Perfil antimicrobiano
de fermentos producidos por
microorganismos aislados de tierra
de distintas regiones de Bolivia
PELAEZ P., Densy,
TERRAZAS S. Enrique,
ALAVAREZ A. Teresa,
GIMENEZ T., Alberto*
* Universidad Mayor de San
Andrés, Facultad de
Ciencias Farmacéuticas y
Bioquímicas
Instituto de Investigaciones
Fármaco Bioquímicas - IIFB,
Area de Biotecnología
PALABRAS CLAVES: Antimicrobiano,
antibacteriano, fermentos,
microorganismos
Vol. VIII - Diciembre de 2000
RESUMEN
Se aislaron 24 hongos a partir de 8 muestras de tierra,
mediante el método de dilución sobre agar y se determinó
la viabilidad de 225 hongos del cepario del IIFB,
encontrándose viable el 81,7%. De las 208 colonias de
hongos evaluadas, el 28,5% presentaron actividad
antimicrobiana en medio sólido. Por su actividad
antimicrobiana de amplio espectro fueron seleccionados
7 hongos para ser sometidos a procesos de cultivo en
batch por duplicado en condiciones de iluminación, pH
y concentración de glucosa controladas. La cepa
productora de antibíoticos, Aspergillus sp, fue
seleccionado para estudios cinéticos en cultivo batch
(100ml), detectandose actividad contra Staphylococcus
aureus (50ul/ml) y Escherichia coli (200ul/ml).
Posteriormente, se realizaron cultivos a 1,000 ml en
fermentador con agitación controlando el pH, la
producción de antibiótico y la concentración de glucosa
en el medio. Una vez filtrado el sobrenadante, fue
sometido a una cromatografía en columna con la resina
HP21 lipofílica, eluida con mezclas de agua y metanol
para su purificación, resultando activa la fracción
obtenida con metanol al 80%, contra S. aureus (25ul/
ml) y E. coli (2000ul/ml).
INTRODUCCION
El potencial de los microorganismos implica una habilidad para
lograr cualquier conversión que encierre compuestos orgánicos por
medio de complejas secuencias de reacciones catalizadas por
enzimas. Así por ejemplo se obtuvieron productos como la
estreptomicina, cloranfenicol y otros antibióticos producidos hongos
aislados de tierra.
La distribución clásica de microorganismos productores de
antibióticos comprende a tres grupos taxonómicos: I Hongos
filamentosos II Bacterias Unicelulares y III Actinomicetos. Sin embargo
recientemente se han aislado varios antibióticos producidos por otros
grupos hasta ahora poco caracterizadas desde el punto de vista de
la producción de antibióticos, como las Mixobacterias, Micoplasmas
y Actinomicetos acuáticos.
La producción de antibióticos comenzó con el cultivo en
profundidad de Penicillium y ha estado bajo mejoramiento desde
entonces.En estos días, se puede lograr mayor productividad de
cualquier metabolito impulsando la utilización de nuevos medios de
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 PELAEZ, TERRAZAS, ALVAREZ, GIMENEZ
cultivo, mediante el mejoramiento de cepas y ensayos
específicos para la optimización del proceso para la
obtención de moléculas de interés industrial, incluyendo
el aislamiento de nuevos antibióticos.
Por lo tanto la búsqueda de microorganismos
productores de antibióticos se ha dirigido hacia los habitads
con características especiales como las que tiene Bolivia
en sus distintas regiones de extrema humedad, calor, frío,
etc., y aunque actualmente se conocen más de 4000
sustancias antibióticas, la búsqueda de otras nuevas
continúa con la misma intensidad, no solamente para la
aplicación a la quimioterapia humana sino también para
el crecimiento de animales de granja y en el control
biológico de fitopatógenos que causan grandes pérdidas
económicas.
Este trabajo pretende como alternativa, obtener
colecciones de variedades de hongos que forman parte
de la biodiversidad en tierras de distintos ecosistemas de
Bolivia y que aún no han sido explorados sobre sus
propiedades, que podrían ser aprovechables en la
investigación principalmente en la búsqueda de cepas con
potencialidad de emplearse en procesos de fermentación
dirigida a la biosíntesis de antimicrobianos y otras
moléculas de interés industrial.
METODOLOGIA
Aislamiento, Identificación y Conservación
Cada muestra recolectada de las regiones de
Tumupasha y del parque Nacional Sajama, fue procesada
mediante el método de dilución sobre agar. Se realizó el
aislamiento primario en cajas petri con agar Sabouraud y
Gentamicina (100ug/ml) y el aislamiento secundario en el
mismo agar con Gentamicina (50ug/ml) dejando incubar
en cada caso a 30ºC hasta el desarrollo de la colonia
fúngica.
Para la identificación macroscópica se observaron las
siguientes características:
1) Anverso: Aspecto: Vellosos, seco, algodonoso, etc.
Color: de la especie fúngica.
2) Reverso: Aspecto: Rugoso, liso. Pigmento: Presente,
no presente.
Para la identificación microscópica se utilizó la técnica
del scotch con azul de lactofenol.
(64) - BIOFARBO
La conservación de las especies aisladas se realizó
lavando esporas con leche pasteurizada y llevando cada
alícuota a liofilización. Los tubos que contenían los
liofilizados se conservaron en desecadores apropiados.
Determinación de la Viabilidad
Para determinar la viabilidad de las especies
conservadas se adicionó caldo Sabouraud en cada tubo
con el liofilizado dejando incubar hasta el desarrollo de la
especie fúngica. Posteriormente se inoculó una asada de
este caldo en una caja con agar Saboraud y se incubó a
30ºC hasta el desarrollo de la colonia, para posteriormente
realizar la identificación tanto macroscópica como
microscópica.
Evaluación de la Actividad Antimicrobiana
La evaluación de la actividad antimicrobiana se realizó
por el método taco placa en medio Muller Hinton fundido
e inoculado con 200ul de bacterias ( 1 x106). Las bacterias
utilizadas fueron: Staphylococcus aureus ATCC 6538,
Escherichia coli ATCC 8739 y Cándida albicans 10231.
Se utilizó como control taco de medio agarizado estéril y
taco de medio agarizado que incluía antibiótico control
(Gentamicina para bacterias y Ketoconazol para
C.albicans), luego se dejaron incubar las cajas durante 24
ha 35ºC y finalmente se midieron los halos de inhibición
sobre el crecimiento bacteriano.
Cultivos Batch (100 ml) sin Agitación
El hongo seleccionado: Aspergillus sp 52QD, se hizo
crecer en tubos pico de flauta, se lavaron las esporas con
tampón Tanquay (4 ml) y se realizó el recuento en cámara
de Newbauer con Lactofenol. En matraces de 250 ml de
capacidad se inoculó la suspensión de esporas en 100 ml
de caldo Sabouraud comercial (Complejo) y en caldo para
producción de antibióticos (Definido1), siendo la
concentración final en todos los cultivos: 106 esporas/ml.
Fueron medidos el pH y Glucosa iniciales mediante el
método de la ortololuidina. Se incubaron los hongos en
estufa 25ºC sin agitación, en ausencia y exposición de
luz, haciendo un seguimiento de la variación de pH y
concentración de glucosa, durante 14 días. Además se
realizaron las pruebas de actividad antibacteriana (método
dilución en TC24) con alícuotas obtenidas cada 12 h.
Cultivos Batch (100 ml) con Agitación
En matraces de 250 ml se prepararon 100ml del medio
comercial Saboraud y del medio definido en nitrógeno y
Vol. VIII - Diciembre de 2000
 PERFIL ANTIMICROBIANO DE FERMENTOS PRODUCIDOS POR MICROORGANISMOS AISLADOS

vitaminas. En ambos se inocularon esporas en Cromatografía en Columna

concentración de 106 esporas/ml. Se llevaron a incubación El sobrenadante (1 litro) se pasó por la resina HP 21
en shaker 150 rpm, midiéndose la concentración de Mitsubishi empacada en una columna (3x12cm), lavando
glucosa y el pH iniciales. Las alícotas se tomaron cada 4 primero con H2O (100ml), metanol agua(80:20) y metanol
horas durante 6 días, para realizar el seguimiento de la (100ml). Las fracciones alcohólicas se juntaron y se
concentración de glucosa, pH, biomasa, diámetro de llevaron a sequedad, obteniéndose un polvo naranja (con
pellets formados y la presencia de actividad antimicrobiana el cual se realizaron pruebas antibacterianas (método de
por el método de dilución TC24. dilución en placa).
Cultivo Batch (1000 ml) con Agitación RESULTADOS
Se preparó el inóculo de la forma ya descrita, teniendo Se aislaron 24 colonias de hongos a partir de 8
finalmente concentración de 106 esporas/ml de caldo muestras de tierras. Se determinaron 11 géneros entre
Sabouraud. Se utilizó un fermentador de 2 litros, con éstas resultando activas 7. Del cepario del IIFB se
agitación y temperatura controlada. Las alícuotas se encontraron viables 184 colonias previamente aisladas.
recolectaron cada 12 horas, durante 6 días para la Se determinaron 28 géneros, siendo 52 de estos
medición de pH, glucosa y determinación de la actividad productores de antibióticos.
antimicrobina (método de dilución TC24).
El Gráfico Nº1 y la Tabla Nº 1 muestran el porcentaje de
Prueba Antibacteriana del Sobrenadante por Método hongos con actividad antimicrobiana. Posteriormente se
de Dilución realizaron 14 cultivos en batch en medio de cultivo Sabouraud
Se realizaron diluciones 1:2 con cada uno de los con Las 7 especies fúngicas descritas en la Tabla Nº 2.
sobrenadantes de los cultivos en batch (100-1000 ml) de Los cultivos se incubaron en estufa a 30ºC sin agitación
Aspergillus sp 52QD desarrollado en medio definido 1 y 2, en presencia de luz y siete en ausencia de luz controlando
y medio comercial, de manera que en cada pocillo se tenían
concentraciones de 400, 200, 100, 50 y 25 ul de fermento/ Gráfico 1
ml de medio Muller Hinton. Cada pozo se inoculó con 10 ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA DE LOS
ul de la suspensión bacteriana de S.aureus y E. coli. Se MICROORGANISMOS AISLADOS DE TIERRA DE
incubó por 18 h a 37ºC. La lectura se realizó por DISTINTAS REGIONES DE BOLIVIA Y DEL CEPARIO
vizualización de crecimiento de bacterias comparado con DEL IIFB DURANTE 1999
los controles. Como controles Agar Muller Hinton,
Gentamicina (10ug/ml) y agar Muller Hinton sembrado con
bacteria .
Separación del Fermento
28,5 % Hongos con
Los sobrenadantes obtenidos en los cultivos en batch actividad
100ml se filtraron y fueron sometidos a una partición
líquido-líquido con acetato de etilo, la fase acuosa se
recolectó en viales para efectuar las pruebas de la actividad 71,5% Hongos sin
actividad
con la técnica de dilución 24 TC y el micelio fue secado en
la estufa a 100ºC y se determinó la biomasa.
Cromatografía en Capa Fina
En una placa de silicagel se depositaron las muestras Tabla 1
obtenidas de los fermentos batch (100 ml), de los medios
Sabouraud y definido 2. Posteriormente la placa se colocó ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA DE HONGOS
en una cámara cromatográfica que contenía como eluyente AISLADOS DE TIERRA Y DEL CEPARIO DEL IIFB
diclorometano con metanol 20%. La placa fue revelada FRENTE A BACTERIAS Y LEVADURAS
con luz UV 254nm.
Actividad frente a: N° de % de
Bioautografía hongos hongos
Las placas cromatográficas de los fermentos, se S. aureus 38 64,4%
depositaron en una caja petri que tenía en su base papel
filtro empapado en agua destilada estéril, posteriormente E.coli 3 5,1%
se adicionó sobre la placa una suspensión de S. aureus C. albicans 6 10,2%
(106UFC/ml) mezclada con 10ml de medio Muller Hinton S.aureus-C.albicans 4 6,1%
llevándose a incubación durante 24 horas a una S.aureus-E.coli 3 3,4%
temperatura de 37C. Se reveló con solución de E.coli-C.albicans 3 5,1%
MTT.(2,5mg/ml). Se realizó la lectura observando la
S.aureus-E.coli-C.albicans 3 51%
coloración violeta en toda la placa excepto en las bandas
TOTAL 59 100%
en que se presentó la inhibición de crecimiento bacteriano.

Vol. VIII - Diciembre de 2000 BIOFARBO - (65)

 PELAEZ, TERRAZAS, ALVAREZ, GIMENEZ

Tabla 2
HONGOS AISLADOS DE TIERRA, SELECCIONADOS PARA
PROCESOS DE FERMENTACION BATCH (100 ml) EN CALDO SABOURAUD
CODIGO CODIGO PROCEDENCIA IDENTIFICACION ACTIVIDAD
NUEVO CEPARIO GENERO (Diámetro de halos de inhibición)
S.aureus E.coli C. albicans
8QD D4HT1164XII ALTAMAANI Aspergillus 12mm 9mm 15mm
12QD AKS2A VELLA VISTA Aspergillus 25mm 13mm 12mm
26QD D503 1-12-97 ALTAMARANI No identificado 27 mm 12mm 12mm
32QD QI TARIJA Cephalosporim 28mm (-) (-)
52QD 72 TARIJA Aspergillus 12mm 11mm (-)
190QD D610514-2-97 VELLA VISTA Penicillium (-) 13mm (-)
227QD AKS3A2QD SAJAMA Dimórfico (-) 12mm 12mm

las variaciones de pH y actividad antimicrobiana en cada Tabla 3

uno de ellos. Resultaron activos en concentraciones de ACTIVIDAD EN MEDIO DE CULTIVO SOLIDO
100ul de fermento/ 10 ml de medio de cultivo: Aspergillus Aspergillas sp (52QD) SELECIONADO PARA
sp 52QD, Aspergillus sp 12QD evaluados frente a S. CULTIVOS EN BACH
aureus, B. subtilis, E. coli y S. flexneri; presentando
actividad solamente frente a S. aureus. BACTERIAS S. aureus E.coli C. albicans

Los sobrenadantes obtenidos de los 14 cultivos se Diámetro del halo 12 mm 11 mm -

de inhibición
filtraron y fueron sometidos a una partición líquido/líquido
con acetato de etilo, recolectándose las fases acuosas
que al ser sometidas a pruebas de actividad antimicrobiana FOTOGRAFIA N° 3
CARACTERISTICAS EN PLACA Aspergillas sp(52QD)
resultaron negativas. Por el contrario 6 fases orgánicas
SELECCIONADO PARA CULTIVOS EN BACH
(acetato de etilo) resultaron positivas.
Anverso Reverso
Para estudiar la cinética de fermentación se eligió el
hongo Aspergillus sp 52QD perteneciente al cepario del
IIFB, cuyas características se muestran en la Tabla Nº 3 y
en la Fotografía Nº 3.
Al ser sometido a procesos de cultivo en batch en dos
medios de cultivo sin agitación, se evidenció la producción
de antibacteriano. Se presentó actividad antibacteriana a
50ul de sobrenadante/ml de medio de cultivo para S.
aureus y a 200ul/ml para E. coli, en ambos. Sin embargo
en el medio Sabouraud la actividad apareció 12 horas antes
que en el medio definido 1, razón por la que se escogió el GRAFICO N° 3
medio definido 2 para realizar seguimiento de producción CURVA DE ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA, VARIACION
de antibiótico en cultivos en batch con agitación, cuyos DE PH, GLUCOSA Y BIOMASA EN MEDIO DEFINIDO
EN FUENTE DE NITROGENO Y VITAMINAS
resultados se observan en los gráficos 3 y 4 y en la Tabla
Nº 4.
En el medio Sabouraud se presentó una mayor
velocidad de crecimiento pero una velocidad menor de
consumo de glucosa en comparación con el medio
definido. En el medio Sabouraud la velocidad de
crecimiento y el aumento de biomasa está ligada a la
velocidad de consumo de glucosa, mientras que en el
medio definido existe un mayor consumo de glucosa y
menor formación de biomasa que coincide con el aumento
en el tamaño y número de pelletes formados en cada
tiempo.
La mayor actividad se presentó a las 36h en 200ul de
sobrenadante/ ml de medio de cultivo tanto para S. aureus
(66) - BIOFARBO Vol. VIII - Diciembre de 2000
 PERFIL ANTIMICROBIANO DE FERMENTOS PRODUCIDOS POR MICROORGANISMOS AISLADOS
Tabla 4
CINETICA DE Aspergillus sp 52 QD
Medio de cultivo _(h-1) qs (h-1)
Definido en N y vitaminas 0,022 0,04
Sabouraud 0,03 0,03 0,03
como para E. coli en el cultivo en batch con medio definido;
sin embargo en el medio sabouraud la mayor actividad se
presentó a las 80h en 50 ul de sobrenadante/ ml de medio
de cultivo solamente contra S. aureus. pero por otro lado
la actividad de 200ul de sobrenadante de medio de cultivo
a las 8h contra E. coli.
Los sobrenadantes de éstos cultivos también se
llevaron a una cromatografía en capa fina utilizando
mezclas de diferentes solventes y además un patrón de
Penicilina resultando bandas comunes entre ambos. Pero
además se observó una banda diferente en la corrida
cromatográfica realizada con el sobrenadante obtenido del
medio de cultivo definido.
Finalmente, en fermentador con agitación se realizaron
cultivos en batch con 1000 ml de medio Sabouraud
siguiendo los parámetros de pH, glucosa y actividad
antimicrobiana de Aspergillus sp 52QD, cuyos resultados
se muestran en el gráfico Nº 5.
Los sobrenadantes se pasaron por la resina HP 21
Mitsubishi, obteniéndose fracciones eludias con agua,
agua metanol 80% y Metanol que se llevaron a sequedad,
obteniéndose en la fraccción al 80% un polvo naranja que
presento actividad a 25ul de fracción/ ml de medio de
cultivo.
DISCUSIONES
En la identificación de hongos existen varios
parámetros que se deben tomar en cuenta, por lo tanto se
debe realizar un estudio mas profundo de éstos para poder
GRAFICO N° 4
CURVA DE PRODUCCION DE ANTIBIOTICO,
CONCENTRACION DE GLUCOSA Y VARIACION DE pH
EN FERMENTADOR (100ml)
Vol. VIII - Diciembre de 2000
Yx/s >Actv contra >Actv contra E.coli
S.aureus
0,52 200ul/ml 200ul/ml
36h 36h
0,73 50ul/ml 200ul/ml
8oh 8h
Gráfico No 5
determinar exactamente la familia a la que pertenecen.
También es interesante destacar que la morfología de los
hongos varía de acuerdo a las condiciones nutritivas del
medio, temperatura, luz así como el tiempo de incubación.
Si bien en nuestro estudio se realizó una identificación
genérica de los microorganismos, se podrían realizar mas
pruebas para determinar la especie del microorganismo.
Se debe resaltar que se hizo un screening básico para
realizar un panorama general de hongos con actividad
antimicrobiana cuando se hicieron las pruebas biológicas
con los sobrenadantes de los cultivos bacth estáticos, lo
recomendable es ensayar nuevamente estos hongos en
cultivos con agitación y variaciones de ciertos parámetros
para la optimización de la producción de los metabolitos
responsables de la actividad antimicrobiana.
En las pruebas biológicas con el fermento de los
cultivos batch estáticos de 100 ml encontramos una
concentración mínima inhibitoria para el fermento de
Aspergillus sp 52QD : CIM de 50 ul de fermento/ml sobre
S. aureus. Sin embargo no es exacta porque el posible
antibiótico que contiene el fermento no esta puro ya que
contiene componentes del medio de cultivo y otros
metabolitos secundarios que se forman durante el proceso
fermentativo.
Por otro lado los fermentos estáticos en Erlenmeyer
no eran homogéneos y al tomar las alícuotas de la parte
media tal vez existía menor o mayor cantidad de antibiótico
que si la alícuota se hubiera tomado del fondo, por lo tanto
sólo sirvieron como indicadores de la presencia o ausencia
de la sustancia activa y no así para cuantificaciones.
En las gráficas se observa que a un descenso de pH
existe aumento de la actividad antimicrobiana, para
BIOFARBO - (67)
 PELAEZ, TERRAZAS, ALVAREZ, GIMENEZ
descartar que este descenso pudo influir en el crecimiento
normal de las bacterias se utilizó un control de crecimiento
a ese pH y otro control tamponando en medio de cultivo
con el fermento a pH 7 donde se ensayaba la actividad,
repitiéndose los resultados.
Mientras que en el medio Sabouraud se observaron
actividades a distintas concentraciones contra S.aureus y
E.coli, en el medio definido 2 se evidenció la actividad en
las mismas concentraciones para ambos microorganismos.
Probablemente se trate de un antibiótico que tiene actividad
sobre la síntesis de la pared celular, por lo que es mas
activo contra S.aureus.
No se controló la transferencia de O2 ni en que medida
pueden influir en el proceso de producción del metabolito,
sin embargo lo que resultó claro es que sin mezclado el
proceso de fermentación se completa en mayor tiempo.
El tiempo de mezclado fue constante ya que la agitación
se realizó con una paleta que gira a 110rpm.
Al realizar la purificación de la posible molécula
antibiótica se obtuvieron varias fracciones, pero sólo la
fracción metanólica (80:20) mostró buena actividad; sin
embargo pensamos si bien se observan pequeños cristales
después de evaporar esta fracción, pensamos que es
necesario realizar una nueva purificación de ésta para
llevar a una prueba de RMN.
El Aspergillus es mas conocido por la producción de
ácido cítrico que por la producción de antibiótico. Con el
intento de descartar que la actividad antibiótica se debía a
la producción de ácido cítrico que al antibiótico realizamos
varias pruebas.
CONCLUSIONES
Se determinó la viabilidad de 225 hongos del cepario
del IIFB, encontrándose viables 81,7%. Se aislaron 24
especies fúngicas de muestras de tierras mediante el
método de dilución sobre agar en contrándose 5
Actinomycetos , 4 Aspergillus , 1 Blastomyces , 2
Cephalosporium, 2 Dimrficos, 3 No identificados, 2 Oidium,
2 Penicillium, 1 Phialopora, 1 Rhizopos y 1 Streptomyces.
De un total de 207 especies estudiadas 59 (28,5%)
presentaron actividad antimicrobiana en medio sólido: 64,4
% frente a S. aureus, 5,1% frente a E. coli, 10,2 % frente a
C.albicas, 3,4 % frente a S. aureus y E coli, 5,1 % frente a
E.coli y C.albicans, 6,8 % frente a S.aureus y C.albicans y
5,1% frente a S.aureus, E.coli y C.albicans.
Por su actividad antimicrobiana de amplio espectro
fueron seleccionados 7 hongos para ser sometidos a
procesos de cultivo en batch, posteriormente se realizó la
extracción de cada uno de los 14 sobrenadantes,
presentando actividad 6 extractos orgánicos pero ninguno
de los extractos acuosos en concentraciones de 100 ul de
fermento/10 ml de medio de cultivo.
Se seleccionó Aspergillus sp 52QD para realizar
procesos de cultivo en batch controlando el pH,
concentración de glucosa, biomasa y agitación. La
actividad se presentó en medio comercial Sabouraud en
50ul y 200ul de sobrenadante/ medio de cultivo para
S.aureus y E.coli, respectivamente.
Fue realizado un cultivo en escala mayor en caldo
(68) - BIOFARBO
Sabouraud (1000 ml) y los fermentos producidos se
llevaron a una cromatografía en columna para su
purificación, obteniéndose fracciones secas para realizar
pruebas antimicrobianas. La actividad se presentó
solamente contra S.aureus en concentración de 25 ul de
fracción/ml de medio, por lo que se recomienda obtener
cristales del fermento y determinar el tipo de molécula para
una producción industrial.
Por lo que se recomienda realizar un estudio de
elucidación estructural del o los metabolitos hallados con
actividad, para posteriormente, si tuvieran algún interés
económico, incrementar la productividad de los mismos
realizando diseños experimentales para la optimización
del medio de cultivo y técnicas de purificación para la
obtención de moléculas antimicrobianas.
BIBLIOGRAFIA
1. BARNETT, y col. Illustrated Genera of Imperfect
Fungi. Burgenes Publishing Company. USA. 1972.
2. BULOCK, J. Intermediary Matabolism and
antibiotic synthesis. England 1990
3. BROCK,D. Thomas y Madigan Michael.
Microbiología 2ªed. En español. México. Prentue Hall.
Hispanoamericano 1993
4. FORCHIASSIN, Flavia y col. Manual de
Procedimientos de laborat7orio de Micología Experimental
Universidad de Buenos Aires 1999
5. LASKIN, Allen y col. Fermentation. Science and
Technology with future. EEUU. 1980
6. MINED, Recopilación de artículos sobre algunas
cuestiones biológicas Tomo2, Cuba 1982
7. NAIR, P. Regulación de la fermentación. Annals
New York Academy of Sciences, 203,53-61,1972
8. PELLON, José. La ingeniería y sus aplicaciones.
Ed. Acribia. España. 1986
9. PEÑA, Carola. Tesina “Búsqueda de actividad
antimicrobiana de microorganismos aislados de tierras y
de macromicetes”UMSA 1997
10. SCRAGG, Alan. Biotecnología para ingenieros.
Limusa. México 1996
11. SHAMUN, Victoria. Tesina “Identificación de
micrrorganismos aislados de tierras de distintos ecosistemas
y perfil antimicrobiano” UMSA 1998
12. STANIER, Roger y col. Microbiología. Reverté,
España, 1985
13. WAINWRIGHT, M Introducción a la Biotecnología
de los hongos Ed Acribia España 1999
14. BARNETT, y col. Illustrated Genera of Imperfect
Fungi. Burgenes Publishing Company. USA. 1972.
15. MAHAIRI Mc Intyre, Effects of Elevated Dissolved
CO2 levels on batch and continuos cultures of Aspergillus
niger. American Society for Microbiology
16. RAPER, K. y col. The Genus Aspergillus. Baltimore
1986
16. BERDY, Janes. Recent Developments of antibiotic
research and clasification of antibiotics acording to chemical
structure. Research Institute for Pharmaceutical Chemestry.
Hungary. 1995
17. FLORES, J Citric Acid Production by solid
substrate fermentation. Agro-Food-Industry HiTech
Tengerdy Febrero 1994
Vol. VIII - Diciembre de 2000
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