitio de infección.

Parasitismo

· Depredación o parasitismo: atacar y alimentarse directamente del organismo

blanco o del agente de biocontrolpuede producir algún tipo de

toxina que ocasiona la muerte del organismo blanco; después, el agente de

biocontrolse alimenta de él.

· Hiperparásitos: Parasitismo en el que un parásito secundario parasita un parásito

previamente existente (primario) en un huésped.

· Micoparásitos: Hongo que parasita a otro hongo; las formas necrótrofas matan al
huésped o parte de él, en tanto que las formas biótrofas causan poco daño o
ninguno al huésped.
METODOLOGÍA
Para llevar a cabo la práctica es necesario tener contemplados varios aspectos
como lo son:
-Materiales y mesa de trabajo en perfecto orden y limpieza.
-Utilización de bata, guantes y cubrebocas.
-Entender perfectamente la metodología de la práctica para obtener resultados y
conclusiones adecuadas y verídicas (una forma para evitar el olvido de algún rubro
es mediante la realización de una bitácora, en la que por cada sesión se escribirá
el nombre de la práctica a realizar; precauciones; materiales; metodología y así,
también, alguna recomendación).
PRIMERA SESIÓN: Sembrado en PDA
1. Esterilización: esterilización de área de trabajo:
En este paso se limpio el área de trabajo con jabón y la solución de
hipoclorito de sodio al 10% y de esta manera quedo totalmente estéril.
2. Se procedió a encender el mechero para de esta manera proceder
con los cultivos de la muestra ya que se debe trabajar dentro de una
zona estéril que abarca una área de 20 cm de diámetro alrededor de
la flama del mechero.
3. Se procedió a cultivar las muestra de Bortitrys cinérea se realizaron
por 2 de cada uno. La manera de cultivar las muestras fue la
siguiente: se corto con una hoja de bisturí un pedazo del Bortitrys de
la hoja de noche buena y se sembró en una caja de Petri con PDA
se pusieron 3 pedazos de la hoja de noche buena con botrytis en
cada caja. Cada agar se selló con un pedazo de masking y se
etiquetó con los datos solicitados. Las muestras se llevaron a la
estufa para dejarlas incubar a 37° C durante 24 horas.
4. Así también se sembraron las diferentes tipos de Tichoderma
comenzando con T. harzianum de igual manera que con la hoja de
noche buena se corto un trozo de trichoderma con el bisturí y se
sembró en la caja de PDA y todos se hicieron por duplicado,
después se realizo el mismo procedimiento con las demás
trichoderma viridae, harzianum michoacan, harzianum colima. Cada
agar se selló con un pedazo de masking y se etiquetó con los datos
solicitados. Las muestras se llevaron a la estufa para dejarlas
incubar a 37° C durante 24 horas.
5. El trichoderma comercial se sembró primero con una dilución con
agua estéril y se procedió a sembrar en el PDA y en la segunda
muestra se sembró directo como viene el producto. Cada agar se
selló con un pedazo de masking y se etiquetó con los datos
solicitados. Las muestras se llevaron a la estufa para dejarlas
incubar a 37° C durante 24 horas.
6. Después de 24 horas se revisaron pero no hubo mucha evolución así
que se dejaron por mas días para que crecieran y después de 4 días
se vio una evolución en el crecimiento, pero aun no era suficiente así
que se dejo en la estufa por otros 2 días mas y estos últimos días
fueron muy buenos por que ahora si la evolución y el crecimiento fue
mayor permitiendo la resiembra con la técnica dual.

DIA 1

DIA 4
SEGUNDA SESION: resembrada técnica dual.
1. Esterilización: esterilización de área de trabajo:
En este paso se limpió el área de trabajo con jabón y la solución de
hipoclorito d de sodio al 10% y de esta manera
quedo totalmente estéril.
2. Se procedió a encender el mechero para de esta manera proceder con los
cultivos de la muestra ya que se debe trabajar dentro de una zona estéril
que abarca una área de 20 cm de diámetro alrededor de la flama del
mechero.
3. Se procedio a resembrar con la técnica dual de acuerdo al diseño
experimental planteado y se realizo 5 repeticiones de cada una de las
técnicas duales.
4. Se realizo una plantilla para poder marcar donde se iba a resembrar botritys
y donde se iba a resembrar la trichoderma con la cual se enfrentaría y se
marcaron las cjas con PDA a una distancia de 2 cm del borde de la caja se
etiquetaron y se procedio a resembrar.
5. Para resembrar con el bisturí se procedió acortar botitrys y se resembro
junto con la trichoderma que también se corto con el bisturí y así se hiso
con las demás trichodermas resembrándolos con la técnica dual vs botritys
de la flor de noche buena. Cada agar se selló con un pedazo de masking y
se etiquetó con los datos solicitados. Las muestras se llevaron a la estufa
para dejarlas incubar a 37° C durante 24 horas. Para ver su evolución.
Después de 48 horas se procedió a revisar cada caja de Petri y de esta manera
comenzamos a medir el diámetro de botrytis para de esta manera tener los
resultados y así poder calcular el porcentaje de inhibición, se midió con una regla
metálica milimétrica el diámetro de cada uno de las cajas de Petri durante 6 días
que fue cuando ya la trichoderma tenía cubierta toda la caja.
Mediciones segundo día

Botrytis cinérea vs Trichoderma harzianum Botrytis cinérea vs Trichoderma harzianum

Colima

Placa Enfrentamiento Control Placa Enfrentamiento Control

1 1.2 cm 1.5 cm 1 1.5 cm 1.5 cm

2 0.7 cm 1.5 cm 2 1.5 cm 1.5 cm

3 1.5 cm 1.0 cm 3 1.2 cm 1.0 cm

4 1 cm 1.0 cm 4 1.0 cm 1.0 cm

5 1.1 cm 1.0 cm 5 1.0 cm 1.0 cm

Botrytis cinérea vs Trichoderma harzianum Mich Botrytis cinérea vs Trichoderma viridae

Placa Enfrentamiento Control Placa Enfrentamiento Control

1 1.7 cm 1.5 cm 1 1.9 cm 1.5 cm

2 1.8 cm 1.5 cm 2 1.8 cm 1.5 cm

3 1.7 cm 1.0 cm 3 1.9 cm 1.0 cm

4 1.3 cm 1.0 cm 4 1.8 cm 1.0 cm

5 1.6 cm 1.0 cm 5 1.8 cm 1.0 cm

Placa Enfrentamiento Control

1 1.0 cm 1.5 cm

2 0.8 cm 1.5 cm

3 1.0 cm 1.0 cm
 4 1.0 cm 1.0 cm

5 1.1 cm 1.0 cm
Botrytis cinérea vs Trichoderma Comercial

Al realizar la medición al siguiente día de la siembra dual se pudo observar un

ligero crecimiento del hongo fitopatogeno conservando su color café y el hongo
antagonista conservo un color marrón claro y un crecimiento ligero.

Mediciones tercer día

Botrytis cinérea vs Trichoderma harzianum Botrytis cinérea vs Tricho.. Harzianum Colima

Placa Enfrentamiento Control Placa Enfrentamiento Control

1 2.4 cm 2.8 cm 1 2.3 cm 2.8 cm

2 1.6 cm 2.1 cm 2 2.3 cm 2.1 cm

3 2.6 cm 2.2 cm 3 2.4 cm 2.2 cm

4 1.7 cm 1.8 cm 4 1.1 cm 1.8 cm

5 2.1 cm 1.8 cm 5 1.8 cm 1.8 cm

Botrytis cinérea vs Trichoderma harzianum Mich Botrytis cinérea vs Trichoderma viridae

Placa Enfrentamiento Control Placa Enfrentamiento Control

1 2.7 cm 2.8 cm 1 2.6 cm 2.8 cm

2 2.9 cm 2.1 cm 2 2.8 cm 2.1 cm

3 2.4 cm 2.2 cm 3 2.9 cm 2.2 cm

4 2.0 cm 1.8 cm 4 2.5 cm 1.8 cm

5 2.4 cm 1.8 cm 5 2.7 cm 1.8 cm

Botrytis cinérea vs Trichoderma Comercial

Placa Enfrentamiento Control

1 1.8 cm 2.8 cm

2 1.8 cm 2.1 cm

3 1.8 cm 2.2 cm

4 1.8 cm 1.8 cm

5 2.5 cm 1.8 cm

En el tercer dia de medición y observación se pudieron notar las hifas en la luz del sol, en el
Trichoderma comercial no se ve el mismo crecimiento que las cepas de Trichoderma viride y
harzianum. El fitopatogeno se observa de un color marron.
Mediciones cuarto día

Botrytis cinérea vs Trichoderma harzianum

Placa Enfrentamiento Control Placa Enfrentamiento Control

1 2.4 cm 3.9 cm 1 2.5 cm 3.9 cm

2 2.8 cm 2.9 cm 2 3.6 cm 2.9 cm

3 3.1 cm 2.9 cm 3 3.1 cm 2.9 cm

4 2.2 cm 3.2 cm 4 2.1 cm 3.2 cm

5 2.9 cm 3.7 cm 5 2.6 cm 3.7 cm

Botrytis cinérea vs Tricho. harzianum Colima

Botrytis cinérea vs Trichoderma harzianum Mich Botrytis cinérea vs Trichoderma viridae

Placa Enfrentamiento Control Placa Enfrentamiento Control

1 3.7 cm 3.9 cm 1 3.6 cm 3.9 cm

2 3.6 cm 2.9 cm 2 3.7 cm 2.9 cm

3 3.6 cm 2.9 cm 3 3.9 cm 2.9 cm

4 2.7 cm 3.2 cm 4 3.6 cm 3.2 cm

5 2.8 cm 3.7 cm 5 3.8 cm 3.7 cm

Placa Enfrentamiento Control

1 3.0 cm 3.9 cm

2 2.8 cm 2.9 cm

3 3.8 cm 2.9 cm

4 2.6 cm 3.2 cm

5 3.8 cm 3.7 cm

Botrytis cinérea vs Trichoderma Comercial

En el cuarto dia se pudo observar en la mayoría de los tipos de trichoderma una gran expansión
de las hifas con un color verde muy tenue y una textura algodonosa de aproximadamente tres
cuartas partes de la caja, hasta este momento el trichoderma comercial ha tenido un crecimiento
muy lento a comparación de los otros tipos de trichoderma. El fitopatogeno conserva su color
marrón y un aspecto sólido.

Mediciones quinto día

Botrytis cinérea vs Trichoderma harzianum

Placa Enfrentamiento Control Placa Enfrentamiento Control

1 2.7 cm 5.0 cm 1 2.6 cm 5.0 cm

2 4.0 cm 4.5 cm 2 4.0 cm 4.5 cm

3 3.3 cm 4.9 cm 3 3.3 cm 4.9 cm

4 2.5 cm 4.5 cm 4 2.5 cm 4.5 cm

5 3.0 cm 6.5 5 3.0 cm 6.5 cm

Botrytis cinérea vs Tricho. harzianum Colima

Botrytis cinérea vs Trichoderma harzianum Mich Botrytis cinérea vs Trichoderma viridae

Placa Enfrentamiento Control Placa Enfrentamiento Control

1 3.8 cm 5.0 cm 1 3.6 cm 5.0 cm

2 3.4 cm 4.5 cm 2 3.9 cm 4.5 cm

3 3.7 4.9 cm 3 4.0 cm 4.9 cm

4 2.7 4.5 cm 4 3.6 cm 4.5 cm

5 2.8 6.5 5 3.9 cm 6.5 cm

Placa Enfrentamiento Control

1 4.1 cm 5.0 cm

2 4.1 cm 4.5 cm

3 4.1 cm 4.9 cm

4 4.0 cm 4.5 cm

5 5.7 cm 6.5 cm

Botrytis cinérea vs Trichoderma Comercial

En este momento el hongo antagonista ya ha ocupado el total de la caja que de

acuerdo a la escala de Bell tiene grado 1 de capacidad antagónica a excepción
del Trichoderma comercial que tiene una textura muy sólida y de color café oscuro
ocupando solo la mitad de la caja. El fitopatogeno tenía un color gris y un contorno
verde, con una textura algodonosa.
Medicines sexto día

Botrytis cinérea vs Trichoderma harzianum

Placa Enfrentamiento Control Placa Enfrentamiento Control

1 2.9 cm 5.4 1 2.8 cm 5.4

2 4.0 cm 5.1 2 4.2 cm 5.1

3 3.5 5.5 3 3.7 cm 5.5

4 2.8 4.9 4 2.6 cm 4.9

5 3.0 7.1 5 2.9 cm 7.1

Botrytis cinérea vs Tricho. harzianum Colima

Botrytis cinérea vs Trichoderma harzianum Mich Botrytis cinérea vs Trichoderma viridae

Placa Enfrentamiento Control Placa Enfrentamiento Control

1 3.9 cm 5.4 1 3.7 cm 5.4

2 3.5 cm 5.1 2 4.0 cm 5.1

3 3.9 cm 5.5 3 4.0 cm 5.5

4 2.8 cm 4.9 4 3.7 cm 4.9

5 3.0 7.1 5 4.0 cm 7.1

Botrytis cinérea vs Trichoderma Comercial

Placa Enfrentamiento Control

1 4.2 5.4

2 4.4 5.1

3 4.3 5.5

4 4.2 4.9

5 5.7 cm 7.1
En este día no se observaron grandes diferencias a comparación del dia anterior,
las hifas de los trichoderma tuvieron un color verde un poco mas intenso y el
trichoderma comercial colonizo la mitad de la superficie del medio de cultivo. El
fitopatogeno tiene un color gris y un contorno verde y una textura esponjosa.
Resultados
Con los correspondientes datos se llevaron a cabo las estadísticas, asi como el
porcentaje de inhibición y resultados finales.
porcentaje de inhibición obtenido a tyraves de la formula utilizada por skidmore y
dickinson (1976) donde PIC=[(c1-c2)/c1]*100 donde c1= es diámetro del testigo
(fitopatogeno sin antagonista) y c2= diámetro del fitopatogeno en los tratamientos
en cultivo dual.

80

70

60

50

40

30

20

10

0
% INHIBICION TH % INHIBICION THC %INHIBICION TV % INHIBICION THM % INHIBICION TC
Obtención de áreas bajo la curva por caja con la formula (Y2+Y1)/2*(X2-X1)
Y2+Y1: porcentajes de inhibición de la caja.
X2-X1: tiempo en que se realizaron las mediciones (hrs)
Con estos datos trataremos de comprobar si Trichoderma comercial o cualquier de
la demás Trichodermas logra mayor inhibición de B.cinerea.
Prueba de T de student para muestras independientes con varianzas iguales.

Ho: u1= u2
Ha: u1≄ u2
u= porcentaje de inhibición de cada tratamiento
INTERPETRACION
Al obtener nuestras T calculadas dentro de nuestra zona de aceptación
considerando un nivel de significancia 𝜶= 0.05 junto con un nivel de confianza del
95% aceptamos nuestra hipótesis nula la cual expresa la igualdad entre
porcentajes de inhibición de los tratamientos, esto quiere decir que sus efectos
antagónicos son iguales para los 5 tipos de Trichoderma ya que se logra una
adecua inhibición de B. cinérea.
Prueba ANOVA (análisis de varianza)
La prueba de ANOVA se realizo con las siguientes tablas de datos
Se observa el HSD la hipótesis nula se rechaza ya que se ve que si existen
diferencias y esto se ve claro que cuando se enfrenta los Trichocderma con el
control el que tiene mayor poder de inhibición es el Trichoderma de colima
mientras que se ve que no hay diferencias significativas entre el THM vs TH,THM
vs TV, THM vs TC, THC vs TH y TV VS TC ya que su poder de inhibición es igual.

0
48 72 96 120 144

THC CONTROL

Se da a conocer el crecimiento de B. cinérea en la técnica dual (trichoderma

Harzianum colima) comparado con el grupo control, el cual tiene un desarrollo
mayor debido a que en el cultivo no se encuentra con el antagonista.
Conclusión
En conclusión, el Trichoderma es una mejor opción como medio de control
biológico para el tratamiento de Botrytis en hojas de flor de noche buena y así
evitar el uso de productos químicos dañinos para el medio ambiente.
Con base en los resultados estadísticos se comprobó que las cepas de
Trichoderma mostraron capacidad antagónica al inhibir el crecimiento de Botrytis
cinérea.

Discusión
Los resultados obtenidos muestran que es posible manejar el problema del hongo
en la hoja de nochebuena de interior mediante la inoculación de cepas de
Trichoderma, sin recurrir al uso de productos químicos. Las cuatro cepas de vida
libre evaluadas podrían ser cultivadas por los agricultores con la debida
capacitación, mientras que el Trichoderma comercial puede obtenerse sin
problemas en las empresas que distribuyen agroquímicos localmente y la facilidad
de su aplicación hace viable su utilización a nivel comercial. El uso indiscriminado
de agroquímicos es una práctica común en los viveros de producción de
nochebuena de interior (García, 2008); ésta práctica se ve agravada por el hecho
de que las plantas se producen en ambientes cerrados o semicerrados y porque la
mayoría de las zonas productoras se ubican en áreas urbanas o periurbanas. El
uso de agentes de biocontrol en el manejo de diversas enfermedades de plantas,
así como otras estrategias bioracionales como el uso de extractos botánicos para
el control de plagas, son alternativas que deben explorarse para reducir los
riesgos del uso de agroquímicos en la salud humana y en los ecosistemas. En
este sentido, la utilización de Trichoderma spp., en el manejo de enfermedades
que atacan a las raíces de las plantas se ha documentado con amplitud (Harman,
2000; Harman et al., 2004). A pesar de que en los últimos años se ha
incrementado el número de agentes biológicos de control disponibles en el
mercado, éstos sólo representan 0.02% (Paulitz, 2001) al 1% (Fravel, 2005) de las
ventas totales a nivel mundial, en comparación con los agroquímicos.

Trichoderma ssp se ha caracterizado por ser un hongo muy útil para el control
biológico en el ámbito agrícola. Thichoderma ssp posee una diversidad de
mecanismos que la ayudan a la planta a liberarse de Fito patógenos y permitiendo
un desarrollo adecuado. Este hongo crece rápidamente, produce una alta cantidad
de conidias y poseen una gran gama de enzimas que le permiten adaptarse a
cualquier suelo demostrando una gran plasticidad ecológica. Al ser un hongo
principalmente de suelo se suele relacionar con fitopatogenos provenientes del
mismo, pero Trichoderma ssp puede actuar en otras partes de la planta por
ejemplo puede combatir enfermedades foliares.

La investigación realizada nos permitió demostrar que las cepas de Trichoderma

utilizadas pudieron inhibir el crecimiento de B. cinérea, habiendo pequeñas
diferencias entre los tratamientos. El uso de Trichoderma como control biológico
presenta ventajas ya que en cuanto a costo es mas económico y ya que el hongo
por naturaleza propia ayuda a descomponer varios sustratos y a devolverlos paras
que sean mas asimilables para las plantas. Los plaguicidas pueden tener efectos
nocivos para la salud no solo de la planta si no del hombre y de toda la flora y
fauna de alrededor.