BAB III

METODE PENELITIAN

3.1 Jenis Penelitian

Penilitian ini merupakan penelitian yang dilakukan didalam laboratorium

Universitas Yarsi menggunakan teknik in vitro. Variabel bebas penelitian
merupakan PRP. Variabel terkait adalah viabilitas sel.

3.2 Rancangan Penelitian

Penelitian ini menggunakan 3 variasi dosis PRP yaitu; 2,5%, 5%, 10% dan 3
dosis PPP yaitu; 2,5%, 5%, 10% kemudian viabilitas sel dihitung
menggunakan MTT assay .

3.3 Populasi

Mesenchymal Progenitor Cell

3.4 Sampel

Sel MPC yang berasal dari biorespiratory Universitas YARSI

3.5 Cara Penetapan Sampel

Sel MPC ditanam dengan kepadatan 10.000/cm2

3.6 Penetapan Besar Sampel

Sebanyak 20.000 sel/sumuran dengan pada multiple 96 well.

3.7 Jenis Data

Kualitatif : Morfologi sel.

Kuantitatif : Jumlah dan persentase sel yang dapat bertahan hidup.

12
3.8 Cara Pengumpulan dan Pengukuran Data
a. Persiapan Platelet-Rich Plasma dengan mensentrifugasi darah vena
sebanyak 10 ml selama 7 menit dengan kecepatan 1500 rpm (putaran
lambat).
b. Platelet-Rich Plasma di sentrifugasi selama 10 menit dengan kecepatan
4800rpm.
c. Kemudian PRP dipanaskan dengan suhu 45C dalam waktu 30 menit
d. Setelah itu sel MPC diberikan DMSO dan diinkubasi selama 24jam
e. Selanjutnya sel MPC dicuci menggunakan PBS dan diberikan perlakuan
bervariasi dan ditambahkan dengan MTT.
f. Setelah diberikan MTT, sel MPC diperiksa dengan melihat bentukan
Kristal formazan dan dihitung viabilitasnya menggunakan microplate
reader.

Kelompok perlakuan :
1) Kontrol dengan serum
2) Kontrol tanpa serum
3) Perlakuan dosis PRP 2,5%
4) Perlakuan dosis PRP 5%
5) Perlakuan dosis PRP 10%
6) Perlakuan dosis PPP 2,5%
7) Perlakuan dosis PPP 5%
8) Perlakuan dosis PPP 10%

13
3.9 Instrumen Pengumpulan Data

Menggunakan mikroskop dan hemasitometer.

3.10 Analisis Data

Data yang diperoleh untuk viabilitas berupa jumlah sel yang dilihat dari
mikroskop pada teknik eksklusi pewarnaan trypan blue, untuk masing-masing
sampel dapat dianalisa lebih lanjut secara kunatitatif dengan menggunakan
Microsoft Excel.

14
 3.11 Alur Penelitian

Darah MPC

Thawing
Sentrifugasi

Tanam pada
well plate
Pemisahan
komponen Platelet
Diberikan
DMSO
PRP
Tanam pada 96
well plate
dipanaskan

Inkubasi selama 24 jam

Isi pada medium dibuang,

dicuci dengan PBS,
tambahkan MTT

Hitung jumlah sel yang

hidup dan yang mati Analisis data dengan
dengan menggunakan microplate reader
mikroskop

Skema 3.1 Alur Penelitian

15
Cara Kerja
Bahan :
1. Peripheral Blood Mononuclear Cell (PBMC)
2. DMEM (Dulbecco’s Modified Eagle Medium)
3. FBS (Fetal Bovine Serum)
4. PBS (Phospate Buffered Saline)
5. Penicillin dan Streptomicin
6. Darah tepi autolog sebanyak 10 ml
7. Pewarnaan trypan blue

Peralatan :
1. Microtube
2. Inverted Microscope
3. Multi plate 96 well
4. Pipet 100 l
5. Sentrifugasi
6. Inkubator (37oC)

Software:
1. Microsoft excel atau SPSS

Pengambilan PRP:

1. Sebanyak 10 ml darah vena autolog diambil dan dicampurkan dengan

antikoagulan sitrat dekstrosa dormula A (ACD-A)
2. Persiapan Platelet-Rich Plasma dengan mensentrifugasi darah vena
sebanyak 10 ml selama 7 menit dengan kecepatan 1500 rpm (putaran
lambat)

16
 3. Platelet-rich Plasma di sentrifugasi kembali lebih waktu yang lebih lama
dan kecepatan yang lebih cepat (putaran cepat) dibanding sentrifugasi
pertama, yaitu selama 10 menit dengan kecepatan 4800 rpm
4. Platelet-rich plasma dipanaskan dalam waktu 30 menit dengan suhu 45C

Prosedur:

1. Beri perlakuan Platelet-Rich Plasma pada masing-masing well dengan

dosis PRP 2,5%, 5%, 10%, dan dosis PPP, 2,5%, 5% dan 10%.
2. Setelah diberikan perlakuan ditambahkan dengan MTT.
3. Diinkubasi selama 24 jam.
4. Hasil viabilitas sel dinilai dari bentukan kristal formazan dilihat
mengunakan mikroskop.
5. Hitung viabilitas sel dengan menggunakan microplate reader.
6. Analisa data dilakukan dengan menggunakan Microsoft Excel dan SPSS.

17
3.12 Jadwal Penelitian

No Kegiatan Waktu
1. Bimbingan proposal dengan dosen Oktober 2016 – Maret 2017
pembimbing
2. Pendaftaran Ujian Proposal Skripsi Maret 2017 – April 2017
3. Ujian Proposal Skripsi Maret 2017 – April 2017
4. Revisi Proposal Skripsi April 2017 – Maret 2017
5. Pelaksanaan Penelitian Mei 2017 – Agustus 2017
6. Penyusunan Laporan Hasil Penelitian July 2017 – September 2017
7. Pendaftaran Ujian Skripsi September 2017 – Oktober 2017
8. Ujian Skripsi Oktober 2017 – November 2018
9. Revisi Skripsi November 2017 – Desember 2017

Tabel 3.1 Jadwal Penelitian

18