UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO

VILLARREAL

FACULTAD CIENCIAS NATURALES Y MATEMÁTICA

ESCUELA DE BIOLOGÍA

LABORATORIO DE EMBRIOLOGÍA

Practica n°2

FECUNDACION in vitro DEL ERIZO DE MAR

(Tetrapigus niger)

Integrantes

 Bolívar Quispe Sara

 Enrique Marín Elaine
 Marco teórico

Fecundación

La fecundación es un proceso biológico que se caracteriza por la unión de dos

células, el gameto masculino y el femenino, que a su vez generan la primera

célula de un nuevo individuo.

Hay que tener en cuenta que la fusión de dos células (un ovocito y un

espermatozoide) produce una célula distinta, llamada cigoto. La fecundación

implica, por lo tanto, el inicio de una nueva vida.

En la mayoría los organismos marinos la fecundación es “externa”, es decir, los

gametos son liberados al ambiente y la unión de estas células se realiza en el

mar. Por ser un proceso de fecundación externa, las especies presentan algunos

mecanismos para reconocer los gametos de la misma especie, en este caso los

ovocitos, poseen una capa de gelatina que reconoce e interactúa sólo con los

espermatozoides de erizos negros.

Fecundación externa y proceso de fecundación

En animales con fecundación externa, como el erizo de mar, los

espermatozoides son liberados al agua. Allí habrá gametos de muchas especies,

y la fecundación tiene que ser entre la misma. Se ha descubierto que en la

cubierta gelatinosa del óvulo hay sustancias atrayentes.

Cuando el espermatozoide se pone en contacto con los péptidos atrayentes

adquiere movilidad, y también se activan sus procesos de respiración. En las

envueltas del óvulo hay Otro polisacárido con restos de sulfato de mucosa que, al

ponerse en contacto con el espermatozoide, activa la reacción acrosómica. En

ese momento aumenta la concentración de calcio intracelular y las bombas de

hidrógeno en la membrana del espermatozoide. Al final, aumenta el pH

intracelular y como resultado el acrosoma se funde con la membrana plasmática

del espermatozoide.

Una vez atravesada la cubierta gelatinosa, y al ponerse en contacto con la

cubierta vitelina, se produce la reacción específica óvulo-espermatozoide.

Esta se produce porque en el exterior del espermatozoide han quedado

expuestas una serie de moléculas de tipo badina, y en la cubierta vitelina del

óvulo hay receptores específicos para ella.

Después se produce la fusión de membranas del óvulo y espermatozoide. En

el momento en el que se produce la primera fusión, se pone en marcha la

inhibición de la polispermia. Para ello se desencadenan una serie de

mecanismos de inhibición: mediante la inhibición rápida, la membrana se

despolariza, de forma que, si había espermatozoides unidos a ella, se sueltan.

Por otro lado, en la inhibición lenta se produce una reacción cortical mediante la

cual los gránulos corticales vierten fuera su contenido y la cubierta vitelina se

endurece: es la membrana de fecundación.

La siguiente fase es la fusión de los pronúcleos: el núcleo y el centriolo del

espermatozoide se encuentran en el interior del óvulo. La membrana del

pronúcleo masculino se desintegra y, al quedar su cromatina en contacto con el

citoplasma del óvulo, se acaba descondensando y se forma una nueva envuelta

nuclear alrededor de la cromatina. El centriolo del gameto masculino va a

funcionar como centro organizador de microtúbulos, que van acercando a los dos

pronúcleos hacia el centro de la célula, los pone en contacto y estos se fusionan

en un solo núcleo. La célula ahora es diploide y se llama zigoto.

A la vez que se inhibe la polispermia y se fusionan los pronúcleos, también se

produce la activación del metabolismo del óvulo:

– Aumenta la síntesis de proteínas: histonas, tubulinas, actina necesarias para

los pasos sucesivos en el desarrollo del embrión.

– Aumenta la síntesis de lípidos, fundamentalmente fosfolípidos, necesarios

para la formación de membranas en la segmentación.

–Aumenta la síntesis de ADN.

–Aumenta el consumo de oxígeno.

– Se produce una reorganización del citoplasma.

III. MATERIALES
- Placa Petri

Fig1 (https://www.tplaboratorioquimico.com/laboratorio-quimico/materiales-e-instrumentos-de-un-laboratorio-quimico/placa-de-
petri.html )

- Pipeta

Fig.2 (http://instrumentosdelaboratorio.org/pipeta )
-Bagueta hipodermica de 1 ML

Fig.3 (http://www.medicalexpo.es/prod/bd/product-71022-619765.html#product-item_619653 )

- Solución de KCL al 0.5M :

Fig.4 (http://enfermeria.pisa.com.mx/administracion-segura-de-cloruro-de-potasio-a-los-
pacientes/)

- Agua de mar limpia

Fig.5 (http://www.vidanaturalia.com/beneficios-del-agua-de-mar-como-tomar-agua-de-mar/)
- Portaobjetos y cubreobjetos

Fig.6 (http://www.metrixlab.mx/categoria-producto/material_general/portaobjetos-y-
cubreobjetos/)
 - Gotero

Fig.7 (http://www.fullquimica.com/2014/ 03/gotero-de-laboratorio.html)

- Materiales de disección

Fig.8
(https://es.vwr.com/store/search;jsessionid=tWyGRiNStQKbRUbuLpBV2645.estore6b?&pi
mId=553082)
-Erizo de mar

Fig.9
(https://ecocost.webs.uvigo.es/images/pdf/Gui%C3%B3n%201%20Reproducci%C3%B3n%20erizo
%20de%20mar.pdf)
IV PROCEDIMIENTO
OBTENCION DE GAMETOS
- METODO 1
1- Antes de realizar la práctica de laboratorio es precioso esterilizar todos los objetos,
utensilios punzo cortantes.
Se obtuvieron los erizos de mar (playa Ancón), manteniéndolos vivos en un balde con agua
de mar , de los cuales no todos sobrevivieron , a los dos que sobrevivieron macho y
hembra ,ambos lo invertimos con la zonal oral hacia arriba , hemos elegido el “estímulo
químico”, que consiste en aplicar una solución de Kcl (cloruro de potasio) al 0,5 M .

Fig.10 inyectando kcl

2. Procedimos a sacudir suavemente para que la solución de KCL haga mayor efecto y esperamos
la salida de los gametos ya que no es posible distinguir si es hembra o macho. Esperamos por unos
3-4 minutos. Como resultado obtuvimos que era hembra debido a que liberaba un líquido rojizo-
tierra.

Fig.11 erizo estimulado después de 3 a 4 minutos

3. Una vez obtenidos los ovocitos se procedió con la ayuda de la pipeta sacar una muestra
vertiéndola sobre el portaobjetos, y con una inclinación de 45 grados se colocó la porta objeto.
Finalmente se llevó al microscopio y se pudo visualizar a los ovocitos del erizo. Graduando primero
con ayuda de los tornillos a 10x, hasta 40X.

Fig.12 ganadas del erizo

METODO 2

1- Este procedimiento se realiza cuando los erizos están muertos, en este caso 2 erizos.

se procedió a limpiar el área externa del cuerpo del erizo de cualquier fragmento ,
seguidamente se procedió a retirar todas las púas del erizo con ayuda de los objetos de
disección , cortándolas todas en lo más mínimo , seguidamente se realizó un corte
transversalmente en el caparazón por la zona cortical en la parte ecuatorial del cuerpo del
erizo , obteniendo 2 mitades: el aboral y el ventral ,donde se encuentraron las gónadas en
sus respectivas masas genitales de color crema- anaranjado para los machos y rojo vinoso
para las hembras.

Fig.13 corte transversal del erizo

2. Se procedió a retirar las gónadas de ambos erizos macho y hembra, testículos y ovarios,
con ayuda de una pinza, sobre la placa Petri a la cual se vertió agua de mar y se colocó en
ambas placas Petri con agua de mar, las gónadas respectivas, finalmente con ayuda de un
removedor se presionaron las gónadas suavemente para que liberen a los ovocitos y los
espermatozoides.

Fig.14

Fig.15

Fig.14 y 15 (testículos del erizo)

Fig.16

Fig.17

Fig.16 y fig.17 (ovarios de erizo hembra)

Fig.18 fig.19

Fig. 20(fig.18, 19 ovarios y testículos .fig20 presionando la muestra)